G 中華人民共和國(guó) 國(guó) 家標(biāo)準(zhǔn)  9694 2013 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)  動(dòng)物性食品中 13 種磺胺類(lèi)藥物 多殘留的測(cè)定  高效液相色譜法  in 013布  2014施  中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部  中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)  發(fā)布  I 目   次  目   次  . I 前   言  . 物性食品中 13 種磺胺類(lèi)藥物多殘留的測(cè)定  高效液相色譜法  .  1 范圍  .  2 規(guī)范性引用文件  .  3 原理  .  4 試劑和材料  .  5 儀器和設(shè)備  .  6 試料的制備與保存  .  品的制備  .  品的保存  .  7  測(cè)定步驟  .  取  .  化  .  測(cè)定  .  白試驗(yàn)  .  8  結(jié)果計(jì)算和表述  .  9  檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度  .  敏度  .  確度  .  密度  .  附錄 A .     言  本標(biāo)準(zhǔn)的附錄 A 為資料性附錄。  本標(biāo)準(zhǔn)系國(guó)內(nèi)首次發(fā)布的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。    動(dòng)物性食品中 13 種磺胺類(lèi)藥物多殘留的測(cè)定  高效液相色譜法  1 范圍  本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了動(dòng)物性食品中磺胺類(lèi)藥物殘留量檢測(cè)的制樣和高效液相色譜測(cè)定方法。  本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬 和雞的肌 肉 和肝臟組織 中的 磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺噁唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧噠嗪、苯?；前?、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺甲噁唑、磺胺異噁唑、磺胺二甲氧噠嗪和磺胺吡唑單個(gè)或多個(gè)藥物 殘留量的檢測(cè)。  2 規(guī)范性引用文件  下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否 可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。   準(zhǔn)化工作導(dǎo)則  第 1 部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫(xiě)規(guī)則   6682  分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)則和試驗(yàn)方法  3 原理  試料中 殘留 的磺胺類(lèi)藥物 ，用 乙酸乙酯提取， 酸溶液轉(zhuǎn)換溶劑， 正己烷除脂， 凈化，高效液相色譜 定 ，外標(biāo)法定量。  4 試劑和材料  以下所用試劑，除特殊注明外均為分析純?cè)噭疄榉? 6682 規(guī)定的一級(jí)水。  磺胺醋酰 、 磺胺吡啶、磺胺甲氧噠嗪、苯?；前贰⒒前烽g甲氧 嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺甲噁唑、磺胺異噁唑、磺胺二甲氧噠嗪、磺胺吡唑 對(duì)照品 ：含量 99 ； 磺胺噁唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶： 含量 98。  乙酸乙酯 ： 色譜純。  乙腈 ： 色譜純。  甲醇 ： 色譜純。    鹽酸  正己烷  甲酸 ： 色譜純。  氨水   ： 60 3 相當(dāng)者。  酸溶液： 取甲酸 1 水溶解并稀釋至 1 000  酸乙腈溶液 ：取 酸 830 乙腈溶解 并稀釋至 1 000  洗脫液 ：取氨水 5 甲醇溶解并稀釋至 100  0.1  鹽酸溶液 ：取鹽酸 水溶解并稀釋至 100  50%甲醇乙腈 溶液：取甲醇 50 乙腈溶解并稀釋至 100  100 g/胺類(lèi)藥物混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液 ： 精密 稱(chēng)取磺胺類(lèi)藥物標(biāo)準(zhǔn)品各 10  100 瓶中，用乙腈溶解并 稀釋至刻度，配制成濃度為 100 g/磺胺類(lèi)藥物混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液 。 20 以下保存，有效期 6 個(gè)月。  10 g/胺類(lèi)藥物混合標(biāo)準(zhǔn)工作液 ： 精密量 取 100 g/胺類(lèi)藥物混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液 5.0  50 瓶中，用乙腈稀釋 至刻度 ， 配制成濃度為 10 g/磺胺類(lèi)藥物混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。 20以下保存，有效期 6 個(gè)月。  5 儀器和設(shè)備  高效液相色譜儀 ： 配紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器。  分析天平 ： 感量 1 g。  天平 ： 感量 g。  渦動(dòng)儀  離心機(jī)  均質(zhì)機(jī)  旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀  氮吹儀  固相萃 取裝置  雞心瓶 ： 100  聚四氟乙烯離心管 ： 50    濾膜 ： 有機(jī)相， m。  6 試料的制備與保存  料 的制備  取適量新鮮或解凍的空白或供試組織，絞碎 ， 并使均質(zhì)。  取均質(zhì)后的供試樣品，作為供試試料。  取均質(zhì)后的空白樣品，作為空白試料。  取均質(zhì)后的空白樣品，添加適宜濃度的標(biāo)準(zhǔn) 工作 液，作為空白添加試料。  料 的保存   20 以下 保存 。  7  測(cè)定步驟  取  稱(chēng)取試料（ 5g， 于 50 加乙酸乙酯 20 動(dòng) 2 4 000 r/ 上清液于 100 渣 中加 乙酸乙酯 20 重復(fù)提取一次，合并兩次提取液。  化  雞心瓶中加 0.1 鹽酸溶液 4  40 下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至少于 3 至 10  0.1 鹽酸溶液 2 至同一離心管中。再用正己烷 3 正己烷轉(zhuǎn)至同一離心管中，渦旋混和 30 s， 3 000 r/ 正己烷。再次用正己烷 3 至 同一離心管中，渦旋混和 30 s， 3 000 r/ 正己烷，取下層液備用。   鹽酸溶液 2 取備用液過(guò)柱 ，控制流速 1 mL/次用 鹽酸溶液 1 0%甲醇乙腈 溶液 2 用洗脫液 4 集洗脫液，于 40 氮?dú)獯蹈?，?酸乙腈 溶液 1.0 濾膜 過(guò) 濾 ，供 高效液相色譜測(cè)定 。  標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備  精密量取 取 10 g/胺類(lèi)藥物 混合 標(biāo)準(zhǔn) 工作 液 適量 ，用 酸乙腈 溶液 稀釋 ， 配制 成 濃度  為 10、 50、 100、 250、 500、 2500 和 5000 g/L 的 系列 混合 標(biāo)準(zhǔn) 溶 液 ， 供 高效液相色譜測(cè)定 。 以 測(cè) 得峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液 濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。 求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。  定  液相色譜參考條件  色譜柱： 18（ 250 .5 徑 5 m） ，或相當(dāng)者；  流動(dòng)相： 酸 +乙腈，梯度洗脫見(jiàn)表 1；  流速： 1 mL/ 柱溫： 30 ；  檢測(cè)波長(zhǎng)： 270  進(jìn)樣體積： 100 L。  表 1   流動(dòng)相梯度洗脫條件  時(shí)間  酸  % 乙腈  % 3 17 3 17 0 20 0 40 0 90 0 90 3 17 3 17 測(cè)定法  取試樣溶液和相應(yīng)的對(duì)照溶液，作單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)，按外標(biāo)法 ， 以峰面積計(jì)算 。 對(duì)照溶液及試樣溶液中磺胺類(lèi)藥物響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測(cè)的線(xiàn)性范 圍之內(nèi)。在上述色譜條件下，對(duì)照溶液和試樣溶液的高效液相色譜圖 見(jiàn)附錄 A。  白試驗(yàn)  除不加試料外，采用完全相同的步驟進(jìn)行平行操作。  8  結(jié)果計(jì)算和表述  試料中 磺胺類(lèi)藥物的殘留量 (g/ 按下式計(jì)算    X= CV m 式中：  X供試 試料中 相應(yīng)的 磺胺類(lèi)藥物的殘留量 ， g/ C試樣 溶 液中 相應(yīng)的 磺胺類(lèi)藥物 濃度， g/ V溶解殘 余 物所用 酸乙腈 溶液 體積，  m供試試料 質(zhì)量， g。  注：計(jì)算結(jié)果需扣除空白值，測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定后的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。  9  檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度  敏度  本方法 豬 和雞的 肌肉 組織 的檢測(cè)限 為 5 g/定量限為 10 g/豬 和雞的肝臟組織 的檢測(cè)限 為12 g/量限 為 25 g/ 確度  本方法肌肉組織在 10 200 g/肝臟組織在 25 200 g/加水平上的回收率 為 60%120%。  密度  本方法的批內(nèi) 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 15%，批間 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 20%。    附錄 A （資料性附錄）  圖 A  磺胺類(lèi) 藥物 標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖（ 250 ng/ 圖 B  雞 肌肉組織 空白試樣色譜圖  圖 C  雞肌肉 組織 空白 添加磺胺類(lèi)藥物試樣色譜圖（ 50 ng/g）  圖 D   雞肝臟空白試樣色譜圖；  圖 E  雞肝臟組織空白添加磺胺類(lèi)藥物試樣色譜圖（ 50 ng/g）；  圖 F  豬肌肉組織空白試樣色譜圖；  圖 G  豬肌肉組織空白添加磺胺類(lèi)藥物試樣色譜圖（ 50 ng/g）