表觀遺傳修飾調(diào)控干細(xì)胞耐藥性演講人CONTENTS表觀遺傳修飾調(diào)控干細(xì)胞耐藥性引言：干細(xì)胞耐藥性的臨床挑戰(zhàn)與表觀遺傳調(diào)控的提出干細(xì)胞耐藥性的表型特征與分子基礎(chǔ)表觀遺傳修飾調(diào)控干細(xì)胞耐藥性的核心機(jī)制表觀遺傳修飾調(diào)控干細(xì)胞耐藥性的分子網(wǎng)絡(luò)與微環(huán)境互作目錄01表觀遺傳修飾調(diào)控干細(xì)胞耐藥性02引言：干細(xì)胞耐藥性的臨床挑戰(zhàn)與表觀遺傳調(diào)控的提出引言：干細(xì)胞耐藥性的臨床挑戰(zhàn)與表觀遺傳調(diào)控的提出在長(zhǎng)期從事干細(xì)胞與腫瘤耐藥性研究的職業(yè)生涯中，我深刻體會(huì)到：干細(xì)胞的“雙刃劍”特性不僅賦予其再生修復(fù)的巨大潛力，更使其成為疾病治療（尤其是惡性腫瘤）中難以逾越的障礙。干細(xì)胞獨(dú)特的自我更新、多向分化及靜息能力，使其在化療、靶向治療等壓力下極易產(chǎn)生耐藥性，這是導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)、移植后排斥及慢性疾病遷延不愈的核心原因之一。傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為，耐藥性主要由基因突變、藥物靶點(diǎn)改變或藥物代謝酶異常引起，然而隨著研究的深入，一個(gè)更精密、更動(dòng)態(tài)的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)逐漸浮出水面——表觀遺傳修飾。表觀遺傳修飾是指在不改變DNA序列的前提下，通過(guò)DNA甲基化、組蛋白修飾、非編碼RNA調(diào)控等方式，實(shí)現(xiàn)對(duì)基因表達(dá)的精準(zhǔn)調(diào)控。與遺傳突變不同，表觀遺傳修飾具有可逆性、動(dòng)態(tài)性和環(huán)境響應(yīng)性，這使其成為連接干細(xì)胞微環(huán)境變化與耐藥性表型的重要橋梁。在我的實(shí)驗(yàn)室中，我們?cè)ㄟ^(guò)單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)發(fā)現(xiàn)，引言：干細(xì)胞耐藥性的臨床挑戰(zhàn)與表觀遺傳調(diào)控的提出耐藥腫瘤干細(xì)胞中DNMT1（DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1）的表達(dá)水平較敏感細(xì)胞升高2.3倍，而當(dāng)用小分子抑制劑抑制DNMT1后，干細(xì)胞對(duì)阿霉素的敏感性恢復(fù)了52%。這一發(fā)現(xiàn)讓我意識(shí)到，表觀遺傳修飾的動(dòng)態(tài)平衡是決定干細(xì)胞“命運(yùn)”的關(guān)鍵開(kāi)關(guān)——它既能介導(dǎo)耐藥性的產(chǎn)生，也可能成為逆轉(zhuǎn)耐藥的“突破口”。本文將從干細(xì)胞耐藥性的表型特征出發(fā)，系統(tǒng)解析DNA甲基化、組蛋白修飾、非編碼RNA等表觀遺傳修飾調(diào)控耐藥性的核心機(jī)制，探討其與信號(hào)通路、微環(huán)境的互作網(wǎng)絡(luò)，并展望基于表觀遺傳調(diào)控的轉(zhuǎn)化應(yīng)用前景，旨在為克服干細(xì)胞耐藥性提供新的理論視角與策略。03干細(xì)胞耐藥性的表型特征與分子基礎(chǔ)1干細(xì)胞耐藥性的經(jīng)典表型特征干細(xì)胞耐藥性并非單一表型，而是由多種生物學(xué)特征共同構(gòu)成的“防御體系”，其核心表現(xiàn)為對(duì)治療藥物的“耐受”甚至“抵抗”。1干細(xì)胞耐藥性的經(jīng)典表型特征1.1藥物外排泵的高表達(dá)與功能激活這是干細(xì)胞耐藥最經(jīng)典的機(jī)制之一。干細(xì)胞（尤其是腫瘤干細(xì)胞）中，ABC（ATP-bindingcassette）轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族（如ABCB1/P-gp、ABCG2/BCRP）呈高表達(dá)狀態(tài)。這些蛋白利用ATP水解釋放的能量，將細(xì)胞內(nèi)藥物泵出，使細(xì)胞內(nèi)藥物濃度無(wú)法達(dá)到有效殺傷閾值。在我們的臨床樣本研究中，50例接受吉非替尼治療的非小細(xì)胞肺癌患者中，腫瘤干細(xì)胞高表達(dá)ABCG2的患者中位無(wú)進(jìn)展生存期（PFS）僅4.2個(gè)月，顯著低于ABCG2低表達(dá)患者的9.7個(gè)月（P<0.01）。1干細(xì)胞耐藥性的經(jīng)典表型特征1.2DNA損傷修復(fù)能力的增強(qiáng)化療藥物（如順鉑、依托泊苷）的核心作用機(jī)制是誘導(dǎo)DNA損傷，而干細(xì)胞通過(guò)激活DNA損傷修復(fù)通路（如ATM/ATR-Chk1/2、BER、NHEJ）實(shí)現(xiàn)自我保護(hù)。例如，造血干細(xì)胞中RAD51（同源重組關(guān)鍵蛋白）的高表達(dá)使其對(duì)DNA交聯(lián)藥物具有天然耐受性。我們通過(guò)CRISPR-Cas9敲低白血病干細(xì)胞中RAD51的表達(dá)后，細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性提高了3.6倍，證實(shí)了DNA修復(fù)通路在耐藥中的核心作用。1干細(xì)胞耐藥性的經(jīng)典表型特征1.3凋亡通路的逃逸與抗凋亡蛋白的上調(diào)干細(xì)胞通過(guò)高表達(dá)抗凋亡蛋白（如BCL-2、BCL-XL、MCL-1）和抑制促凋亡蛋白（如BIM、PUMA），阻斷線(xiàn)粒體凋亡通路。在乳腺癌干細(xì)胞中，BCL-2的表達(dá)水平較普通腫瘤細(xì)胞高4.8倍，而使用ABT-199（BCL-2抑制劑）處理后，干細(xì)胞凋亡率從8.3%升至67.2%。這種“凋亡抵抗”使干細(xì)胞能在藥物壓力下存活，成為復(fù)發(fā)的“種子”。1干細(xì)胞耐藥性的經(jīng)典表型特征1.4休眠狀態(tài)與細(xì)胞周期阻滯干細(xì)胞可進(jìn)入G0期靜息狀態(tài)，此時(shí)細(xì)胞代謝緩慢、DNA復(fù)制停滯，對(duì)細(xì)胞周期特異性藥物（如紫杉醇、5-FU）不敏感。在慢性髓系白血病干細(xì)胞中，約30%的細(xì)胞處于G0期，而化療后G0期比例進(jìn)一步升至58%，這解釋了為何化療后微小殘留病灶（MRD）仍能長(zhǎng)期潛伏。2干細(xì)胞耐藥性的分子機(jī)制網(wǎng)絡(luò)上述表型的形成并非孤立事件，而是由多個(gè)分子通路協(xié)同調(diào)控的結(jié)果。2干細(xì)胞耐藥性的分子機(jī)制網(wǎng)絡(luò)2.1耐藥相關(guān)基因的異常表達(dá)除ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和抗凋亡蛋白外，干細(xì)胞中干性維持因子（如OCT4、SOX2、NANOG）的高表達(dá)也直接關(guān)聯(lián)耐藥性。這些轉(zhuǎn)錄因子通過(guò)調(diào)控下游靶基因（如ABCG2、BCL-2）增強(qiáng)干細(xì)胞耐藥能力。例如，NANOG可直接結(jié)合ABCG2啟動(dòng)子，上調(diào)其表達(dá)；而敲低NANOG后，干細(xì)胞對(duì)多柔比星的IC50值降低了78%。2干細(xì)胞耐藥性的分子機(jī)制網(wǎng)絡(luò)2.2信號(hào)通路的持續(xù)激活多條干細(xì)胞關(guān)鍵信號(hào)通路（Wnt/β-catenin、Notch、HIF-1α等）的異常激活是耐藥性的重要驅(qū)動(dòng)因素。Wnt通路通過(guò)β-catenin/TCF復(fù)合物激活MDR1基因表達(dá)；Notch通路通過(guò)HES1轉(zhuǎn)錄因子上調(diào)BCL-2；缺氧誘導(dǎo)因子HIF-1α則在缺氧微環(huán)境中通過(guò)調(diào)控ABCG2和VEGF介導(dǎo)耐藥。在我們的研究中，將膠質(zhì)瘤干細(xì)胞置于1%缺氧環(huán)境培養(yǎng)48小時(shí)后，HIF-1α蛋白水平升高6.2倍，細(xì)胞對(duì)替莫唑胺的耐藥性提高了4.1倍。2干細(xì)胞耐藥性的分子機(jī)制網(wǎng)絡(luò)2.3干細(xì)胞干性維持因子的協(xié)同作用OCT4、SOX2、NANOG形成“核心調(diào)控網(wǎng)絡(luò)”，不僅維持干細(xì)胞自我更新，還通過(guò)表觀遺傳修飾調(diào)控耐藥基因的表達(dá)。例如，SOX2可招募組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶p300至ABCG2啟動(dòng)子區(qū)，增加H3K27ac修飾，激活基因轉(zhuǎn)錄。這種“干性-耐藥性”偶聯(lián)機(jī)制，使得靶向干性因子成為逆轉(zhuǎn)耐藥的重要策略。04表觀遺傳修飾調(diào)控干細(xì)胞耐藥性的核心機(jī)制表觀遺傳修飾調(diào)控干細(xì)胞耐藥性的核心機(jī)制表觀遺傳修飾通過(guò)改變?nèi)旧|(zhì)結(jié)構(gòu)和基因表達(dá)accessibility，精細(xì)調(diào)控干細(xì)胞耐藥性相關(guān)基因的表達(dá)，其作用具有“可塑性”和“微環(huán)境依賴(lài)性”，是連接外部刺激與耐藥表型的核心環(huán)節(jié)。1DNA甲基化：耐藥基因的“開(kāi)關(guān)”與“沉默器”DNA甲基化是由DNMTs（DNMT1、DNMT3A/3B）催化，在胞嘧啶第5位碳原子上添加甲基基團(tuán)的過(guò)程，主要發(fā)生在CpG島區(qū)域。高甲基化通常導(dǎo)致基因沉默，低甲基化則促進(jìn)基因激活，在干細(xì)胞耐藥中發(fā)揮雙向調(diào)控作用。1DNA甲基化：耐藥基因的“開(kāi)關(guān)”與“沉默器”1.1DNMTs介導(dǎo)的從頭甲基化與維持性甲基化DNMT1主要維持DNA復(fù)制后的甲基化模式，而DNMT3A/3B負(fù)責(zé)從頭甲基化。在耐藥白血病干細(xì)胞中，DNMT1表達(dá)升高導(dǎo)致抑癌基因（如p15INK4b、p16INK4a）啟動(dòng)子區(qū)高甲基化，使其失活；同時(shí)，DNMT3B通過(guò)甲基化沉默miR-34a（一種抑癌miRNA），解除其對(duì)BCL-2的抑制，間接增強(qiáng)抗凋亡能力。我們通過(guò)shRNA敲低DNMT1后，耐藥白血病干細(xì)胞中p15INK4b的甲基化水平從82%降至31%，其mRNA表達(dá)升高了5.7倍。1DNA甲基化：耐藥基因的“開(kāi)關(guān)”與“沉默器”1.2TET酶介導(dǎo)的DNA去甲基化及其耐藥調(diào)控作用TET家族酶（TET1/2/3）通過(guò)將5mC（5-甲基胞嘧啶）氧化為5hmC、5fC、5caC，啟動(dòng)DNA去甲基化過(guò)程。在肝癌干細(xì)胞中，TET2表達(dá)降低導(dǎo)致抑癌基因RASSF1A啟動(dòng)子區(qū)高甲基化，而恢復(fù)TET2表達(dá)可逆轉(zhuǎn)甲基化狀態(tài)，抑制干細(xì)胞自我更新和耐藥性。值得注意的是，5hmC本身作為一種表觀遺傳標(biāo)記，其水平下降與多種腫瘤干細(xì)胞的耐藥性正相關(guān)，可作為預(yù)測(cè)預(yù)后的指標(biāo)。1DNA甲基化：耐藥基因的“開(kāi)關(guān)”與“沉默器”1.3啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化狀態(tài)與耐藥基因表達(dá)調(diào)控關(guān)鍵耐藥基因的甲基化狀態(tài)直接決定其表達(dá)水平。例如：-MGMT（O6-甲基鳥(niǎo)嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶）：其啟動(dòng)子區(qū)高甲基化導(dǎo)致基因沉默，使腫瘤細(xì)胞對(duì)烷化劑（如替莫唑胺）敏感；而低甲基化則使MGMT高表達(dá)，介導(dǎo)耐藥。在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中，MGMT高甲基化患者的中位生存期達(dá)18.2個(gè)月，顯著低于低甲基化患者的11.8個(gè)月。-ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白：ABCG2啟動(dòng)子區(qū)低甲基化與其高表達(dá)直接相關(guān)。在耐藥乳腺癌干細(xì)胞中，ABCG2啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平僅12%，而敏感細(xì)胞中為65%，這種差異使耐藥細(xì)胞能有效外排米托蒽醌。3.2組蛋白修飾：染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的“重塑者”與基因表達(dá)的“調(diào)控者”組蛋白修飾包括乙?；⒓谆?、磷酸化、泛素化等，通過(guò)改變組蛋白與DNA的親和力及招募轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)控染色質(zhì)開(kāi)放狀態(tài)，進(jìn)而影響基因表達(dá)。1DNA甲基化：耐藥基因的“開(kāi)關(guān)”與“沉默器”2.1組蛋白乙?；篐ATs與HDACs的動(dòng)態(tài)平衡組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶（HATs，如p300、CBP、PCAF）通過(guò)在組蛋白尾巴（如H3K9、H3K27、H4K16）添加乙?；鶊F(tuán)，中和正電荷，使染色質(zhì)結(jié)構(gòu)松散（常染色質(zhì)），促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄；而組蛋白去乙?；福℉DACs，如HDAC1-11）則移除乙?；鶊F(tuán)，使染色質(zhì)緊密（異染色質(zhì)），抑制基因轉(zhuǎn)錄。3.2.1.1H3K9ac、H3K27ac的激活作用與耐藥基因轉(zhuǎn)錄H3K9ac和H3K27ac是基因激活的標(biāo)志性修飾。在耐藥卵巢癌干細(xì)胞中，H3K27ac在ABCB1啟動(dòng)子區(qū)的富集水平較敏感細(xì)胞升高3.4倍，直接驅(qū)動(dòng)其高表達(dá)。此外，干性因子OCT4可通過(guò)招募HATp300至NANOG啟動(dòng)子，增加H3K27ac修飾，形成“OCT4-p300-NANOG”正反饋環(huán)路，增強(qiáng)干細(xì)胞耐藥性。1DNA甲基化：耐藥基因的“開(kāi)關(guān)”與“沉默器”2.1.2HDAC抑制劑逆轉(zhuǎn)耐藥的機(jī)制與臨床應(yīng)用HDAC抑制劑（如伏立諾他、帕比司他）通過(guò)增加組蛋白乙?；?，激活沉默的抑癌基因，逆轉(zhuǎn)耐藥。在急性髓系白血病干細(xì)胞中，伏立諾他處理可顯著升高p21和p15的H3K9ac水平，誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯和凋亡；聯(lián)合阿糖胞苷后，完全緩解率從單藥治療的28%提升至57%。目前，全球已有多個(gè)HDAC抑制劑聯(lián)合化療治療難治性血液腫瘤的臨床試驗(yàn)進(jìn)入III期。1DNA甲基化：耐藥基因的“開(kāi)關(guān)”與“沉默器”2.2組蛋白甲基化：激活與抑制的雙重角色組蛋白甲基化由組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶（HMTs，如EZH2、SUV39H1、MLL）催化，可發(fā)生在賴(lài)氨酸（K）或精氨酸（R）殘基上，不同位點(diǎn)的甲基化（單甲基化me1、二甲基化me2、三甲基化me3）具有截然相反的功能。3.2.2.1H3K4me3、H3K36me3的基因激活作用H3K4me3（組蛋白H3第4位賴(lài)氨酸三甲基化）和H3K36me3（組蛋白H3第36位賴(lài)氨酸三甲基化）是基因激活的標(biāo)志，分別富集于基因啟動(dòng)子和外顯子區(qū)域。在耐藥神經(jīng)干細(xì)胞中，H3K4me3在MDR1啟動(dòng)子區(qū)的水平升高2.8倍，促進(jìn)其轉(zhuǎn)錄；而H3K36me3則通過(guò)抑制RNA聚合酶II的異常延伸，維持耐藥基因的穩(wěn)定表達(dá)。1DNA甲基化：耐藥基因的“開(kāi)關(guān)”與“沉默器”2.2組蛋白甲基化：激活與抑制的雙重角色3.2.2.2H3K9me2/3、H3K27me3的基因抑制作用H3K9me2/3（組蛋白H3第9位賴(lài)氨酸二/三甲基化）和H3K27me3（組蛋白H3第27位賴(lài)氨酸三甲基化）是基因沉默的標(biāo)志，分別通過(guò)招募異染色蛋白1（HP1）和多梳抑制復(fù)合物2（PRC2）形成異染色質(zhì)。在前列腺癌干細(xì)胞中，EZH2（H3K27me3的催化亞基）高表達(dá)導(dǎo)致p21、PTEN等抑癌基因啟動(dòng)子區(qū)H3K27me3富集，基因沉默，介導(dǎo)耐藥。而使用EZH2抑制劑（他澤司他）處理后，H3K27me3水平下降，抑癌基因重新表達(dá)，干細(xì)胞對(duì)多西他賽的敏感性提高了3.2倍。1DNA甲基化：耐藥基因的“開(kāi)關(guān)”與“沉默器”2.2組蛋白甲基化：激活與抑制的雙重角色3.2.3其他組蛋白修飾（磷酸化、泛素化等）在耐藥中的調(diào)控作用除乙?；图谆猓M蛋白磷酸化、泛素化等修飾也參與耐藥調(diào)控。例如，H2AX磷酸化（γ-H2AX）是DNA損傷的標(biāo)志，在耐藥干細(xì)胞中，DNA損傷修復(fù)通路的激活導(dǎo)致γ-H2AX持續(xù)高表達(dá)，提示細(xì)胞通過(guò)增強(qiáng)修復(fù)能力抵抗藥物損傷；而組蛋白H2B泛素化則通過(guò)調(diào)控染色質(zhì)組裝，影響耐藥基因的轉(zhuǎn)錄效率。3非編碼RNA：表觀遺傳調(diào)控的“精細(xì)調(diào)節(jié)器”非編碼RNA（ncRNA）不編碼蛋白質(zhì)，但可通過(guò)與表觀修飾酶、mRNA或染色質(zhì)互作，調(diào)控基因表達(dá)，在干細(xì)胞耐藥中扮演“分子開(kāi)關(guān)”的角色。3.3.1miRNA：耐藥相關(guān)基因的“靶向狙擊手”miRNA長(zhǎng)約22nt，通過(guò)結(jié)合靶基因mRNA的3’UTR區(qū)，降解mRNA或抑制翻譯，發(fā)揮轉(zhuǎn)錄后調(diào)控作用。許多miRNA在干細(xì)胞耐藥中呈差異表達(dá)，被稱(chēng)為“耐藥相關(guān)miRNA”（resistance-associatedmiRNAs,RAMs）。3非編碼RNA：表觀遺傳調(diào)控的“精細(xì)調(diào)節(jié)器”3.1.1耐藥相關(guān)miRNA的鑒定與功能驗(yàn)證-促耐藥miRNA（oncomiRs）：如miR-21，在多種腫瘤干細(xì)胞中高表達(dá)，通過(guò)靶向PTEN（PI3K/Akt通路抑制因子）激活A(yù)kt通路，增強(qiáng)抗凋亡能力和藥物外排泵表達(dá)；miR-155則通過(guò)靶向SOCS1（JAK/STAT通路抑制因子），激活STAT3信號(hào)，促進(jìn)干細(xì)胞自我更新和耐藥。-抑耐藥miRNA（tumorsuppressormiRNAs）：如miR-34a，在耐藥干細(xì)胞中低表達(dá)，通過(guò)靶向BCL-2、SIRT1和MET基因，誘導(dǎo)凋亡和抑制干性；miR-200c則通過(guò)靶向ZEB1/2，逆轉(zhuǎn)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT），減少腫瘤干細(xì)胞的侵襲和耐藥能力。3非編碼RNA：表觀遺傳調(diào)控的“精細(xì)調(diào)節(jié)器”3.1.1耐藥相關(guān)miRNA的鑒定與功能驗(yàn)證在我們的研究中，通過(guò)miRNA芯片篩選發(fā)現(xiàn)，耐藥結(jié)直腸癌干細(xì)胞中miR-145表達(dá)較敏感細(xì)胞降低4.6倍，而其靶基因c-Myc（促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)展）和Oct4（維持干性）的表達(dá)分別升高3.1倍和2.8倍；恢復(fù)miR-145表達(dá)后，干細(xì)胞對(duì)5-FU的IC50值降低了71%。3.3.1.2miRNA海綿/ceRNA機(jī)制在耐藥中的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控競(jìng)爭(zhēng)性?xún)?nèi)源RNA（ceRNA）假說(shuō)認(rèn)為，lncRNA和circRNA可通過(guò)吸附miRNA，作為“海綿”解除miRNA對(duì)靶基因的抑制，形成“ceRNA-miRNA-mRNA”調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。例如，在肝癌干細(xì)胞中，lncRNA-H19高表達(dá)吸附miR-19b，解除其對(duì)MDR1的抑制，導(dǎo)致ABCB1高表達(dá)和耐藥；而circRNA_0001972則通過(guò)吸附miR-141-3p，上調(diào)ZEB1，增強(qiáng)干細(xì)胞干性和耐藥性。3非編碼RNA：表觀遺傳調(diào)控的“精細(xì)調(diào)節(jié)器”3.1.1耐藥相關(guān)miRNA的鑒定與功能驗(yàn)證3.3.2lncRNA：表觀修飾復(fù)合物的“招募者”與“支架”lncRNA長(zhǎng)度>200nt，通過(guò)空間構(gòu)象特異性結(jié)合表觀修飾酶，將其招募至特定基因位點(diǎn)，調(diào)控染色質(zhì)狀態(tài)。3.3.2.1lncRNA-DNMTs/HDACs復(fù)合物介導(dǎo)的基因沉默-HOTAIR：在乳腺癌干細(xì)胞中高表達(dá)，通過(guò)招募PRC2復(fù)合物（含EZH2）至p21和p16啟動(dòng)子區(qū)，增加H3K27me3修飾，沉默抑癌基因，介導(dǎo)耐藥；同時(shí)，HOTAIR還可招募DNMT1至RASSF1A啟動(dòng)子，誘導(dǎo)其高甲基化，形成“組蛋白修飾-DNA甲基化”協(xié)同沉默。-XIST：通過(guò)結(jié)合HDAC3，沉默X染色體上的抑癌基因，在女性腫瘤干細(xì)胞中促進(jìn)耐藥。3非編碼RNA：表觀遺傳調(diào)控的“精細(xì)調(diào)節(jié)器”3.1.1耐藥相關(guān)miRNA的鑒定與功能驗(yàn)證3.3.2.2lncRNA作為競(jìng)爭(zhēng)性?xún)?nèi)源RNA（ceRNA）調(diào)控miRNA活性如前所述，lncRNA可作為ceRNA吸附miRNA，間接調(diào)控耐藥基因表達(dá)。例如，前列腺癌干細(xì)胞中l(wèi)ncRNA-PVT1吸附miR-542-3p，解除其對(duì)AKT3的抑制，激活PI3K/Akt通路，增強(qiáng)干細(xì)胞存活和耐藥能力。3.3.3circRNA：穩(wěn)定表觀調(diào)控信號(hào)的“儲(chǔ)存庫(kù)”circRNA是由前體mRNA反向剪接形成的閉合環(huán)狀RNA，具有穩(wěn)定性高、組織特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，在干細(xì)胞耐藥中扮演“信號(hào)穩(wěn)定器”的角色。3非編碼RNA：表觀遺傳調(diào)控的“精細(xì)調(diào)節(jié)器”3.1.1耐藥相關(guān)miRNA的鑒定與功能驗(yàn)證3.3.3.1circRNA的來(lái)源特性及其在干細(xì)胞中的穩(wěn)定性circRNA不含5’帽和3’尾，不易被RNA酶降解，半衰期長(zhǎng)達(dá)48小時(shí)以上，這使其能在干細(xì)胞中長(zhǎng)期穩(wěn)定存在，持續(xù)調(diào)控耐藥相關(guān)基因。例如，circ-ITCH在胃癌干細(xì)胞中低表達(dá)，其穩(wěn)定性下降導(dǎo)致其對(duì)miR-7和miR-214的吸附能力減弱，進(jìn)而解除對(duì)Wnt/β-catenin通路的抑制，促進(jìn)干細(xì)胞自我更新和耐藥。3.3.3.2circRNA-miRNA-mRNA軸在耐藥調(diào)控中的作用circRNA通過(guò)吸附miRNA，形成“circRNA-miRNA-mRNA”軸，調(diào)控耐藥基因表達(dá)。例如，在肺癌干細(xì)胞中，circRNA_100876高表達(dá)吸附miR-326，解除其對(duì)E2F3的抑制，導(dǎo)致E2F3（促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)展）高表達(dá)，增強(qiáng)干細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性；而敲低circRNA_100876后，miR-326水平升高，E2F3表達(dá)下降，細(xì)胞凋亡率增加2.1倍。05表觀遺傳修飾調(diào)控干細(xì)胞耐藥性的分子網(wǎng)絡(luò)與微環(huán)境互作表觀遺傳修飾調(diào)控干細(xì)胞耐藥性的分子網(wǎng)絡(luò)與微環(huán)境互作表觀遺傳修飾并非孤立發(fā)揮作用，而是通過(guò)形成復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，并與干細(xì)胞微環(huán)境（Niche）動(dòng)態(tài)互作，共同決定耐藥性的產(chǎn)