I 青蒿素的提取與檢測(cè)工藝 摘 要 青蒿是常用的功能性植物，青蒿素是從青蒿中提取的一種抗瘧有效成分，為無色針狀結(jié)晶，易溶于有機(jī)溶劑 ；具有抗白血病和免疫調(diào)節(jié)功能它具有低毒、高效、速效的特點(diǎn) ,在國(guó)際市場(chǎng)上供不應(yīng)求 , 應(yīng)用及經(jīng)濟(jì)前景十分看好。本論文結(jié)合超臨界 CO2提取技術(shù)和常規(guī)結(jié)晶法研究了從青篙中提取、分離純化青篙素的工藝。通過比較的方法，對(duì)青蒿中青蒿素的提取工藝進(jìn)行了綜述，討論了青蒿素提取工藝的研究方向。青蒿素提取方法主要有傳統(tǒng)有機(jī)溶劑提取法、超聲波提取法、微波萃取法和超臨界流體萃取法 ； 青蒿素檢測(cè)技術(shù)主 要有紫外分光光度法、高效液相色譜法、高效液相色譜 蒸發(fā)光檢測(cè)法等。 關(guān)鍵詞：黃花蒿 ； 青蒿素 ； 提取 ； 含量檢測(cè) ；微波預(yù)處理 ； II Research Progresses on Extraction and Detection Techniques of Artemisinin Abstract Objective The aim was to make a summary on research progresses on extraction and detection techniques of artemisinin Meth- od In the research ， the concerning progress was made based on physicochemical property ， source ， extraction methods and detection technolo- gy of artemisinin Result Artemisinin is colorless acicular crystal and easier to be dissolved in organic solvent The extraction methods of ar- temisinin include organic solvent extraction， ultrasonic extraction， microwave extraction and supercritical fluid extraction； the detection tech- nologies include ultraviolet spectrophotometry， high performance liquid chromatography and HPLC-evaporative light-scattering KEY WORDS: Artemisinin； Extraction； Content detection； Microwave assisted Extraction； High performance liquid chromatog- raphy。 III 目 錄 前 言 . 1 第 1 章 青蒿素的提取方法 . 2 1.1 傳統(tǒng)有機(jī)溶劑提取 . 2 1.1.1 冷浸提取 . 2 1.1.2 回流提取 . 2 1.2 超臨界 CO2 萃取 . 4 1.3 微波萃取技術(shù) . 1.4 超聲波強(qiáng)化石油醚提取 . 第 2 章 青蒿素的檢測(cè) . 6 2.1 紫外分光光度法 . 6 2.2 高效液相色譜法 . 2.3 高效液相色譜蒸發(fā)光檢測(cè)法 . 結(jié) 論 . 9 參考文獻(xiàn) . 11 1 前 言 青蒿是菊科植物黃花蒿干燥的地上部分，為我國(guó)傳統(tǒng)中藥。藥理研究表明，黃花蒿具有抗瘧、抑制光敏反應(yīng)、抗腫瘤、抗菌殺蟲、抑制免疫功能亢進(jìn)、抗心律失常、抗孕、抑制疤痕成纖維細(xì)胞、抗單純皰疹病毒等作用，在現(xiàn)代臨床上用于對(duì)惡性瘧疾、發(fā)熱、血吸蟲病、口腔黏膜扁平苔蘚、紅斑狼瘡、心律失常的治療 1 ，并且對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的免疫有顯著療效 2 。黃花蒿的有效成分 青蒿素在抗瘧方面與傳統(tǒng)的奎寧類抗瘧藥物具有不同的作用機(jī)理。青蒿素是一種倍半萜內(nèi)脂類化合物 3 ，分子式為 C15H22O5。在青蒿素的基礎(chǔ)上開發(fā)出了多種衍生物，如雙氫青蒿素、青蒿琥酯、蒿甲醚、蒿乙醚等，均有抗瘧、抗孕、抗纖維化、抗血吸蟲、抗弓形蟲、抗心律失常和抑制腫瘤細(xì)胞毒性等作用 4 5 。目前，青蒿素用于瘧疾防治的價(jià)值已被人類認(rèn)識(shí)和接受，世界衛(wèi)生組織已把青蒿素的復(fù)方制劑列為國(guó)際上防治瘧疾的首選藥物。青蒿素因其在丙酮、醋酸乙酯、氯仿 、苯及冰醋酸中易溶，在乙醇和甲醇、乙醚及石油醚中可溶解，傳統(tǒng)提取方法一般采用有機(jī)溶劑法，后來又出現(xiàn)了超臨界 CO2 萃取技術(shù)、超聲波強(qiáng)化石油醉提取、微波輔助萃取技術(shù)。本文對(duì)青蒿素的提取方法進(jìn)行綜述，討論了青蒿素提取工藝的研究方向及其檢測(cè)方法。 2 第 1 章 青蒿素的提取方法 1.1 傳統(tǒng)有機(jī)溶劑提取 1.1.1 冷浸提取 李自勇等 6 采用工業(yè)酒精冷浸法提取青蒿中的青蒿素，以浸漬時(shí)固液比、萃取時(shí)母液與萃取劑體積比、萃取次數(shù)為考察對(duì)象，最終確定酒精體積 ( mL) 與青蒿質(zhì)量 ( g) 比為 10 1，分 3 次提取，母液體積 ( mL) 為青蒿質(zhì)量 ( g) 的 2 5 倍，萃取劑乙酸乙酯與母液體積比為 1 1，分 4 次萃取，后用活性炭脫色、結(jié)晶及重結(jié)晶，干燥得到的青蒿素產(chǎn)品產(chǎn)率可達(dá) 2 73，純度可達(dá) 99%。黃榮崗 7 建立了低溫提取青蒿素的基本流程 : 青蒿葉 加甲醇攪拌提取 提取液低溫冷凍 離心 萃取 精制 青蒿素結(jié)晶 檢測(cè)。通過單因素考察冷凍液體積、冷凍液甲醇濃度、冷凍時(shí)間、溫度 4 個(gè)關(guān)鍵因素。結(jié)果表明 : 隨著冷凍液體積與甲醇比例的增 大，青蒿素的轉(zhuǎn)移率逐步提升。之后又采用正交實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行上述 4 因素考察。結(jié)果表明 : 當(dāng)甲醇濃度為 70%、濃縮倍數(shù)為 1 倍、冷凍溫度為 5、冷凍時(shí)間為 3 h 時(shí)，所得青蒿素提取率最高，為 82. 5%，含量為 99 3%。后又與柱層析工藝進(jìn)行比較，表明低溫工藝優(yōu)勢(shì)明顯 。 1.1.2 回流提取 韋國(guó)峰等 8 探討了青蒿最佳提取工藝，分別比較了冷浸法、回流法、索氏法、超聲法這 4 種方法。以青蒿素標(biāo)準(zhǔn)品為對(duì)照，用紫外分光光度法 測(cè)定青蒿中青蒿素含量。結(jié)果表明 : 回流提取法的提取率和青蒿素含量較高。杜曉英等 9 對(duì)用不同提取溶劑 ( 70%乙醇、石油醚、 120#汽油 ) 以及不同提取 工藝 ( 回流提取法、滲漏提取法和冷循環(huán)提取法 ) 所得到的青蒿素用紫外分光光度法進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明 :以 120# 汽油回流提取法所得的收率和含量最高，并指出以 120# 汽油作提取溶劑的冷循環(huán)提取法適合現(xiàn)代化大規(guī)模生產(chǎn)。鄧素蘭等 10 研究了不同溶劑分離提取青蒿中青蒿素的實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明 : 在 50恒溫回流提取 2 次、固液比為 1 10/1 8、時(shí)間為 3 2h/1h 的條件下，石油醚 ( 30 60 ) 為最佳溶媒介質(zhì)， 1%活性炭脫色的效果最佳， 80% 甲醇洗提取液的濃縮浸膏得到進(jìn)一 步分離純化。此工藝提取分離所 得的青蒿素的結(jié)晶經(jīng) HPLC 法測(cè)定其含量最高 70 761%。 1.2 超臨界 CO2 萃取技術(shù) 超臨界 CO2 萃取是基于 CO2 流體在超臨界狀態(tài)下對(duì)某些物質(zhì)具有特殊的增強(qiáng)其溶解度的效應(yīng)而建立起來的一種新型分離技術(shù)。用超臨界 CO2可以代替某些常規(guī)提取溶劑進(jìn)行有效成分的提取 ,采用最佳工藝條件實(shí)現(xiàn)從植物中提取分離得到高純度的化合物的目標(biāo)。超臨界 CO2 萃取具有反應(yīng)時(shí)間短、選擇性高和無溶劑殘留等優(yōu)點(diǎn) ,而且其操作溫度較低 ,可似避免低熔點(diǎn)物質(zhì)分解特別適合于熱敏性天然物質(zhì)的分離 , 廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、日用香料等工業(yè)領(lǐng) 域 11 。最近 ,超臨界 CO2 萃取設(shè)備中對(duì)壓力系統(tǒng)和溫度系統(tǒng)的控制方法也有一定的研究開發(fā) 12 。錢國(guó)平 13 等研究了用超臨界 CO2 從黃花篙中萃取青篙素的影響因素。在 15 . 2 2 9 . 7 M Pa 和 40 60 范圍內(nèi) ,隨著壓力和溫度升高 ,萃取率增大 , 萃取選擇性下降。以萃取率和萃取選擇性為目標(biāo) ,優(yōu)化了超臨界萃取工藝條件 , 得到較佳的操作條件。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明 ,用超臨界 CO2 從黃花離中萃取青篙素 , 得到純度 10 % 以上的萃取物 ,其質(zhì)量傳遞受植物細(xì)胞內(nèi)部擴(kuò)散控制 , 因此對(duì)黃花篙植株 必須進(jìn)行粉碎 ,粒徑以 60 80 目為宜。操作條件對(duì)萃取率和萃取選擇性有很大影響。在一定溫度下 , 壓力升高 , 萃取率增大 , 萃取選擇性下降 ； 在一定壓力下 ,溫度升高 ,萃取率增大 ,萃取選擇性下降 CO2流速太大 ,萃取流體中青篙素濃度遠(yuǎn)達(dá)不到飽和溶解度 ,浪費(fèi) CO2 和壓縮功 ,而 CO2流速太小 ,需延長(zhǎng)萃取時(shí)間。實(shí)驗(yàn)優(yōu)化得到較佳工藝條件為萃取壓力 20 M Pa , 萃取溫度50 ,每 kg 原料每小時(shí)通 CO2 (液態(tài) ) 1 kg , 萃取時(shí)間 4 h ； 原料中存在一定比例的水起到夾帶劑的作用 ,對(duì)萃取有利 ,用熱球模型 擬合了萃取動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù) ,表明擴(kuò)散系數(shù)隨壓力和溫度升高而增大。用超臨界 CO2從黃花篙中萃取青篙素 ,可以得到純度 15% 以上的萃取物 ,萃取率達(dá)到 95 % 以上 14 。從中藥現(xiàn)代化的角度來講 ,今后用超臨界流體萃取技術(shù)萃取中藥有效成分的工藝研究還會(huì)不斷發(fā)展 ,可以預(yù)見 ,隨著研究的不斷深人 , 超臨界CO2流體萃取技術(shù)在中藥有效成分提取方面將發(fā)揮出更大的作用 15。 4 1.3 微波萃取技術(shù) 微波萃取又稱為微波輔助萃取 ( Microwave assisted Extraction， MAE)，是指用合適的溶劑在微波反 應(yīng)器中從天然藥用植物、礦物、動(dòng)物組織中提取各種化學(xué)成分的技術(shù)和方法。微波指頻率在 300M 和 300 kM Hz 之間的電磁波 16 17 。經(jīng)研究表明 :微波萃取法具有萃取時(shí)間短、溶劑用量少、提取率高、溶劑回收率高、所得產(chǎn)品品質(zhì)好、成本低、投資少等優(yōu)點(diǎn)。韓偉等 18 采用微波輔助提取法提取青蒿中的青蒿素，發(fā)現(xiàn)青蒿素提取率隨物料粉碎度的增加而提高，其中以 120 目青蒿粉末為原料時(shí)，青蒿素的提取率最高 ； 隨著微波輻射時(shí)間的增加，青蒿素的提取率也隨之增大，但最終趨向于恒定，在前 10 min 內(nèi)增加趨勢(shì)明顯， 10 min 后增大趨勢(shì)緩慢， 并在 12 min 后有微弱的下降，因此微波輻射時(shí)間以 12 min 為 宜 ； 隨著溶劑比的增大，青蒿素的提取率有明顯的提高。郝金玉等采用微波輔助提取法提取青蒿中的青蒿素，并對(duì)提取溶劑乙醇、三氯甲烷、環(huán)己烷、正己烷、石油醚 ( 30 60 和 60 90 2 種 ) 、 120 號(hào)溶劑油和 6 號(hào)抽提溶劑油進(jìn)行了比較，考察了溶劑的介電常數(shù)對(duì)青蒿素得率的影響，同時(shí)將微波輔助提取法同索氏提取、超臨界 CO2 提取以及加熱攪拌提取法進(jìn)行了比較，結(jié)果顯示，要達(dá)到微波輔助提取 4 6 min 的提取效果， 用傳統(tǒng)的熱提取、索氏提取法需要幾個(gè)小時(shí)甚至十幾個(gè)小時(shí)以上的時(shí)間，因此微波輔助提取能大幅提高提取速率。梁忠生 19 用微波預(yù)處理的方法對(duì)青蒿素提取產(chǎn)率進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)與無微波預(yù)處理相比，微波預(yù)處理可提高青蒿素產(chǎn)率 15 個(gè)百分點(diǎn)，當(dāng) 20 號(hào)溶劑汽油為溶劑，微波預(yù)處理功率 450 W，預(yù)處理時(shí)間 240 s，索式提取時(shí)間 6 h 時(shí)，提取率和產(chǎn)率分別達(dá) 0 49% 和88%以上。由此可見，用微波預(yù)處理青蒿干粉，亦可顯著地提高青蒿素的提取率。 1.4 超聲波強(qiáng)化石油醚提取 超聲波應(yīng)用于生物技術(shù)是一個(gè)較新的研究領(lǐng)域。近年來超聲波 在高分 子化合物降解、有機(jī)合成、提取分離等方面得到了廣泛的研究及應(yīng)用 ,如多糖的降解及提取 20。中草藥原料所含成份相當(dāng)復(fù)雜 ,不僅含有效成份 , 還 5 含有許多無效成份及雜質(zhì) ,有效成份的提取率將直接關(guān)系到成品藥的治療 效果。應(yīng)用超聲波提取法具有操作方便、提取時(shí)間短、提取率高等優(yōu)點(diǎn) 21。目前對(duì)超聲波用于從植物中提取藥用有效成份進(jìn)行了較多研究 22-25 , 都取得了較滿意的效果 ,回收率大大提高。我國(guó)工業(yè)化超聲波提取設(shè)備的研究也已經(jīng)有了一定的發(fā)展。第一套生產(chǎn)型連續(xù)化管道式多功能超聲波提取機(jī)組于 2002 年底在成 都得到實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用 , 每小時(shí)可提取 150 kg 的植物藥材 , 提取時(shí)間縮短至 50 min 以內(nèi) ,得率提高 20% 左右 ； 第一套生產(chǎn)型連續(xù)化釜雛式多功能超聲波提取機(jī)組 2003 年在哈爾濱得到實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用 26。趙兵 27等人采用超聲波強(qiáng)化石油醚提取青篙素 ,為改進(jìn)現(xiàn)有青篙素提取工藝、縮短提取時(shí)間、降低提取成本、提高產(chǎn)品質(zhì)量提供了一些依據(jù)。他們將超聲波強(qiáng)化石油醚提取青篙素的工藝過程與常規(guī)石油醚提取比較 ,發(fā)現(xiàn)用超聲波不僅可以大大縮短提取時(shí)間 ,減少提取產(chǎn)物中雜質(zhì)的含量 ,而且還可以降低溶劑的消耗。此實(shí)驗(yàn)還對(duì)超聲波強(qiáng)度 、超聲波處理時(shí)間、攪拌時(shí)間、超聲波處理間歇次數(shù)等實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析 ,得出結(jié)論 : 超聲波用于強(qiáng)化石油醚提取青篙素時(shí) ,采用 20 kHz、 90 W 超聲波 , 在 50 下 , 單次作用20 min 后繼續(xù)攪拌至 30 min 時(shí) , 提取率可達(dá) 83% ； 而用超聲波處理 6次 ,每次處理 2min , 共計(jì) 12 min , 提取相同時(shí)間 ,提取率可達(dá) 81 % , 與1 000 r/ m in 攪拌提取 2 h 的提取率相同。 6 第 2 章 青蒿素的檢測(cè) 2.1 紫外分光光度法 青蒿素最大吸收峰波長(zhǎng)為 205 nm，吸收系數(shù)小，干擾嚴(yán)重 ，不能直接用此峰進(jìn)行定量分析。青蒿素遇稀堿后結(jié)構(gòu)發(fā)生定量轉(zhuǎn)化，其產(chǎn)物 292 nm 處有一強(qiáng)吸收峰，故可用紫外分光光度法進(jìn)行檢測(cè)。周濃等 28 采用紫外分光光度法研究了云陽縣不同產(chǎn)地青蒿所含青蒿素的差異。其檢測(cè)波長(zhǎng)為292 nm，結(jié)果顯示對(duì)照品在 0 02 0 14 mg/L 范圍內(nèi)具良好的線性關(guān)系， r = 0 999 8 平均回收率為 98 81% ( n = 7) ，方法精密度試驗(yàn) RSD =0 38%。李春莉等 29 用紫外分光光度計(jì)對(duì)青蒿素標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，確定最適吸收波長(zhǎng)，并在最適吸收波長(zhǎng)下建立青蒿素 標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度濃度曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定青蒿樣品中青蒿素的含量，結(jié)果顯示，青蒿素的最適吸收波長(zhǎng)為 290 5 nm，吸光度濃度回歸方程為 : Y =0 043X + 0 006，不同青蒿樣品中青蒿素含量有差異。陳迪釗等 30 采用紫外分光光度法對(duì)提取溶劑的選擇、青蒿提取物與 NaOH 反應(yīng)情況及最佳青蒿素堿轉(zhuǎn)化條件進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)以正己烷或石油醚等非極性類溶劑作提取劑，對(duì)青蒿素的提取率較高，提取物中雜質(zhì)含量較低 ； 提取物中非青蒿素成分與 NaOH 反應(yīng)能快速完成，且一般不引起 292 nm 附近吸收值的變化， 因此不干擾青蒿素含量的測(cè)定 ； 青蒿素堿轉(zhuǎn)化反應(yīng)可選擇在 25下與 0 3%的 NaOH 作用 30 min， 或 50下與 0 2%的 NaOH 作用 20 min； 該方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD =1 84，相關(guān)系數(shù) r =0 999 5，回收率為 98 102%。 2.2 高效液相色譜法 高效液相色譜法是 20 世紀(jì) 70 年代迅速發(fā)展起來的一種高效、快速、高選擇性、高靈敏度的新型分離分析技術(shù)。高效液相色譜法在藥物分析中的應(yīng)用主要是鑒別相關(guān)物質(zhì)、檢查藥物中有關(guān)物質(zhì)的含量限度及測(cè)定有效成分或主要成分含量。高效液相色譜法具分析 速度快、分離效率高、檢測(cè)靈敏度高、檢測(cè)自動(dòng)化、適用范圍廣、組分易回收、樣品處理較簡(jiǎn)單等優(yōu) 7 點(diǎn)，還可在檢查雜質(zhì)的同時(shí)進(jìn)行含量測(cè)定，為分析工作節(jié)約了很多時(shí)間，同時(shí)也降低了分析成本，因此在各類藥物的鑒別、檢查和含量測(cè)定中能充分發(fā)揮其他分析方法無法比擬的優(yōu)勢(shì)。黃玉蘭等 31 采用高效液相色譜法，以甲醇磷酸氫二鈉磷酸二氫鈉緩沖液 (分別取 0 1 mol/L 磷酸氫二鈉和 0 1 mol/L 磷酸二氫鈉溶液各 100 ml 置 1 000 ml 量瓶中，加水定 容至 1 000 ml) ( 55 45) 為流動(dòng)相，流速 1ml/min，柱溫 35 ，檢測(cè)波長(zhǎng) 260 nm 為條件，測(cè)定青蒿素的含量，研究表明該方法對(duì)青蒿藥材中青蘺素檢測(cè)重現(xiàn)性較好，青蒿素在 5 163 82 608 g/ml 之間有良好的線性關(guān)系，加樣回收率為 97 5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD =1 2%( n =5) 。陳益元等 32 用無水乙醇提取青蒿草中的青蒿素，并用高效液相色譜法對(duì)其 進(jìn)行測(cè)定，流動(dòng)相為甲醇 ( 10 mmol/L) 磷酸鹽緩沖液 ( 60 40) ，流速為 1 0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為 260 nm，結(jié)果顯示該方法在青蒿素濃度為5 0 25 0 mg/L 范圍時(shí)線性相關(guān)系數(shù) r =0 9998，加標(biāo)回收率在 90 5% 98 5%之間， RSD 在 0 93% 1 51% 之間 ； 青蒿草中青蒿素的含量在 0 554% 1 020%之間。熊春媚等 33 用高效液相色譜法測(cè)定青蒿中青蒿素含量，采用安捷侖 ZORBAX Stable Bound ( 4 6 mm 150 mm，0 5 mm) 色譜柱，外標(biāo)法定量，流動(dòng)相為乙腈水 ( 體積比為 44 56) ，流速 1 0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為 210 nm，在該色譜條件下青蒿素在 20 min 內(nèi) 可達(dá)到基線分離，該方法加標(biāo)回收率為 99 5%， RSD =4 32%， 在 130 g 范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系， r =0 99999，表明該方法簡(jiǎn)便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。朱華李等 34 采用 HPLC 法測(cè)定青蒿素含量，色譜柱為Agilent C18柱，流動(dòng)相為乙腈水 ( 65 35) ，流速 1 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)205 nm，結(jié)果顯示青蒿素進(jìn)樣量為 6 0 50 0 g 時(shí)與峰面積的線性關(guān)系良好， r =0 9999( n =6) ，平均回收率為 100 1%， RSD =1 3%。 2.3 高 效液相色譜蒸發(fā)光檢測(cè)法 惠玉虎等 35 采用 HPLC ELSD 法測(cè)定青蒿提取物中青蒿素的含量，所用色譜柱 InertsilODS23 ( 150 mm 416 mm， 5 m) ，流動(dòng)相為乙腈水 ( 69 31，用三氟醋酸調(diào) pH 至 3) ，檢測(cè)器漂移管溫度 45 ，柱溫25 ，結(jié)果發(fā)現(xiàn)青蒿素峰面積的常用對(duì)數(shù)值與其質(zhì)量濃度的常用對(duì)數(shù)值線 8 性關(guān)系良好 ( r =0198 9) ； 樣品平均回收率 98 171%( RSD 為 0 142%， n =6) ，說明該方法靈敏、準(zhǔn)確可靠，可作為青蒿提取物中青蒿 素的定量方法。 周翱翱等 36 首次建立高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測(cè)器測(cè)定青蒿素含量的方法，并對(duì)大量的青蒿樣品進(jìn)行含量測(cè)定，所用色譜柱迪馬公司 Diamon2sil C18( 250 mm 416 mm， 5 m) ，流動(dòng)相甲醇水 ( 75 25) ，流速 1 mL/min，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器漂移管溫度 40 ，載氣壓力 315 bar，放大系數(shù) ( gain) 為 9，進(jìn)樣體積 20 L，結(jié)果發(fā)現(xiàn)青蒿素在 1 5 g 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回收率為 99 133%，說明該方法具有良好的精密度和重現(xiàn)性，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可作 為青蒿藥材及青蒿素類產(chǎn)品的質(zhì)量控制方法，為青蒿藥材的收購(gòu)及栽培等提供依據(jù)。張東等 37 建立了 HPLC ELSD 測(cè)定青蒿素片中青蒿素含量的方法，并用于青蒿素片中青蒿素含量的測(cè)定。他們所用色譜柱 Thermo C18( 416 mm 250 mm， 5 m) ，以甲醇水 ( 8020) 為流動(dòng)相，流速為 110 ml/min，柱溫為 25 ，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器漂移管溫度 60 ，載氣 ( N2) 壓力 518 10 3 Pa，增益值為 50，結(jié)果發(fā)現(xiàn)青蒿素在 11 002 41 008 g 內(nèi)呈良好的線 性關(guān) 系 ( r =99 96%) 平均加樣回收率為 99 145%，說明該方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于測(cè)定青蒿素片中青蒿素的含量。陳靖等 38 等采用 HPLC UV ELSD 聯(lián)用，建立青蒿葉片中青蒿素及其相關(guān)倍半萜的含量測(cè)定方法，他們采用 Venusil XBP C18 色譜柱 ( 200 mm 4 6 mm， 5 m) ，流動(dòng)相 : 乙腈水梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng) 203 nm，流速 1 0 ml/min， ELSD 載氣壓力0 35 MPa，噴嘴溫度 35 ，漂移管溫度 60 ，檢測(cè)器 UV ELSD 聯(lián)用，測(cè)定了青蒿葉片中青蒿素、青蒿素 B、去氧青蒿素含量，并在同一色譜柱條件下將流動(dòng)相改為乙腈水甲酸 ( 體積比為 60 00 40 000 08) ，檢測(cè)波長(zhǎng)改為 215 nm，檢測(cè)器改為 UV 檢測(cè)器，測(cè)定青蒿葉片中青蒿酸含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn) 4 種倍半萜在各自的線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好 ( r 0 999 0) ， RSD 3 %，平均加樣回收率分別為 98 5%( RSD = 2 3%) 、96 5% ( RSD = 1 8%) 、 97 5% ( RSD = 3 6% ) 、 95 4%( RSD =2 5%) ，說明該方法可作為青蒿中青蒿素及其相關(guān)倍半萜含量的測(cè)定方法。 對(duì)青蒿素定量檢測(cè)的方法有很多種，有重量法、雙波長(zhǎng)薄層掃描法 39 、紫外分光光度法、高效液相色譜法 ( HPLC) 、反相高效液相色譜法 40 、紅外光譜 9 法 41 、毛細(xì)管電泳法 42 、高效液相色譜蒸發(fā)光檢測(cè)法 43 、 RP高效液相色譜法 44 。目前主要采用的是高效液相色譜法 ( HPLC) 和紫外分光光度法。紫外分光光度法操作簡(jiǎn)單，投資不大，而高效液相色譜儀器投資大，運(yùn)行成本較高，采用何種檢測(cè)方法，一般是由 不同的研究者根據(jù)自己的研究條件而定。 洛陽理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計(jì)論文 10 結(jié) 論 青蒿素在青蒿中含量很低，不同品種的青蒿青蒿素含量差異較大，提取率低，無法滿足市場(chǎng)上的需求，因此一方面應(yīng)加強(qiáng)青蒿的遺傳育種工作，探索影響青蒿素含量的因素，提 高青蒿中青蒿素含量，培育青蒿良種用于栽培 ；另一方面應(yīng)加強(qiáng)青蒿素提取方法及檢測(cè)技術(shù)的改進(jìn)，采用先進(jìn)的提取方 法提取青蒿素。傳統(tǒng)有機(jī)溶劑提取法、超聲波提取法、微波 萃取法、超臨界 CO2 萃取技術(shù)等幾種方法在提取青蒿素方面都有利有弊。工業(yè)上大規(guī)模提取青蒿素目前仍采用有機(jī)溶 劑法，檢測(cè)技術(shù)主要是用紫外分光光度法或高效液相色譜法。隨著各項(xiàng)提取新技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用，會(huì)逐漸取代傳統(tǒng)的有機(jī)溶劑提取，從實(shí)驗(yàn)室走向工業(yè)化，不斷提高青蒿素的得率，進(jìn)而提高經(jīng)濟(jì)效益。 洛陽理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計(jì)論文 11 參考文獻(xiàn) 1 金美花青蒿的藥理作用與臨床新用 J 現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生， 2009， 25( 15) :2352 2 丁小芬， 胡紅青蒿治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的免疫藥理作用 J 中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志， 2006， 12( 1) : 75 76 3 Hsu E The history of qing hao in the Chinese materiamedica J Trans R Soc Trop Med Hyg， 2006， 100:505 508 4 楊耀芳青蒿素及其衍生物的藥理作用和臨床應(yīng)用 J 中國(guó)臨床藥學(xué)雜志， 2003， 12( 4) :253 257 5 賀小青，方鵬飛青蒿素及其衍生物的藥理作用 J 醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2006， 25( 6 6 李自勇，秦海敏，喻宗沅等工業(yè)酒精冷浸法提取青蒿素 J 精細(xì)石油化工進(jìn)展， 2008， 9( 1) :35 37 7 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