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文檔簡介

1、實(shí)驗五 植物細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微觀察,2010級生物技術(shù) 馮德,實(shí)驗?zāi)康?觀察光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞骨架的結(jié)構(gòu) 了解顯示植物細(xì)胞骨架的方法及其原理,實(shí)驗原理,細(xì)胞骨架是指在細(xì)胞中支持和連接細(xì)胞各組分，以及與細(xì)胞運(yùn)動有關(guān)的結(jié)構(gòu)，它包括微管、微絲、中間纖維。 當(dāng)用適當(dāng)濃度的Triton X一100(非離子表面活性劑)處理時，可將細(xì)胞內(nèi)大部分蛋白質(zhì)抽提掉，但細(xì)胞骨架系統(tǒng)的蛋白質(zhì)卻仍被保存 經(jīng)過戊二醛固定和考馬斯亮藍(lán)R250染色，從而在光鏡下觀察到細(xì)胞骨架的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。,實(shí)驗用品,器材：顯微鏡、50ml燒杯、滴管、容量瓶、 載玻片、蓋玻片、鑷子 材料：洋蔥鱗莖,試劑： 1、M一緩沖液 2、6m molL PH6

2、8磷酸緩沖液。 3、1Triton X一100，用M-緩沖液配。 4、0.2考馬斯亮藍(lán)R250，其溶劑是甲醇46.5ml，冰乙酸7ml，蒸餾水46.5ml。 5、3戊二醛，用6m molL磷酸緩沖液(PH68)配制。 6、50、70、95乙醇（永久制片用）。 7、叔丁醇、正丁醇、二甲苯、樹膠(永久制片用)。,實(shí)驗方法,取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮細(xì)胞(約lcm2大小)若干片 置于裝有PH 6.8磷酸緩沖液的50ml燒杯中，使其下沉 吸去磷酸緩沖液 用1Triton X一100處理（20-30min） 吸去Triton X100 用M-緩沖液洗3次，每次10分鐘,3戊二醛固定0.51小時 PH6.8磷酸緩沖液洗3次，每次10min 用0.2考馬斯亮藍(lán)R250染色2030min 用蒸餾水洗12次 材料置于載玻片上，加蓋玻片，鏡檢,用TritonX-100 的緩沖液處理材料時，應(yīng)控制在30min 左右 在用考馬斯亮藍(lán)染色的時候應(yīng)該注意把洋蔥鱗莖表皮攤開,使其染色均勻.利于以后觀察 在染色

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