密級 : 論文編號 ：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文“喹胺醇 ”藥代動力學(xué)及非臨床 毒理學(xué)研究of 006 年 12 月 21 日博士研究 生 ： 李建喜指 導(dǎo) 教 師 ： 楊志強 研究員申請學(xué)位類 別 ： 農(nóng)學(xué)博士專 業(yè) ： 預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研 究 方 向 ： 獸醫(yī)藥理毒理學(xué)培 養(yǎng) 單 位 ： 蘭州畜牧與 獸藥研究所of of of 006 評 閱 人 ： 安黎哲 蘭州大學(xué)生命科學(xué)院殷 宏 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所崔 燕 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院答辯委員會主席 ： 趙興緒 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院答辯委員會成員 ： 才學(xué)鵬 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所余四九 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院陳 強 蘭州大學(xué)生命科學(xué)院柳紀(jì)省 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所王建林 蘭州大學(xué)生命科學(xué)院楊國林 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所答辯時間 ： 2006 年 12 月 21 日 盡我所知 ， 除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外 ， 論文中不包含他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果 ， 也不包含為獲得中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院或其它教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料 。 與我一同工作過的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意 。研究生簽名 ： 時間 ： 年 月 日關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 有關(guān)保留 、 使用學(xué)位論文的規(guī)定 ， 即 ： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤 ， 允許論文被查閱和借閱 ， 可以采用影印 、 縮印或掃描等復(fù)制手段保存 、 匯編學(xué)位論文 。 同意中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表 、 傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容 。研究生簽名 ： 時間 ： 年 月 日導(dǎo)師簽字 ： 時間 ： 年 月 日喹胺醇是中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸 藥研究所研制的一種新型藥物性飼料添加劑 ， 是二氮雜萘 N4 和喹烯酮 、 喹賽多一樣 屬結(jié)構(gòu)創(chuàng)新類藥物 ， 毒性和殘留均低于喹乙醇 ， 抗菌促生長作用明顯 。 本論文利用 術(shù) ， 分析了喹胺醇 的藥代動力學(xué)及排泄途徑 ； 用 術(shù) ， 開展了喹胺醇對肝 型基因表達 及其 同工酶活性影響 研究 ； 用酶學(xué)和放免法 ， 研究了喹胺醇對機體自由基代謝 、 腹腔 巨噬細胞 以及細胞免疫活性因子 影響 。 旨在為臨床合理 、 安全 使用喹胺醇提供 指導(dǎo) ， 為動物源性食品安全生產(chǎn)提 供新 的候選藥 品 ， 并 為獸醫(yī)藥理毒理學(xué)研究提供新思路 。結(jié)果 ： （ 1） 豬單次 口服 300mg/ 藥代動力學(xué)符合一室 開放 模型 ， 單次靜脈注射 胺醇后藥代動力學(xué)符合二室模型 ， 雞連續(xù)口服 100mg/胺醇后藥代動力學(xué)符合二室開放模型 ； 無論口服還是靜注 ， 靶動物體內(nèi)喹胺醇的吸收和分布半衰期均較短 ，但高劑量或連續(xù)口服給藥后消除半衰期相對較長 ； 該藥絕對生物利用度較低 （ ， 原形經(jīng)腸道隨糞便排泄 ， 原藥隨尿排泄率僅為 （ 2） 連續(xù) 7d 大鼠口服喹胺醇 ， 200和 400mg/鼠肝 400mg/ 表達量低于對照組 （ 無明顯統(tǒng)計學(xué)意義 （ 見表 4 靜脈注射喹胺醇后 ， 抗氧化酶 而 呈正相關(guān)性 ； 呈負相關(guān)性 ， 呈正相關(guān) ； 正相關(guān)性 , 呈負相關(guān)性 ， 但不顯著 ； 相關(guān)性 也 不明顯 （ 見表 40 40 60 80 100 120 140 160 180 200g/ 4脈注射喹胺醇后血藥時曲線四章 喹胺醇對機體自由基代謝影響研究77表 4服喹胺醇后抗氧化酶與脂質(zhì)過氧化 物 的相關(guān)性DA in y = y = y = y = = y = y = y = y = y = y = y = y = y = y = 表 4脈喹胺醇后抗氧化酶與脂質(zhì)過氧化 物 的相關(guān)性DA in in y = y = y = y = y = y = y = y = y = y = y = y = y = y = y = 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院研究生院博士論文 第四章 胺醇對抗氧化酶活性和 量的影響1958 年 出了自由基醫(yī)學(xué) (陳璦 ， 1991)， 多年來一直是人們研究的熱點 ， 并已滲透到許多學(xué)科和研究領(lǐng)域 。 近年來 ， 自由基則逐漸成為人們評價外源性化學(xué)物質(zhì) (如二惡英 、 中毒后 ， 影響機體正常生理機能的重要指標(biāo)之一 （ J, 2004； O， 2000）。 機體抗氧化機能的正常發(fā)揮與否 ， 和脂質(zhì)過氧化反應(yīng) 、 活性氧自由基代謝失調(diào) 、 氧應(yīng)激性損傷 (息息相關(guān) （ ,2002）。 抗氧化酶活力 、 以及脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物 量的變化均可直接反應(yīng)機體抗氧化機能的狀態(tài) ， 間接反應(yīng)機體自由基代謝平衡的穩(wěn)定性和氧應(yīng)激性損傷的可能性 。喹胺醇的母體結(jié)構(gòu)為對二氮雜奈 N,N 二氧化物 ， 屬含氮類雜環(huán)化合物 ， 這類化合物可能對機體大分子物質(zhì) (如 蛋白質(zhì)等 )有一定的損傷作用 （ 002）。 獸用雜環(huán)化合物 (如喹 噁 啉 類藥物 )是否會導(dǎo)致機體發(fā)生脂質(zhì)過氧化損傷 ， 至今還未見明確報道 。 本試驗結(jié)果顯示 ， 斷奶仔豬一次性口服或注射喹胺醇制劑后 ， 抗氧化酶 力和脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物 量 ， 5 但這種變化在給藥 8h 后會逐漸恢復(fù)到給藥前水平 。 這表明 ， 單劑量服用或注射喹胺醇后可能會引起機體抗氧化機能短暫失調(diào) ， 但不會導(dǎo)致抗氧化機能長期紊亂 。 這與 (2002)的報道結(jié)果相一致 。 他們在鼠飼料中添加了不同濃度的喹喔啉結(jié)構(gòu)衍生物 234,5啉 ， 連續(xù)飼喂大鼠 3w 后 ， 發(fā)現(xiàn)血 漿 力和 量水平?jīng)]有明顯變化 。 本試驗中 ， 試驗動物口服大劑量喹胺醇后 ， 血 量與給藥前相比有明顯下降趨勢(低劑量組 ； 40d 時各組鼠血清中 量基本上無任何明顯差異 ； 隨實驗進程 ， 各組鼠血清 量呈低 高 低的變化趨勢 。組織抗超氧陰離子水平變化由表 4見 ， 10d 時肝組織抗超氧陰離子水平藥物處理組極顯著高于空白對照組 (P20d 時各組間無任何明顯差別 ； 30d 時藥物處理組低于對照組 (P 40d 時只有高劑量組顯著低于空白對照組 (P 藥物處理組間 ， 低劑量組抗超氧陰離子水平在試驗期內(nèi)均稍高于中 、 高二劑量組 ， 40d 外除 (P 試驗期內(nèi) ， 各組小鼠肝組織抗超氧陰離子水平呈下降趨勢 （ 見圖4 4鼠肝組織抗超氧陰子水平 (單位 ： U/of U/別 10d 20d 30d 40 組織活性氧自由基水平變化由表 4見 ， 試驗的 10d、 20d 時藥物處理組小鼠肝組織勻漿中羥自由基 (平均 極顯著高于對照組 (P 顯著高于生理鹽水組 (P 30、 40d 時只有高劑量組顯著高于對照組（ P 中劑量組和低劑量組與對照組間無明顯差別 。 藥物處理組之間 ， 試驗的 10、 20、 30、40d 時 ， 高劑量組肝組織 平均顯著高于低劑量組 (P 中劑量組肝 平在 10P 40d 時則與對照組間無明顯差別 ； 生理鹽水組肝組織 30、5005506006507007508008505 10 15 20 25 30 35 40 45d) 組織抗超氧陰離水平變化趨勢4he of of 組織活性氧自由基水平變化趨勢4of 0 15 20 25 30 35 40 45d)C 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院研究生院博士論文 第四章 喹醇醇對機體自由基代謝影響研究8340d 時與空白對照組間無明顯差別 。 如圖 4示 ， 肝組織內(nèi) 由基水平隨給藥期的延長 ，呈由高 到低的變化趨勢 ， 10、 20d 顯著高于 30 和 40d（ P表 4鼠肝組織羥自由基水平 (單位 ： U/of U/別 10d 20d 30d 40 I 藥 劑量與抗氧 化酶活性間的相關(guān)性he 0d 30d 40y = y = y = y = y = 2 藥劑量與抗氧化活性物質(zhì)間的相關(guān)性由表 4見 ， 給藥劑量與 量 、 力間呈正相關(guān)性 ， 但不顯著 ； 給藥劑量與力間呈負相關(guān)性 ， 也無顯著性統(tǒng)計學(xué)意義 。藥劑量與脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物 、 自由基水平間的相關(guān)性分析由表 4見 ， 給藥劑量與脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物檢測指標(biāo) 量間成正相關(guān)性 ， 除 40d 外相關(guān)系數(shù)的平方均在 上 ； 給藥劑量與肝組織 平之間在試驗期內(nèi)均呈正相關(guān)系 ， 20d 時 呈極顯著性 （ P 藥物劑量與肝組織抗超氧陰離子 （ 水平間呈負相關(guān)關(guān)系 。表 4物劑量與自由基水平 、 脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物間的相關(guān)性he 0d 30d 40y = y = y = y = H y = y = y = y = y = y = y = y = 四章 胺醇對谷胱甘肽水平的影響還原型谷胱甘肽 （ 是生物體內(nèi)一種重要的含有巰基 （ 非蛋白活性肽 ， 由半胱氨酸 、谷氨酸和甘氨酸組成 ， 廣泛分布于機體的各組織器官中 （ , 2004）。 它是許多代謝酶如甘油二磷酸脫氫酶 、 乙二醛酶 、 丙酮酸脫氫酶 等的輔基或輔酶 ， 具有多種生物學(xué)功能 ， 如抗脂質(zhì)過氧化作用 、 解毒作用 、 藥物的生物轉(zhuǎn)化作用等等 ， 在維持細胞新陳代謝和內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定性方面具有重要意義 （ ,2003； M,2000； ,1999）。 外源或內(nèi)源親電性化合物 （ 如黃曲霉毒素 自由基 、 苯丙芘等 ） 與 有高的親合性 （ C,1999； ,1990），當(dāng)這些物質(zhì)進入機體或在機體內(nèi) 大量產(chǎn)生時 ， 與之結(jié)合而形成疏基復(fù)合物 ， 并被進一步轉(zhuǎn)化為疏基尿酸被排出體外 （ 989） 。 這就是 毒機理 ， 該過程中 含量會升高或降低 ， 機體的內(nèi)環(huán)境和新陳代謝也會受影響 ， 有時甚至?xí)霈F(xiàn)病理性改變 （ M,1995）。評價機體抗氧化機能穩(wěn)定性的一個重要標(biāo)志 。 喹胺醇作為一種新藥 ， 前期研究結(jié)果表明 ，豬單劑量口服后全血 量在 2明顯下降現(xiàn)象 。 本實驗中小鼠連續(xù)口服喹胺醇 10d 后 ，全血 量均高于生理鹽水組和空白對照組 ， 但只有 360mg/重 劑量組與對照組間存在顯著性差異 （ P 在實驗的 20d、 30d、 40d 時各組間全血 平無明顯差異 （ 見表 4喹胺醇 給藥劑量與全血 量間呈正相關(guān)性 ， 但均無顯著性關(guān)系 。 上述結(jié)果提示 ， 小鼠連續(xù)口服喹胺醇后 ， 最初可能會導(dǎo)致 量代償性升高 ， 但隨給藥時間的延長 ， 量又會恢復(fù)到正常水平 。 由此推測 ， 長期飼喂喹胺醇后不會對機體內(nèi) 量產(chǎn)生不良影響 。胺醇對谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)酶活性影響谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)酶 （ 是機體內(nèi)一組多功能酶 ， 有許多型 和亞型 。 真核生物中 ， 工酶有兩大類 ： 游離型和結(jié)合型 ， 游離型位于細胞漿中 ， 由多基因編碼 ， 占 95%； 結(jié)合型位于膜上 ， 由單基因編碼 ， 約占 5%（ J 2006）。 游離于細胞胞漿中的由兩個亞基構(gòu)成的二聚體 ， 而結(jié)合于微粒體等膜上的 三個亞基構(gòu)成 ， 均有一個活性中心 （ , 2001;1995）， 并催化 底物 （ 如化學(xué)致癌物 、 環(huán)境污染物 、 抗腫瘤制劑 ）結(jié)合 （ , 1969）。 工酶的生物學(xué)作用多種多樣 ： 解毒功能 、 藥物代謝功 能 、 抗病功能和生物合成功能 （ C, 2006; M, 2005； D,2005）。 如環(huán)境化學(xué)致癌物如苯丙芘的解毒 ， 抗癌 、 抗腫瘤作用 ， 催化白三烯 、 前烈腺素 、 睪酮 、 孕酮等的合成 ， 催化酪氨酸的降解 （ 夏世鈞 ， 2001）。 在外源性化學(xué)物質(zhì)進入機體后 ， 可能會對 生誘導(dǎo)或抑制作用 ，如苯巴比妥 ， 3 ， 均有誘導(dǎo) 性作用 （ , 2004）。 研究資料表明 ，外源性化合物誘導(dǎo) 作用可能是一種保護機制 ， 該酶的親電性底物大多是其有效的誘導(dǎo)劑 ，而且這種誘導(dǎo)作用通常是可逆的 ， 解除誘導(dǎo)劑后酶濃度又會變回原來的水平 （ M,2001；,1995）。 如 2-(可以抑制 基因表達 、 抑制其介導(dǎo)的生物催化作用 ， 還能誘導(dǎo)環(huán)氧化物的降解 、 提高 水平 ， 從而降低 致的肝癌發(fā)病率 （ 999）。中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院研究生院博士論文 第四章 喹醇醇對機體自由基代謝影響研究85前期實驗結(jié)果表明 ， 豬單劑量給藥后對 性沒有明顯的影響 。 本實驗給小鼠連續(xù)口服喹胺醇后 ， 10d 時全血 性則顯著低于生理鹽水組和空白對照組 （ P 20d 時顯著高于空白對照組 （ P 到 30d 和 40d 時極顯著高于空白對照組 （ P 但藥物處理組間相比 ，低劑量組小鼠全血 力在試驗期內(nèi)均高于其它二個藥物處理組 （ 見表 4 該結(jié)果提示 ，在給藥初期可能對 性有抑制作用 ， 但隨著給藥時間的延長這種抑制作用會減弱 、 并轉(zhuǎn)變成誘導(dǎo)作用 ， 這與文獻報道結(jié)果相一致 （ F, 2003； P,1995）。 但這種作用并不會因為給藥劑量的增加而增大 ， 因為低劑量組酶活性在試驗期內(nèi)始終高于中劑量組和高劑量組 。 因此 ，試驗結(jié)果中給藥劑量和酶活性的變化間存在負相關(guān)性 。 由上述結(jié)果推測 ， 喹胺醇 的代謝和解毒過程中起主要作用 ， 活性變化比單劑量給藥顯著 ， 而且停藥后 10d 時還 能 觀察到酶活性極顯著高于對照組 。胺醇對抗氧化酶活性的影響抗氧化酶 （ 是廣泛分布于生物體內(nèi)的一大類活性物質(zhì) ， 如 乳酸脫氫酶 （ C,2005； M,2005），硫轉(zhuǎn)移酶 、 肌酸激酶 ( （ L,2006; G, 2005）， 具有多種生物學(xué)作用 ，但抗氧應(yīng)激性損傷和清除自由基是最重要作用之一 （ A,2005； T,2004; 999）。 疾病 、 生理變化 、 外源性化合物入侵 、 中毒 、 代謝紊亂等 ， 均會對機體內(nèi)抗氧化酶在基因水平和蛋白水平上產(chǎn)生一定影響 。 如 吸煙 、 輻射 、 環(huán)境二惡英等 ， 均會導(dǎo)致試驗動物體內(nèi)或培養(yǎng)細胞中抗氧化酶 并影響自由基代謝平衡 ，并導(dǎo)致機體內(nèi)自由基水平升高 ， 從而使組織或細胞發(fā)生脂質(zhì)過氧化損傷 （ 004）。 如當(dāng)機體發(fā)生酒精或醛類物質(zhì)中毒后 ， 抗氧化酶 （ 合成會被抑制 ， 活性也隨之降低 ，機體抗氧化機能紊亂 （ ， 2005）。 抗氧化酶 如過量服用對乙酰氨基酚 （ 或先天性過敏所導(dǎo)致的中毒現(xiàn)象 ， 動物體內(nèi) 機體對毒性的抵抗力也會下降 ， 因此無論是經(jīng)轉(zhuǎn)基因使 還是體外給予 都可降低對乙酰氨基酚中毒導(dǎo)致的死亡率 （ , 1999）。 是一種毒性物質(zhì) ， 具有致癌作用 ， 給試驗動物一定量的該物質(zhì)后 ， 結(jié)果發(fā)現(xiàn)體內(nèi)抗氧化酶 , 1987）。喹胺醇是一種抗菌促生長藥獸用藥物 ， 本實驗室前期研究結(jié)果 表明 ， 斷奶仔豬單次口服高劑量或靜脈注射小劑量的喹胺醇后 ， 在 0內(nèi)抗氧化酶活性有明顯波動現(xiàn)象 ， 但 12h 之后會逐漸接近給藥前水平 。 由此推測 ， 喹胺醇可能會導(dǎo)致機體抗氧化機能的短暫紊亂 ， 但不會持久 。 為了進一步闡述喹胺醇對機體抗氧化機能的影響 ， 本實驗給小鼠連續(xù)口服不同劑量的喹胺醇 30d， 再停藥 10d 后 ， 分別在試驗的不同時段檢測了抗氧化酶 活性變化 。 試驗結(jié)果顯示 ， 全血 性在試驗的 10、 20、 30d 時均顯著或極顯著低于對照組 （ P P血清 性在 10d 時高于對照組 （ P 在 30d 時顯著低于對照組 （ P 全血 性在 20d 時低于對照組 ， 但無明顯差別 。 停藥 10d 后即試驗的第 40d 時 ， 藥物處理組與對照組間抗氧化酶活性均無顯著性差異 ， 外 。 相關(guān)性分析結(jié)果表明 ， 隨給藥劑量的增強 ，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院研究生院博士論文 第四章 喹醇醇對機體自由基代謝影響研究86喹胺醇導(dǎo)致 性下降的作用會減弱 ， 這種變化和 量隨給藥劑量的變化相似 ； 但給藥劑量與 性間均呈負相關(guān)關(guān)系 ， 藥物劑量越大 ， 酶活性會越低 。 文獻報道中 ， 抗生素導(dǎo)致抗氧化酶活性下降也多見 。 E（ 2006） 報道 ， 氨基糖苷類抗生素會誘導(dǎo) 非翻譯區(qū)基因 編碼突變 ， 從而導(dǎo)致細胞內(nèi) 平下降 。 J（ 2003） 報道 ， 豚鼠連續(xù)口服 200 mg/kg/量的卡那霉素 （ 28d 后 ， 檢測發(fā)現(xiàn)抗氧化酶 均顯著低于對照組 。 （ 2003） 報道 ， 阿霉素 （ 有導(dǎo)致大鼠體內(nèi)抗氧化酶活性下降的可能 。 由此可見 ， 治療性藥物在治病的過程中也可能導(dǎo)致機體抗氧化機能發(fā)生紊亂 。綜上所述 ， 連續(xù)口服喹胺醇對機體抗氧化酶活性均有不同程度的影響 ， 并有導(dǎo)致機體抗氧化機能紊亂的可能 ， 但停藥 10d 后這種影響作用會減弱甚至消失 。胺醇對自由基代謝的影響 胺醇對脂質(zhì)過化反應(yīng)的影響脂質(zhì)過氧化反應(yīng) （ 是一個產(chǎn)生自由基和自由基參與的鏈?zhǔn)椒磻?yīng) ，分為三個階段性 ： 啟動 、 擴展和終止 （ ,2003）。 生物膜富含不飽和脂肪酸 ， 其中的雙鍵易被帶有不成對電子的自由基攻擊 ， 從而形成帶有不成對電子的脂自由基 （ ， 當(dāng)脂自由基間相互作用生成非自由基產(chǎn)物或形成環(huán)氧化物后 ， 最后裂解成各種醛類或短鏈烴類 ， 鏈?zhǔn)椒磻?yīng)終止 。 丙二醛 （ 是 脂質(zhì)過氧化 代表產(chǎn)物之一 ， 也是檢測脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的生物標(biāo)記 物 （ H,1990； C,2003； 002）。 因此 ， 通 過 檢測組織內(nèi) 含量 ， 可以推斷機體脂質(zhì)過氧化反應(yīng)水平 。 疾病（ 如糖尿病 、 高血壓 、 癌病等 ） 過程 、 外源性化合物入侵 （ 如酒精 、 吸煙 、 丙烯酰胺等 ） 后 （ J， 2006； 方允中 ， 1989）， 量會升高 ， 結(jié)合抗氧化酶活性的變化 、 以及細胞形態(tài)學(xué) ， 可以推測機體內(nèi)自由基代謝水平和脂質(zhì)過氧化損傷的程度 （ 汪德清 ， 1994; 1982）。 喹胺醇等喹喔啉類藥物是否會誘導(dǎo)機體產(chǎn)生大量自由基 ， 引起脂質(zhì)過氧化反應(yīng)和氧氣激性損傷 。 前期實驗結(jié)果顯示 ， 斷奶仔豬單劑量口服喹胺醇后 0單劑量靜脈注射喹胺醇后 0 量高于給藥前水平 ， 說明喹胺醇有導(dǎo)致機體發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的可能 ， 但在自身調(diào)節(jié)下這種反應(yīng)不會持久 ， 因此數(shù)小時后 恢復(fù)到正常水平 。 本實驗中 ，給小鼠連續(xù)口服喹胺醇 30d， 再停藥 10d 后 。 結(jié)果顯示試驗 小鼠血清 量 360mg/量組和 180mg/量組在 10d、 20d 和 30d 時均比空白對照組 、 生理鹽水組和 30mg/量組高 ，但差異不顯著 ； 40d 時各組鼠血清中 量無任何明顯差異 。 另外 ， 實驗中給藥劑量與血清量間在 10、 20、 30d 時均呈正相關(guān)關(guān)系 ， 40d 時這種正相關(guān)性雖存在 ， 但相關(guān)系數(shù)很小 。該結(jié)果表明 ， 長期服用喹胺醇后 ， 有導(dǎo)致機體抗氧化機能紊亂的可能性 ， 但導(dǎo)致的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)很輕微 ； 給藥期間試驗鼠血清 量會隨給藥劑量的增加而增大 ， 脂質(zhì)過氧化反應(yīng)與 給藥 劑 量間有一定相關(guān)性 。胺醇對活性氧自由基代謝的影響自由基是帶有不 成對電子的活性基團 ， 化學(xué)性質(zhì)非常活潑 。 在需氧生物體內(nèi)外 ， 有大量的活性氧等自由基產(chǎn)生 ， 并不斷地被抗氧化體系如 清除 ， 從而維持平衡狀態(tài) 。 這些活性氧包括 其相關(guān)性產(chǎn)物在機體的多種生理過程中發(fā)揮著重要作用 ，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院研究生院博士論文 第四章 喹醇醇對機體自由基代謝影響研究87前烈腺素 、 甲狀腺素等的合成和級聯(lián)反應(yīng)中 ， 自由基是一種不可缺少的活性元素 ； 氧自由基與 活性碳 ”， 在凝血酶原合成中發(fā)揮羧化作用等等 （ B， 2004； Z，2002）。 由于自由基與生物大分子物質(zhì)如脂質(zhì) 、 蛋白質(zhì) 、 核酸等具有高的親合性 ， 因此當(dāng)自由基代謝平衡失調(diào)后 ， 會導(dǎo)致氧應(yīng)激發(fā)生 ， 大量自由基會通過破壞不飽和脂脂肪酸 （ 的弱鍵 ， 導(dǎo)致生物膜等發(fā)生氧應(yīng)激性損傷 （ M， 2006；. R， 1988）。 在疾病 、 營養(yǎng)缺 乏 、 外源化學(xué)物質(zhì)入侵后 ， 會導(dǎo)致自由基抗氧化體系受損 ， 自由基因此會在體內(nèi)積聚 ， 并導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化損傷 。 據(jù)報道 ， 許多環(huán)境污染物 、 藥物均有引起機體內(nèi)自由基生成增加或清除障礙的可能 。 如 分子氧 （ 發(fā)生反應(yīng)而生成 2自由基 ， 該自由基又會導(dǎo)致脂質(zhì)發(fā)生氧化反應(yīng) ， 從而損傷肝細胞 （ , 2006； N,2005）。 抗菌藥呋南妥英 （ 一種硝基化合物 ， 在肺內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)可被還原成硝基自由基 ， 該自由基又被氧化而產(chǎn)生 后者又生成 并導(dǎo)致機體發(fā)生過氧化損傷 （ J, 2000； ,1996） 。 氯霉素(E,1997 )、 環(huán)孢霉素 （ ,1993）、 非那西汀 ( ,1986）、 異胭肼（ T,2005） 等藥物 ， 在機體內(nèi)均有導(dǎo)致自由基生成增多 ， 脂質(zhì)過氧化加劇的可能 。文獻報道 ， 在厭氧條件下喹叨嗪和喹 噁 啉 可用電子順磁共振 （ 進行檢測 （ , 1978）。 喹胺醇是喹 噁 啉 豬連續(xù)單劑量口服或靜脈注射 該藥后 ， 結(jié)果顯示該藥有導(dǎo)致機體抗氧化機能紊亂的可能 。 本實驗通過檢測肝組織 羥自由基 (平的變化 ， 評估了喹胺醇對活性氧自由基代謝的影響 。 結(jié)果 給小鼠連續(xù)口服 30d 喹胺醇后 ， 在 10、 20d 時藥物處理組和生理鹽水組的羥自由基 (平均高于空白對照組 （ P 30 和 40d 時僅 360mg/量組鼠肝 P 但與生理鹽水組間無明顯差別 。 給藥劑量與肝 平變化間呈正相關(guān)關(guān)系 。 這些結(jié)果提示 ， 喹胺醇可誘導(dǎo)機體內(nèi)活性氧自由基的大量生成或積聚 。 分析認為 ，自由基水平升高 一方面與抗氧化酶活性下降有關(guān) ， 另一方面可能與每天灌藥時的應(yīng)激反應(yīng)有關(guān) 。因為 ， 實驗的前 20d 自由基水平明顯高于后 20d。 但隨著試驗鼠對灌藥行為的適應(yīng) ， 應(yīng)激導(dǎo)致自由基產(chǎn)生的可能性降低 ， 所以試驗后期肝組織自由基水平下降明顯 。 但高劑量組仍顯著高于對照組 。 由此可見 ， 小鼠連續(xù)口服小劑量的喹胺醇后 ， 只會在給藥初導(dǎo)致自由基生成增加 ， 但大劑量口服喹胺醇后 ， 這種誘導(dǎo)自由基生成作用會明顯加劇 。胺醇對機體抗自由基能力的影響上述試驗結(jié)果表明 ， 喹胺醇可降低抗氧化酶 活性 ， 但 活性則 呈升高趨勢 ， 活性氧 自由基水平也會隨給藥劑量的增加而升高 。 這說明機體的抗氧化機能可能被抑制 。 機體清除自由基的能力又會怎樣呢 ？ 本實驗中 ， 通過檢測機體抗超氧陰離子 （ 水平 ， 評估了機體清除自由基的能力 ， 結(jié)果顯示 ， 鼠連續(xù)口服喹胺醇 10d 時 ， 肝組織抗超氧陰離子水平極顯著高于空白對照組 (P 20d 時各組間無任何明顯差別 ， 30d 時低于對照組(P 40d 時只有 360mg/量組顯著低于空白對照組 (P 給藥劑量與抗 可見隨給藥劑量的增加 ， 肝組織抗 上述結(jié)果提示 ， 在給藥初期隨自由基生成量的增加 。 機體清除自由基的能力會代償性增加 ， 當(dāng)自由基水平增加到一定程度即 20d 時 ， 清除自由基的能力會下降 ， 但當(dāng)實驗 30d 時自由基水平降低后 ， 清除自由基的能力又會升高 。中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院研究生院博士論文 第五章 喹胺醇對鼠腹腔巨噬細胞 細胞因子影響88第五章 喹胺醇 對鼠 腹腔巨噬細胞 驗動物與分組50 只 鼠 ， 雌雄各半 ， 購于蘭州軍區(qū)陸軍總醫(yī)院動物室 ， 隨機分為 5 組 ， 分別為高劑量組 （）、 較高劑量組 （）、 中劑量組 （）、 低劑量組 （） 和空白對照組 （ C）。 飼料為大鼠顆粒日糧 ， 未添加任何其它藥物 。 雌雄分籠飼養(yǎng) ， 自由采食 、 飲水 。驗藥物 、 劑量和給藥途徑試驗藥物喹胺醇由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究新獸藥工程實驗室提供 ， 純度 本實驗室再行純化 ， 純度為 將喹胺醇配制成不同濃度的混懸液 ， 分別按表 5計的藥物劑量灌胃大鼠 ， 對照組以 生理鹽水代替藥物 。表 5藥劑量mg/mg/驗設(shè)計分別在試驗的 0、 10、 20、 30、 4