生物學(xué)生物科技公司研究助理實(shí)習(xí)報(bào)告一、摘要2023年6月5日至8月22日，我在一家生物科技公司擔(dān)任研究助理，負(fù)責(zé)細(xì)胞培養(yǎng)與分子克隆實(shí)驗(yàn)。核心工作成果包括完成120株重組質(zhì)粒構(gòu)建，成功率為92%，其中5株表達(dá)載體經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證活性達(dá)98%；優(yōu)化了3種細(xì)胞系傳代方法，使原代細(xì)胞擴(kuò)增效率提升40%。期間應(yīng)用了QPCR技術(shù)檢測(cè)基因表達(dá)，數(shù)據(jù)處理采用GraphPadPrism9進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，熟練掌握了限制性酶切圖譜構(gòu)建與電泳成像分析。提煉出標(biāo)準(zhǔn)化操作SOP流程，可減少實(shí)驗(yàn)變異率25%。通過(guò)實(shí)踐驗(yàn)證了分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)需嚴(yán)格把控試劑批次，確保重復(fù)性數(shù)據(jù)可靠性。二、實(shí)習(xí)內(nèi)容及過(guò)程2023年6月5日入職，8周實(shí)習(xí)期間，主要參與重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)搭建項(xiàng)目。公司是做抗體藥物研發(fā)的，實(shí)驗(yàn)室有哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和微生物發(fā)酵兩條線，我跟著負(fù)責(zé)CHO細(xì)胞表達(dá)團(tuán)隊(duì)。初期熟悉細(xì)胞基本操作，6月12日獨(dú)立開(kāi)展原代細(xì)胞復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)，7天傳代一次，到6月28日累計(jì)擴(kuò)增5代，活細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示增殖率穩(wěn)定在85%以上。7月2日轉(zhuǎn)入手工克隆質(zhì)粒構(gòu)建，目標(biāo)是把客戶提供的基因片段插入表達(dá)載體pCDNA3.1，用了EcoRI和XhoI雙酶切，7月10日拿到第一批酶切產(chǎn)物，通過(guò)1%瓊脂糖凝膠電泳看條帶，發(fā)現(xiàn)有兩個(gè)預(yù)期大小的片段，但有個(gè)額外的小片段干擾，最后挑了6個(gè)單克隆送測(cè)序，4個(gè)正確，轉(zhuǎn)化效率約67%。導(dǎo)師建議優(yōu)化酶切條件，我調(diào)整了反應(yīng)體積，8月1日再次實(shí)驗(yàn)，這次轉(zhuǎn)化率提到80%，還學(xué)會(huì)了用限制性酶切圖譜分析質(zhì)粒結(jié)構(gòu)。實(shí)習(xí)中期遇到CHO細(xì)胞表達(dá)量低的問(wèn)題，7月15日接到上游反饋蛋白純化困難，我的任務(wù)是把編碼序列送入表達(dá)載體pET28a，并篩選最佳表達(dá)條件。用了三種誘導(dǎo)劑濃度（0.5、1、2mMIPTG）和兩種溫度（37℃、30℃），8月5日通過(guò)SDSPAGE檢測(cè)，30℃+1mMIPTG組合下目標(biāo)蛋白條帶最亮，表達(dá)量比默認(rèn)條件高約1.2倍，還少了些內(nèi)源蛋白雜峰。實(shí)驗(yàn)室管理上，有時(shí)候試劑申領(lǐng)流程要等半天，8月10日做WesternBlot時(shí)發(fā)現(xiàn)ECL發(fā)光液快沒(méi)了，臨時(shí)找隔壁團(tuán)隊(duì)借了但批次不同，條帶亮度差異挺明顯，最后用ImageJ軟件做了灰度標(biāo)準(zhǔn)化。另外培訓(xùn)機(jī)制也一般，新員工沒(méi)系統(tǒng)學(xué)過(guò)細(xì)胞凍存復(fù)蘇的細(xì)節(jié)，8月15日我?guī)б粋€(gè)實(shí)習(xí)生做傳代，她吸細(xì)胞懸液時(shí)總把培養(yǎng)皿倒得太斜，我提醒她要沿壁緩慢吸，她下次就好多了。最后成果是8月20日完成項(xiàng)目結(jié)題報(bào)告，匯總了4個(gè)質(zhì)粒構(gòu)建和2個(gè)表達(dá)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，重組蛋白表達(dá)量最高達(dá)到原設(shè)計(jì)的1.5倍。這段經(jīng)歷讓我意識(shí)到分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)要注重細(xì)節(jié)控制，比如移液器校準(zhǔn)和試劑避光保存，也學(xué)會(huì)了用統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。最大的收獲是認(rèn)識(shí)到抗體藥物研發(fā)是個(gè)系統(tǒng)工程，我的小實(shí)驗(yàn)只是其中一環(huán)，上下游環(huán)節(jié)緊密相連。如果繼續(xù)做這個(gè)方向，我希望有機(jī)會(huì)接觸更多結(jié)構(gòu)生物學(xué)分析，現(xiàn)在看LigandScan預(yù)測(cè)分子對(duì)接還是挺有意思的。三、總結(jié)與體會(huì)8周實(shí)習(xí)像把理論課上的抽象概念具象化了。6月5日剛?cè)r(shí)，對(duì)著細(xì)胞培養(yǎng)板都覺(jué)得手抖，現(xiàn)在8月22日離開(kāi)時(shí)，獨(dú)立完成從質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到蛋白表達(dá)量初步評(píng)估的整個(gè)流程已不是難事。期間做的120株質(zhì)粒構(gòu)建，雖然成功率只有92%，但通過(guò)分析失敗案例，比如某次電轉(zhuǎn)化效率僅30%是因?yàn)榧?xì)胞狀態(tài)不佳，學(xué)到了動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)比靜態(tài)評(píng)估重要。分子克隆實(shí)驗(yàn)中，5株表達(dá)載體測(cè)序驗(yàn)證活性達(dá)98%的案例，讓我深刻體會(huì)到試劑批次對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的潛在影響，后來(lái)堅(jiān)持同一批次試劑做對(duì)照，數(shù)據(jù)重復(fù)性確實(shí)提升了不少。這些經(jīng)歷讓我明白，生物實(shí)驗(yàn)的嚴(yán)謹(jǐn)性體現(xiàn)在每一個(gè)微小的操作細(xì)節(jié)里。實(shí)習(xí)也讓我對(duì)職業(yè)規(guī)劃有了更清晰的方向。之前對(duì)抗體藥物研發(fā)的理解比較模糊，現(xiàn)在接觸了從基因編輯到細(xì)胞表達(dá)再到蛋白純化的完整鏈條，發(fā)現(xiàn)自己對(duì)蛋白質(zhì)工程領(lǐng)域挺感興趣。公司用的GraphPadPrism9作數(shù)據(jù)分析，我之前只會(huì)用Excel做簡(jiǎn)單統(tǒng)計(jì)，這次主動(dòng)學(xué)了非參數(shù)檢驗(yàn)和重復(fù)測(cè)量ANOVA，現(xiàn)在感覺(jué)數(shù)據(jù)處理能力是塊短板，下學(xué)期打算報(bào)考相關(guān)證書(shū)，爭(zhēng)取把統(tǒng)計(jì)分析學(xué)扎實(shí)。7月15日遇到CHO表達(dá)量低那事兒，剛開(kāi)始挺焦慮，后來(lái)通過(guò)查閱文獻(xiàn)和請(qǐng)教同事，發(fā)現(xiàn)優(yōu)化IPTG濃度和誘導(dǎo)溫度能有效提升產(chǎn)量，這種解決問(wèn)題的過(guò)程讓我意識(shí)到，未來(lái)做科研或工作，抗壓能力和主動(dòng)學(xué)習(xí)能力比單純會(huì)操作設(shè)備更重要。行業(yè)趨勢(shì)上，8月10日參加部門例會(huì)時(shí)聽(tīng)到主管講，現(xiàn)在抗體藥物開(kāi)發(fā)越來(lái)越注重結(jié)構(gòu)生物學(xué)驗(yàn)證，像我的小實(shí)驗(yàn)最終目的也是為后續(xù)的晶體解析提供高質(zhì)量的蛋白，這讓我意識(shí)到，未來(lái)的生物醫(yī)藥研發(fā)一定是多學(xué)科交叉的，單純會(huì)做實(shí)驗(yàn)不夠，還得懂點(diǎn)計(jì)算生物學(xué)和AI輔助藥物設(shè)計(jì)。這段經(jīng)歷讓我心態(tài)上最大的轉(zhuǎn)變是責(zé)任感了，以前做實(shí)驗(yàn)覺(jué)得數(shù)據(jù)對(duì)不上就歸咎于設(shè)備，現(xiàn)在會(huì)先反思是不是自己操作有疏漏，比如8月5日調(diào)整IPTG濃度時(shí)，反復(fù)確認(rèn)了培養(yǎng)基pH值和溫度，確保排除環(huán)境因素干擾。這種從學(xué)生思維到職場(chǎng)人思維的改變，感覺(jué)對(duì)后續(xù)學(xué)習(xí)和工作都有很大幫助。實(shí)習(xí)中暴露出的試劑管理、培訓(xùn)機(jī)制等問(wèn)題，我也在考慮如果以后有機(jī)會(huì)參與實(shí)驗(yàn)室管理，能不能引入更高效的試劑共享平臺(tái)或者建立新員工快速培訓(xùn)手冊(cè)，雖然這聽(tīng)起來(lái)有點(diǎn)遠(yuǎn)，但至少現(xiàn)在開(kāi)始思考這些問(wèn)題是沒(méi)錯(cuò)的。致謝感謝公司給我這次實(shí)習(xí)機(jī)會(huì)，讓我在8月22日結(jié)束的這段經(jīng)歷中收獲良多。特別感謝我的導(dǎo)師，從6月5日剛開(kāi)始就耐心指導(dǎo)我掌握細(xì)胞培養(yǎng)基本操作，比如原代細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)如何判斷最佳消化時(shí)間，還有7月2日質(zhì)粒構(gòu)建失敗時(shí)，幫我分析電泳圖找到問(wèn)題所在。感謝實(shí)驗(yàn)室的同事們，8月10日我遇到ECL試劑批次差異問(wèn)題，是隔壁組的小李借給我對(duì)比，