ICS65.150CCSB5222ThetechnicalspecificationforfermentationcultureoffreshwaterchlorellavulgarisIDB22/T3386—2022本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件中的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由吉林省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。本文件起草主要單位：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，吉林省水產(chǎn)技術(shù)推廣總站、通化師范學(xué)院。本文件主要起草人：張東鳴、陳玉珂、藺麗麗、王秋舉、郭志欣、劉洪建、趙云龍、高永生。DB22/T3386—20221小球藻發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)規(guī)范本文件規(guī)定了小球藻（Chlorellavulgaris）發(fā)酵培養(yǎng)的儀器設(shè)備與耗材，培養(yǎng)基，培養(yǎng)，測定生物量和采收。本文件適用于淡水小球藻設(shè)施發(fā)酵培養(yǎng)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB11607漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1擴(kuò)大培養(yǎng)expandculture培養(yǎng)基中接種少量的藻種，在適宜環(huán)境條件（溫度、鹽度、光照、pH值等）下，藻液達(dá)到一定的濃度后，一次性采收或作進(jìn)一步擴(kuò)大培養(yǎng)的過程。3.2發(fā)酵培養(yǎng)fermentationculture小球藻通過生物氧化反應(yīng)獲得能量以維持藻細(xì)胞生長的過程。4儀器設(shè)備與耗材4.1儀器設(shè)備小球藻發(fā)酵培養(yǎng)儀器設(shè)備應(yīng)滿足下列要求：a)發(fā)酵罐,容量不低于50L；b)恒溫干燥箱，不低于2000W；c)高壓滅菌器,滅菌體積不低于50L；d)高速離心機(jī)，轉(zhuǎn)速不低于5000r/min，離心體積不小于500mL；e)充氣泵，功率大于200W。4.2耗材玻璃三角燒瓶，培養(yǎng)皿，離心管。2DB22/T3386—20225培養(yǎng)基5.1擴(kuò)大培養(yǎng)用BG-11培養(yǎng)基，主要成分見表1。表1BG-11培養(yǎng)基組成KHPOONaCO23O24MgSOO25HBO1MnClOONaMoOOOO5.2發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)基主要成分見表2。表2發(fā)酵培養(yǎng)基組成123KHPO4MgSOO5NaHPOO678DB22/T3386—202236培養(yǎng)6.2擴(kuò)大培養(yǎng)6.2.1藻種小球藻純度≥99.99%。6.2.2接種無菌環(huán)境下，將已無菌的600mLBG-11培養(yǎng)基裝入1L已滅菌處理的玻璃三角燒瓶中，然后將200mL密度達(dá)到106ind/mL的小球藻接種于BG-11培養(yǎng)基中。6.2.3培養(yǎng)條件pH6.5，培養(yǎng)溫度28℃,充氣量1.5L/min,培養(yǎng)時間為96h。6.3發(fā)酵培養(yǎng)6.3.1接種在50L發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，接種量為10%，將3L擴(kuò)大培養(yǎng)的小球藻藻種接入27L發(fā)酵培養(yǎng)基中。6.3.2培養(yǎng)條件裝料體積30L，溫度28℃,攪拌速度150r/min~300r/min，發(fā)酵時間96h。6.3.3補(bǔ)料在發(fā)酵培養(yǎng)達(dá)36h時向發(fā)酵罐內(nèi)補(bǔ)充30g/L葡萄糖；在發(fā)酵培養(yǎng)達(dá)60h時向發(fā)酵罐內(nèi)補(bǔ)充10g/L尿素，培養(yǎng)至滿96h結(jié)束。7測定生物量取8mL藻液裝入10mL離心管中以8000r/min離心10min，棄上清，再用蒸餾水混懸藻泥，離心棄上清，重復(fù)三遍。將藻泥用少量蒸餾水洗入預(yù)先稱重的培養(yǎng)皿中敞口置于80℃烘