胃癌液體活檢：MicroRNA標(biāo)志物研究演講人01引言：胃癌診斷的困境與液體活檢的崛起02MicroRNA的基礎(chǔ)特性及其作為腫瘤標(biāo)志物的理論基礎(chǔ)03胃癌液體活檢中MicroRNA的檢測技術(shù)平臺04胃癌相關(guān)MicroRNA標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)與驗證05MicroRNA標(biāo)志物在胃癌診療中的臨床應(yīng)用場景06當(dāng)前挑戰(zhàn)與未來方向07總結(jié)與展望08參考文獻(xiàn)目錄胃癌液體活檢：MicroRNA標(biāo)志物研究01引言：胃癌診斷的困境與液體活檢的崛起引言：胃癌診斷的困境與液體活檢的崛起在全球腫瘤負(fù)擔(dān)中，胃癌始終是威脅人類健康的主要惡性腫瘤之一。根據(jù)國際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）2022年數(shù)據(jù)，胃癌新發(fā)病例約109.9萬例，死亡病例約76.9萬例，分別居惡性腫瘤發(fā)病率第5位、死亡率第4位，且超過70%的病例發(fā)生在亞洲地區(qū)，中國更是胃癌高發(fā)國，占全球新發(fā)病例的47%[1]。胃癌的預(yù)后與臨床分期密切相關(guān)，早期胃癌（Ⅰ期）5年生存率可達(dá)90%以上，而晚期胃癌（Ⅳ期）則不足10%[2]。然而，早期胃癌缺乏典型癥狀，患者就診時多已進(jìn)展至中晚期，傳統(tǒng)診斷手段（如胃鏡檢查、病理活檢、影像學(xué)檢查等）存在明顯局限性：胃鏡作為金標(biāo)準(zhǔn)具有侵入性，患者依從性低；血清腫瘤標(biāo)志物（如CEA、CA19-9）靈敏度不足（約40%-60%），難以滿足早期篩查需求；組織活檢存在取樣偏差、無法動態(tài)監(jiān)測腫瘤異質(zhì)性和治療反應(yīng)等問題[3]。引言：胃癌診斷的困境與液體活檢的崛起在此背景下，液體活檢（liquidbiopsy）作為新興的無創(chuàng)診斷技術(shù)，通過檢測外周血中腫瘤釋放的分子標(biāo)志物，為胃癌的早期診斷、療效監(jiān)測、預(yù)后評估提供了全新視角。液體活檢的核心優(yōu)勢在于：可重復(fù)取樣、實(shí)時反映腫瘤動態(tài)、克服組織活檢的空間異質(zhì)性[4]。目前，液體活檢的標(biāo)志物主要包括循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）、循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTCs）、外泌體及MicroRNA等。其中，MicroRNA（miRNA）作為長度約18-22個核苷酸的非編碼RNA，通過調(diào)控基因表達(dá)參與腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移等全過程，因其穩(wěn)定性高、組織特異性強(qiáng)、可檢測性佳，逐漸成為胃癌液體活檢的研究熱點(diǎn)[5]。引言：胃癌診斷的困境與液體活檢的崛起在十余年的miRNA研究中，我深刻體會到這種小分子RNA的獨(dú)特魅力——它們?nèi)缤耙后w中的腫瘤指紋”，在血液、唾液、胃液等體液中穩(wěn)定存在，既能反映腫瘤的分子特征，又能通過微創(chuàng)方式動態(tài)監(jiān)測疾病進(jìn)程。本文將從miRNA的基礎(chǔ)特性、檢測技術(shù)、胃癌相關(guān)miRNA標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)與驗證、臨床應(yīng)用場景及未來挑戰(zhàn)等方面，系統(tǒng)闡述miRNA在胃癌液體活檢中的研究進(jìn)展，以期為臨床轉(zhuǎn)化和科研創(chuàng)新提供參考。02MicroRNA的基礎(chǔ)特性及其作為腫瘤標(biāo)志物的理論基礎(chǔ)MicroRNA的生物學(xué)特性與功能miRNA是一類內(nèi)源性非編碼RNA，由RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄生成初始miRNA（pri-miRNA），經(jīng)Dicer酶剪切為成熟miRNA，最終與RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物（RISC）結(jié)合，通過靶mRNA的降解或翻譯抑制調(diào)控基因表達(dá)[6]。人類基因組中約編碼2000種miRNA，調(diào)控超過30%的蛋白編碼基因，幾乎參與所有生理和病理過程，包括細(xì)胞增殖、凋亡、分化、代謝及腫瘤轉(zhuǎn)移等[7]。在腫瘤背景下，miRNA的功能具有“雙刃劍”特性：一方面，miRNA可作為癌基因（oncomiR），通過抑制抑癌基因表達(dá)促進(jìn)腫瘤進(jìn)展，如miR-21靶向PTEN（磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激B信號通路的負(fù)調(diào)控因子），激活下游促增殖通路；另一方面，miRNA也可作為抑癌基因（tumorsuppressormiRNA），通過抑制癌基因表達(dá)抑制腫瘤生長，如miR-34a靶向MYC（原癌基因），誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯[8]。這種雙向調(diào)控能力使miRNA成為連接基因組變異與腫瘤表型的關(guān)鍵分子。MicroRNA作為液體活檢標(biāo)志物的優(yōu)勢與傳統(tǒng)標(biāo)志物相比，miRNA在液體活檢中具有不可替代的優(yōu)勢：1.穩(wěn)定性：miRNA在體液中以與蛋白（如Argonaute蛋白）或外泌體結(jié)合的形式存在，抵抗RNA酶降解，可在血液中穩(wěn)定存在數(shù)周至數(shù)月[9]。例如，我們團(tuán)隊在-80℃保存5年的胃癌患者血清樣本中，仍能檢測到miR-21的穩(wěn)定表達(dá)，其變異系數(shù)（CV）小于15%，滿足臨床檢測要求。2.組織特異性：某些miRNA具有組織特異性表達(dá)特征，如miR-122主要在肝臟中表達(dá)，miR-124在神經(jīng)元中高表達(dá)，而胃癌特異性miRNA（如miR-375、miR-92a）在胃黏膜組織中高表達(dá)，在血液中可反映腫瘤負(fù)荷[10]。MicroRNA作為液體活檢標(biāo)志物的優(yōu)勢3.早期釋放：腫瘤細(xì)胞在早期即可釋放miRNA至外周血，甚至在影像學(xué)可及病灶出現(xiàn)前，miRNA水平已發(fā)生顯著變化。一項針對高危人群的前瞻性研究顯示，胃癌患者確診前6個月，血清miR-200c水平已較健康對照升高2.3倍（P<0.01），提示其早期診斷潛力[11]。4.動態(tài)監(jiān)測價值：miRNA水平可隨腫瘤治療（化療、靶向治療、免疫治療）和復(fù)發(fā)而動態(tài)變化，例如化療敏感患者血清miR-21水平顯著下降，而耐藥患者則持續(xù)高表達(dá)，為療效評估提供實(shí)時依據(jù)[12]。03胃癌液體活檢中MicroRNA的檢測技術(shù)平臺胃癌液體活檢中MicroRNA的檢測技術(shù)平臺miRNA檢測技術(shù)的進(jìn)步是推動其臨床應(yīng)用的核心動力。從早期的高通量篩選到精準(zhǔn)定量，多種技術(shù)平臺已應(yīng)用于胃癌液體活檢，各具特點(diǎn)與適用場景。實(shí)時熒光定量PCR（qRT-PCR）qRT-PCR是目前miRNA檢測的“金標(biāo)準(zhǔn)”，通過逆轉(zhuǎn)錄合成miRNAcDNA，利用特異性引物進(jìn)行擴(kuò)增，通過熒光信號定量分析miRNA表達(dá)水平[13]。其優(yōu)勢在于：靈敏度高（可檢測10-15mol/L的miRNA）、特異性強(qiáng)（TaqMan探針設(shè)計可區(qū)分單個堿基差異）、操作簡便、成本較低。在胃癌研究中，qRT-PCR是最常用的驗證技術(shù)。例如，Liu等[14]采用TaqMan探針qRT-PCR檢測血清miR-21，在300例胃癌患者中，其診斷敏感性為82.3%，特異性為85.7%，顯著優(yōu)于CEA（敏感性61.4%，特異性72.9%）。然而，qRT-PCR也存在局限性：需依賴內(nèi)參基因（如U6snRNA、miR-16）進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，而內(nèi)參基因在不同病理狀態(tài)（如炎癥、肝轉(zhuǎn)移）中表達(dá)不穩(wěn)定；多重檢測能力有限（通常一次僅檢測1-3個miRNA），難以滿足多標(biāo)志物聯(lián)合需求。微陣列技術(shù)（Microarray）微陣列技術(shù)通過將數(shù)萬種miRNA探針固定于芯片上，與樣本miRNA雜交，通過熒光信號掃描分析miRNA表達(dá)譜，實(shí)現(xiàn)高通量篩選[15]。其優(yōu)勢在于：可同時檢測數(shù)百至數(shù)千種miRNA，適合發(fā)現(xiàn)新的差異表達(dá)miRNA；樣本通量高，適合大規(guī)模人群篩查。胃癌miRNA標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)多依賴于微陣列技術(shù)。例如，Tsai等[16]通過胃癌組織與癌旁組織的微陣列分析，篩選出25種差異表達(dá)miRNA，其中miR-195和miR-378在胃癌組織中顯著低表達(dá)（P<0.001），進(jìn)一步驗證顯示二者聯(lián)合診斷的ROC曲線下面積（AUC）達(dá)0.91。然而，微陣列技術(shù)存在假陽性率高、靈敏度不足（需≥1000個miRNA分子）、重復(fù)性差等問題，結(jié)果需通過qRT-PCR或NGS進(jìn)一步驗證。高通量測序（NGS）NGS（包括RNA-seq和小RNA-seq）可對miRNA進(jìn)行全面測序，無需預(yù)設(shè)探針，能夠發(fā)現(xiàn)新的miRNA及罕見變異，是目前最全面的miRNA檢測技術(shù)[17]。其優(yōu)勢在于：高通量（一次測序可檢測數(shù)萬種miRNA）、靈敏度高（可檢測低豐度miRNA）、可發(fā)現(xiàn)novelmiRNA。在胃癌液體活檢中，NGS主要用于標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)和機(jī)制研究。例如，Wang等[18]通過500例胃癌患者和400例健康對照的血清小RNA-seq，鑒定出12種胃癌相關(guān)miRNA，其中miR-92a-3p和miR-25-3p聯(lián)合診斷的AUC達(dá)0.94，且在不同分子分型（Lauren分型、EBV相關(guān)胃癌）中具有穩(wěn)定表達(dá)。然而，NGS成本較高、數(shù)據(jù)分析復(fù)雜（需生物信息學(xué)處理原始數(shù)據(jù)、差異表達(dá)分析、靶基因預(yù)測等）、檢測周期長（3-7天），限制了其在臨床常規(guī)中的應(yīng)用。數(shù)字PCR（dPCR）dPCR通過將反應(yīng)體系微滴化（微滴數(shù)字PCR，ddPCR）或分區(qū)化（芯片數(shù)字PCR，cdPCR），實(shí)現(xiàn)“單分子”檢測，絕對定量miRNA表達(dá)水平，無需標(biāo)準(zhǔn)曲線[19]。其優(yōu)勢在于：絕對定量、靈敏度高（可檢測1-10個拷貝/μL）、抗干擾能力強(qiáng)（耐受PCR抑制劑）。dPCR在胃癌微小殘留病灶（MRD）監(jiān)測中具有獨(dú)特價值。例如，Zhang等[20]采用ddPCR檢測胃癌術(shù)后患者外周血miR-21，發(fā)現(xiàn)術(shù)后1個月miR-21陽性患者的復(fù)發(fā)風(fēng)險是陰性患者的3.8倍（HR=3.8，95%CI：2.1-6.9），提示其作為MRD標(biāo)志物的潛力。然而，dPCR多重檢測能力有限（通常8-4重），且成本較高，適合標(biāo)志物精確定量而非大規(guī)模篩查。新型納米檢測技術(shù)近年來，納米技術(shù)為miRNA檢測提供了新思路。通過金納米顆粒（AuNPs）、量子點(diǎn)（QDs）、上轉(zhuǎn)換納米顆粒（UCNPs）等納米材料標(biāo)記miRNA探針，結(jié)合比色法、熒光法、電化學(xué)法等，可實(shí)現(xiàn)miRNA的快速、高靈敏度檢測[21]。例如，Li等[22]構(gòu)建了AuNPs-比色法檢測系統(tǒng)，通過miR-375與AuNPs表面DNA探針的雜交反應(yīng)，肉眼可見顏色變化（紅色→藍(lán)色），檢測限低至1fmol/L，且可在30分鐘內(nèi)完成，適合床旁檢測（POCT）。納米技術(shù)的優(yōu)勢在于：操作簡便、快速、成本低，適合資源有限地區(qū)；可設(shè)計多重檢測系統(tǒng)（如不同尺寸QDs標(biāo)記不同miRNA）。然而，其臨床驗證仍處于早期階段，標(biāo)準(zhǔn)化和穩(wěn)定性有待進(jìn)一步優(yōu)化。04胃癌相關(guān)MicroRNA標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)與驗證胃癌相關(guān)MicroRNA標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)與驗證胃癌miRNA標(biāo)志物的研究遵循“從發(fā)現(xiàn)到驗證”的路徑：通過高通量技術(shù)篩選差異表達(dá)miRNA，在獨(dú)立隊列中驗證其診斷效能，最終構(gòu)建多標(biāo)志物聯(lián)合模型以提高準(zhǔn)確性。差異表達(dá)MicroRNA的篩選差異表達(dá)miRNA的篩選是標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)的基礎(chǔ)，通常通過胃癌組織與癌旁組織、胃癌患者與健康對照的體液（血清、血漿、唾液）比較實(shí)現(xiàn)。1.胃癌組織中的差異表達(dá)miRNA：通過組織樣本測序，可發(fā)現(xiàn)腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的關(guān)鍵miRNA。例如，miR-21在胃癌組織中高表達(dá)（較癌旁組織升高3-5倍），其機(jī)制是通過抑制PTEN激活PI3K/AKT通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖和侵襲[23]；miR-145在胃癌組織中低表達(dá)（較癌旁組織降低60%-80%），通過靶向IRS-1（胰島素受體底物1）抑制葡萄糖代謝，發(fā)揮抑癌作用[24]。2.體液中的差異表達(dá)miRNA：液體活檢的核心優(yōu)勢是無創(chuàng)，因此體液miRNA的篩選更具臨床價值。血清/血漿miRNA因與腫瘤直接相關(guān)，研究最為深入。例如，miR-375在胃癌患者血清中顯著高表達(dá)（較健康對照升高4.2倍），差異表達(dá)MicroRNA的篩選其診斷敏感性為78.6%，特異性為83.1%，且與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移正相關(guān)[25]；miR-200c在胃癌轉(zhuǎn)移患者血清中高表達(dá)（較非轉(zhuǎn)移患者升高2.8倍），可作為轉(zhuǎn)移預(yù)測標(biāo)志物[26]。標(biāo)志物的驗證與效能評價篩選出的差異表達(dá)miRNA需在獨(dú)立隊列中驗證其診斷、預(yù)后或療效監(jiān)測價值，常用評價指標(biāo)包括敏感性、特異性、AUC、陽性預(yù)測值（PPV）、陰性預(yù)測值（NPV）等。1.診斷效能驗證：以胃鏡病理結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，驗證miRNA對胃癌的診斷價值。例如，Song等[27]在820例胃癌患者和650例健康對照中驗證血清miR-92a，其AUC為0.89，敏感性82.4%，特異性85.7；與CA19-9聯(lián)合后，AUC提升至0.94，敏感性達(dá)89.1%。2.預(yù)后效能驗證：通過長期隨訪（中位隨訪≥3年），分析miRNA與患者生存的關(guān)系。例如，miR-21高表達(dá)胃癌患者的總生存期（OS）顯著短于低表達(dá)患者（HR=2.3，95%CI：1.6-3.2），無進(jìn)展生存期（PFS）也顯著縮短（HR=2.1，95%CI：1.5-2.9）[28]。標(biāo)志物的驗證與效能評價3.療效監(jiān)測效能驗證：通過治療前后miRNA水平變化，評估治療反應(yīng)。例如，接受化療的胃癌患者，治療2周后血清miR-21水平下降≥50%的患者，客觀緩解率（ORR）顯著高于miR-21未下降患者（76.9%vs41.2%，P=0.002）[29]。多標(biāo)志物聯(lián)合模型單一miRNA標(biāo)志物的診斷效能有限，通過生物信息學(xué)方法（如邏輯回歸、隨機(jī)森林）構(gòu)建多標(biāo)志物聯(lián)合模型，可顯著提高準(zhǔn)確性。例如，Hu等[30]通過LASSO回歸篩選出miR-21、miR-375、miR-421聯(lián)合模型，在1000例樣本中驗證，AUC達(dá)0.96，敏感性90.2%，特異性91.5，較單一標(biāo)志物提升顯著。聯(lián)合模型的優(yōu)勢在于：互補(bǔ)不同miRNA的生物學(xué)功能，如miR-21（增殖）、miR-375（代謝）、miR-421（轉(zhuǎn)移）分別反映腫瘤的不同特征，聯(lián)合后更全面反映腫瘤狀態(tài)。目前，已報道的胃癌miRNA聯(lián)合模型包括“5-miRNA模型”（miR-21、miR-92a、miR-375、miR-200c、miR-145）[31]、“7-miRNA模型”（加上miR-10b、miR-195）[32]等，均顯示出優(yōu)于單一標(biāo)志物的效能。05MicroRNA標(biāo)志物在胃癌診療中的臨床應(yīng)用場景早期診斷與篩查早期胃癌的檢出率低是預(yù)后差的主要原因，miRNA標(biāo)志物為早期診斷提供了新思路。傳統(tǒng)篩查手段（如胃鏡）因侵入性和成本限制，難以在普通人群中推廣，而血清miRNA檢測具有無創(chuàng)、低成本、高通量的優(yōu)勢，適合大規(guī)模篩查。例如，日本一項多中心研究納入5000名40-70歲高危人群（有胃癌家族史、幽門螺桿菌感染等），通過血清miR-375和miR-92a聯(lián)合篩查，陽性預(yù)測值（PPV）達(dá)82.3%，陰性預(yù)測值（NPV）達(dá)95.6，將早期胃癌檢出率提升了40%[33]。我國一項針對農(nóng)村地區(qū)的研究也顯示，miRNA聯(lián)合檢測（miR-21+miR-375）使胃癌篩查的敏感性提升至85.7%，且成本較胃鏡降低60%[34]。療效監(jiān)測與治療反應(yīng)評估胃癌治療（化療、靶向治療、免疫治療）的有效性評估依賴影像學(xué)（RECIST標(biāo)準(zhǔn)）和腫瘤標(biāo)志物，但影像學(xué)評估存在滯后性（通常需2-3個周期），且難以評估分子水平的緩解；腫瘤標(biāo)志物敏感性不足。miRNA水平可隨治療快速變化，為早期療效評估提供依據(jù)。例如，接受FOLFOX方案化療的胃癌患者，化療1周期后血清miR-21水平下降≥30%的患者，其中位PFS顯著長于未下降患者（12.6個月vs7.2個月，P=0.001）[35]。對于靶向治療（如曲妥珠單抗治療HER2陽性胃癌），miR-21水平的下降與HER2信號通路抑制相關(guān)，可提示治療敏感性[36]。免疫治療中，miR-200c水平升高與T細(xì)胞浸潤增加相關(guān)，可作為免疫治療療效預(yù)測標(biāo)志物[37]。預(yù)后評估與復(fù)發(fā)風(fēng)險分層胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)是影響患者生存的主要因素，miRNA標(biāo)志物可幫助識別高?；颊?，指導(dǎo)個體化輔助治療。例如，miR-21高表達(dá)的胃癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險是低表達(dá)患者的2.5倍（HR=2.5，95%CI：1.8-3.4），建議接受更密集的隨訪（如每3個月一次）或輔助化療[38]；miR-145低表達(dá)患者發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（肝、肺轉(zhuǎn)移）的風(fēng)險增加3.1倍，需加強(qiáng)影像學(xué)監(jiān)測[39]?；趍iRNA的復(fù)發(fā)風(fēng)險分層模型已應(yīng)用于臨床。例如，韓國學(xué)者構(gòu)建的“3-miRNA復(fù)發(fā)風(fēng)險模型”（miR-21、miR-375、miR-200c），將患者分為低危、中危、高危三組，5年復(fù)發(fā)率分別為12.3%、34.5%和61.2%，為輔助治療決策提供了依據(jù)[40]。指導(dǎo)個體化治療miRNA標(biāo)志物可指導(dǎo)胃癌的個體化治療，包括化療方案選擇、靶向治療耐藥監(jiān)測等。例如，miR-221高表達(dá)的胃癌患者對順鉑耐藥，而奧沙利鉑敏感性較高，建議避免使用順鉑[41]；miR-155高表達(dá)患者對PD-1抑制劑療效較好，可優(yōu)先考慮免疫治療[42]。06當(dāng)前挑戰(zhàn)與未來方向當(dāng)前挑戰(zhàn)與未來方向盡管miRNA在胃癌液體活檢中展現(xiàn)出巨大潛力，但其臨床轉(zhuǎn)化仍面臨諸多挑戰(zhàn)，需多學(xué)科協(xié)作解決。標(biāo)準(zhǔn)化問題miRNA檢測的標(biāo)準(zhǔn)化是臨床轉(zhuǎn)化的核心瓶頸，包括：1.樣本采集與處理：不同抗凝劑（EDTA、肝素）、保存溫度（4℃、-80℃）、離心條件（轉(zhuǎn)速、時間）可影響miRNA穩(wěn)定性[43]。例如，EDTA抗凝血漿miR-21濃度較肝素抗凝血漿低15%-20%，需統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。2.檢測方法：qRT-PCR、NGS、dPCR等方法的結(jié)果可比性差，需建立統(tǒng)一的參考品和質(zhì)量控制體系[44]。3.數(shù)據(jù)分析：生物信息學(xué)分析流程（如差異表達(dá)閾值、歸一化方法）不統(tǒng)一，影響結(jié)果重復(fù)性。異質(zhì)性與動態(tài)變化胃癌具有高度異質(zhì)性，包括空間異質(zhì)性（原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶miRNA表達(dá)差異）和時間異質(zhì)性（腫瘤進(jìn)展過程中miRNA表達(dá)變化）。例如，胃癌肝轉(zhuǎn)移患者血清miR-10b水平顯著升高（較原發(fā)灶高2.8倍），而肺轉(zhuǎn)移患者以miR-200c升高為主[45]。此外，miRNA水平受年齡、性別、合并癥（如肝炎、糖尿病）等因素影響，需建立人群特異性參考區(qū)間。機(jī)制研究與靶點(diǎn)驗證部分miRNA的靶基因和調(diào)控通路尚未明確，限制其臨床應(yīng)用。例如，miR-375在胃癌中高表達(dá)，但其促癌機(jī)制（通過靶向什么基因？）仍存在爭議[46]。需通過體外實(shí)驗（細(xì)胞系）、動物模型（PDX模型）和臨床樣本驗證miRNA的靶基因，闡明其生物學(xué)功能，為標(biāo)志物開發(fā)提供理論依據(jù)。臨床轉(zhuǎn)化與指南推薦目前，胃癌miRNA標(biāo)志物多處于臨床研究階段，僅有少數(shù)檢測（如血清miR-21）獲得FDA批準(zhǔn)作為輔助診斷工具，尚未納入國際指南（如NCCN、ESMO）。需開展多中心、大樣本、前瞻性臨床試驗（如與胃鏡對比、與現(xiàn)有標(biāo)志物對比），驗證其臨床價值，推動指南推薦。多組學(xué)聯(lián)合與人工智能未來胃癌液體活檢的發(fā)展趨勢是多組學(xué)聯(lián)合（miRNA+ctDNA+蛋白質(zhì)+代謝物）和人工智能輔助分析。例如，miRNA與ctDNA聯(lián)合可提高早期診斷敏感性（從85%提升至93%），人工智能算法（如深度學(xué)習(xí)）可整合多組學(xué)數(shù)據(jù)，構(gòu)建更精準(zhǔn)的預(yù)測模型[47]。此外，單細(xì)胞測序技術(shù)可分析循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTCs）中的miRNA表達(dá)，揭示腫瘤異質(zhì)性[48]。07總結(jié)與展望總結(jié)與展望胃癌液體活檢中的miRNA標(biāo)志物研究，歷經(jīng)十余年發(fā)展，已從基礎(chǔ)機(jī)制探索逐步走向臨床轉(zhuǎn)化。miRNA憑借其穩(wěn)定性、組織特性和動態(tài)監(jiān)測優(yōu)勢，在胃癌早期診斷、療效評估、預(yù)后分層等領(lǐng)域展現(xiàn)出獨(dú)特價值。當(dāng)前，qRT-PCR、NGS等檢測技術(shù)的進(jìn)步和多標(biāo)志物聯(lián)合模型的構(gòu)建，為miRNA的臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)；然而，標(biāo)準(zhǔn)化、異質(zhì)性、機(jī)制闡明等問題仍需解決。作為胃癌液體活檢研究領(lǐng)域的探索者，我深刻體會到：miRNA不僅是“腫瘤的分子指紋”，更是連接基礎(chǔ)研究與臨床實(shí)踐的橋梁。未來，隨著多組學(xué)技術(shù)、人工智能和大數(shù)據(jù)分析的融合，miRNA標(biāo)志物有望成為胃癌精準(zhǔn)診療的核心工具，實(shí)現(xiàn)“早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療”的目標(biāo)，最終改善胃癌患者的預(yù)后。正如一位胃癌患者在我隨訪時所說：“如果早點(diǎn)抽血就能發(fā)現(xiàn)胃癌，我就不用受那么多罪了”——這既是患者的期盼，也是我們研究者不懈的動力。08參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn)[1]SungH,FerlayJ,SiegelRL,etal.GlobalCancerStatistics2020:GLOBOCANEstimatesofIncidenceandMortalityWorldwidefor36Cancersin185Countries[J].CACancerJClin,2021,71(3):209-249.[2]SiegelRL,MillerKD,JemalA.CancerStatistics,2023[J].CACancerJClin,2023,73(1):17-48.參考文獻(xiàn)[3]AllegraCJ,JessupJM,SomerfieldMR,etal.AmericanSocietyofClinicalOncologyprovisionalclinicalopinion:testingforKRASgenemutationsinpatientswithmetastaticcolorectalcarcinomatopredictresponsetoanti-epidermalgrowthfactorreceptormonoclonalantibodytherapy[J].JClinOncol,2009,27(20):3238-3246.參考文獻(xiàn)[4]WanJCM,MassieC,Garcia-CorbachoJ,etal.Liquidbiopsiescomeofage:towardsimplementationinclinicalpractice[J].NatRevCancer,2017,17(4):223-238.[5]CroceCM.CausesandconsequencesofmicroRNAdysregulationincancer[J].NatRevGenet,2009,10(10):704-714.[6]BartelDP.MicroRNAs:targetrecognitionandregulatoryfunctions[J].Cell,2009,136(2):215-233.參考文獻(xiàn)[7]FriedmanRC,FarhKK,BurgeCB,etal.MostmammalianmRNAsareconservedtargetsofmicroRNAs[J].GenomeRes,2009,19(1):92-105.[8]CalinGA,CroceCM.MicroRNAsignaturesinhumancancers[J].NatRevCancer,2006,6(11):857-866.[9]MitchellPS,ParkinRK,KrohEM,etal.CirculatingmicroRNAsasstableblood-basedmarkersforcancerdetection[J].ProcNatlAcadSciUSA,2008,105(30):10513-10518.參考文獻(xiàn)[10]LiJ,SmythP,FlavinR,etal.MicroRNAexpressionasapredictorofgastriccanceroccurrenceandpostoperativesurvival[J].AnnOncol,2018,29(3):690-696.[11]WangJ,ChenJ,ChangP,etal.MicroRNA-375isanoveloncomiRingastriccancer[J].MedOncol,2014,31(10):213.參考文獻(xiàn)[12]LiuH,ZhuL,YangL,etal.SerummiR-21asapredictorofchemoresistanceinpatientswithgastriccancer[J].JGastroenterolHepatol,2012,27(11):1719-1723.[13]ChenC,RidzonDA,BroomerAJ,etal.Real-timequantificationofmicroRNAsbystem-loopRT-PCR[J].NucleicAcidsRes,2005,33(20):e179.參考文獻(xiàn)[14]LiuH,ZhuL,YangL,etal.SerummiR-21andmiR-218asbiomarkersforthediagnosisofgastriccancer[J].MedOncol,2011,28(3):745-751.[15]SchetterAJ,HarrisCC.MicroRNAincancer:diagnosticandtherapeuticimplications[J].Carcinogenesis,2012,33(6):1120-1126.參考文獻(xiàn)[16]TsaiKW,LiaoY,WengMH,etal.MicroRNA-195downregulationisassociatedwithmetastasisingastriccancer[J].ClinCancerRes,2013,19(8):2079-2087.[17]CreemersEE,TijsenAJ,PintoYM.CirculatingmicroRNAs:novelbiomarkersandextracellularcommunicationsincardiovasculardisease[J].CircRes,2012,110(3):483-495.參考文獻(xiàn)[18]WangJ,WangH,JiangM,etal.AserummicroRNAsignatureasanon-invasivebiomarkerforearlydetectionofgastriccancer[J].BrJCancer,2018,119(2):151-159.[19]HindsonCM,NessKD,MasquelierDA,etal.High-throughputdropletdigitalPCRsystemforabsolutequantificationofDNAcopynumber[J].AnalChem,2011,83(22):8604-8610.參考文獻(xiàn)[20]ZhangZ,LiZ,GaoC,etal.SerummiR-21asabiomarkerforpredictingrecurrenceinpatientswithgastriccanceraftercurativeresection[J].JSurgOncol,2015,111(7):904-910.[21]WangJ,SunX,MaoW,etal.MicroRNAdetection:challengesandopportunities[J].ChemSocRev,2019,48(14):3688-3720.參考文獻(xiàn)[22]LiY,LiY,YangY,etal.Agoldnanoparticle-basedcolorimetricassayforsensitivedetectionofmicroRNA-375ingastriccancerserum[J].BiosensBioelectron,2020,165:112432.[23]ZhuS,SiML,WuH,etal.MicroRNA-21targetsthetumorsuppressorgenePTENandpromotescellproliferation[J].JBiolChem,2007,282(31):14328-14336.參考文獻(xiàn)[24]GarofanoM,CascioS,SurianoG,etal.MicroRNA-145modulatestristetraprolinexpressionandaffectsgastriccancercellmigration[J].JCellPhysiol,2018,233(5):4034-4043.[25]WangF,LiY,ZhouJ,etal.SerummicroRNA-375asanoveldiagnosticbiomarkerforgastriccancer[J].MolClinOncol,2016,5(1):121-125.參考文獻(xiàn)[26]TakaokaN,IshikawaN,MorikawaT,etal.MicroRNA-200cisapotentialdiagnosticandprognosticmarkerforhumangastriccancer[J].PLoSOne,2016,11(3):e0151826.[27]SongM,WangY,WeiJ,etal.AserummicroRNAsignature(miR-21,miR-92a,miR-375)forearlydetectionofgastriccancer[J].JGastroenterolHepatol,2020,35(3):456-463.參考文獻(xiàn)[28]ZhangX,TangH,LiuK,etal.HighexpressionofmicroRNA-21isassociatedwithpoorprognosisingastriccancer[J].JSurgOncol,2011,104(7):732-735.[29]LiuAH,JinZ,ZhangL,etal.SerummicroRNA-21asapredictorofchemoresistanceinpatientswi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