2025年大學(xué)生物技術(shù)（基因擴增）專項測試卷

（考試時間：90分鐘滿分100分）班級______姓名______一、單項選擇題（總共10題，每題4分，每題只有一個正確答案，請將正確答案填入括號內(nèi)）1.基因擴增技術(shù)的核心步驟是（）A.引物設(shè)計B.模板DNA變性C.引物與模板退火D.DNA聚合酶延伸2.以下哪種不是常用的基因擴增方法（）A.PCRB.LCRC.SDAD.ELISA3.在PCR反應(yīng)中，TaqDNA聚合酶的作用是（）A.使雙鏈DNA解鏈B.催化引物與模板結(jié)合C.合成新的DNA鏈D.穩(wěn)定反應(yīng)體系4.基因擴增引物的長度一般為（）A.5-10bpB.10-15bpC.15-30bpD.30-50bp5.影響基因擴增效率的因素不包括（）A.引物濃度B.dNTP濃度C.反應(yīng)溫度D.樣品顏色6.實時熒光定量PCR中，熒光信號強度與（）成正比A.模板DNA濃度B.引物濃度C.Taq酶濃度D.dNTP濃度7.基因擴增產(chǎn)物的特異性主要取決于（）A.引物特異性B.Taq酶活性C.dNTP種類D.反應(yīng)時間8.巢式PCR的優(yōu)點是（）A.提高擴增特異性B.增加擴增產(chǎn)量C.簡化操作D.降低成本9.逆轉(zhuǎn)錄PCR用于擴增（）A.DNAB.RNAC.蛋白質(zhì)D.多糖10.多重PCR可以同時擴增（）A.多個基因B.多個樣本C.多種引物D.多種模板二、多項選擇題（總共5題，每題6分，每題有兩個或兩個以上正確答案，請將正確答案填入括號內(nèi)）1.基因擴增技術(shù)可應(yīng)用于（）A.基因克隆B.疾病診斷C.基因表達分析D.藥物研發(fā)2.PCR反應(yīng)體系的組成包括（）A.模板DNAB.引物C.dNTPD.TaqDNA聚合酶3.提高基因擴增特異性的方法有（）A.優(yōu)化引物設(shè)計B.提高退火溫度C.增加模板量D.減少dNTP濃度4.實時熒光定量PCR的熒光標記物有（）A.SYBRGreenB.TaqMan探針C.分子信標D.熒光素酶5.基因擴增技術(shù)的發(fā)展趨勢包括（）A.更高的特異性B.更快的擴增速度C.更低的成本D.更簡單的操作三、判斷題（總共10題，每題3分，請判斷對錯，在括號內(nèi)打“√”或“×”）1.基因擴增只能擴增已知序列的基因。（）2.PCR反應(yīng)中引物濃度越高越好。（）3.實時熒光定量PCR可以對基因進行絕對定量。（）4.巢式PCR比普通PCR更易出現(xiàn)非特異性擴增。（）5.逆轉(zhuǎn)錄PCR需要先將RNA逆轉(zhuǎn)錄為DNA。（）6.多重PCR擴增的片段大小必須相同。（）7.基因擴增產(chǎn)物可直接用于測序。（）8.TaqDNA聚合酶具有5'→3'外切酶活性。（）9.基因擴增技術(shù)可用于檢測病毒感染。（）10.隨著技術(shù)發(fā)展，基因擴增反應(yīng)不需要引物。（）四、簡答題（總共3題，每題10分，請簡要回答問題）1.簡述PCR反應(yīng)的基本原理。2.說明實時熒光定量PCR的工作原理及應(yīng)用。3.如何設(shè)計一對高效且特異性強的基因擴增引物？五、論述題（總共1題，每題20分，請詳細闡述觀點）論述基因擴增技術(shù)在生物技術(shù)領(lǐng)域的重要作用及未來發(fā)展前景。答案：一、單項選擇題1.D2.D3.C4.C5.D6.A7.A8.A9.B10.A二、多項選擇題1.ABCD2.ABCD3.AB4.ABC5.ABCD三、判斷題1.×2.×3.√4.×5.√6.×7.×8.×9.√10.×四、簡答題1.PCR反應(yīng)基本原理：以模板DNA為模板，在引物引導(dǎo)下，TaqDNA聚合酶從引物3'端開始延伸合成新的DNA鏈，經(jīng)過變性、退火、延伸三個步驟的循環(huán)，使特定DNA片段呈指數(shù)級擴增。2.實時熒光定量PCR工作原理：在PCR反應(yīng)體系中加入熒光標記物，隨著PCR產(chǎn)物的增加，熒光信號強度與產(chǎn)物量成正比，通過檢測熒光信號變化實時監(jiān)測PCR進程，實現(xiàn)對基因的定量分析。應(yīng)用：基因表達定量分析、病原體核酸定量檢測、腫瘤微小殘留病灶監(jiān)測等。3.設(shè)計高效且特異性強的基因擴增引物：首先要選擇與模板DNA特異性互補的序列，避免引物內(nèi)部或引物之間形成互補配對。引物長度一般15-30bp，GC含量在40%-60%。引物3'端不能有多個連續(xù)相同堿基，5'端可進行修飾。同時要考慮引物與模板的退火溫度，一般Tm值在55-65℃。五、論述題基因擴增技術(shù)在生物技術(shù)領(lǐng)域的重要作用：在基因克隆方面，可快速獲得大量目的基因片段，為后續(xù)研究提供材料；疾病診斷中，能靈敏檢測病原體核酸，實現(xiàn)早期診斷；基因表達分析可準確測定基因表達水平，了解基因功能。