密級(jí)： 論文編號(hào)： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩士學(xué)位論文 高比活木聚糖酶 高效表達(dá) 及其性質(zhì)改良 請(qǐng) 人 : 王亞茹 指 導(dǎo) 教 師 : 范云六 院士 申請(qǐng)學(xué)位類(lèi)別: 理學(xué)碩士 專(zhuān) 業(yè) : 微生物學(xué) 研 究 方 向: 微生物飼料工程 培 養(yǎng) 單 位: 研究生院 生物技術(shù)研究所 飼料研究所 提交日期 2006 年 5 月 2006 獨(dú) 創(chuàng) 性 聲 明 本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下 進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。 研究生簽名： 時(shí)間： 年 月 日 關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明 本人完全了解中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤(pán)，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。 (保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議) 論文作者簽名： 時(shí)間： 年 月 日 導(dǎo)師簽名： 時(shí)間： 年 月 日 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 作者簡(jiǎn)歷 論文評(píng)閱人、答辯委員名單 論文題目 高比活木聚糖酶 高效表達(dá)及其性質(zhì)改良 論文作者 王亞茹 指導(dǎo)教師 范云六 培養(yǎng)單位 生物技術(shù)研究所 姓名 職稱(chēng)職務(wù) 導(dǎo)師類(lèi)別 單位 專(zhuān)業(yè) 伍寧豐 研究員 碩導(dǎo) 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所 分子生物學(xué)章引梅 副研究員 碩導(dǎo) 中國(guó)科學(xué)院遺傳 微生物學(xué) 評(píng) 閱 人 李 俊 副研究員 碩導(dǎo) 中國(guó)農(nóng)科院農(nóng)業(yè)資源與農(nóng)業(yè)區(qū)劃研究所 微生物學(xué) 答辯 主席 宋 未 教 授 博導(dǎo) 首都師范大學(xué)生物學(xué)院 分子生物學(xué)張志芳 研究員 博導(dǎo) 中國(guó)農(nóng)科院生物技術(shù)研究所 分子生物學(xué)張 杰 研究員 博導(dǎo) 中國(guó)農(nóng)科院植物保護(hù)研究所 微生物基因工程 王 琦 教 授 博導(dǎo) 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理系 微生物學(xué) 朱昌雄 研究員 博導(dǎo) 中國(guó)農(nóng)科院農(nóng)業(yè)環(huán)境與可持續(xù)發(fā)展研究所 微生物學(xué) 答 辯 委 員 答辯時(shí)間、地點(diǎn) 2006 年 5 月 26 日, 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所 記 錄 羅會(huì)穎 摘 要 木聚糖是一種由- 木糖苷鍵連接形成并帶有多種取代基的多聚糖，大量存在于飼料植物的細(xì)胞壁中。木聚糖可以增加單胃動(dòng)物消化道內(nèi)的食麋粘性，降低動(dòng)物對(duì)營(yíng)養(yǎng)的吸收和飼料消化率，是重要的抗?fàn)I養(yǎng)因子。木聚糖酶是可將木聚糖降解成低聚木糖和木糖的水解酶。內(nèi)切 糖苷鍵，是一類(lèi)重要的半纖維素酶, 在飼料中應(yīng)用可消除飼料中木聚糖的抗?fàn)I養(yǎng)作用, 同時(shí)它還廣泛應(yīng)用于紙漿工業(yè)、食品工業(yè)及能源工業(yè)等眾多領(lǐng)域。通過(guò)重組微生物反應(yīng)器高效表達(dá)木聚糖酶，尤其是高比活木聚糖酶，提高其發(fā)酵效價(jià)，以進(jìn)一步降低生產(chǎn)成本是目前木聚糖酶研究的熱點(diǎn)之一。另外，通過(guò)對(duì)木聚糖酶蛋白進(jìn)行分子改良，以提高其比活性也是進(jìn)一步提高木聚糖酶應(yīng)用潛力的有效途徑。 瘤胃微生物源的木聚糖酶是目前發(fā)現(xiàn)的比活性最高的天然木聚糖酶。我們將本實(shí)驗(yàn)室前期克隆到的來(lái)源于瘤胃真菌木聚糖酶基因 按正確的閱讀框架整合到畢赤酵母表達(dá)載體，通過(guò)電擊轉(zhuǎn)入畢赤酵母，得到重組子。重組子中表達(dá)蛋白的析和酶活性測(cè)定表明，木聚糖酶基因 組菌株在 5 聚糖酶白表達(dá)量達(dá)到 1 mg/活性達(dá)到 13000 IU/目前文獻(xiàn)報(bào)道的木聚糖酶最高表達(dá)量高近 4 倍。表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)純化后進(jìn)行了酶學(xué)性質(zhì)測(cè)定，結(jié)果表明，以 4 純化的 U/717.1 .5 mg/000 最適反應(yīng)溫度和分別為 60同時(shí)各類(lèi)金屬離子和化學(xué)試劑對(duì)木聚糖酶 酶學(xué)性質(zhì)來(lái)看，它是一種酸性木聚糖酶，且對(duì)胰蛋白酶有很好的抗性，這一性質(zhì)使其有望作為飼料添加劑應(yīng)用于飼料工業(yè)中。另外，該酶對(duì)作用環(huán)境中的各種離子、表面活性劑、螯合劑不敏感，也有利于此酶在工業(yè)上的實(shí)際應(yīng)用。 對(duì)白結(jié)構(gòu)分析結(jié)果表明其C 端 57 個(gè)氨基酸序列為連接序列和錨定區(qū)域，我們利用到截短的木聚糖酶基因序列將重組表達(dá)載體化進(jìn)入畢赤酵母，并篩選獲得陽(yáng)性重組子。搖床水平上的析和表達(dá)產(chǎn)物的酶學(xué)測(cè)定研究表明，木聚糖酶基因到分泌表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物 果表明： mg/0000 mL，比活為 U/433.8 純化的親本白相比，其比活性及 酶學(xué)性質(zhì)測(cè)定結(jié)果表明，白最適反應(yīng)溫度為 60，最適 比， 熱穩(wěn)定性略有提高。部分金屬離子對(duì)酶活有 1020的增強(qiáng)作用，而抑制 50的酶活性。活性達(dá)到 U/于目前報(bào)道的木聚糖酶，為木聚糖酶進(jìn)一步的高效表達(dá)和降低生產(chǎn)成本提供了良好的材料。同時(shí)，本實(shí)驗(yàn)也為有針對(duì)性地進(jìn)行酶分子性質(zhì)改良提供了新的思路和經(jīng)驗(yàn)。 關(guān)鍵詞：木聚糖酶 高比活性 高效表達(dá) 畢赤酵母 性質(zhì)改良 is a in As a of of of of by of of is a of by an of in to of by in is of of on is an to of is as a of a is by It is by of of mg 3000 IU of of to be of U/mg .5 mg/mL 000mLas pH 0 on of is an is to it is be in as an In is to to be in 7 at of of by a 171at of of as U/mg 433.8 to of on pH 0 of a on n2+up 0 20% 0% up U/is of a of of 錄 第一章 綜述 況 的分子結(jié)構(gòu)區(qū)域 的家族 的理化性質(zhì)的催化機(jī)制的基因工程胃微生物基本情況及分類(lèi) 胃微生物來(lái)源的酶 . 木聚糖酶的應(yīng)用飼料行業(yè)中的應(yīng)用 造紙工業(yè)中的應(yīng)用 食品和醫(yī)藥行業(yè)中的應(yīng)用 釀酒行業(yè)及其它領(lǐng)域中的應(yīng)用 越性體菌和載體 響外源基因表達(dá)的因素及表達(dá)條件的優(yōu)化 研究的目的和意義二章 木聚糖酶 畢赤酵母中的表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)研究 驗(yàn)材料 菌株與質(zhì)粒 試劑盒、工具酶和生化試劑液 培養(yǎng)基 實(shí)驗(yàn)儀器法 木聚糖酶基因 高效表達(dá)木聚糖酶基因的重組酵母的構(gòu)建 發(fā)酵罐水平重組酵母的高細(xì)胞密度發(fā)酵 木 聚 糖 酶的純化 木聚糖酶最適 定性的測(cè)定 木聚糖酶最適反應(yīng)溫度和熱穩(wěn)定性的測(cè)定 金屬子和相關(guān)化學(xué)試劑對(duì)木聚糖酶活性 的影響聚糖酶反應(yīng)初速度的測(cè)定 木聚糖酶 0 木聚糖酶比活性測(cè)定1 木聚糖酶抗胃蛋白酶及胰蛋白酶能力 果 木聚糖酶酶活性測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 木聚糖酶基因 木聚糖酶基因 重組酵母在 3L 發(fā)酵罐中的細(xì)胞高密度發(fā)酵 木 聚 糖 酶 純化 最適 定性 不同化學(xué)試劑對(duì) 活的影響 木聚糖酶0 比活性測(cè)定1 木聚糖酶抗胃蛋白酶及胰蛋白酶能力 活性改良 料及方法 材料 木聚糖酶 表達(dá)載體 構(gòu)建 表達(dá)的木聚糖酶的純化與酶學(xué)性質(zhì)測(cè)定 果 木聚糖酶 因的比活性改良 木聚糖酶高效表達(dá)重組酵母的篩選 搖床水平木聚糖酶的表達(dá)聚糖酶 酶學(xué)性質(zhì)測(cè)定 性質(zhì)比較 四章 木聚糖酶 飼喂試驗(yàn) 1 木聚糖酶 肉仔雞生產(chǎn)性能的影響 試驗(yàn)方法驗(yàn)結(jié)果與分析 小結(jié) 聚糖酶對(duì)肉仔雞表 觀代謝能和養(yǎng)分消化率的影響 材料與方法驗(yàn)結(jié)果 小結(jié) 五章 結(jié)論與討論 論論 考文獻(xiàn) 謝 者簡(jiǎn)歷 第一章 綜述 第一章 綜 述 木聚糖是一種五碳糖，是植物細(xì)胞中重要的結(jié)構(gòu)多聚糖，在植物細(xì)胞壁中的含量?jī)H次于纖維素，約占細(xì)胞干重的 35%。木聚糖是半纖維素的重要組分，它是自然界中含量?jī)H次于纖維素的第二豐富的多聚糖，幾乎占地球可更新有機(jī)碳含量的三分之一（1995）。 木聚糖廣泛存在于在農(nóng)業(yè)副產(chǎn)物如玉米芯、麥麩、米糠、秸稈、甘蔗渣等中，但這一重要的可再生資源一直難以得到有效的利用；而在造紙制漿過(guò)程中富含木聚糖的工業(yè)廢料往往直接排入水體，導(dǎo)致水質(zhì)富營(yíng)養(yǎng)化從而嚴(yán)重破壞生態(tài)環(huán)境，這些現(xiàn)象在我國(guó)尤為突出（孫迅等，1998 ）。而另一方面，作為木聚糖水解產(chǎn)物主要成分的低聚木糖是一種附加值高，市場(chǎng)前景看好的功能性食品添加劑，目前已成為國(guó)內(nèi)外競(jìng)相研究開(kāi)發(fā)的功能性低聚糖之一（許正宏等，2001 ） 。因此對(duì)木聚糖的有效利用和深層開(kāi)發(fā)已成為目前國(guó)內(nèi)外的研究熱點(diǎn)。 木聚糖酶是可將木聚糖降解成低聚糖和木糖的一類(lèi)酶的總稱(chēng)，它作為一種多酶體系廣泛存在于各種微生物中。在近四十年的研究歷程中，各國(guó)科學(xué)家們已從不同來(lái)源的微生物中分離到大量的不同類(lèi)型和功能的木聚糖酶（孫迅等， 1998；楊瑞鵬等，1990 ） ，并對(duì)其酶學(xué)性質(zhì)、催化機(jī)制以及分子結(jié)構(gòu)有了比較詳盡的研究。隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展和進(jìn)步，特別是基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)的廣泛應(yīng)用，對(duì)木聚糖酶的了解更加深入，已經(jīng)分離出多種木聚糖酶基因，并有多種木聚糖酶產(chǎn)品已得到應(yīng)用（劉相梅等， 2001） 。其中，木聚糖酶在飼料工業(yè)、造紙工業(yè)、能源工業(yè)以及食品醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用價(jià)值，在科學(xué)界中已引起廣泛關(guān)注。 1. 木聚糖的分子結(jié)構(gòu) 木聚糖是一種雜合多糖，是半纖維素的主要組成成分。其主鏈由多個(gè)吡喃木糖基通過(guò)木糖苷鍵相連。根據(jù)糖苷鍵的類(lèi)型，木聚糖可分兩種，1 ， 4木聚糖和1 ， 3木聚糖。前者存在于陸生植物細(xì)胞壁中，它的主鏈由以1 ，4 糖苷鍵相連的 D吡喃木糖殘基聚合而成；而后者存在于海洋藻類(lèi)的細(xì)胞壁中，其主鏈由 D吡喃木糖殘基通過(guò)1 ，3 糖苷鍵聚合而成( ,1990)。 木聚糖側(cè)鏈上的取代基主要有乙?；?、 4O 甲基D 葡糖醛酸殘基、阿拉伯吡喃糖殘基等。這些側(cè)鏈以共價(jià)或非共價(jià)形式與木質(zhì)素、纖維素及其他聚合物相連接，組成植物細(xì)胞重要的結(jié)構(gòu)細(xì)胞壁（et 1998）。不同來(lái)源的木材中，木聚糖以不同形式存在。在闊葉樹(shù)中木聚糖以 合度為150200，且具有高度的乙酰化；在針葉樹(shù)中木聚糖是非乙?；?，以阿拉伯糖- 4合度為 70130；而一年生植物及草中的木聚糖是阿拉伯木聚糖。同型線性木聚糖主要存在于茅草，煙草和海藻中。不同植物或同一植物不同的生長(zhǎng)階段，木聚糖的組成成分及其多聚化程度都有所不同，由于其異質(zhì)性和復(fù)雜性，木聚糖的完全水解需要多種不同類(lèi)型酶的協(xié)同作用( 2004)。不同植物中木聚糖的含量也有所差別，一般硬材中所含木聚糖比軟材中多，硬材中木聚糖能占到干重的 15 30%，軟材中一般占干重的 7%10% 。在某些一年生植物如小麥、甘蔗、棉子殼中，木聚糖含量非常高，一般含量能達(dá) 30%以上（ 1995）。 圖 1 1 所示是木聚糖的主要結(jié)構(gòu)特征（朱靜等， 1996）?？梢钥闯?，木聚糖的主鏈與纖維素很類(lèi)似，只是其單體為 D木糖而非 D葡萄糖。一般在 C2 、C 3 位上易乙?；?，葡糖醛酸1中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 綜述 殘基則以 O鍵連在 C2 位上，阿拉伯糖殘基多出現(xiàn)于 C2 、C 4 位上。這些側(cè)鏈類(lèi)型及雜合程度的不同直接影響木聚糖的溶解性、天然構(gòu)象及與其它結(jié)構(gòu)多糖分子的結(jié)合情況，因而也極大影響了木聚糖酶的作用方式及效率（et 1999；Li et ，2000）。 圖 1木聚糖的結(jié)構(gòu) 況 木聚糖酶是可將木聚糖降解成低聚糖和木糖的一類(lèi)酶的總稱(chēng)。由于木聚糖分子結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性，要將其完全水解需要多種酶的參與：如內(nèi)切 4作用于木聚糖主鏈，隨機(jī)的切開(kāi)木聚糖內(nèi)部的木糖苷鍵，將其分解為低聚糖；- 用于木寡糖的非還原性末端，釋放出木糖及木二糖。同時(shí)由于木聚糖多為異聚多糖，主鏈和側(cè)鏈上均有多種取代基團(tuán)，因此將它徹底水解還需要一些特異性酶的作用，如木聚糖側(cè)鏈的水解需要- 、- 乙酰木聚糖脂酶(阿魏酸酯酶( 多種水解酶的共同作用( 2004)。另外在海洋微生物中還存在一種 - 1， 3 ， 3 D ,1990）。圖 12 為不同木聚糖酶的作用位點(diǎn)。 自然界中多種生物可產(chǎn)木聚糖酶，包括細(xì)菌、真菌、放線菌、海藻、原生動(dòng)物、腹足動(dòng)物和人。重要的產(chǎn)木聚糖酶微生物包括：黑曲霉（、里氏木霉（淺青紫鏈霉菌（ 、糞肥桿菌( 簡(jiǎn)青霉( 。細(xì)菌與真菌所產(chǎn)的木聚糖在性質(zhì)上有一定的差異( 2002)。細(xì)菌所產(chǎn)的木聚糖酶具有較好的耐溫性和耐堿性，同時(shí)其所產(chǎn)的木聚糖酶的纖維素酶活性較低。例如: 產(chǎn)的一種木聚糖酶其最適 為 時(shí)在 仍具有 40%的活性( 1992)； 0，在 范圍內(nèi)2中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 綜述 都具有較高酶活性( 1992)； 含有木聚糖的培養(yǎng)基中木聚糖酶的表達(dá)量可達(dá)到 4049U/它的纖維素酶活性只有 (2000)。而真菌所產(chǎn)的木聚糖酶其產(chǎn)量一般較細(xì)菌的木聚糖酶高，在酸性條件下有較高的酶活性，耐受的 圍一般在 間，同時(shí)它的纖維素酶活性較高。例如 產(chǎn)木聚糖酶活性可達(dá) 1244 U/同時(shí)其纖維素酶活性也可達(dá) (1987)。除了不同的木聚糖酶以外，許多微生物還可以產(chǎn)生復(fù)合木聚糖酶，它們具有不同的物理化學(xué)性質(zhì)、結(jié)構(gòu)、比活性和產(chǎn)量；復(fù)合木聚糖酶的底物結(jié)合位點(diǎn)不同，對(duì)多糖骨架上連續(xù)的未取代木糖殘基的數(shù)目要求不同,同時(shí)又具有重復(fù)卻不相同的特性，從而提高了水解的效率并擴(kuò)大了水解范圍。例如產(chǎn) 15 種胞外的木聚糖水解酶，產(chǎn) 13 種木聚糖水解酶(1985)。造成木聚糖酶多型性的原因很多，或是由于蛋白酶的部分水解，或是由于不同程度的糖基化和酰胺化，或者它們根本就是不同基因的產(chǎn)物（朱靜等，1996）。 圖 12 不同木聚糖酶的作用位點(diǎn) 12. of by 木聚糖酶一般在木聚糖及木聚糖水解物的誘導(dǎo)下表達(dá)，而受到葡萄糖的抑制，但也有組成型表達(dá)的木聚糖酶。不同的誘導(dǎo)底物及培養(yǎng)基的組成成分都會(huì)影響到木聚糖酶的活力及其產(chǎn)物成分（劉超鋼等，1999；孫迅等，1999 ；洪楓等，1998 ；et 1986 ）。在研究 產(chǎn)酶情況時(shí)發(fā)現(xiàn)，如果用木聚糖作為唯一碳源，它們就會(huì)選擇性地只產(chǎn)生木聚糖3中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 綜述 酶，當(dāng)用纖維素作為碳源時(shí)，則更多地產(chǎn)纖維素酶。 同一種酶作用于不同的底物，得到的產(chǎn)物也 不同。如橄欖綠鏈霉菌（ 分子結(jié)構(gòu)域 聚糖酶在結(jié)構(gòu)和性質(zhì)上有很大的差別。木聚糖酶有的只含有單一區(qū)域即催化同木聚糖酶分子在其氨之為區(qū)域，即纖維素結(jié)合結(jié)構(gòu)域( 根據(jù)氨基生的木聚糖酶以玉米芯作為誘導(dǎo)底物時(shí)，得到的產(chǎn)物主要有阿拉伯木二糖，阿拉伯木三糖，阿拉伯木四糖（et 1990）。而用米糠作誘導(dǎo)底物時(shí)，得到的產(chǎn)物主要有阿拉伯木二糖，阿拉伯木三糖，葡糖醛酸木三糖和甲基葡糖醛酸木三糖（et 1990； et 1994； et 1994）。一些農(nóng)業(yè)副產(chǎn)物玉米芯、麥麩、米糠、秸桿、甘蔗渣等是很多微生物產(chǎn)酶的適宜底物，這為它們的工業(yè)應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。 酶不同微生物產(chǎn)生的木區(qū)，也有的同時(shí)具備催化區(qū)和多種非催化區(qū)。多區(qū)域木聚糖酶分子結(jié)構(gòu)中含有催化區(qū)（纖維素結(jié)合區(qū)（木聚糖結(jié)合區(qū)（錨定區(qū)（連接序列（、重復(fù)序列（、熱穩(wěn)定區(qū)（及其它未知功能的非催化區(qū)等，這些區(qū)域擔(dān)負(fù)著不同的生理功能。不同木聚糖酶所包含的區(qū)域差別較大，有的僅具有其中的一種或幾種，有的則包含以上所有區(qū)域（劉瑞田等，1998；et ,1991）。 木聚糖酶的催化區(qū)承擔(dān)著酶的水解功能，并作為該酶分類(lèi)的基礎(chǔ)。雖然不基酸組成的數(shù)目和種類(lèi)上相差很大，但它們的催化區(qū)在大小上比較一致，在催化區(qū)特定位置的谷氨酸和天冬氨酸對(duì)催化特性是非常關(guān)鍵的。同一族的木聚糖酶的催化結(jié)構(gòu)域具有序列同源性， 11 家族木聚糖酶分子有 40%90% 的相似性，而 11 家族和 10 家族之間木聚糖酶催化區(qū)的氨基酸序列和催化基團(tuán)的周?chē)蛄袩o(wú)有意義的同源性，這表明兩個(gè)家族在進(jìn)化上來(lái)源于不同的基因，并具有不同的折疊方式。有些木聚糖酶分子中含有兩個(gè) 琥珀酸纖維桿菌（6.4 B 兩個(gè)催化區(qū)域，兩區(qū)域有 同源性。 0 族木聚糖酶的催化區(qū)， 1 族木聚糖酶的催化區(qū)。對(duì)10 族和 11 族木聚糖酶催化區(qū)晶體結(jié)構(gòu)的分析表明，第 10 族木聚糖酶催化區(qū)形成（/）8桶狀結(jié)構(gòu)，而第 11 族木聚糖酶形成折疊結(jié)構(gòu)( 1999)。到目前為止，有六種以上第 10 族木聚糖酶的催化區(qū)取得了高清晰度的X 構(gòu)（et 2000；et 1997）。 木聚糖酶的底物結(jié)合區(qū)差異較大。一些木聚糖酶的底物結(jié)合區(qū)對(duì)木聚糖有特異性，所以又稱(chēng)木聚糖結(jié)合區(qū)（et 1999）。一般這些底物結(jié)合區(qū)并不影響酶的催化活性，但對(duì)不溶性底物有著特殊作用。如 的 ，它包含有催化區(qū)域及 天然狀態(tài)下，它既能分解可溶性木聚糖，也能分解不溶性木聚糖，而如果人工除去 就不能降解不溶性木聚糖，但不會(huì)影響對(duì)可溶性木聚糖的降解效率。所以 ui et 2000）。 在木聚糖酶分子中常含有一種獨(dú)立的無(wú)催化功能的酸序列的同源性，木聚糖酶及纖維素酶可分為 10 多種類(lèi)型的纖維素結(jié)合區(qū)，該區(qū)域可以和結(jié)晶纖維素結(jié)合，其主要特征是：( 1)在靠近端和端分別有一個(gè) 2)除 個(gè)很穩(wěn)定的 3)帶電氨基酸的含量低。將 間區(qū)域、連接序列一并4中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 綜述 除去，僅影響酶與纖維素的結(jié)合能力，但酶的底物特異