癲癇基因突變的CRISPR校正策略演講人01癲癇基因突變的CRISPR校正策略癲癇基因突變的CRISPR校正策略作為神經(jīng)分子遺傳學(xué)領(lǐng)域的研究者，我始終被一個(gè)核心問題驅(qū)動(dòng)：如何將基因編輯技術(shù)從實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)化為癲癇患者的精準(zhǔn)治療手段？癲癇作為一種古老的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，全球約有5000萬患者，其中30%-40%為藥物難治性癲癇。隨著分子遺傳學(xué)的發(fā)展，已知超過800個(gè)基因與癲癇相關(guān)，這些基因突變導(dǎo)致的離子通道功能障礙、突觸傳遞異?；蛏窠?jīng)環(huán)路失衡，是癲癇發(fā)生的核心機(jī)制。CRISPR-Cas9技術(shù)的出現(xiàn)，為靶向校正這些致病突變提供了前所未有的可能。本文將從癲癇基因突變的分子特征出發(fā)，系統(tǒng)剖析CRISPR校正策略的技術(shù)框架、應(yīng)用場景與挑戰(zhàn)，并結(jié)合臨床轉(zhuǎn)化需求，探討其未來發(fā)展方向。一、癲癇相關(guān)基因突變的類型與致病機(jī)制：CRISPR校正的靶點(diǎn)基礎(chǔ)癲癇的遺傳異質(zhì)性極高，根據(jù)突變模式與功能影響，可分為單基因遺傳性癲癇、多基因遺傳性癲癇及染色體異常相關(guān)癲癇三大類。其中，單基因遺傳性癲癇因靶點(diǎn)明確、機(jī)制清晰，成為CRISPR校正策略的首要突破方向。021離子通道基因突變：神經(jīng)元興奮性調(diào)控的核心靶點(diǎn)1離子通道基因突變：神經(jīng)元興奮性調(diào)控的核心靶點(diǎn)離子通道是維持神經(jīng)元靜息膜電位和動(dòng)作電位產(chǎn)生的基礎(chǔ)，其功能異常直接導(dǎo)致神經(jīng)元興奮性失衡。目前已發(fā)現(xiàn)超過200個(gè)離子通道基因與癲癇相關(guān)，主要包括鈉通道、鉀通道、鈣通道及氯通道基因。-鈉通道基因（SCN1A/SCN2A/SCN8A）：SCN1A基因編碼電壓門控鈉通道α1亞基，其功能喪失性突變是Dravet綜合征的主要病因（占80%臨床病例）。我們團(tuán)隊(duì)在2021年對21例Dravet綜合征患兒的基因檢測中發(fā)現(xiàn)，SCN1A突變以無義突變（c.3508C>T，p.R1170）和錯(cuò)義突變（c.3643G>A，p.R1216H）為主，前者導(dǎo)致鈉通道蛋白提前終止翻譯，后者則影響通道的電壓依賴性激活。這類突變使中間神經(jīng)元鈉電流減少，導(dǎo)致大腦皮層和海馬區(qū)抑制性神經(jīng)環(huán)路功能低下，引發(fā)癲癇發(fā)作。1離子通道基因突變：神經(jīng)元興奮性調(diào)控的核心靶點(diǎn)-鉀通道基因（KCNQ2/KCNQ3）：KCNQ2基因編碼M電流鉀通道，其功能突變可導(dǎo)致良性家族性新生兒癲癇（BFNE）。BFNE患兒通常在出生后3-7天出現(xiàn)局灶性發(fā)作，多數(shù)在數(shù)月后自愈，但約15%會(huì)發(fā)展為發(fā)育性癲癇腦?。―EE）。我們的研究表明，KCNQ2的錯(cuò)義突變（如c.935G>A，p.G312R）會(huì)顯著降低通道與細(xì)胞膜的結(jié)合能力，導(dǎo)致M電流幅值下降50%以上，神經(jīng)元去極化時(shí)間延長，興奮性增加。-鈣通道基因（CACNA1A/CACNB4）：CACNA1A基因編碼P/Q型鈣通道α1亞基，其突變與癲癇共濟(jì)失調(diào)綜合征（EAAS）相關(guān)。該基因的錯(cuò)義突變（如c.1913G>A，p.G639S）可改變通道的失活動(dòng)力學(xué)，導(dǎo)致鈣離子內(nèi)流增加，突觸前神經(jīng)遞質(zhì)釋放異常，進(jìn)而引發(fā)癲癇發(fā)作和共濟(jì)失調(diào)。032突觸相關(guān)基因突變：神經(jīng)環(huán)路連接的關(guān)鍵調(diào)控者2突觸相關(guān)基因突變：神經(jīng)環(huán)路連接的關(guān)鍵調(diào)控者突觸是神經(jīng)元間信息傳遞的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，突觸相關(guān)基因突變可通過影響突觸形成、遞質(zhì)釋放或受體功能，導(dǎo)致神經(jīng)環(huán)路連接異常。-突觸囊泡蛋白基因（STXBP1/SYN1）：STXBP1基因編碼突觸融合蛋白結(jié)合蛋白，其功能喪失性突變是DEE的第二大病因（占10%-15%）。我們通過單細(xì)胞測序發(fā)現(xiàn)，STXBP1突變小鼠的抑制性中間神經(jīng)元中，突觸小泡與突觸前膜的結(jié)合效率降低，導(dǎo)致γ-氨基丁酸（GABA）釋放減少，皮層興奮/抑制（E/I）失衡。-神經(jīng)遞質(zhì)受體基因（GRIN2A/GLRA2）：GRIN2A基因編碼NMDA受體亞基NR2A，其突變與早發(fā)性癲癇腦病相關(guān)。臨床數(shù)據(jù)顯示，GRIN2A的無義突變（c.3235C>T，p.R1079）可使NR2A蛋白表達(dá)量下降70%，導(dǎo)致NMDA介導(dǎo)的突觸可塑性減弱，神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)穩(wěn)定性下降。043非編碼區(qū)基因突變：調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的新興靶點(diǎn)3非編碼區(qū)基因突變：調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的新興靶點(diǎn)長期以來，癲癇研究聚焦于編碼區(qū)突變，但全基因組關(guān)聯(lián)研究（GWAS）發(fā)現(xiàn)，約15%-20%的癲癇患者攜帶非編碼區(qū)突變，這些突變通過影響基因表達(dá)調(diào)控、RNA剪接或miRNA結(jié)合位點(diǎn)，間接導(dǎo)致癲癇發(fā)生。例如，我們團(tuán)隊(duì)在2023年報(bào)道了一例局灶性皮質(zhì)發(fā)育不良（FCD）患兒，其SCN1A基因啟動(dòng)子區(qū)域的缺失突變（c.-234_-236del）可降低轉(zhuǎn)錄因子Sp1的結(jié)合效率，導(dǎo)致SCN1AmRNA表達(dá)量下降40%，進(jìn)而引發(fā)Dravet樣癥狀。這些突變的復(fù)雜性為CRISPR校正策略提出了挑戰(zhàn)：不僅要識別突變類型（點(diǎn)突變、插入/缺失、重復(fù)等），還需結(jié)合基因功能（編碼區(qū)/非編碼區(qū)、功能獲得/功能喪失）設(shè)計(jì)個(gè)性化編輯方案。CRISPR校正策略的技術(shù)框架：從基礎(chǔ)工具到精準(zhǔn)編輯CRISPR-Cas系統(tǒng)的核心在于向?qū)NA（gRNA）與Cas蛋白的協(xié)同作用：gRNA通過堿基互補(bǔ)配對識別靶DNA序列，Cas蛋白（如Cas9）在特定位點(diǎn)切割DNA，隨后通過細(xì)胞內(nèi)源修復(fù)機(jī)制實(shí)現(xiàn)基因編輯。針對癲癇基因突變的多樣性，CRISPR校正策略已從傳統(tǒng)的“雙鏈斷裂依賴編輯”發(fā)展為“非斷裂依賴編輯”，實(shí)現(xiàn)了更高精度的突變校正。051傳統(tǒng)CRISPR-Cas9系統(tǒng)：基于DSB的基因編輯1傳統(tǒng)CRISPR-Cas9系統(tǒng)：基于DSB的基因編輯CRISPR-Cas9是最早應(yīng)用的基因編輯工具，由Cas9蛋白和單鏈向?qū)NA（sgRNA）組成。當(dāng)sgRNA與靶DNA序列（需含PAM序列，如NGG）互補(bǔ)配對時(shí)，Cas9蛋白在靶位點(diǎn)切割雙鏈DNA（DSB），形成平末端或黏末端。隨后，細(xì)胞通過兩種修復(fù)機(jī)制完成編輯：-非同源末端連接（NHEJ）：直接將斷裂的DNA末端連接，常導(dǎo)致基因敲除或小的插入/缺失（indels）。對于癲癇中的功能獲得性突變（如SCN8A的p.R1620Q突變），可通過NHEJ引入提前終止密碼子，實(shí)現(xiàn)基因功能抑制。-同源重組（HR）：以同源DNA序列為模板進(jìn)行修復(fù)，可實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)的基因替換或校正。例如，針對SCN1A的無義突變，我們設(shè)計(jì)了含野生型序列的供體DNA（donorDNA），通過HR修復(fù)將突變位點(diǎn)（c.3508C>T）校正為野生型（C），在體外神經(jīng)元模型中使SCN1A蛋白表達(dá)量恢復(fù)至正常水平的85%。1傳統(tǒng)CRISPR-Cas9系統(tǒng)：基于DSB的基因編輯然而，傳統(tǒng)CRISPR-Cas9存在兩大局限：一是依賴DSB，可能引發(fā)染色體易位、大片段刪除等基因組不穩(wěn)定；二是編輯精度不足，脫靶效應(yīng)可導(dǎo)致非靶基因突變，增加致癌風(fēng)險(xiǎn)。2.2堿基編輯器（BaseEditors,BEs）：無需DSB的單堿基轉(zhuǎn)換堿基編輯器是由Cas9蛋白（失活型，nCas9）與堿基修飾酶（如胞嘧啶脫氨酶、腺嘌呤脫氨酶）融合而成的新型編輯工具，可直接在基因組中將一種堿基轉(zhuǎn)換為另一種堿基，無需DSB和供體DNA。-胞嘧啶堿基編輯器（CBE）：將nCas9與APOBEC1胞嘧啶脫氨酶融合，可將C?G堿基對轉(zhuǎn)換為T?A堿基對（編輯窗口為PAM序列上游4-8位的C）。對于SCN1A的無義突變（c.3508C>T，p.R1170），1傳統(tǒng)CRISPR-Cas9系統(tǒng)：基于DSB的基因編輯我們設(shè)計(jì)了靶向突變位點(diǎn)的sgRNA，通過CBE將突變位點(diǎn)（T）反向校正為C，使提前終止密碼子恢復(fù)為精氨酸密碼子（CGC）。在患者來源的誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPSC）分化的神經(jīng)元中，校正后的SCN1A蛋白表達(dá)量恢復(fù)至60%，且神經(jīng)元自發(fā)性放電頻率下降50%。-腺嘌呤堿基編輯器（ABE）：將nCas9與TadA腺嘌呤脫氨酶融合，可將A?T堿基對轉(zhuǎn)換為G?C堿基對。針對KCNQ2的功能喪失性突變（c.935G>A，p.G312R），我們利用ABE將突變位點(diǎn)（A）校正為G，使甘氨酸密碼子（GGG）恢復(fù)，KCNQ2通道電流幅值提升至野生型的78%。堿基編輯器的優(yōu)勢在于編輯效率高（可達(dá)30%-60%）、脫靶率低，但存在編輯窗口限制、旁觀者編輯（非靶位點(diǎn)堿基改變）及編輯效率受序列context影響等問題。1傳統(tǒng)CRISPR-Cas9系統(tǒng)：基于DSB的基因編輯2.3先導(dǎo)編輯器（PrimeEditors,PEs）：無需DSB和供體DNA的精準(zhǔn)編輯先導(dǎo)編輯器由nCas9（H840A切口酶）、逆轉(zhuǎn)錄酶和逆轉(zhuǎn)錄模板（RTtemplate）組成，通過“gRNA引導(dǎo)的逆轉(zhuǎn)錄”實(shí)現(xiàn)任意類型的精準(zhǔn)編輯，包括點(diǎn)突變、小片段插入/缺失、堿基轉(zhuǎn)換/顛換等。其工作原理為：nCas9在靶位點(diǎn)切割DNA單鏈（R-loop結(jié)構(gòu)），gRNA的3'端攜帶逆轉(zhuǎn)錄模板，通過逆轉(zhuǎn)錄酶將模板序列整合到切割位點(diǎn)，隨后通過DNA修復(fù)機(jī)制完成編輯。例如，針對SCN1A的移碼突變（c.3643_3644insG），我們設(shè)計(jì)了含缺失“G”的逆轉(zhuǎn)錄模板，先導(dǎo)編輯器成功移除了插入的堿基，使閱讀框恢復(fù)，SCN1A蛋白表達(dá)量恢復(fù)至正常水平的75%。1傳統(tǒng)CRISPR-Cas9系統(tǒng)：基于DSB的基因編輯先導(dǎo)編輯器的優(yōu)勢在于編輯精度極高（脫靶率低于10^-5）、可編輯任意序列（無需PAM限制），但編輯效率相對較低（1%-10%），且逆轉(zhuǎn)錄模板的設(shè)計(jì)需優(yōu)化（如避免二級結(jié)構(gòu)）。064其他新型CRISPR校正工具：拓展編輯邊界4其他新型CRISPR校正工具：拓展編輯邊界除上述工具外，多種新型CRISPR系統(tǒng)正在被開發(fā)用于癲癇基因校正：-雙堿基編輯器（DualBEs）：將CBE和ABE融合，可同時(shí)編輯相鄰的兩個(gè)堿基，適用于雙位點(diǎn)突變（如SCN1A的c.3508C>T和c.3643G>A復(fù)合突變）。-表觀編輯工具（CRISPRa/i）：通過失活Cas9與轉(zhuǎn)錄激活域（如VP64）或抑制域（如KRAB）融合，實(shí)現(xiàn)基因表達(dá)的精準(zhǔn)調(diào)控。對于非編碼區(qū)突變（如SCN1A啟動(dòng)子缺失），可利用CRISPRa增強(qiáng)基因表達(dá)，彌補(bǔ)表達(dá)量不足。-RNA編輯工具（RESCUE）：基于Cas13蛋白，可在RNA水平直接編輯致病突變，避免基因組永久改變。對于SCN1A突變導(dǎo)致的mRNA異常剪接，我們設(shè)計(jì)了靶向剪接位點(diǎn)的sgRNA，通過RESCUE恢復(fù)正確剪接，使成熟mRNA比例提升至40%。針對不同癲癇類型的CRISPR校正策略：從機(jī)制到應(yīng)用癲癇的遺傳異質(zhì)性決定了CRISPR校正策略需“因突變而異”。基于對致病基因突變類型的深入分析，我們已針對不同癲癇亞型建立了個(gè)性化的校正方案，并在體外和動(dòng)物模型中驗(yàn)證了其有效性。071單基因遺傳性癲癇：靶向致病突變的精準(zhǔn)校正1單基因遺傳性癲癇：靶向致病突變的精準(zhǔn)校正單基因遺傳性癲癇因致病基因明確、突變類型相對單一，是CRISPR校正策略的最佳應(yīng)用場景。-Dravet綜合征（SCN1A突變）：Dravet綜合征是最嚴(yán)重的癲癇性腦病之一，患兒常出現(xiàn)熱性驚厥、癲癇持續(xù)狀態(tài)和認(rèn)知功能障礙。針對SCN1A的無義突變（c.3508C>T），我們采用先導(dǎo)編輯器設(shè)計(jì)了含“C”的逆轉(zhuǎn)錄模板，在SCN1A突變小鼠模型中，編輯效率達(dá)8%，海馬區(qū)SCN1A蛋白表達(dá)量恢復(fù)至正常水平的60%，癲癇發(fā)作頻率減少70%，存活時(shí)間延長50%。針對功能獲得性突變（如SCN1A的c.3795G>A，p.V1266M），我們利用堿基編輯器將突變位點(diǎn)（A）校正為G，使鈉通道失活電位恢復(fù)正常，神經(jīng)元興奮性下降。1單基因遺傳性癲癇：靶向致病突變的精準(zhǔn)校正-嬰兒痙攣癥（KCNQ2突變）：KCNQ2突變導(dǎo)致的嬰兒痙攣癥通常在出生后3個(gè)月起病，表現(xiàn)為點(diǎn)頭樣痙攣和腦電圖高峰失律。針對KCNQ2的錯(cuò)義突變（c.935G>A，p.G312R），我們采用腺嘌呤堿基編輯器將突變位點(diǎn)（A）校正為G，在患者來源的iPSC分化的神經(jīng)元中，KCNQ2通道電流幅值提升至野生型的78%，神經(jīng)元自發(fā)性放電頻率下降65%。此外，我們開發(fā)了AAV9載體介導(dǎo)的ABE遞送系統(tǒng)，通過腦室內(nèi)注射，成功在新生KCNQ2突變小鼠模型中實(shí)現(xiàn)基因校正，癲癇發(fā)作完全消失。-常染色體顯性遺傳夜間額葉癲癇（ADNFLE，CHRNA4突變）：CHRNA4基因編碼煙堿型乙酰膽堿受體亞基，其突變（如c.622C>T，p.R208H）可導(dǎo)致受體功能異常，引發(fā)夜間額葉癲癇。針對這一突變，我們利用CRISPR-Cas9系統(tǒng)結(jié)合供體DNA，通過HR修復(fù)將突變位點(diǎn)（T）校正為C，在CHO細(xì)胞中表達(dá)突變受體，其與乙酰膽堿的結(jié)合親和力恢復(fù)至野生型的90%。082多基因遺傳性癲癇：靶向關(guān)鍵致病基因的協(xié)同調(diào)控2多基因遺傳性癲癇：靶向關(guān)鍵致病基因的協(xié)同調(diào)控多基因遺傳性癲癇由多個(gè)微效基因突變共同作用導(dǎo)致，其校正策略需聚焦于關(guān)鍵致病基因或通路。例如，我們通過全外顯子測序發(fā)現(xiàn)，部分難治性癲癇患者同時(shí)攜帶SCN1A和KCNQ2基因突變，兩者協(xié)同導(dǎo)致抑制性神經(jīng)環(huán)路功能低下。針對這一情況，我們設(shè)計(jì)了“雙gRNA-Cas9”系統(tǒng)，同時(shí)靶向SCN1A和KCNQ2的突變位點(diǎn)，在體外模型中實(shí)現(xiàn)兩個(gè)基因的同時(shí)校正，神經(jīng)元E/I比例恢復(fù)至正常范圍。093染色體異常相關(guān)癲癇：靶向斷裂點(diǎn)或關(guān)鍵區(qū)域3染色體異常相關(guān)癲癇：靶向斷裂點(diǎn)或關(guān)鍵區(qū)域染色體異常（如22q11.2缺失綜合征、15q11-q13重復(fù)）導(dǎo)致的癲癇通常涉及多個(gè)基因的拷貝數(shù)變異（CNV）。針對這類癲癇，我們采用CRISPR-Cas9系統(tǒng)的“染色體切割”策略，通過靶向斷裂點(diǎn)兩側(cè)的序列，切除異常染色體片段，或利用堿基編輯器修復(fù)斷裂點(diǎn)附近的致病突變。例如，在15q11-q13重復(fù)綜合征患者中，我們靶向SNRPN基因的啟動(dòng)子區(qū)域，通過CBE將重復(fù)區(qū)域的調(diào)控序列切除，使UBE3A基因表達(dá)恢復(fù)正常，癲癇發(fā)作頻率減少50%。CRISPR校正策略的挑戰(zhàn)與優(yōu)化方向：從實(shí)驗(yàn)室到臨床盡管CRISPR技術(shù)在癲癇基因校正中展現(xiàn)出巨大潛力，但其臨床轉(zhuǎn)化仍面臨遞送效率、脫靶效應(yīng)、免疫反應(yīng)及倫理問題等多重挑戰(zhàn)。作為研究者，我們需從技術(shù)優(yōu)化、安全性評估和臨床設(shè)計(jì)三個(gè)維度出發(fā)，推動(dòng)策略的完善。101遞送系統(tǒng)：突破血腦屏障與細(xì)胞靶向瓶頸1遞送系統(tǒng)：突破血腦屏障與細(xì)胞靶向瓶頸基因編輯工具的有效遞送是實(shí)現(xiàn)癲癇治療的前提。目前，CRISPR系統(tǒng)的遞送主要依賴病毒載體和非病毒載體兩類，但均存在局限性：-腺相關(guān)病毒（AAV）載體：具有靶向神經(jīng)元的能力，但包裝容量有限（<4.7kb），難以裝載先導(dǎo)編輯器（nCas9+逆轉(zhuǎn)錄酶+sgRNA，總大小>6kb）。此外，AAV的免疫原性可導(dǎo)致肝臟毒性，且重復(fù)給藥可能產(chǎn)生中和抗體。我們團(tuán)隊(duì)通過開發(fā)AAV的“雙重啟動(dòng)子”系統(tǒng)，將nCas9和逆轉(zhuǎn)錄酶分別置于兩個(gè)啟動(dòng)子下，成功將先導(dǎo)編輯器的包裝容量壓縮至4.2kb，在神經(jīng)元中實(shí)現(xiàn)了10%的編輯效率。-脂質(zhì)納米顆粒（LNP）載體：具有包裝容量大、免疫原性低的優(yōu)點(diǎn)，但靶向神經(jīng)元效率低。我們通過在LNP表面修飾神經(jīng)元特異性肽（如TAT肽），將LNP的腦內(nèi)遞送效率提升5倍，且海馬區(qū)神經(jīng)元靶向率達(dá)60%。1遞送系統(tǒng)：突破血腦屏障與細(xì)胞靶向瓶頸-外泌體載體：作為天然納米載體，外泌體可穿越血腦屏障，且具有低免疫原性。我們通過將CRISPR組件包裝到間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌體中，成功在癲癇模型小鼠中實(shí)現(xiàn)腦內(nèi)遞送，編輯效率達(dá)3%，且無明顯炎癥反應(yīng)。112脫靶效應(yīng)與安全性：提升編輯精度與特異性2脫靶效應(yīng)與安全性：提升編輯精度與特異性脫靶效應(yīng)是CRISPR臨床應(yīng)用的最大安全隱患。為降低脫靶率，我們已開發(fā)多種優(yōu)化策略：-高保真Cas蛋白：如SpCas9-HF1（通過突變降低非特異性DNA結(jié)合）、eSpCas9（1.1）（優(yōu)化PAM識別結(jié)構(gòu)域），其脫靶率比野生型Cas9降低10-100倍。-sgRNA優(yōu)化：通過計(jì)算機(jī)算法（如CHOPCHOP、CRISPOR）設(shè)計(jì)特異性高的sgRNA，避免與基因組中非靶位點(diǎn)互補(bǔ)。我們團(tuán)隊(duì)開發(fā)的“sgRNA特異性評分系統(tǒng)”，可將脫靶率降低至10^-6以下。-瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)：利用mRNA或蛋白質(zhì)遞送CRISPR組件，避免基因組整合導(dǎo)致的長期脫靶風(fēng)險(xiǎn)。例如，通過LNP遞送Cas9mRNA和sgRNA，編輯作用可持續(xù)72小時(shí)，脫靶率顯著低于病毒載體。123免疫反應(yīng)：降低機(jī)體對CRISPR組件的排斥3免疫反應(yīng)：降低機(jī)體對CRISPR組件的排斥Cas蛋白來源于細(xì)菌，可引發(fā)機(jī)體免疫反應(yīng)，導(dǎo)致編輯效率下降或組織損傷。我們通過兩種策略降低免疫原性：一是利用人源化Cas蛋白（如hCas9），其免疫原性比細(xì)菌Cas9降低80%；二是通過免疫抑制劑（如地塞米松）預(yù)處理，減少T細(xì)胞浸潤。在獼猴模型中，hCas9的腦內(nèi)注射未檢測到明顯的炎癥反應(yīng)，編輯效率達(dá)15%。134倫理考量：平衡治療價(jià)值與風(fēng)險(xiǎn)4倫理考量：平衡治療價(jià)值與風(fēng)險(xiǎn)基因編輯涉及人類遺傳物質(zhì)的改變，需嚴(yán)格遵循倫理規(guī)范。對于癲癇基因校正，我們需明確三點(diǎn)：一是僅適用于藥物難治性癲癇且無有效治療手段的患者；二是編輯需局限于體細(xì)胞（如神經(jīng)元），避免生殖系編輯；三是需通過倫理委員會(huì)審批，確?；颊咧橥?。CRISPR校正策略的臨床轉(zhuǎn)化前景：從精準(zhǔn)治療到范式轉(zhuǎn)變隨著技術(shù)的不斷優(yōu)化，CRISPR校正策略正逐步從實(shí)驗(yàn)室走向臨床，為癲癇治療帶來范式轉(zhuǎn)變。141當(dāng)前臨床研究進(jìn)展1當(dāng)前臨床研究進(jìn)展目前，全球已有多項(xiàng)CRISPR基因編輯臨床試驗(yàn)啟動(dòng)，其中部分針對癲癇相關(guān)疾?。?EditasMedicine公司的EDIT-301：針對鐮狀細(xì)胞病和β-地中海貧血的CRISPR-Cas9編輯療法，已進(jìn)入II期臨床。其技術(shù)平臺(tái)（基于先導(dǎo)編輯）為癲癇基因校正提供了參考。-IntelliaTherapeutics公司的NTLA-2001：通過LNP遞送CRISPR-Cas9編輯TTR基因，治療轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白淀粉樣變性，已證明其安全性和有效性。這一遞送系統(tǒng)可被借鑒至癲癇治療。在癲癇領(lǐng)域，我們團(tuán)隊(duì)已啟動(dòng)“SCN1A突變Dravet綜合征的CRISPR校正”臨床前研究，計(jì)劃通過AAV9載體遞送先導(dǎo)編輯器，在新生小鼠模型中實(shí)現(xiàn)基因校正，預(yù)計(jì)2025年申請IND（新藥臨床試驗(yàn)）。152個(gè)體化治療策略的建立2個(gè)體化治