合成生物藥物純化工程師崗位招聘考試試卷及答案一、填空題（每題1分，共10分）1.蛋白純化中最常用的疏水相互作用層析填料是______。2.離子交換層析中，緩沖液pH應與目標蛋白pI相差至少______個單位。3.生物藥物純化后除菌過濾常用的濾膜孔徑是______μm。4.純化回收率計算公式為：回收率=______×100%。5.層析柱再生常用的強堿試劑是______。6.常用的蛋白濃度比色測定方法有BCA法和______法。7.核酸純化中去除蛋白質(zhì)的常用試劑是______。8.凍干生物藥物常用的保護劑有蔗糖和______。9.GMP要求純化過程記錄需包含______、日期、操作人員等信息。10.親和層析中，針對His標簽蛋白的常用配體是______。二、單項選擇題（每題2分，共20分）1.蛋白純化工藝中，通常最先采用的層析步驟是（）A.離子交換層析B.疏水相互作用層析C.親和層析D.凝膠過濾層析2.適合pH7.0左右使用的緩沖液是（）A.Tris-HClB.醋酸-醋酸鈉C.檸檬酸-檸檬酸鈉D.硼酸-硼砂3.層析柱峰形拖尾最可能的原因是（）A.柱壓過高B.樣品未過濾C.填料壓縮D.緩沖液濃度過低4.濾膜完整性測試常用方法是（）A.氣泡點法B.重量法C.分光光度法D.電泳法5.下列哪項不是蛋白回收率偏低的原因？（）A.目標蛋白吸附填料B.樣品降解C.洗脫條件不合適D.緩沖液pH接近pI6.去除層析柱疏水雜質(zhì)的試劑是（）A.1MNaOHB.20%乙醇C.1MNaClD.0.1MHCl7.可檢測蛋白純度的方法是（）A.SDSB.紫外分光光度法C.凱氏定氮法D.比濁法8.核酸純化中去除RNA的酶是（）A.DNaseIB.RNaseAC.蛋白酶KD.逆轉(zhuǎn)錄酶9.凍干工藝的前提條件是（）A.樣品滅菌B.預凍至-40℃以下C.樣品濃縮D.除熱原10.純化偏差的正確處理方式是（）A.隱瞞記錄B.實時記錄并評估C.直接調(diào)整工藝D.事后補記三、多項選擇題（每題2分，共20分）1.常用蛋白純化層析方法包括（）A.離子交換層析B.疏水相互作用層析C.親和層析D.凝膠過濾層析E.反向?qū)游?.緩沖液配制注意事項（）A.準確稱量B.過濾除菌C.調(diào)節(jié)pHD.新鮮配制E.加防腐劑3.層析柱維護要點（）A.控制柱壓B.樣品過濾C.定期再生D.合適緩沖液保存E.高溫滅菌4.除菌過濾驗證內(nèi)容（）A.完整性測試B.細菌挑戰(zhàn)C.流速測試D.吸附性測試E.熱原驗證5.蛋白純度分析方法（）A.SDSB.WesternBlotC.HPLCD.毛細管電泳E.質(zhì)譜6.核酸純化常用試劑（）A.酚-氯仿B.乙醇C.蛋白酶KD.RNaseAE.硅膠柱7.凍干關(guān)鍵參數(shù)（）A.預凍溫度B.升華溫度C.解析溫度D.真空度E.凍干時間8.純化污染物控制措施（）A.無菌操作B.顆粒過濾C.熱原去除D.避免交叉污染E.環(huán)境監(jiān)測9.GMP純化記錄要求（）A.實時記錄B.可追溯C.簽名確認D.完整準確E.事后補記需說明10.回收率影響因素（）A.上樣量B.洗脫條件C.樣品降解D.填料吸附E.檢測誤差四、判斷題（每題2分，共20分）1.所有層析都需梯度洗脫。（）2.緩沖液pH越接近pI，離子交換效果越好。（）3.除菌濾膜可重復使用。（）4.回收率越高，產(chǎn)品質(zhì)量越好。（）5.層析柱清洗只需NaOH。（）6.BCA法可測μg/mL級蛋白濃度。（）7.核酸純化需去除內(nèi)毒素。（）8.凍干前需預凍樣品。（）9.純化記錄可事后補記。（）10.GMP允許未評估偏差。（）五、簡答題（每題5分，共20分）1.簡述離子交換層析原理及關(guān)鍵操作要點。2.簡述除菌過濾的作用及驗證要求。3.簡述層析柱再生方法及注意事項。4.簡述純化過程內(nèi)毒素控制措施。六、討論題（每題5分，共10分）1.如何優(yōu)化蛋白純化工藝平衡回收率與純度？2.層析柱性能下降（峰拖尾、分辨率低）的應對措施？答案部分一、填空題答案1.苯基瓊脂糖凝膠（PhenylSepharose）2.13.0.224.（回收液目標物總量/上樣液目標物總量）5.NaOH（1MNaOH）6.Bradford（Lowry）7.酚-氯仿（蛋白酶K）8.甘露醇（海藻糖）9.批次號（產(chǎn)品名稱）10.Ni-NTA二、單項選擇題答案1.C2.A3.B4.A5.D6.B7.A8.B9.B10.B三、多項選擇題答案1.ABCD2.ABCD3.ABCD4.ABCDE5.ABCDE6.ABCDE7.ABCDE8.ABCDE9.ABCD10.ABCDE四、判斷題答案1.×2.×3.×4.×5.×6.√7.√8.√9.×10.×五、簡答題答案1.原理：利用目標蛋白與填料離子基團的靜電差異分離。要點：①緩沖液pH與pI差≥1（保證帶電荷）；②低鹽上樣、高鹽洗脫；③樣品過濾防堵；④控制流速防柱壓過高；⑤梯度洗脫優(yōu)化分離。2.作用：去除微生物，保證無菌。驗證要求：①氣泡點法測完整性；②細菌挑戰(zhàn)試驗；③流速穩(wěn)定性測試；④吸附性測試（不吸附目標物）；⑤熱原去除驗證（如需）。3.常用方法：①NaOH清洗蛋白/核酸；②乙醇/異丙醇去疏水雜質(zhì)；③高鹽緩沖液去離子吸附雜質(zhì)。注意：①控制柱壓；②再生后平衡至工作緩沖液；③親和柱避免強酸堿；④定期測柱性能。4.措施：①原料無內(nèi)毒素污染；②陰離子交換層析去除；③0.1μm濾膜/超濾；④試劑無菌無熱原；⑤潔凈區(qū)操作；⑥鱟試驗定期檢測。六、討論題答案1.優(yōu)化策略：①層析順序（先親和富集，再離子交換/疏水純化）；②緩沖液調(diào)整（pH、鹽濃度減少非特異性吸附）；③梯度洗脫斜率優(yōu)化（平衡純度與回收率）；④加保護劑防降解；⑤在線檢測實時調(diào)整。需結(jié)合蛋白特性迭代，避免過度追求純度導致回收率