2026年高考生物一輪復習：選擇性必修3生物技術與工程知識點考點背誦提綱第1章發(fā)酵工程第1節(jié)傳統(tǒng)發(fā)酵技術的應用1.酵母菌是單細胞真菌，真核生物，生殖方式可分為出芽生殖(營養(yǎng)充足)和孢子生殖(營養(yǎng)匱乏)兩類，代謝類型為異養(yǎng)兼性厭氧型，在無氧條件下2.醋酸菌是一類使糖類和酒精氧化成醋酸等產物的單細胞細節(jié)，原核生物，分裂方式為二分裂，代謝類型為異養(yǎng)需氧型，當糖源和氧氣都充足時能將糖直接分解為醋酸；當缺少糖源時，醋酸菌先將乙醇轉化為乙醛，再將乙醛轉變?yōu)榇姿帷?.乳酸菌是單細胞細菌，原核生物，分裂方式為二分裂，代謝類型為異養(yǎng)厭氧型，在無氧條件下產生乳酸。5.制作泡菜的基本步驟：①用清水和食鹽配制質量百分比為5%～20%的鹽水，并將鹽水煮沸，冷卻待用；鹽水煮沸的目的：殺死水中雜菌；除去水中溶解氧，為乳酸菌提供無氧環(huán)境。②將新鮮蔬菜(如蘿卜、黃瓜等)洗凈，切成塊狀或條狀，混合均勻，晾干后裝入泡菜壇內；裝至半壇時，放入蒜瓣、生姜及其他香辛料，繼續(xù)裝置八成③將冷卻好的鹽水緩緩倒入壇中，使鹽水沒過全部菜料，蓋好壇蓋；④向壇蓋邊槽中注滿水，并在發(fā)酵過程中注意經常向水槽中補充水，根據室內溫度控制發(fā)酵時間。壇蓋邊槽注滿水的目的：完全隔絕外界空氣，保持壇內無氧環(huán)境，防止雜菌污染。6.制作果酒/果醋的基本步驟：毒，晾干備用；②取新鮮葡萄，先用清水沖洗1～2次，再先沖洗再去枝梗的目的：先去除枝梗會造成葡萄皮表面出現創(chuàng)口，增加其被雜菌污染的概率。不能反復多次沖洗的目的：避免洗掉果皮上的野生酵母，使酵母菌數量減少，發(fā)酵效果差。無氧呼吸產生酒精且釋放CO2,剩余空間可起到緩沖作用防止發(fā)酵液外溢。④將溫度控制在18一30℃進行發(fā)酵。在發(fā)酵過程中，每隔12h左右將瓶蓋擰松一次，注意不要打開瓶蓋，此后再擰緊瓶蓋。發(fā)擰松瓶蓋的目的：酒精發(fā)酵過程會產生CO2,發(fā)酵瓶內的氣壓增大，若長期只擰松不擰開的目的：防止空氣中雜菌飄入發(fā)酵瓶造成污染。酒精生成。酵溫度為30一35℃,時間為7一8d。7.在上述傳統(tǒng)發(fā)酵食品的制作過程中，我們沒有接種菌種，而是利用了天然存在的菌種。第2節(jié)微生物的培養(yǎng)技術及應用一、微生物的基本培養(yǎng)技術1.人們按照微生物對營養(yǎng)物質的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質——培養(yǎng)基，用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物或積累其代謝物。其中，不含凝固劑(如瓊脂)、呈液體狀態(tài)的培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基；添加較多凝固劑，呈固體狀態(tài)的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，它是實驗室中最常用的培養(yǎng)基之一。2.各種培養(yǎng)基的配方不同，但一般都含有水、碳源(提供碳元素的物質)、氮源(提供氮元素的物質)和無機鹽等營養(yǎng)物質。在提供上述幾種主要營養(yǎng)物質的基礎上，培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質以及02的需求。3.獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關鍵是防止雜菌污染。4.消毒是指使用較為溫和的物理、化學或生物等方法殺死物體表面或內部一部分微生物。常用的消毒方法有煮沸消毒、巴氏消毒等。5.滅菌則是指使用強烈的理化方法殺死物體內外所有的微生物，包括芽孢和等。6.常見的消毒和滅菌的方法：①煮沸消毒法：在100℃煮沸5一6min,可以殺死微生物的營養(yǎng)細胞和一部分芽孢；②巴氏消毒法：在62一65℃消毒30min或80一90℃,處理30s~1min,可以殺死牛奶中的絕大多數微生物，并且不破壞牛奶的營養(yǎng)成分；③化學藥物消毒：常對操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒；④濕熱滅菌：100kPa,121℃下處理15～30min,常用來滅培養(yǎng)基；⑤干熱滅菌：將滅菌物品放入密閉容器如干熱滅菌箱，在160一170℃的熱空氣中維持2一3h可以達到滅菌的目的，常用于耐高溫的和需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(如吸管、培養(yǎng)皿等)、金屬用具等；⑥灼燒滅菌：將微生物的接種工具，如涂布器、接種環(huán)、接種針或其他金屬用具，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌。此外，在接種過程中，試管口、瓶口等容易被污染的部位，也可以通過此方法來滅菌。品接觸。為了避免周圍環(huán)境中微生物的污染，接下來的許多操作都應在超8.在微生物學中，將接種于培養(yǎng)基內，在合適條件下形成的含特定種類微生物的群體稱為培養(yǎng)物。由單一個體繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物，獲得純培養(yǎng)物的過程就是純培養(yǎng)。10.酵母菌的純培養(yǎng)過程：①制備培養(yǎng)基：配置培養(yǎng)基→滅菌(使用高壓蒸汽滅菌法)→倒平板；一個未接種的平板倒置，放入28℃左右(培養(yǎng)溫度因酵母菌種類的不同而稍有差異)的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48h。12.常用的微生物純化的方法：旁冷卻接種環(huán)，同時拔出裝有酵母菌培養(yǎng)液的試管的棉塞→將試管口通焰→在火焰附近用接種環(huán)蘸取—環(huán)菌液→將試管口通過火焰，并塞上棉塞→在火焰附近將皿蓋打開一條縫隙，用接種環(huán)在培養(yǎng)基表面迅速輕劃三至五條平行線，蓋上皿蓋→注意不要將最后一次的劃線與第一次的劃線相連。第5頁共21頁②稀釋涂布平板法：鏟取土樣，將樣品裝入紙袋中→將10g土樣加入盛有90mL無菌水的錐形瓶中，充分搖勻，取1mL上清液加入盛有9mL無菌水的試管中，依次等比稀釋→取0.1mL菌液，滴加到培養(yǎng)基表面→將涂布器浸在盛酒精的燒杯中→將涂布器放在火焰上灼燒，待酒精燃盡、涂布器冷卻后，再進行涂布→用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面，涂布時可轉動培養(yǎng)皿，使涂布均勻。13.在微生物學中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱為選擇培養(yǎng)基。14.微生物的數量測定方法：①稀釋涂布平板法：稀釋涂布平板法除可以用于分離微生物外，也常用來統(tǒng)計樣品中活菌的數目。當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個單菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結果準確，一般選擇菌落數為30一300的平板進行計數，且在同一稀釋度下，應至少對3個平板進行重復計數，然后求出平均值。統(tǒng)計的菌落數往往比活菌的實際數目少，這是因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。②顯微鏡直接計數法：利用顯微鏡進行直接計數，也是一種常用的、快速直觀的測定微生物數量的方法。該方法利用特定的細菌計數板或血細胞計數板，在顯微鏡下觀察、計數，然后再計算一定體積的樣品中微生物的數量，統(tǒng)計的菌落數往往比活菌的實際數目多，這是因為顯微鏡下統(tǒng)計的是活菌數和死第3節(jié)發(fā)酵工程及其應用1.發(fā)酵工程一般包括菌種的選育，擴大培養(yǎng)，培養(yǎng)基的配制、滅菌，接種，發(fā)酵，產品的分離、提純等方面2.發(fā)酵工程的應用：①在食品工業(yè)上的應用：生產傳統(tǒng)的發(fā)酵產品、生產各種各樣的食品添加劑、②在醫(yī)藥工業(yè)上的應用：青霉素的發(fā)現和產業(yè)化生產推動了發(fā)酵工程在醫(yī)藥領域的應用和發(fā)展。之后，發(fā)酵工程逐步擴展到了其他抗生素、多種氨基酸、激素和免疫調節(jié)劑等的生產領域。近些年來，基因工程、蛋白質工程等的廣泛應用給發(fā)酵工程制藥領域的發(fā)展注入了強勁動力。③在農牧業(yè)上的應用：生產微生物肥料、生產微生物農藥、生產微生物飼料④在其他方面的應用：發(fā)酵原料的改變推動著發(fā)酵工業(yè)迅速發(fā)展，對解決資源短缺與環(huán)境污染問題具有重要意義。自然界中還存在著一定數量的極端微生物，它們能在各種極端惡劣的環(huán)境(如高溫、高壓、高鹽和低溫等環(huán)境)中正常生活，對它們的研究已成為國際熱點，其中一些極端微生物已應用于生產實踐。第2章細胞工程第1節(jié)植物細胞工程1.細胞增裂和分化后，仍然具有產生完整生物體或分化成其他各神細胞的潛能，即細胞具有全能性。2.在特定的時間和空間條件下，細胞中的基因會選擇性地表達。3.植物組織培養(yǎng)技術：是指將離體的植物器官、組織或細胞等，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導其形成完整植株的技術。這些離體培養(yǎng)的植物器官、組織或細胞被稱為外植體。4.菊花的組織培養(yǎng)：①用酒精擦拭雙手和超凈工作臺臺面。將流水充分沖洗后的外植體(幼嫩的莖段)用酒精消毒30s,然后立即用無菌水清洗2～3次。再用次氯酸鈉溶液處理30min后，立即用無菌水清洗2一3次；③在酒精燈火焰旁，將外植體的1/3∽1/2插人誘導愈傷組織的培養(yǎng)基中，用封口膜或瓶蓋封蓋瓶口，并在培養(yǎng)瓶上做好標記；④將接種了外植體的錐形瓶或植物組織培養(yǎng)瓶置于18一22℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中，定期觀察和記錄愈傷組織的生長情況；⑤培養(yǎng)15一20d后.將生長良好的愈傷組織轉接到誘導生芽的培養(yǎng)基上，長【操作注意】②接種時注意外植體的方向，不要倒插；③誘導愈傷組織期間一般不需要光照(脫分化階段避光),在后續(xù)的培養(yǎng)過程中，每日需要給予適當時間和強度的光照(再分化階段照光)。5.在進行體細胞雜交之前，必須先利用纖維素酶和果膠酶去除這層細胞壁，獲得原生質體。二醇(PEG)融合法、高Ca2+-—高pH融合法等。融合后得到的雜種細胞第8頁共21頁7.植物體細胞雜交是指將不同來源的植物體細胞，在一定條件下融合成雜種細胞，并把雜種細胞培育成新植物體的技術。其突出意義在于克服遠緣雜交不親和的障礙。8.植物體細胞雜交技術流程圖：A細胞9.植物繁殖新途徑①快速繁殖：快速繁殖技術又叫微型繁殖技術，它不僅可以高效、快速地實現種苗的大量繁殖，還可以保持優(yōu)良品種的遺傳特性。②作物脫毒：以植物的莖尖作為外植體進行組織培養(yǎng)，再生的植株就有可能不帶病毒，從而獲得脫毒苗，減輕病毒在作物體內積累而導致的作物產量降低、品質變差。10.作物新品種的培育①單倍體育種：單倍體育種可以先通過花藥(或花粉)培養(yǎng)獲得單倍體植株，然后經過秋水仙素誘導染色體加倍，當年就能培育出遺傳性狀相對穩(wěn)定的純合二倍體植株，這極大地縮短了育種的年限，節(jié)約了大量的人力和第9頁共21頁②突變體的利用：在植物的組織培養(yǎng)過程中，由于培養(yǎng)細胞一直處于不斷增殖的狀態(tài)，因此它們容易受到培養(yǎng)條件和誘變因素(如射線、化學物質等)的影響而產生突變。從產生突變的個體中可以篩選出對人們有用的突變體，進而培育成新品種。11.細胞產物的工廠化生產：植物代謝會產生一些一般認為不是植物基本的生命活動所必需的產物——次生代謝物。次生代謝物是一類小分子有機化合物(如酚類、萜類和含氮化合物等),在植物抗病、抗蟲等方面發(fā)揮作用，也是很多藥物、香料和色素等的重要來源。由于植物畑胞的次生代謝物含量很低，從植物組織提取會大最破壞植物資源，有些產物又不能或難以通過化學合成途徑得到，因此人們期望利用植物細胞培養(yǎng)來獲得目標產物，這個過程就是細胞產物的工廠化生產。植物細胞培養(yǎng)是指在離體條件下對單個植物細胞或細胞團進行培養(yǎng)使其增殖的技術。它不占用耕地，幾乎不受季節(jié)、天氣等的限制，因此對于社會、經濟、環(huán)境保護具有重要意義。第2節(jié)動物細胞工程1.動物細胞培養(yǎng)是指從動物體中取出相關的組織，將它分散成單個細胞，然后在適宜的培養(yǎng)條件下，讓這些細胞生長和增殖的技術。2.動物細胞培養(yǎng)的條件：①營養(yǎng)：細胞在體外培養(yǎng)時，培養(yǎng)基中應含有細胞所需要的各種營養(yǎng)物質。將細胞所需的營養(yǎng)物質按種類和所需量嚴格配制而成的培養(yǎng)基稱為合成培養(yǎng)基。由于人們對細胞所需的營養(yǎng)物質尚未全部研究清楚，因此在使用合成培養(yǎng)基時，通常需要加入血清等一些天然成分。培養(yǎng)動物細胞一般使用液體培養(yǎng)基，也稱為培養(yǎng)液。②無菌、無毒的環(huán)境：在體外培養(yǎng)細胞時，必須保證環(huán)境是無菌、無毒的，即需要對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用其進行滅菌處理以及在無菌環(huán)境下進行操作。培養(yǎng)液還需要定期更換，以便清除代謝物，防止細胞代謝物積累對細胞自身造成危害。第10頁共21頁的溫度多以36.5±0.5℃為宜。多數物細胞生存的適宜pH為7.2一7.4。養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶，并將它們置于含有95%空氣和5%CO2的混合氣體的放入CO?用機械的方法，或用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理的方法，將組織分散成單個細胞放入CO?4.干細胞存在于早期胚胎、骨髓和臍帶等多種組織和器官中，包括胚胎干細胞和成體干細胞等。①胚胎干細胞(簡稱ES細胞)存在于早期胚胎中，具有分化為成年動物體內的任何一種類型的細胞，并進一步形成機體的所有組織和器官甚至個體的潛能。②成體干細胞是成體組織或器官內的干細胞，包括骨髓中的造血干細胞、神經系統(tǒng)中的神經干細胞和睪丸中的精原干細胞等。成體干細胞具有組織特異性，只能分化成特定的細胞或組織，不具有發(fā)育成完整個體的能能力。5.科學家通過體外誘導小鼠成纖維細胞，獲得了類似胚胎干細胞的一種細胞，將它稱為誘導多能干細胞(簡稱iPS細胞)。因其誘導過程無須破壞胚胎，而且iPS細胞可以來源于病人自身的體細胞，將它移植回病人體內后，理論上可以避免免疫排斥反應，所以科學家普遍認為iPS細胞的應用前景優(yōu)于胚胎干細胞。1.動物細胞融合技術就是使兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的技術。融合后形成的雜交細胞具有原來兩個或多個細胞的遺傳信息。2.動物細胞融合與植物原生質體融合的基本原理相同，均體現了細胞膜具有定的流動性。誘導動物細胞融合的常用方法有PEG融合法、電融合法和滅活病毒誘導法等，其中滅活病毒誘導法是動物細胞融合的特有方法。3.細胞融合技術突破了有性雜交的局限，其重大意義在于使遠緣雜交成為可4.單克隆抗體的制備流程：①用特定的抗原對小鼠進行免疫，并從該小鼠的脾中得到能產生特定抗體的B淋巴細胞；與此同時，體外培養(yǎng)骨髓瘤細胞；②將獲得的多種B淋巴細胞與骨髓瘤細胞誘導融合，獲得多種雜交細胞；③用特定的選擇培養(yǎng)基進行篩選：在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死亡，只有融合的雜交瘤細胞才能生長；④對上述經選擇培養(yǎng)的雜交瘤細胞進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經多次篩選，就可獲得足夠數量的能分泌所需抗體的細胞；⑤將抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞在體外條件下大規(guī)模培養(yǎng)，或注射到小鼠腹腔內增殖；⑥從細胞培養(yǎng)液或小小鼠腹水中獲取大量的單克隆抗體。【注意區(qū)分】①雜交瘤細胞的優(yōu)點：既能迅速大量增殖，又能產生抗體。②單克隆抗體的優(yōu)點：能準確地識別抗原的細微差異(靈敏度高),與特定抗原發(fā)生特異性結合(特異性強),并且可以大量制備。5.單克隆抗體的應用：①抗體-藥物偶聯物(ADC)通過將細胞毒素與能特異性識別腫瘤抗原的單克隆抗體結合。實現了對腫瘤細胞的選擇性殺傷。ADC通常由抗體、接頭和藥物(如細胞毒素)三部分組成。②作為體外診斷試劑，在多種疾病的診斷和病原體鑒定中發(fā)揮重要的作用。例如，利用同位素或熒光標記的單克隆抗體在特定組織中成像的技術，可定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病。③單克隆抗體自身也能用于治療疾病。在醫(yī)藥領域，單克隆抗體藥物占有非常重要的地位。2015年，全球銷傳額前十位的藥物中，單克隆抗體藥物就有5種。同年，我國的單克隆抗體藥物市場規(guī)模已達72億元。1.動物細胞核移植技術是將動物的細胞核移入一個去核的卵母細胞中，井使重組細胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動物個體的技術。2.哺乳動物核移植可以分為胚胎細胞核移植和體細胞核移植。由于動物胚胎細胞分化程度低，表現全能性相對容易，而動物體細胞分化程度高，表現全能性十分困難，因此動物體細胞核移植的難度明顯高于胚胎細胞核移植。3.體細胞核移植的過程：①從屠宰場收集牛卵巢，采集卵母細胞，在體外培養(yǎng)到MII期；同時，從供體高產奶牛身體的某一部校(如耳)上取體細胞，進行培養(yǎng)；②通過顯微操作對MII期卵母細胞去核；③將供體細胞注入去核的卵母細胞，通過電融合法使兩細胞融合，供體核進入卵母細胞，形成重構胚；④用物理或化學方法(如電刺激、Ca2+載體、乙醇和蛋白酶合成抑制劑等)⑤將胚胎移入受體(代孕)母牛體內，代孕母牛生出與供體奶牛遺傳物質基本相同的犢牛。第13頁共21頁4.體細胞核移植技術的應用：①在畜牧生產中，利用體細胞核移植技術，可以加速家畜遺傳改良進程，促進②在醫(yī)藥衛(wèi)生領域，通過建立轉基因體細胞系，再利用體細胞核移植技術培育的轉基因克隆動物可以作為生物反應器，生產許多珍貴的醫(yī)用蛋白。③在治療人類疾病時，轉基因克隆動物的細胞、組織或器官可以作為異種移植的供體；以患者作為供體培育的人核移植胚胎干細胞，經過誘導分化能形成相應的細胞、組織或器官，將它們移植給患者時可以避免免疫排斥反應；克隆特定疾病模型的動物，還能為研究該疾病的玫病機制和開發(fā)相應的藥物提供幫助。④.在保護瀕危物種方面，該技術有望增加瀕危物種的存活數量。第3節(jié)胚胎工程1.胚胎工程是指對生殖細胞、受精卵或早期胚胎細胞進行多種顯微操作和處理，然后將獲得的胚胎移植到雌性動物體內生產后代，以滿足人類的各種需求。胚胎工程技術包括體外受精、胚胎移植和胚胎分割等。2.受精是精子與卵子結合形成合子(即受精卵)的過程，包括受精前的準備階段和受精階段，在自然條件下，哺乳動物的受精在輸卵管內完成。準備階段1——精子獲能：剛剛排出的精子不能立即與卵子受精，必須在雌性動物的生殖道發(fā)生相應的生理變化后，才能獲得受精能力，這一生理現象稱為“精子獲能”;準備階段2——卵子的準備：卵子一般在排出2～3h后才能被精子穿入。動物排出的卵子成熟程度不同，有的可能是初級卵母細胞，如馬、犬等；有的可能是次級卵母細胞，如豬、羊等，但它們都要在輸卵管內進一步成熟，到MII期時，才具備與精子受精的能力；受精階段：獲能后的精子與卵子相遇的瞬回，卵細胞膜外的透明帶會迅速發(fā)生生理反應(透明帶反應),阻止后來的精子進入透明帶。然后，精子入卵。第15頁共21頁精子入卵后，卵細胞膜也會立即發(fā)生生理反應(卵黃膜封閉),拒絕其他精子再進入卵內。精子入卵后，尾部脫離，原有的核膜破裂并形成一個新的核膜，最后形成一個比原來精子的核還大的核，叫作雄原核。與此同時，精子入卵后被激活的卵子完成減數分裂Ⅱ,排出第二極體后，形成雌原核。雄、雌原核充分發(fā)育后，相向移動，彼此靠近，核膜消失。這個含有兩個染色體組的合子就是受精卵。受精過程結束后，受精卵的發(fā)育也就開始了。4.胚胎早期發(fā)育的幾個階段：①卵裂期：受精卵形成后即在輸卵管內進行有絲分裂，開始發(fā)育，此時是在透明帶內進行分裂，細胞的數量不斷增加，但胚胎的總體積并不增加，有機物在不斷減少，但有機物種類增加。②桑葚胚期：當卵裂產生的子細胞逐漸形成致密的細胞團，形似桑葚時，這時的胚胎稱為桑葚胚，此時細胞沒有分化。③囊胚期：胚胎進一步發(fā)育，細胞逐漸分化。聚集在胚胎一端的細胞形成內細胞團，將來發(fā)育成胎兒的各種組織；而沿透明帶內壁擴展和排列的細胞，稱為滋養(yǎng)層細胞，它們將來發(fā)育成胎膜和胎盤。隨著胚胎的進一步發(fā)育，胚胎的內部出現了含有液體的腔——囊胚腔，這個時期的胚胎叫作囊胚。囊胚進一步擴大，會導致透明帶破裂，胚胎從其中伸展出來，這一過程叫作孵化。④原腸胚期：原腸胚表面的細胞層為外胚層，向內遷胚層將逐漸分化形成各種組織、器官等。1.體外受精：哺乳動物的體外受精技術主要包括卵母細胞的采集、精子的獲取和受精等步驟。采集到卵母細胞和精子，要分別在體外進行成熟培養(yǎng)和獲能處理，然后才能用于體外受精。一般情況下，可以將獲能的精子和培養(yǎng)成熟的卵子置于適當的培養(yǎng)液中共同培養(yǎng)一段時間，來促使它們完成受精。2.胚胎移植是指將通過體外受精其他方式得到的胚胎，移植到同種的、生理狀態(tài)相同的雌性動物體內，使之繼續(xù)發(fā)育為新個體的技術。以家畜的胚胎移植為例.胚胎移植主要包括供體、受體的選擇和處理，配種或人工授精，胚胎的收集、檢查、培養(yǎng)或保存，胚胎的移植，以及移植后的檢查等步驟。3.胚胎移植的步驟：①對優(yōu)良供體母牛和受體母牛進行同期發(fā)情處理，使供體母牛超數排卵，使受體母牛發(fā)情；②取供體母牛的MII期的卵母細胞與優(yōu)良公牛的已獲能的精子結合，形成受③受精卵在適宜培養(yǎng)液中進行早期胚胎發(fā)育，收集早期胚胎并檢查；④取健康的桑葚胚或囊胚期進行胚胎移植，轉入發(fā)情的受體母牛子宮內；⑤對受體奶牛進行定期妊娠檢查，分娩出具有優(yōu)良性狀的后代。4.胚胎移植的優(yōu)點：①充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個體的繁殖潛力；②大大縮短了供體本身的繁殖周期；③對供體施行超數排卵處理后，可獲徂多枚胚胎，經移這使供體的后代數是自然繁殖的十幾倍到幾十倍；究和應用。5.胚胎分割是指采用機械方法將早期胚胎切割成2等份、4等份或8等份等，經移植獲得同卵雙胎或多胎的技術。來自同一胚胎的后代具有相同的遺傳物胚胎分割所需要的主要儀器設備為體視顯微鏡和顯微操作儀，在進行胚胎分割時，應選擇發(fā)育良好、形態(tài)正常的桑葚胚或囊胚，將它移入盛有操作液的培養(yǎng)皿中，然后在顯微鏡下用分割針或分割刀分割。在分割囊胚階段的胚6.在胚胎移植前，進行性別鑒定、遺傳病篩查等，對于人工控制動物性別、動物繁育健康后代具有重要意義。第3章基因工程原核生物中分離純化出來的。迄今分離的限制酶有數千種，許多已經被商業(yè)化生產。它們能夠識別雙鏈DNA分子的特定核昔酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開。平末端。作用底物是DNA片段，作用位點是磷酸二酯鍵。4.運載體能攜帶外源基因進入細胞，是外源基因穩(wěn)定存在并表達，常見的運載體有質粒、噬菌體、動植物病毒等。以質粒為例，質粒是一種裸露的、結構簡單、獨立存在于真核細胞細胞核或原核細胞擬核DNA之外，井具有自我供外源DNA片段(基因)插入其中。攜帶外源DNA片段的質粒進入受體細胞在基因工程操作中，真正被用作載體的質粒，都是在天然質粒的基礎上進行過人工改造的，這些質粒上常有特殊的標記基因，如四環(huán)索抗性基因、氨節(jié)背霉素抗性基因等，便于重組DNA分子的篩選。①稱取約30g洋蔥切碎，然后放入研缽中，倒入10mL研磨液，充分研磨；②在漏斗中墊上紗布，將洋蔥研磨液過濾到燒杯中，在4℃冰箱中放置幾分鐘后，再取上清液。也可以直接將研磨液倒入塑料離心管中，在1500r/min的轉速下離心5min,再取上清液放入燒杯中；第18頁共21頁③在上清液中加入體積相等的、預冷的酒精溶液(體積分數為95%),靜置2在10000r/min的轉速下離心5min,棄上清液，將管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干。物溶于其中一支試管的NaCl溶液中。然后，向兩支試管中各加入4苯胺試劑?；旌暇鶆蚝?，將試管置于沸水中加熱5min。待試管冷卻后，比第2節(jié)基因工程的基本操作程序②利用PCR獲取和擴增目的基因：PCR是聚合酶鏈式反應的縮寫，它是一項根據DNA半保留復制的原理和堿基互補配對的原則，在體外提供參與DNA復制的各種組分與反應條件，對目的基因的核苷酸序列進行大量復制的技術。2.第二步——基因表達載體的構建(核心步驟)①導入植物受體細胞：農桿菌轉化法、花粉管第19頁共21頁①取農桿菌中的Ti質粒在體外進行后續(xù)操作，將獲得的目的基因插入到Ti質粒的T-DNA序列中，其特點是易轉移并整合到受主細胞的染色體DNA上，獲得重組Ti質粒；②用CaCl2處理農桿菌，使其變?yōu)楦惺軕B(tài)細胞，將其培養(yǎng)在含有重組Ti質粒的培養(yǎng)液中，還應加入某些抗生素(標記基因上攜帶有某些抗性基因)對農桿菌進行篩選，獲得成功轉入重組Ti質粒的農桿菌；③用轉化成功的農桿菌侵染植物細胞，目的基因可隨著T-DNA轉移到植物細胞的染色體DNA中去。④利用植物組織培養(yǎng)技術將轉化成功的植物細胞培養(yǎng)成一個植物個體。4.第四步——目的基因的檢測與鑒定①分子水平檢測：包括通過PCR和電泳技術、分子雜交技術等檢測棉花的染色體DNA上是否插入了目的基因或檢測目的基因是否轉錄出對于的mRNA;從轉基因棉花中提取蛋白質，用相應的抗體進行抗原一抗體雜交，檢測由基因是否翻譯成目的蛋白等。②個體水平檢測：進行接種實驗，如采摘抗蟲棉的葉片飼喂棉鈴蟲來確定目的基因是否賦予了棉花抗蟲特性以及抗性的程度。第3節(jié)基因工程的應用1.基因工程在農牧業(yè)方面的應用①改良植物的品質②提高動物的生長速率③改善畜產品的品質2.基因工程在醫(yī)藥衛(wèi)生領域的應用對微生物或動植物的細