合成生物基因治療載體工程師崗位招聘考試試卷及答案填空題（每題1分，共10分）1.基因治療中常用的非整合型病毒載體是______2.陽離子脂質(zhì)體與DNA結(jié)合形成的復(fù)合物稱為______3.載體構(gòu)建的核心步驟包括酶切、連接和______4.腺病毒載體通常缺失______基因以降低致病性5.CRISPR-Cas9系統(tǒng)常用的遞送載體是______6.非病毒載體中聚合物PEI的主要優(yōu)勢是______7.載體靶向性修飾常通過添加______實現(xiàn)8.慢病毒載體可整合到宿主細(xì)胞的______中9.載體純化常用方法包括超速離心和______10.基因治療載體安全性評估需檢測______答案1.腺相關(guān)病毒（AAV）2.脂質(zhì)-DNA復(fù)合物（LPD）3.轉(zhuǎn)化/轉(zhuǎn)染4.E15.AAV/慢病毒6.可修飾性強7.特異性配體8.基因組9.層析法10.插入突變風(fēng)險單項選擇題（每題2分，共20分）1.以下屬于非整合型病毒載體的是？A.慢病毒B.腺病毒C.逆轉(zhuǎn)錄病毒D.整合酶缺陷型慢病毒2.陽離子脂質(zhì)體的主要作用是？A.擴增DNAB.切割DNAC.壓縮DNA促攝取D.整合基因3.載體構(gòu)建中限制酶的功能是？A.連接片段B.切割特定序列C.修飾末端D.擴增DNA4.常用于體內(nèi)基因遞送的載體是？A.大腸桿菌質(zhì)粒B.AAVC.噬菌體D.酵母載體5.慢病毒載體可感染的細(xì)胞類型是？A.僅分裂細(xì)胞B.僅非分裂細(xì)胞C.分裂+非分裂細(xì)胞D.僅原核細(xì)胞6.載體靶向修飾不包括？A.肽段修飾B.抗體片段修飾C.多糖修飾D.核酸隨機修飾7.慢病毒包裝細(xì)胞需表達(dá)的蛋白是？A.Gag/Pol/EnvB.Cas9/gRNAC.熒光蛋白D.細(xì)胞因子8.降低載體遞送效率的因素是？A.血清穩(wěn)定B.細(xì)胞攝取障礙C.靶向配體D.核定位信號9.基因治療載體臨床前常用動物模型不包括？A.小鼠B.大鼠C.非人靈長類D.大腸桿菌10.可用于瞬時表達(dá)的載體是？A.腺病毒B.慢病毒C.逆轉(zhuǎn)錄病毒D.整合型AAV答案1.B2.C3.B4.B5.C6.D7.A8.B9.D10.A多項選擇題（每題2分，共20分，多選/少選不得分）1.常用病毒載體包括？A.AAVB.慢病毒C.腺病毒D.噬菌體2.非病毒載體優(yōu)勢是？A.無免疫原性B.容量大C.易制備D.整合風(fēng)險低3.載體構(gòu)建關(guān)鍵工具酶是？A.限制酶B.DNA連接酶C.Taq酶D.逆轉(zhuǎn)錄酶4.載體安全性評估指標(biāo)包括？A.插入突變B.免疫反應(yīng)C.毒性D.遞送效率5.慢病毒載體特點是？A.基因組整合B.感染分裂+非分裂細(xì)胞C.容量≤10kbD.免疫原性低6.陽離子脂質(zhì)體組成包括？A.陽離子脂質(zhì)B.中性脂質(zhì)C.膽固醇D.核酸7.載體靶向策略包括？A.表面配體B.核定位信號C.組織特異性啟動子D.增強子8.載體純化方法有？A.超速離心B.離子交換層析C.親和層析D.電泳9.載體應(yīng)用領(lǐng)域包括？A.遺傳性疾病B.腫瘤C.感染性疾病D.再生醫(yī)學(xué)10.影響AAV遞送效率的因素是？A.血清型B.劑量C.給藥途徑D.宿主免疫答案1.ABC2.BCD3.AB4.ABC5.ABD6.ABC7.ABCD8.ABC9.ABCD10.ABCD判斷題（每題2分，共20分，對√錯×）1.腺病毒載體可整合到宿主基因組（×）2.非病毒載體免疫原性比病毒載體低（√）3.慢病毒僅感染分裂細(xì)胞（×）4.AAV載體容量約4.7kb（√）5.陽離子脂質(zhì)體毒性比聚合物低（×）6.平末端連接比粘性末端效率高（×）7.載體靶向僅依賴表面配體（×）8.慢病毒包裝需輔助質(zhì)粒（√）9.腺病毒免疫原性低（×）10.非病毒載體可體內(nèi)外遞送（√）簡答題（每題5分，共20分）1.簡述AAV載體的主要優(yōu)勢。答案：AAV是基因治療常用載體，優(yōu)勢為：①免疫原性低，不易引發(fā)強烈免疫反應(yīng)；②可感染分裂/非分裂細(xì)胞，適用范圍廣；③血清型多樣（如AAV9靶向中樞神經(jīng)），可組織特異性遞送；④容量適中（4.7kb），滿足多數(shù)治療基因需求；⑤無致病性，安全性已在臨床驗證。2.非病毒載體與病毒載體的核心區(qū)別？答案：①來源：病毒載體為改造天然病毒，非病毒為人工合成（脂質(zhì)體、聚合物）；②整合性：多數(shù)病毒可整合，非病毒多瞬時表達(dá)；③免疫原性：病毒高，非病毒低；④容量：非病毒容量大（可攜大片段），病毒有限；⑤制備：非病毒易規(guī)?；?，病毒需復(fù)雜包裝；⑥安全性：非病毒整合風(fēng)險低，病毒需關(guān)注插入突變。3.載體構(gòu)建的基本流程？答案：①獲取目的基因（PCR/合成）；②酶切載體與目的基因（產(chǎn)生互補末端）；③T4連接酶連接重組載體；④轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌；⑤抗性篩選+PCR/酶切驗證重組質(zhì)粒；⑥純化重組質(zhì)粒，用于后續(xù)轉(zhuǎn)染/包裝。4.載體靶向性修飾的兩類策略？答案：①細(xì)胞外靶向：修飾載體表面（脂質(zhì)體/AAV）添加特異性配體（肽段/抗體），與靶細(xì)胞受體結(jié)合；②細(xì)胞內(nèi)靶向：插入核定位信號（NLS）促DNA入核，或用組織特異性啟動子使基因僅在靶組織表達(dá)；此外，PEG修飾可降低非特異性攝取。討論題（每題5分，共10分）1.討論慢病毒載體的應(yīng)用及安全性挑戰(zhàn)。答案：慢病毒因可整合基因組、感染非分裂細(xì)胞，常用于遺傳性疾?。ㄈ缂顾栊约∥s）、腫瘤治療。但挑戰(zhàn)包括：①插入突變風(fēng)險（激活原癌基因）；②免疫原性（包裝蛋白引發(fā)免疫清除）；③容量限制（≤8kb）；④生產(chǎn)難度（避免野生型病毒污染）。目前通過整合酶缺陷型慢病毒（IDLV）降低整合風(fēng)險，優(yōu)化包裝系統(tǒng)提高安全性，是研究重點。2.如何提高非病毒載體的體內(nèi)遞送效率？答案：非病毒載體體內(nèi)效率低的優(yōu)化策略：①表面修飾靶向配體（轉(zhuǎn)鐵蛋