實(shí)驗(yàn)二 細(xì)菌基本形態(tài)和特殊結(jié)構(gòu)觀察,一 目的要求,1 了解普通光學(xué)顯微鏡原理及構(gòu)造。 2 學(xué)習(xí)并掌握普通光學(xué)顯微鏡油鏡的正確使用方法。 3 用油鏡觀察細(xì)菌基本形態(tài)。 4 了解負(fù)染色原理、細(xì)菌芽孢染色基本原理，油鏡觀察細(xì) 菌的莢膜、芽孢形態(tài)。 5 細(xì)菌運(yùn)動(dòng)性觀察。,二 基本原理, 普通光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu) 普通光學(xué)顯微鏡的光學(xué)成象原理 3 莢膜染色 4 芽孢染色, 普通光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu),（1 ) 機(jī)械系統(tǒng) 包括鏡座、鏡臂、載物臺(tái)、物鏡轉(zhuǎn)換器、鏡筒及調(diào)節(jié)器等 （2 ) 光學(xué)系統(tǒng) 包括反光鏡、聚光器、物鏡、目鏡等。, 普通光學(xué)顯微鏡的光學(xué)成象原理,（1）顯微鏡的放大倍數(shù) 放大倍數(shù)：目鏡的放大倍數(shù)與物鏡的放大倍數(shù)之乘積 。,目鏡 ： 物鏡,低倍鏡：10X 高被鏡：40X 油鏡：100X,10 X 100X,目鏡,物鏡, 顯微鏡的分辨率,油鏡比低倍鏡、高倍鏡觀察物體更清晰。,原因： 油鏡分辨率高于低倍鏡、高倍鏡 油鏡匯聚光線(xiàn)的能力大于低倍鏡、高倍鏡, 分辨率是指顯微鏡能夠分辨的最小距離即鑒別限度（R） R=（2NA） (為入射光波波長(zhǎng)； NA為顯微鏡數(shù)值孔徑),NA= .sin,為標(biāo)本、物鏡之間介質(zhì)的折射率。 為光軸上物點(diǎn)發(fā)出的光線(xiàn)與物鏡有效直徑兩端最大夾角角度的 一半。,低倍鏡= 高倍鏡=空氣=1.0 ， 油鏡香柏油=1.52 低倍鏡 高倍鏡 油鏡 ， sin低倍鏡 sin高倍鏡 sin油鏡 NA低倍鏡 NA高倍鏡 NA油鏡 所以，油鏡的分辨力比高倍鏡、低倍鏡高。,匯聚光線(xiàn)的能力油鏡高于低倍鏡、高倍鏡。,3 莢膜染色,主要成分多為糖類(lèi)，無(wú)色透明且不易著色常用負(fù)染色觀察。負(fù)染色是將細(xì)菌細(xì)胞和背景著色，從而把無(wú)色透明、不著色的莢膜結(jié)構(gòu)襯托顯現(xiàn)出來(lái)。,菌體,莢膜,菌膠團(tuán)： 多個(gè)菌體的莢膜融合為一個(gè)團(tuán)狀物，內(nèi)有多個(gè)菌體。,4 芽孢染色,細(xì)菌芽孢壁厚而致密，透性低，難于染色，但一旦被染色又難于脫色。因此先用強(qiáng)著色力的染料（孔雀綠）處理，并同時(shí)加熱，使菌體以及芽孢均著色，后使菌體脫色，而芽孢保留原色，經(jīng)復(fù)染（蕃紅），菌體與芽孢分別以不同顏色顯現(xiàn)。,芽孢,菌體,對(duì)有芽孢的菌體進(jìn)行簡(jiǎn)單染色（只用一種染料染色）。 菌體和芽孢著色情況如何？,三 實(shí)驗(yàn)材料,細(xì)菌基本形態(tài)標(biāo)本片：大腸桿菌片 枯草桿菌片 八疊球菌片 細(xì)菌特殊形態(tài)標(biāo)本片：枯草芽孢桿菌芽孢片 示范片觀察：莢膜片觀察 懸滴法觀察活細(xì)菌的運(yùn)動(dòng),四 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及步驟,1 細(xì)菌基本形態(tài)觀察 2 細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀察 3 懸滴法觀察活細(xì)菌運(yùn)動(dòng),1 細(xì)菌基本形態(tài)觀察,學(xué)習(xí)油鏡的正確使用方法。 用油鏡觀察 大腸桿菌 枯草桿菌 八疊球菌,2 細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀察,學(xué)習(xí)油鏡的正確使用方法。 用油鏡觀察細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu) 枯草芽孢桿菌芽孢（油鏡） 鉀細(xì)菌莢膜（高倍鏡）（示范）,3 懸滴法觀察活細(xì)菌運(yùn)動(dòng),懸滴片制好后，用低倍鏡調(diào)焦，換高倍鏡觀察。 注意：視野中暗光觀察。運(yùn)動(dòng)的菌體發(fā)亮。,觀察前準(zhǔn)備 ：顯微鏡的準(zhǔn)備和調(diào)試視野明亮 低倍鏡觀察 高倍鏡觀察（此步可以省略） 油鏡觀察：加香柏油，油鏡頭浸入香柏油中后調(diào)焦 顯微鏡油鏡頭的清洗和歸位（二甲苯清洗）,油鏡使用主要步驟,注意 ！ 顯微鏡調(diào)焦方法,五 實(shí)驗(yàn)報(bào)告,繪 大腸桿菌 枯草桿菌 八疊球菌形態(tài)示意圖 繪枯草芽孢桿菌芽孢形態(tài)示意圖,菌 名：大腸桿菌 放大倍數(shù)：16100 X,細(xì)菌形態(tài)示意圖繪圖要求：, 選擇形態(tài)典型的部分細(xì)菌細(xì)胞繪圖。 僅繪出細(xì)菌細(xì)胞輪廓，但不同細(xì)菌的細(xì)胞大小比例應(yīng) 適宜，且形態(tài)上應(yīng)有所區(qū)分。 細(xì)菌與視野相對(duì)大小應(yīng)符合實(shí)際，應(yīng)將細(xì)菌細(xì)胞排布 在視野中離開(kāi)中心的部位（即繪空心圖）。 必須注明菌名、