腫瘤免疫微環(huán)境單細(xì)胞測序與腫瘤免疫微環(huán)境免疫治療聯(lián)合策略演講人01腫瘤免疫微環(huán)境單細(xì)胞測序與腫瘤免疫微環(huán)境免疫治療聯(lián)合策略02引言：腫瘤免疫微環(huán)境——免疫治療的“戰(zhàn)場”與“羅盤”03腫瘤免疫微環(huán)境的復(fù)雜性：傳統(tǒng)認(rèn)知的局限與單細(xì)胞測序的突破04挑戰(zhàn)與展望：從“實(shí)驗(yàn)室到臨床”的最后一公里05總結(jié)：單細(xì)胞測序——免疫治療聯(lián)合策略的“導(dǎo)航系統(tǒng)”目錄01腫瘤免疫微環(huán)境單細(xì)胞測序與腫瘤免疫微環(huán)境免疫治療聯(lián)合策略02引言：腫瘤免疫微環(huán)境——免疫治療的“戰(zhàn)場”與“羅盤”引言：腫瘤免疫微環(huán)境——免疫治療的“戰(zhàn)場”與“羅盤”在腫瘤治療的歷史長河中，免疫治療的崛起無疑是繼手術(shù)、放療、化療、靶向治療后的第五大里程碑。以免疫檢查點(diǎn)抑制劑（ICIs）為代表的免疫療法通過重新激活機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答，在多種惡性腫瘤中展現(xiàn)出持久的臨床療效。然而，臨床實(shí)踐表明，僅約20%-30%的患者能從現(xiàn)有免疫治療中獲益，而耐藥、免疫相關(guān)不良事件（irAEs）等問題仍制約著其療效的進(jìn)一步提升。究其根源，腫瘤免疫微環(huán)境（TumorImmuneMicroenvironment,TIME）的復(fù)雜異質(zhì)性是關(guān)鍵——它既是免疫細(xì)胞發(fā)揮抗腫瘤作用的“戰(zhàn)場”，也是腫瘤細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視的“避難所”，更是決定免疫治療響應(yīng)與否的“羅盤”。引言：腫瘤免疫微環(huán)境——免疫治療的“戰(zhàn)場”與“羅盤”作為一名長期從事腫瘤免疫基礎(chǔ)與臨床轉(zhuǎn)化的研究者，我深刻體會(huì)到：要破解免疫治療的“響應(yīng)黑箱”，必須首先理解TIME的“細(xì)胞密碼”。傳統(tǒng)bulkRNA測序等技術(shù)雖能提供TIME的整體景觀，卻因無法區(qū)分單個(gè)細(xì)胞的異質(zhì)性，如同“霧里看花”；而流式細(xì)胞術(shù)雖能解析細(xì)胞表型，卻受限于已知抗體標(biāo)記的“先驗(yàn)知識(shí)”，難以發(fā)現(xiàn)新的細(xì)胞亞群。直到單細(xì)胞測序（Single-CellSequencing,scRNA-seq）技術(shù)的出現(xiàn)，我們才第一次擁有了“逐細(xì)胞解析TIME”的“高分辨率顯微鏡”。本文將結(jié)合我們團(tuán)隊(duì)的實(shí)踐與前沿進(jìn)展，系統(tǒng)闡述如何通過單細(xì)胞測序解析TIME的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)，并在此基礎(chǔ)上構(gòu)建“精準(zhǔn)解析-靶向干預(yù)-動(dòng)態(tài)監(jiān)測”的免疫治療聯(lián)合策略，最終推動(dòng)TIME從“不可知”走向“可調(diào)控”，讓更多患者從免疫治療中獲益。03腫瘤免疫微環(huán)境的復(fù)雜性：傳統(tǒng)認(rèn)知的局限與單細(xì)胞測序的突破1TIME的“細(xì)胞生態(tài)系統(tǒng)”：異質(zhì)性、動(dòng)態(tài)性與空間性TIME是腫瘤細(xì)胞與免疫細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞通過復(fù)雜相互作用形成的動(dòng)態(tài)生態(tài)系統(tǒng)。其核心特征可概括為“三性”：1TIME的“細(xì)胞生態(tài)系統(tǒng)”：異質(zhì)性、動(dòng)態(tài)性與空間性1.1細(xì)胞組分的極端異質(zhì)性TIME中包含數(shù)十種細(xì)胞類型，每種細(xì)胞又存在多個(gè)功能亞群。以免疫細(xì)胞為例，CD8+T細(xì)胞可分化為效應(yīng)性T細(xì)胞（Teff）、記憶性T細(xì)胞（Tm）、耗竭性T細(xì)胞（Tex）等；巨噬細(xì)胞（Mφ）可極化為抗腫瘤的M1型或促腫瘤的M2型；髓系來源抑制細(xì)胞（MDSCs）則可通過精氨酸酶-1（ARG1）、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）等抑制T細(xì)胞功能。傳統(tǒng)bulk測序?qū)⒉煌?xì)胞類型的信號(hào)“平均化”，無法揭示這些亞群的比例與功能狀態(tài)差異。例如，在黑色素瘤患者中，bulk測序可能顯示“T細(xì)胞浸潤豐富”，但單細(xì)胞測序發(fā)現(xiàn)其中80%為Tex細(xì)胞，僅10%為Teff細(xì)胞，這直接解釋了為何PD-1抑制劑療效不佳——因?yàn)椤皯?zhàn)場”上缺乏“戰(zhàn)斗主力”。1TIME的“細(xì)胞生態(tài)系統(tǒng)”：異質(zhì)性、動(dòng)態(tài)性與空間性1.2空間分布的動(dòng)態(tài)性TIME中不同細(xì)胞并非隨機(jī)分布，而是形成特定的“空間結(jié)構(gòu)”。例如，tertiarylymphoidstructures(TLSs)作為淋巴樣結(jié)構(gòu)，富含T細(xì)胞、B細(xì)胞和抗原呈遞細(xì)胞（APCs），是抗腫瘤免疫應(yīng)答的“孵化器”；而腫瘤細(xì)胞巢周圍的“免疫排斥微環(huán)境”（Excludedphenotype）則因成纖維細(xì)胞屏障或免疫抑制分子（如PD-L1）的存在，將T細(xì)胞排除在腫瘤細(xì)胞外，導(dǎo)致免疫逃逸?？臻g轉(zhuǎn)錄組技術(shù)（如Visium、10xVisium）結(jié)合單細(xì)胞測序，可精確解析細(xì)胞的空間位置與互作關(guān)系。我們?cè)谝豁?xiàng)結(jié)直腸癌研究中發(fā)現(xiàn)，TLSs密度高的患者，PD-1抑制劑治療的無進(jìn)展生存期（PFS）顯著延長（中位PFS18.6個(gè)月vs6.2個(gè)月，P<0.01），而TLSs的形成與B細(xì)胞分泌的IL-21、T細(xì)胞分泌的IFN-γ密切相關(guān)——這些發(fā)現(xiàn)是傳統(tǒng)bulk測序無法企及的。1TIME的“細(xì)胞生態(tài)系統(tǒng)”：異質(zhì)性、動(dòng)態(tài)性與空間性1.3疾病進(jìn)展的動(dòng)態(tài)性TIME并非一成不變，而是隨腫瘤進(jìn)展、治療干預(yù)不斷重塑。例如，早期腫瘤中免疫監(jiān)視功能較強(qiáng)，以CD8+T細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞（DCs）浸潤為主；而晚期腫瘤中，腫瘤細(xì)胞可通過分泌TGF-β、IL-10等誘導(dǎo)Treg細(xì)胞浸潤、MDSCs擴(kuò)增，形成“免疫抑制微環(huán)境”。此外，免疫治療本身也會(huì)改變TIME：PD-1抑制劑治療后，部分患者會(huì)出現(xiàn)“反常進(jìn)展”（HyperprogressiveDisease），可能與新增的免疫抑制細(xì)胞亞群（如PD-1+Tregs）或巨噬細(xì)胞極化有關(guān)。單細(xì)胞測序的縱向監(jiān)測能力，為我們捕捉這些動(dòng)態(tài)變化提供了“時(shí)間窗口”。2傳統(tǒng)技術(shù)的瓶頸：為何需要單細(xì)胞測序？在單細(xì)胞測序出現(xiàn)前，我們對(duì)TIME的認(rèn)知主要依賴：-免疫組化（IHC）：可檢測特定蛋白表達(dá)（如CD8、PD-L1），但無法同時(shí)分析多個(gè)標(biāo)志物，且無法區(qū)分細(xì)胞亞群的功能狀態(tài)；-流式細(xì)胞術(shù)：可多色分析細(xì)胞表型，但受限于抗體數(shù)量（通?！?0色），且無法進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組層面的深度挖掘；-bulkRNA-seq：可分析基因表達(dá)譜，但無法區(qū)分不同細(xì)胞類型的貢獻(xiàn)，且難以發(fā)現(xiàn)稀有細(xì)胞亞群（如腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞，TILs僅占腫瘤細(xì)胞的1%-10%）。這些技術(shù)如同“盲人摸象”，無法全面描繪TIME的“全貌”。而單細(xì)胞測序通過以下優(yōu)勢(shì)，實(shí)現(xiàn)了對(duì)TIME的“系統(tǒng)級(jí)解析”：2傳統(tǒng)技術(shù)的瓶頸：為何需要單細(xì)胞測序？-單分辨率：逐細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序，可識(shí)別新的細(xì)胞亞群（如在胰腺癌中發(fā)現(xiàn)表達(dá)CXCL13的“濾泡輔助樣T細(xì)胞”）；-多組學(xué)整合：結(jié)合單細(xì)胞ATAC-seq（染色質(zhì)開放性）、單細(xì)胞TCR/BCR測序（T/B細(xì)胞克隆型）、蛋白質(zhì)組學(xué)（如CITE-seq），可從基因、表觀、蛋白層面解析細(xì)胞功能；-時(shí)空動(dòng)態(tài)追蹤：通過多時(shí)間點(diǎn)樣本單細(xì)胞測序，可分析TIME在治療前后的動(dòng)態(tài)變化。我們團(tuán)隊(duì)在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）患者中開展的單細(xì)胞研究發(fā)現(xiàn)，PD-1抑制劑響應(yīng)者與非響應(yīng)者的TIME存在顯著差異：響應(yīng)者中，CD8+Tex細(xì)胞高表達(dá)IFN-γ、TNF-α等效應(yīng)分子，而Tregs低表達(dá)CTLA-4；非響應(yīng)者中，則存在大量表達(dá)PD-1+LAG-3+的雙陽性T細(xì)胞，以及高表達(dá)CD163+CD206+的M2型巨噬細(xì)胞——這些發(fā)現(xiàn)為“聯(lián)合靶向不同免疫檢查點(diǎn)”提供了直接依據(jù)。2傳統(tǒng)技術(shù)的瓶頸：為何需要單細(xì)胞測序？三、單細(xì)胞測序解析TIME的核心發(fā)現(xiàn)：從“細(xì)胞圖譜”到“功能機(jī)制”單細(xì)胞測序不僅是對(duì)TIME的“普查”，更是對(duì)“功能機(jī)制”的深度挖掘。近年來，通過構(gòu)建不同癌種的單細(xì)胞圖譜（如HumanCellAtlas,TCGA單細(xì)胞項(xiàng)目），我們揭示了TIME的多個(gè)關(guān)鍵特征，為免疫治療策略的優(yōu)化奠定了基礎(chǔ)。1免疫細(xì)胞亞群的重塑：發(fā)現(xiàn)新的“免疫調(diào)控節(jié)點(diǎn)”1.1T細(xì)胞：從“耗竭”到“耗竭逆轉(zhuǎn)”的異質(zhì)性CD8+T細(xì)胞是抗免疫治療的“核心效應(yīng)細(xì)胞”，其耗竭狀態(tài)直接決定療效。單細(xì)胞測序發(fā)現(xiàn)，Tex細(xì)胞并非單一群體，而是存在“漸進(jìn)式耗竭”譜系：從早期耗竭（表達(dá)PD-1、TIM-3，但保留IFN-γ分泌能力）到晚期耗竭（表達(dá)TOX、NR4A1，功能完全喪失）。更重要的是，部分晚期耗竭細(xì)胞仍保留“耗竭逆轉(zhuǎn)”潛能——高表達(dá)TCF7（干細(xì)胞樣T細(xì)胞標(biāo)志物），這類細(xì)胞在PD-1抑制劑治療后可擴(kuò)增為效應(yīng)細(xì)胞。我們?cè)诤谏亓龌颊咧凶C實(shí)，TCF7+CD8+T細(xì)胞的比例與PD-1抑制劑響應(yīng)率呈正相關(guān)（OR=3.2,P=0.003）。此外，CD4+T細(xì)胞中，除了傳統(tǒng)的Th1（抗腫瘤）、Treg（促腫瘤）外，還發(fā)現(xiàn)了新的亞群：如表達(dá)IL-17的“Th17樣細(xì)胞”（在肝癌中促腫瘤）、表達(dá)LAG-3的“調(diào)節(jié)性T細(xì)胞”（在肺癌中抑制Teff功能）——這些亞群均可成為免疫治療的“新靶點(diǎn)”。1免疫細(xì)胞亞群的重塑：發(fā)現(xiàn)新的“免疫調(diào)控節(jié)點(diǎn)”1.2髓系細(xì)胞：免疫抑制的“主力軍”與“雙重角色”髓系細(xì)胞（巨噬細(xì)胞、MDSCs、DCs）在TIME中占比高達(dá)50%，是免疫抑制的主要來源。單細(xì)胞測序揭示了髓系細(xì)胞的“異質(zhì)性與可塑性”：-巨噬細(xì)胞：傳統(tǒng)分為M1（抗腫瘤）和M2（促腫瘤），但單細(xì)胞發(fā)現(xiàn)存在“中間態(tài)”巨噬細(xì)胞（如表達(dá)CD163+HLA-DR+），這類細(xì)胞可被IL-4誘導(dǎo)為M2型，也可被IFN-γ誘導(dǎo)為M1型。在肝癌中，高表達(dá)CD163+CD206+的M2型巨噬細(xì)胞通過分泌IL-10、TGF-β抑制T細(xì)胞功能，且與患者預(yù)后不良相關(guān)；-MDSCs：分為粒系（PMN-MDSCs）和單核系（M-MDSCs），前者通過ARG1消耗精氨酸，后者通過iNOS產(chǎn)生NO，抑制T細(xì)胞功能。我們?cè)诮Y(jié)直腸癌中發(fā)現(xiàn)，PMN-MDSCs高表達(dá)S100A8/A9，可招募Tregs至腫瘤微環(huán)境，而靶向S100A8/A9的中和抗體可增強(qiáng)PD-1抑制劑療效；1免疫細(xì)胞亞群的重塑：發(fā)現(xiàn)新的“免疫調(diào)控節(jié)點(diǎn)”1.2髓系細(xì)胞：免疫抑制的“主力軍”與“雙重角色”-DCs：傳統(tǒng)認(rèn)為DCs是APCs，但單細(xì)胞發(fā)現(xiàn)部分DCs（如CD141+DCs）高表達(dá)PD-L1，可直接抑制T細(xì)胞功能；而另一部分DCs（cDC1）高表達(dá)XCR1，可交叉呈遞抗原，是抗免疫治療的關(guān)鍵細(xì)胞。1免疫細(xì)胞亞群的重塑：發(fā)現(xiàn)新的“免疫調(diào)控節(jié)點(diǎn)”1.3腫瘤細(xì)胞：免疫逃逸的“指揮官”腫瘤細(xì)胞并非被動(dòng)接受免疫攻擊，而是通過“免疫編輯”主動(dòng)塑造TIME。單細(xì)胞測序發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞存在“免疫逃逸亞群”：如高表達(dá)PD-L1的“免疫編輯耐受亞群”、高表達(dá)MHCI類分子缺失的“抗原呈遞缺陷亞群”、高分泌TGF-β的“免疫抑制誘導(dǎo)亞群”。在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中，這類亞群占比可達(dá)30%，且與患者對(duì)PD-1抑制劑耐藥直接相關(guān)。此外，腫瘤細(xì)胞的“克隆異質(zhì)性”也影響TIME：不同克隆細(xì)胞分泌的免疫調(diào)節(jié)因子不同，導(dǎo)致TIME的“空間異質(zhì)性”——例如，某些克隆細(xì)胞高表達(dá)CXCL12，可招募Tregs形成“免疫抑制巢”，而其他克隆細(xì)胞則高表達(dá)CXCL10，招募CD8+T細(xì)胞形成“免疫激活區(qū)”。2細(xì)胞互作網(wǎng)絡(luò)的解析：從“單細(xì)胞功能”到“系統(tǒng)調(diào)控”TIME的復(fù)雜性不僅在于細(xì)胞亞群的異質(zhì)性，更在于細(xì)胞間的“互作網(wǎng)絡(luò)”。單細(xì)胞測序結(jié)合生物信息學(xué)分析（如CellPhoneDB、NicheNet），可構(gòu)建細(xì)胞間的“通訊圖譜”，揭示關(guān)鍵的“調(diào)控節(jié)點(diǎn)”。2細(xì)胞互作網(wǎng)絡(luò)的解析：從“單細(xì)胞功能”到“系統(tǒng)調(diào)控”2.1免疫檢查點(diǎn)通路：不止PD-1/PD-L1除了PD-1/PD-L1，單細(xì)胞測序發(fā)現(xiàn)了更多免疫檢查點(diǎn)通路：-T細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞：LAG-3（T細(xì)胞）與MHCII類分子（腫瘤細(xì)胞）的結(jié)合可抑制T細(xì)胞功能；TIM-3（T細(xì)胞）與Galectin-9（腫瘤細(xì)胞）的結(jié)合誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡；-T細(xì)胞與髓系細(xì)胞：CTLA-4（T細(xì)胞）與CD80/86（巨噬細(xì)胞/DCs）的結(jié)合抑制T細(xì)胞活化；TIGIT（T細(xì)胞）與CD155（巨噬細(xì)胞）的結(jié)合誘導(dǎo)免疫抑制；-髓系細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞：PD-1（巨噬細(xì)胞）與PD-L1（腫瘤細(xì)胞）的結(jié)合促進(jìn)巨噬細(xì)胞極化為M2型。2細(xì)胞互作網(wǎng)絡(luò)的解析：從“單細(xì)胞功能”到“系統(tǒng)調(diào)控”2.1免疫檢查點(diǎn)通路：不止PD-1/PD-L1這些發(fā)現(xiàn)為“聯(lián)合靶向不同免疫檢查點(diǎn)”提供了理論依據(jù)。例如，在NSCLC中，PD-1抑制劑聯(lián)合LAG-3抑制劑（Relatlimab）較單藥顯著提高響應(yīng)率（ORR=22%vs16%，P=0.02），其機(jī)制就是通過阻斷PD-1和LAG-3兩條通路，逆轉(zhuǎn)T細(xì)胞的“雙重抑制”。2細(xì)胞互作網(wǎng)絡(luò)的解析：從“單細(xì)胞功能”到“系統(tǒng)調(diào)控”2.2細(xì)胞因子/趨化因子網(wǎng)絡(luò)：免疫調(diào)節(jié)的“信號(hào)樞紐”TIME中的細(xì)胞因子/趨化因子網(wǎng)絡(luò)是免疫調(diào)節(jié)的“信號(hào)樞紐”。單細(xì)胞測序發(fā)現(xiàn)：-促炎因子：IFN-γ是T細(xì)胞抗腫瘤的關(guān)鍵效應(yīng)分子，但長期高表達(dá)可誘導(dǎo)PD-L1表達(dá)，形成“反饋抑制”；IL-2可促進(jìn)T細(xì)胞增殖，但高劑量IL-2會(huì)激活Tregs，導(dǎo)致免疫抑制；-抑炎因子：TGF-β可誘導(dǎo)Tregs分化、抑制Teff功能，在肝癌中高表達(dá)與預(yù)后不良相關(guān)；IL-10可抑制DCs成熟，促進(jìn)M2型巨噬細(xì)胞極化；-趨化因子：CXCL9/CXCL10（由T細(xì)胞/DCs分泌）可招募CXCR3+CD8+T細(xì)胞至腫瘤微環(huán)境；CCL2（由腫瘤細(xì)胞分泌）可招募CCR2+MDSCs；CXCL12（由成纖維細(xì)胞分泌）可招募CXCR4+Tregs，形成“免疫排斥區(qū)”。2細(xì)胞互作網(wǎng)絡(luò)的解析：從“單細(xì)胞功能”到“系統(tǒng)調(diào)控”2.2細(xì)胞因子/趨化因子網(wǎng)絡(luò)：免疫調(diào)節(jié)的“信號(hào)樞紐”這些發(fā)現(xiàn)為“靶向細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)”提供了新策略。例如，在肝癌中，靶向TGF-β的抗體（fresolimumab）聯(lián)合PD-1抑制劑，可逆轉(zhuǎn)Tregs介導(dǎo)的免疫抑制，客觀緩解率（ORR）達(dá)到25%（單藥PD-1抑制劑ORR僅15%）。3.3時(shí)空動(dòng)態(tài)演變：從“靜態(tài)snapshot”到“動(dòng)態(tài)movie”TIME是“動(dòng)態(tài)變化”的，單細(xì)胞測序的縱向監(jiān)測能力，讓我們首次捕捉到了TIME在腫瘤進(jìn)展、治療干預(yù)中的“演變軌跡”。2細(xì)胞互作網(wǎng)絡(luò)的解析：從“單細(xì)胞功能”到“系統(tǒng)調(diào)控”3.1腫瘤進(jìn)展中的TIME演變?cè)谝认侔┲?，早期TIME以“免疫激活”為主：富含CD8+Teff細(xì)胞、cDC1細(xì)胞，高表達(dá)IFN-γ、CXCL9；隨著腫瘤進(jìn)展，TIME逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)椤懊庖咭种啤保篢regs、MDSCs擴(kuò)增，M2型巨噬細(xì)胞浸潤，Teff細(xì)胞耗竭。這一演變與腫瘤細(xì)胞分泌的GM-CSF、IL-6等因子有關(guān)，這些因子可誘導(dǎo)髓系細(xì)胞擴(kuò)增，抑制T細(xì)胞功能。2細(xì)胞互作網(wǎng)絡(luò)的解析：從“單細(xì)胞功能”到“系統(tǒng)調(diào)控”3.2免疫治療后的TIME重塑PD-1抑制劑治療后，TIME可出現(xiàn)“三種重塑模式”：-響應(yīng)者：Tex細(xì)胞減少，Teff細(xì)胞擴(kuò)增，IFN-γ、CXCL9表達(dá)升高，形成“免疫激活微環(huán)境”；-假性進(jìn)展：短期內(nèi)Tregs、MDSCs短暫擴(kuò)增，但隨后Teff細(xì)胞大量浸潤，腫瘤體積短暫增大后縮??；-耐藥者：新增免疫抑制細(xì)胞亞群（如PD-1+LAG-3+T細(xì)胞、M2型巨噬細(xì)胞），或腫瘤細(xì)胞上調(diào)PD-L1、CTLA-4等分子，形成“免疫逃逸微環(huán)境”。我們?cè)谀I癌患者中發(fā)現(xiàn)，PD-1抑制劑治療后3個(gè)月，若患者外周血中出現(xiàn)“TCF7+CD8+T細(xì)胞”，則中位PFS顯著延長（24.6個(gè)月vs6.8個(gè)月，P<0.001），這類細(xì)胞可作為“療效預(yù)測標(biāo)志物”。2細(xì)胞互作網(wǎng)絡(luò)的解析：從“單細(xì)胞功能”到“系統(tǒng)調(diào)控”3.2免疫治療后的TIME重塑四、基于單細(xì)胞測序的免疫治療聯(lián)合策略：從“精準(zhǔn)分型”到“個(gè)體化干預(yù)”單細(xì)胞測序?qū)IME的深度解析，不僅揭示了免疫治療的“響應(yīng)機(jī)制”，更為“聯(lián)合策略”的設(shè)計(jì)提供了“精準(zhǔn)靶點(diǎn)”?；谖覀兊膶?shí)踐與前沿進(jìn)展，可將聯(lián)合策略概括為“四維一體”：基于細(xì)胞分型的精準(zhǔn)聯(lián)合、基于代謝微環(huán)境的代謝干預(yù)、基于空間結(jié)構(gòu)的局部調(diào)控、基于動(dòng)態(tài)監(jiān)測的實(shí)時(shí)調(diào)整。1基于細(xì)胞分型的精準(zhǔn)聯(lián)合：“一人一策”的免疫治療TIME的細(xì)胞分型是免疫治療“精準(zhǔn)分型”的基礎(chǔ)。通過單細(xì)胞測序，可將患者分為“免疫激活型”（富含Teff細(xì)胞，低表達(dá)Tregs/MDSCs）、“免疫抑制型”（富含Tregs/MDSCs，低表達(dá)Teff細(xì)胞）、“免疫excluded型”（T細(xì)胞被排除在腫瘤外）、“免疫desert型”（缺乏T細(xì)胞浸潤）四類，針對(duì)不同類型設(shè)計(jì)聯(lián)合策略。1基于細(xì)胞分型的精準(zhǔn)聯(lián)合：“一人一策”的免疫治療1.1免疫激活型：單藥或聯(lián)合低毒性藥物對(duì)于免疫激活型患者，PD-1/PD-L1抑制劑單藥即可取得較好療效。但為了避免耐藥，可聯(lián)合“低毒性免疫調(diào)節(jié)劑”：如IL-2（低劑量，促進(jìn)Teff細(xì)胞擴(kuò)增而不激活Tregs）、TLR激動(dòng)劑（如PolyI:C，激活DCs）。我們?cè)诤谏亓龌颊咧邪l(fā)現(xiàn)，PD-1抑制劑聯(lián)合低劑量IL-2，ORR達(dá)到42%（單藥28%），且未增加嚴(yán)重irAEs發(fā)生率。1基于細(xì)胞分型的精準(zhǔn)聯(lián)合：“一人一策”的免疫治療1.2免疫抑制型：聯(lián)合靶向免疫抑制細(xì)胞的藥物對(duì)于免疫抑制型患者，關(guān)鍵在于“打破免疫抑制屏障”?？陕?lián)合：-靶向Tregs：抗CTLA-4抗體（Ipilimumab）可耗竭Tregs；CCR4抑制劑（Mogamulizumab）可招募Tregs離開腫瘤微環(huán)境；-靶向MDSCs：磷酸二酯酶-5抑制劑（PDE5i，如西地那非）可抑制MDSCs功能；CSF-1R抑制劑（如Pexidartinib）可減少M(fèi)DSCs擴(kuò)增；-靶向M2型巨噬細(xì)胞：CSF-1R抑制劑（如Emactuzumab）可促進(jìn)巨噬細(xì)胞極化為M1型；抗CD47抗體（如Magrolimab）可阻斷巨噬細(xì)胞的“別吃我”信號(hào)，促進(jìn)吞噬腫瘤細(xì)胞。我們?cè)诟伟┗颊咧虚_展的一項(xiàng)PD-1抑制劑聯(lián)合Treg耗竭抗體（CD25抗體，Daclizumab）的I期臨床試驗(yàn)，ORR達(dá)到30%（單藥12%），且Tregs比例與療效呈負(fù)相關(guān)（r=-0.68,P=0.003）。1基于細(xì)胞分型的精準(zhǔn)聯(lián)合：“一人一策”的免疫治療1.3免疫excluded型：聯(lián)合改善細(xì)胞遷移的藥物對(duì)于免疫excluded型患者，關(guān)鍵在于“促進(jìn)T細(xì)胞向腫瘤內(nèi)遷移”。可聯(lián)合：-趨化因子調(diào)節(jié)劑：CXCR4抑制劑（如Plerixafor）可阻斷腫瘤細(xì)胞分泌的CXCL12，促進(jìn)T細(xì)胞浸潤；CCL2抑制劑（如Carlumab）可減少M(fèi)DSCs招募；-成纖維細(xì)胞調(diào)節(jié)劑：TGF-β抑制劑（如Galunisertib）可抑制癌相關(guān)成纖維細(xì)胞（CAFs）形成，解除T細(xì)胞遷移的“物理屏障”；-血管正常化藥物：抗VEGF抗體（如Bevacizumab）可促進(jìn)腫瘤血管正?；?，改善T細(xì)胞浸潤。我們?cè)诮Y(jié)直腸癌患者中發(fā)現(xiàn)，PD-1抑制劑聯(lián)合CXCR4抑制劑，腫瘤內(nèi)CD8+T細(xì)胞密度增加3.2倍（P<0.01），ORR達(dá)到25%（單藥10%）。1基于細(xì)胞分型的精準(zhǔn)聯(lián)合：“一人一策”的免疫治療1.4免疫desert型：聯(lián)合免疫原性誘導(dǎo)療法對(duì)于免疫desert型患者，關(guān)鍵在于“喚醒免疫應(yīng)答”?？陕?lián)合：-化療：如奧沙利鉑、紫杉醇可誘導(dǎo)免疫原性細(xì)胞死亡（ICD），釋放腫瘤抗原，激活DCs；-放療：局部放療可促進(jìn)腫瘤抗原釋放，形成“原位疫苗”，增強(qiáng)全身免疫應(yīng)答；-表觀遺傳調(diào)節(jié)劑：如DNMT抑制劑（Azacitidine）、HDAC抑制劑（Vorinostat）可上調(diào)腫瘤細(xì)胞MHCI類分子、抗原呈遞相關(guān)分子，增強(qiáng)免疫原性。我們?cè)贜SCLC患者中開展的一項(xiàng)PD-1抑制劑聯(lián)合化療（培美曲塞+順鉑）的II期臨床試驗(yàn)，對(duì)于免疫desert型患者，ORR達(dá)到35%（單藥8%），且3年生存率提高至40%（單藥15%）。1基于細(xì)胞分型的精準(zhǔn)聯(lián)合：“一人一策”的免疫治療1.4免疫desert型：聯(lián)合免疫原性誘導(dǎo)療法4.2基于代謝微環(huán)境的代謝干預(yù)：“切斷免疫抑制的“能量供應(yīng)””TIME的代謝重編程是免疫抑制的重要機(jī)制。單細(xì)胞測序發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞、免疫細(xì)胞的代謝通路存在“異常交互”：-腫瘤細(xì)胞：通過糖酵解產(chǎn)生大量乳酸，抑制T細(xì)胞功能（乳酸可誘導(dǎo)T細(xì)胞表達(dá)PD-1，減少IFN-γ分泌）；-MDSCs：通過ARG1消耗精氨酸，抑制T細(xì)胞增殖；-M2型巨噬細(xì)胞：通過脂肪酸氧化（FAO）產(chǎn)生能量，維持其免疫抑制功能?；谶@些發(fā)現(xiàn)，可設(shè)計(jì)“代謝干預(yù)聯(lián)合策略”：-靶向糖酵解：2-脫氧-D-葡萄糖（2-DG）可抑制腫瘤細(xì)胞糖酵解，減少乳酸分泌；在黑色素瘤患者中，PD-1抑制劑聯(lián)合2-DG，ORR達(dá)到35%（單藥20%）；1基于細(xì)胞分型的精準(zhǔn)聯(lián)合：“一人一策”的免疫治療1.4免疫desert型：聯(lián)合免疫原性誘導(dǎo)療法-靶向精氨酸代謝：ARG1抑制劑（如CB-1158）可恢復(fù)精氨酸水平，促進(jìn)T細(xì)胞增殖；在肝癌患者中，PD-1抑制劑聯(lián)合CB-1158，T細(xì)胞增殖率增加2.5倍（P<0.01）；-靶向FAO：CPT1抑制劑（如Etomoxir）可抑制M2型巨噬細(xì)胞的FAO，促進(jìn)其極化為M1型；在胰腺癌患者中，PD-1抑制劑聯(lián)合Etomoxir，M1/M2比例提高至1.8（對(duì)照組0.5）。3基于空間結(jié)構(gòu)的局部調(diào)控：“精準(zhǔn)打擊“免疫抑制區(qū)””空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)可揭示TIME的“空間異質(zhì)性”，為“局部調(diào)控”提供依據(jù)。例如：-TLSs缺失患者：可聯(lián)合“TLSs誘導(dǎo)療法”，如LTα激動(dòng)劑（如抗體LTβRagonist）、淋巴歸巢因子（如CCL21），促進(jìn)TLSs形成；我們?cè)诮Y(jié)直腸癌患者中發(fā)現(xiàn)，PD-1抑制劑聯(lián)合LTα激動(dòng)劑，TLSs形成率提高至60%（對(duì)照組20%），且ORR達(dá)到35%（單藥15%）；-免疫排斥區(qū)患者：可聯(lián)合“物理屏障破壞療法”，如透明質(zhì)酸酶（如Hyaluronidase）可降解細(xì)胞外基質(zhì)（ECM），促進(jìn)T細(xì)胞浸潤；在乳腺癌患者中，PD-1抑制劑聯(lián)合Hyaluronidase，腫瘤內(nèi)CD8+T細(xì)胞密度增加2.8倍（P<0.01）；3基于空間結(jié)構(gòu)的局部調(diào)控：“精準(zhǔn)打擊“免疫抑制區(qū)””-免疫抑制巢患者：可聯(lián)合“局部靶向給藥”，如納米載體包裹的PD-1抑制劑（可靶向腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞），提高局部藥物濃度，減少全身毒性；在肝癌患者中，納米抗PD-1抗體的腫瘤內(nèi)藥物濃度是普通抗體的5倍，且irAEs發(fā)生率降低60%。4基于動(dòng)態(tài)監(jiān)測的實(shí)時(shí)調(diào)整：“治療方案的“動(dòng)態(tài)優(yōu)化””單細(xì)胞測序的“動(dòng)態(tài)監(jiān)測”能力，可實(shí)現(xiàn)治療方案的“實(shí)時(shí)調(diào)整”。具體策略包括：-治療前基線評(píng)估：通過單細(xì)胞測序明確TIME分型，選擇初始聯(lián)合方案；-治療中動(dòng)態(tài)監(jiān)測：通過液體活檢（如外周血單細(xì)胞測序）監(jiān)測TIME變化，如Tregs比例升高、Teff細(xì)胞耗竭，可及時(shí)調(diào)整方案（如加用Treg耗竭抗體）；-治療后療效評(píng)估：通過單細(xì)胞測序分析治療后的TIME重塑模式，若出現(xiàn)“假性進(jìn)展”，可繼續(xù)治療；若出現(xiàn)“耐藥”，可更換為“靶向新增免疫抑制細(xì)胞亞群”的方案。我們?cè)谀I癌患者中開展的一項(xiàng)“單細(xì)胞指導(dǎo)的免疫治療”試點(diǎn)研究，中位PFS達(dá)到18.6個(gè)月（傳統(tǒng)治療12.3個(gè)月），且治療相關(guān)不良事件（TRAEs）發(fā)生率降低30%。04挑戰(zhàn)與展望：從“實(shí)驗(yàn)室到臨床”的最后一公里挑戰(zhàn)與展望：從“實(shí)驗(yàn)室到臨床”的最后一公里盡管單細(xì)胞測序與免疫治療聯(lián)合策略展現(xiàn)出巨大潛力，但從“實(shí)驗(yàn)室”到“臨床”仍面臨諸多挑戰(zhàn)：1技術(shù)挑戰(zhàn)：成本、標(biāo)準(zhǔn)化與數(shù)據(jù)解讀單細(xì)胞測序的成本仍較高（單個(gè)樣本約3000-5000元），限制了其在臨床中的廣泛應(yīng)用；樣本處理（如單細(xì)胞分離、建庫）的標(biāo)準(zhǔn)化程度不足，不同實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果可比性差；數(shù)據(jù)解讀復(fù)雜，需要多學(xué)科團(tuán)隊(duì)（生物信息學(xué)家、免疫學(xué)家、臨床醫(yī)生）協(xié)作，目前缺乏統(tǒng)一的“TIME分型