第六章 放射免疫分析和其他免疫分析,競爭放射分析,概述,競爭放射分析,競爭放射分析,放射免疫分析,Ag* Ab,(定量),（限量）,基本原理,放射免疫分析,基本假設(shè),放射免疫分析,根據(jù)質(zhì)量作用定理得到平衡結(jié)合常數(shù),P ,12,PQP,PPqP,放射免疫分析,因此,放射免疫分析,放射免疫分析,F與p的函數(shù)關(guān)系,放射免疫分析,R與p的函數(shù)關(guān)系,R2 + R(1+KAp - KAq) - KAq = 0,放射免疫分析,放免的基本試劑,標(biāo)準(zhǔn)品,特異抗體,標(biāo)記物,放射免疫分析,標(biāo)準(zhǔn)品,一級標(biāo)準(zhǔn)品 二級標(biāo)準(zhǔn)品,定量依據(jù),按每次用量分裝保存,放射免疫分析,標(biāo)記抗原,0.1 Ci/mg ( 3.7 GBq/mg ),95%,標(biāo)記物鑒定方法,放射免疫分析,放射免疫分析,放射免疫分析,抗原,半抗原,(Hapten),人工抗原,抗血清,放射免疫分析,2制備,（HSA、BSA、牛甲狀腺球蛋白、卵清蛋白等）,放射免疫分析,表示血清中Ab的濃度或含量,KA,交叉反應(yīng)%,滴度,放射免疫分析,50%,抗血清B,抗血清A,放射免疫分析,親和力, 108 L/mol,放射免疫分析,放射免疫分析,特異性,單克隆抗體： 特異性,多克隆抗體：,放射免疫分析,來自雜交瘤細(xì)胞的無性繁殖,免疫動物法,放射免疫分析,對分離方法的要求：,放射免疫分析,分離技術(shù),5. 非特異性沉淀法,Ag-Ab + 鹽類、有機溶劑,共沉淀分離,常用: 聚乙二醇(PEG)、硫酸銨,放射免疫分析,放射免疫分析,6. 雙抗體沉淀法,第一,第二,放射免疫分析,7. 雙抗體-PEG法 PR試劑法,8. 可磁化分離法,磁化活性顆粒,磁化固相抗體分離法,引入磁化材料, 不用離心,活性炭+氧化鐵磁化活性炭顆粒,抗體+固相材料+氧化鐵磁化固相-抗體,放射免疫分析,RIA 的建立及有關(guān)問題,（一）三個基本試劑的用量,（二）反應(yīng)介質(zhì),緩沖液 pH=7.5 PB,（三）溫育溫度與時間,放射免疫分析,0.5%BSA,正常兔血清,放射免疫分析,（四）反應(yīng)方式,1. 平衡法,Ag* + Ag + Ab,反應(yīng)幾率相同,2. 非平衡法,Ag + Ab,+ Ag*,Ag*反應(yīng)幾率 Ag,放射免疫分析,（五）標(biāo)準(zhǔn)曲線類型,放射免疫分析,Logit-Log模型,放射免疫分析,放射免疫分析,放射免疫分析,放射免疫分析,10,( P-P ),放射免疫分析,(1) 外加標(biāo)準(zhǔn)品的回收率,放射免疫分析,(2) 高含量樣品, 用緩沖液等倍數(shù)稀釋, 則測定值與樣品量, 呈:,免疫放射分析(IRMA),過量*Ab+Ag，測定復(fù)合物放射性（多余Ab通過一定手段除去） ，其活度與待測Ag量呈正相關(guān)。,基本原理,免疫放射分析(IRMA),免疫放射分析(IRMA),IRMA分離游離Ab和復(fù)合物，采用單克隆Ab作分離劑,免疫放射分析(IRMA),分類,免疫放射分析(IRMA),免疫放射分析(IRMA),IRMA與RIA的區(qū)別,非放射標(biāo)記免疫分析,非放射標(biāo)記免疫分析,光譜法,酶,非放射標(biāo)記免疫分析,非放射標(biāo)記免疫分析,化學(xué)發(fā)光物質(zhì),直接化學(xué)發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記法,吖啶酯