高致病性動物病原微生物實驗生物安全柜氣流模式定期驗證細(xì)則一、驗證目的高致病性動物病原微生物實驗生物安全柜（以下簡稱“生物安全柜”）氣流模式定期驗證旨在通過科學(xué)檢測手段，確認(rèn)柜內(nèi)定向氣流的穩(wěn)定性、均勻性及屏障完整性，確保其在操作過程中有效形成負(fù)壓屏障，防止氣溶膠泄漏，保護(hù)操作人員、實驗樣本及環(huán)境安全。驗證需覆蓋氣流速度、流型可視化、高效過濾器（HEPA/ULPA）完整性等核心指標(biāo)，確保設(shè)備持續(xù)符合《病原微生物實驗室生物安全管理條例》及GB41918-2022等標(biāo)準(zhǔn)要求。二、適用范圍本細(xì)則適用于從事第一類、第二類高致病性動物病原微生物實驗活動的生物安全三級（BSL-3）及以上實驗室，涉及Ⅱ級A2型、B2型及Ⅲ級生物安全柜的氣流模式定期驗證。驗證對象包括新安裝設(shè)備的首次驗證、日常使用中的定期復(fù)檢（每6個月一次）、重大維修（如過濾器更換、風(fēng)機(jī)維護(hù)）后的性能確認(rèn)，以及實驗室環(huán)境發(fā)生顯著變化（如通風(fēng)系統(tǒng)改造、設(shè)備移位）后的補(bǔ)充驗證。三、驗證周期常規(guī)周期：Ⅱ級生物安全柜：每6個月進(jìn)行一次全面氣流模式驗證，包括風(fēng)速測試、氣流可視化及HEPA過濾器完整性檢測。Ⅲ級生物安全柜：每3個月增加一次負(fù)壓密封性測試，確保柜體與手套箱連接處的氣流屏障有效性。特殊情況：設(shè)備發(fā)生故障（如風(fēng)機(jī)異響、報警觸發(fā)）或維修后，需立即進(jìn)行驗證；實驗過程中發(fā)生氣溶膠泄漏事件后，需在事件處理完畢后48小時內(nèi)完成專項驗證；設(shè)備停用超過30天重新啟用前，需執(zhí)行完整驗證流程。四、具體操作步驟（一）驗證前準(zhǔn)備環(huán)境控制：關(guān)閉實驗室通風(fēng)柜、空調(diào)出風(fēng)口等干擾氣流源，實驗室內(nèi)人員活動限制在最低必要范圍，提前30分鐘啟動生物安全柜，確保氣流穩(wěn)定。溫濕度控制在18-25℃，相對濕度40%-60%，避免環(huán)境溫濕度劇烈波動影響氣流檢測精度。設(shè)備校準(zhǔn)：熱式風(fēng)速儀：精度≥0.01m/s，已通過計量校準(zhǔn)并在有效期內(nèi)，使用前需用標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速發(fā)生器進(jìn)行現(xiàn)場校驗。發(fā)煙裝置：采用甘油煙霧發(fā)生器或鈦四氯化物發(fā)煙筆，煙霧顆粒直徑需控制在0.5-2μm，確?？梢暬Ч?。氣溶膠光度計：用于HEPA過濾器完整性測試，需提前用PAO（聚α烯烴）氣溶膠進(jìn)行校準(zhǔn)，量程覆蓋0.001%-100%泄漏率。人員資質(zhì)：操作人員需持有生物安全柜操作培訓(xùn)證書，熟悉GB41918-2022標(biāo)準(zhǔn)中氣流測試的技術(shù)要求，且近12個月內(nèi)無違規(guī)操作記錄。（二）風(fēng)速測試下降氣流速度測試：布點方法：在工作區(qū)上方150mm高度處，按“網(wǎng)格法”布置測量點。Ⅱ級生物安全柜采用25點矩陣（5×5網(wǎng)格，每點間距≤300mm），Ⅲ級柜增加至49點（7×7網(wǎng)格），確保覆蓋整個工作區(qū)。測量流程：風(fēng)速儀探頭垂直于氣流方向，每個測點持續(xù)讀數(shù)3次，每次間隔10秒，取算術(shù)平均值。測試過程中避免手部遮擋探頭，防止氣流擾動。數(shù)據(jù)記錄：記錄各點風(fēng)速值、平均值及標(biāo)準(zhǔn)差，計算均勻性偏差（最大單點值與平均值之差≤±20%）。流入氣流速度測試：測量位置：在前窗操作口垂直平面上，距開口邊緣50mm處，按高度方向均勻布置5個測點（頂部、中部、底部及上下1/4處），每個測點沿水平方向取左、中、右3個位置讀數(shù)。技術(shù)要求：Ⅱ級A2型柜流入風(fēng)速≥0.51m/s，B2型≥0.57m/s；Ⅲ級柜入口處負(fù)壓需維持-120Pa±10Pa，流入氣流速度≥0.6m/s。（三）氣流可視化測試靜態(tài)流型測試：發(fā)煙位置：分別在工作區(qū)左、中、右三個區(qū)域的頂部（距HEPA過濾器出口100mm）、中部（工作臺面上方300mm）及前窗開口處釋放煙霧，觀察氣流軌跡。合格流型：垂直氣流應(yīng)均勻向下，無渦流或向上反流；前窗開口處煙霧應(yīng)沿操作口內(nèi)側(cè)平穩(wěn)向內(nèi)吸入，無向外擴(kuò)散；柜體邊角處無氣流死角，煙霧沿側(cè)壁無滯留。動態(tài)干擾測試：模擬操作：操作人員穿戴完整防護(hù)裝備（防護(hù)服、手套、護(hù)目鏡），在柜內(nèi)進(jìn)行典型實驗操作（如移液器移液、離心管開蓋、攪拌混勻），同步釋放煙霧觀察氣流擾動情況。關(guān)鍵控制點：操作時手臂移動速度不超過0.5m/s，避免快速動作導(dǎo)致氣流紊亂；離心管開蓋時煙霧應(yīng)被即時吸入排風(fēng)系統(tǒng)，無向操作人員方向擴(kuò)散的痕跡。（四）HEPA過濾器完整性測試氣溶膠發(fā)生：在生物安全柜進(jìn)風(fēng)端注入PAO氣溶膠，濃度控制在10-20mg/m3，上游氣溶膠濃度需穩(wěn)定30分鐘后開始檢測。掃描方法：邊框掃描：用光度計探頭沿過濾器與柜體密封邊框移動，速度≤5cm/s，重點檢測液槽密封膠與過濾器的連接處。濾料掃描：按“之”字形路徑掃描過濾器表面，探頭距濾料表面≤25mm，掃描間距≤20mm，確保覆蓋整個過濾面積。數(shù)據(jù)判定：濾料泄漏率≤0.01%，邊框及密封處泄漏率≤0.05%；Ⅲ級柜排氣過濾器需額外進(jìn)行不可掃描區(qū)域檢測，泄漏率≤0.005%。（五）負(fù)壓密封性測試（Ⅲ級柜專用）壓力設(shè)定：關(guān)閉前窗操作口，啟動負(fù)壓控制系統(tǒng)，將柜內(nèi)壓力調(diào)節(jié)至-120Pa，穩(wěn)定后關(guān)閉風(fēng)機(jī)。衰減監(jiān)測：用高精度壓差計記錄10分鐘內(nèi)壓力變化，每1分鐘讀數(shù)一次。合格標(biāo)準(zhǔn)為10分鐘內(nèi)壓力衰減≤10%（即最終壓力≥-108Pa）。泄漏定位：若衰減超標(biāo)，用煙霧發(fā)生器檢測柜體觀察窗、手套接口、管道連接處等部位，標(biāo)記泄漏點并進(jìn)行密封處理后重新測試。五、合格標(biāo)準(zhǔn)驗證項目Ⅱ級A2型Ⅱ級B2型Ⅲ級平均下降氣流速度0.38-0.51m/s0.38-0.51m/s0.40-0.55m/s平均流入氣流速度≥0.51m/s≥0.57m/s≥0.60m/s（入口負(fù)壓-120Pa）氣流均勻性偏差≤±20%≤±20%≤±15%HEPA濾料泄漏率≤0.01%≤0.01%≤0.01%邊框密封泄漏率≤0.05%≤0.05%≤0.05%負(fù)壓衰減（10分鐘）——≤10%氣流可視化無渦流、無泄漏無渦流、無泄漏無渦流、無泄漏六、異常處理風(fēng)速異常：若下降氣流速度低于下限（如Ⅱ級柜＜0.38m/s），檢查風(fēng)機(jī)轉(zhuǎn)速是否正常，過濾器是否堵塞（阻力＞初始值50%時需更換）；流入氣流速度不足時，調(diào)整前窗高度至標(biāo)準(zhǔn)操作位置（通常200mm），若仍不達(dá)標(biāo)，需檢查排風(fēng)管道是否存在堵塞或漏風(fēng)。氣流泄漏：前窗操作口發(fā)現(xiàn)煙霧外逸時，立即停止實驗，檢查滑動窗密封膠條是否老化，必要時更換硅膠密封條；HEPA過濾器泄漏超標(biāo)時，需標(biāo)記泄漏位置，若為局部小孔可采用專用密封膠修補(bǔ)，修補(bǔ)后泄漏率仍超標(biāo)的，必須整體更換過濾器并重新驗證。數(shù)據(jù)爭議：同一測點三次測量值標(biāo)準(zhǔn)差＞0.05m/s時，需排除儀器故障后重新測量；驗證結(jié)果不合格時，由實驗室生物安全委員會組織復(fù)核，必要時委托第三方檢測機(jī)構(gòu)進(jìn)行仲裁檢測。七、記錄保存驗證記錄內(nèi)容：設(shè)備信息：型號、序列號、安裝位置、累計運行時間；環(huán)境參數(shù)：溫度、濕度、實驗室靜壓；儀器校準(zhǔn)：風(fēng)速儀、光度計的校準(zhǔn)證書編號及有效期；原始數(shù)據(jù)：各測點風(fēng)速值、過濾器掃描圖譜、氣流可視化照片/視頻；結(jié)論判定：是否合格、不合格項及整改措施。保存要求：紙質(zhì)記錄需雙人簽字確認(rèn)，電子版記錄加密存儲并定期備份；驗證報告及原始數(shù)據(jù)保存至少5年，重大維修及故障處理記錄需永久保存；記錄應(yīng)便于追溯，包含“驗證-整改-復(fù)核”全流程閉環(huán)信息。八、驗證人員資質(zhì)與職責(zé)資質(zhì)要求：持有省級獸醫(yī)行政管理部門頒發(fā)的高致病性動物病原微生物實驗操作資格證書；近2年內(nèi)參加過生物安全柜驗證技術(shù)培訓(xùn)并考核合格；熟悉GB41918-2022、《獸醫(yī)實驗室生物安全管理規(guī)范》等法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)。職責(zé)分工：主檢人員：負(fù)責(zé)制定驗證方案、操作核心儀器、數(shù)據(jù)分析及報告編制；輔助人員：協(xié)助環(huán)境控制、設(shè)備調(diào)試及安全防護(hù)，確保驗證過程符合生物安全要求；審核人員：由實驗室負(fù)責(zé)人或生物安全專