糧食檢驗(yàn)   儲(chǔ)糧真菌的檢測(cè)  標(biāo)準(zhǔn)編制說(shuō)明  國(guó)家糧食局標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量中心  國(guó)家糧食局科學(xué)研究院   2 / 7 糧食檢驗(yàn)  儲(chǔ)糧真菌的檢測(cè) 1. 工作概況  目背景和來(lái)源  我國(guó)是糧食儲(chǔ)備大國(guó)，儲(chǔ)備糧的安全是關(guān)系國(guó)計(jì)民生的頭等大事。 在儲(chǔ)糧過(guò)程中真菌的危害是造成糧食損失的一個(gè)主要原因。預(yù)防儲(chǔ)糧真菌危害最為有效的方法，就是早發(fā)現(xiàn)、早處理，將危害控制在萌芽狀態(tài)。 因此 ，儲(chǔ)糧真菌危害的早期檢測(cè)是解決這個(gè)問(wèn)題的關(guān)鍵，但目前這項(xiàng)技術(shù)仍是制約全球各國(guó)安全儲(chǔ)糧的一個(gè)瓶頸。近幾十年來(lái)，國(guó)內(nèi)外相 關(guān)研究有很多報(bào) 道 ，利用真菌某些特定的化學(xué)成分或代謝物質(zhì)檢測(cè)，進(jìn)行儲(chǔ)糧真菌危害的預(yù)報(bào)，是用的最多的一種方法 ， 如 細(xì)胞壁多糖、麥角甾醇、真菌酶類(lèi)及一些真菌揮發(fā)性物質(zhì)等的檢測(cè)。但這些成果多數(shù)仍處于研究階段，實(shí)際應(yīng)用較少。  項(xiàng)目承擔(dān)單位 對(duì)儲(chǔ)糧真菌危害早期檢測(cè)方法進(jìn)行了研究，并建立了一個(gè)儲(chǔ)糧真菌危害快速的早期檢測(cè)方法。 該 方法的特點(diǎn)是在傳統(tǒng)的細(xì)胞計(jì)數(shù)法基礎(chǔ)上， 通過(guò)對(duì)真菌孢子檢測(cè)濃度設(shè)限（ 105 個(gè) /g），消除了樣品自身攜帶真菌孢子的干擾，達(dá)到僅檢測(cè)在儲(chǔ)糧中生長(zhǎng)的危害真菌的目的。 方法 可用于檢測(cè)糧堆發(fā)熱之前真菌生長(zhǎng)變化 的情況。  本標(biāo)準(zhǔn)的研究工作經(jīng)歷 5年多的時(shí)間，包括三個(gè)階段的研究過(guò)程。首先 進(jìn)行方法條件優(yōu)化 ； 通過(guò) 12 家檢測(cè)單位進(jìn)行方法驗(yàn)證，最后通過(guò)了標(biāo)準(zhǔn)中心組織的方法比對(duì)試驗(yàn) 。  在上述幾個(gè)階段研究的基礎(chǔ)上，編制了 糧食檢驗(yàn)  儲(chǔ)糧真菌的檢測(cè) （征求意見(jiàn)稿）標(biāo)準(zhǔn)文本及其編制說(shuō)明 。   要工作過(guò)程  準(zhǔn)研究  本標(biāo)準(zhǔn) 歷經(jīng) 5 年多時(shí)間，研究工作共分三個(gè)階段 ， 首先進(jìn)行方法條件優(yōu)化；通過(guò)12家檢測(cè)單位進(jìn)行方法驗(yàn)證，最后通過(guò)了標(biāo)準(zhǔn)中心組織的方法比對(duì)試驗(yàn)。  第一階段的研究 ，主要是對(duì) 檢測(cè)方法進(jìn)行優(yōu)化 ， 通過(guò)不同 糧食樣 品的檢測(cè) ，對(duì)稱(chēng)樣量、振蕩時(shí)間、篩網(wǎng)孔徑等因素進(jìn)行優(yōu)化； 第二階段 研究 ， 主要開(kāi)展 多家單位的方法驗(yàn)證， 國(guó)家、省、直轄市八家檢測(cè)單位參加了驗(yàn)證工作，考察方法的再現(xiàn)性 。 第三階段研究 3 / 7 主要開(kāi)展 方法的比對(duì)試驗(yàn)，由標(biāo)準(zhǔn)中心組織， 9 家省糧油質(zhì)檢站技術(shù)骨干參加方法比對(duì)試驗(yàn)，反映 該方法與糧食微生物的相關(guān)性 。  準(zhǔn)制定  成立標(biāo)準(zhǔn)工作組；  編寫(xiě)標(biāo)準(zhǔn)討論稿；  編寫(xiě)標(biāo)準(zhǔn)征求意見(jiàn)稿和編制說(shuō)明，征求糧油標(biāo)委會(huì)全體委員及國(guó)家有關(guān)管理部門(mén)意見(jiàn)；  制原則   糧食檢驗(yàn)  儲(chǔ)糧真菌的檢測(cè) 是建立在科學(xué)研究基礎(chǔ)上，為 儲(chǔ)糧行業(yè)服務(wù)，切實(shí)保障我國(guó)儲(chǔ)備糧安全及企業(yè)經(jīng)濟(jì)利益的一項(xiàng)技術(shù)性標(biāo)準(zhǔn)。標(biāo)準(zhǔn)編制過(guò)程中主要遵循以下原則：  以大量的實(shí)驗(yàn)室及 基層檢測(cè)人員檢測(cè) 數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)，首次制定 糧食檢驗(yàn)  儲(chǔ)糧真菌的檢測(cè)  標(biāo)準(zhǔn)。  廣泛征求行業(yè)主管部門(mén)和儲(chǔ)藏安全評(píng)價(jià)技術(shù)專(zhuān)家的意見(jiàn)，并進(jìn)行修改完善。  文本編寫(xiě)按照   準(zhǔn)化工作導(dǎo)則   第 1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫(xiě)規(guī)則及  準(zhǔn)化工作導(dǎo)則   第 2 部分：標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)范性技術(shù)要素內(nèi)容的確定方法的要求進(jìn)行。  3 主要研究?jī)?nèi)容及試驗(yàn)結(jié)果綜述  要  本方法是在傳統(tǒng)的細(xì)胞計(jì)數(shù)法基礎(chǔ)上，經(jīng)改進(jìn)，建立的一種用于儲(chǔ)糧真菌危害早期快速檢測(cè)的新方法。本方法特點(diǎn)是，對(duì)樣品真菌孢子提取濃度設(shè)在 105個(gè) /消除了樣品中攜帶真菌孢子的干擾，達(dá)到對(duì)儲(chǔ)糧危害真菌快速檢測(cè)的目的。  究?jī)?nèi)容  取 條件優(yōu)化   4 / 7 1） 稱(chēng)樣量   稱(chēng)取同一被感染小麥樣品 行樣品量對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響的試驗(yàn)。研究結(jié)果表明，在本試驗(yàn)條件下，稱(chēng)樣量對(duì)測(cè)試結(jié)果無(wú)明顯的影響。本方法稱(chēng)樣量定為  2） 提取時(shí)間   稱(chēng)取同一被感染的小麥樣品 擇 個(gè)梯度，進(jìn)行提取條件的優(yōu)化，結(jié)果表明，提取時(shí)間對(duì)樣品危害真菌孢子計(jì)數(shù)無(wú)明顯的影響，本方法提取時(shí)間定為 1 3） 過(guò)濾孔徑   選擇 60、 100、 200、 300、 400、 500 目濾布，進(jìn)行不同濾布孔徑過(guò)濾，對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響試驗(yàn)。結(jié)果表明，采用不同孔徑濾布過(guò)濾對(duì)最終檢測(cè)結(jié)果無(wú)明顯的影響，但對(duì)觀察的顯微鏡視野有顯著的影響，在本方法中推薦濾介質(zhì)孔徑為 300目。  復(fù)性  選擇了三個(gè)不同感染水平的小麥和稻谷樣品，進(jìn)行方法的重復(fù)性試驗(yàn)（ n=8）， 結(jié)果見(jiàn)表 1。  表 1 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)（ n = 8）  樣品  真菌孢子數(shù) /105 個(gè) /g 小麥  稻谷  1        6.0 x  由 上 表可知，三個(gè)感染水平的小麥和稻谷樣品，八次重復(fù)，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（ 變化在   這一結(jié)果對(duì)于微生物常規(guī)檢驗(yàn)，誤差處于一個(gè)較低的水平。由此可看出，本方法具有 較 好的重復(fù)性。  法驗(yàn)證  選擇了 8家省級(jí)糧油質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站（北京、天津、山東、江蘇、浙江、江西、湖北、安徽）和 4家相關(guān)分析檢測(cè)中心，按危害真菌孢子計(jì)數(shù)方法，對(duì)四個(gè)不同感染水平的小麥、稻谷、玉米、大豆樣品進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表 2   5 / 7 表 2 再現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)（ n=12）  檢測(cè)單位       糧種  真菌孢子數(shù) /105 個(gè) /g 小麥  稻谷  玉米  大豆  1         0 1 2 .3 x  D 表 2可知，小麥、稻谷、玉米、大豆四個(gè)樣品，每個(gè)樣品經(jīng) 12家相關(guān)檢測(cè)單位，測(cè)定三個(gè)平行樣品取其平均值，檢測(cè)結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（ 變化在 這一結(jié)果對(duì)于微生物常規(guī)檢驗(yàn)，誤差處于一個(gè)較低的水平。由此可看出，本方法具有較好的再現(xiàn)性。  平板菌落計(jì)數(shù)法比較  根據(jù)儲(chǔ)糧安全水分項(xiàng)目研究需要，國(guó)家糧食局糧油標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量中心主持，由國(guó)家糧食局科學(xué)研究院和 9個(gè)省級(jí)糧油檢測(cè)站（中心）參加，對(duì)危害真菌孢子計(jì)數(shù)法 與經(jīng)典平板菌落計(jì)數(shù)法 進(jìn)行 了 2 次比對(duì)試驗(yàn) ，屆時(shí)三個(gè)多月 ， 危害真菌孢子計(jì) 數(shù)法驗(yàn)證結(jié)果及與經(jīng)典 平板菌落計(jì)數(shù)法結(jié)果進(jìn)行線性分析，結(jié)果見(jiàn)下圖。   6 / 7 0 100000 200000 300000 400000 500000 6000000500000010000000150000002000000025000000Y =34  5 1 5 X+23 5 2 2 9 0R = 5 5從圖可看出，兩種方法檢測(cè)結(jié)果具有良好的一致性。  根據(jù) 大量研究和 相關(guān)研究報(bào)導(dǎo)，對(duì)本方法進(jìn)行儲(chǔ)糧真菌危害早期檢測(cè)，提出一個(gè)初步的判定方法。詳見(jiàn)表 3。  表 3 儲(chǔ)糧真菌危害檢測(cè)判定方法  級(jí)別  危害真菌孢子數(shù) /個(gè) /g 安全性評(píng)價(jià)  主要危害真菌    未檢出  安全  未出現(xiàn)危害真菌生長(zhǎng)    105 105 臨界  （關(guān)鍵控 制區(qū)）  以灰綠曲霉為主，后期，會(huì)出現(xiàn)少量白曲霉等的生長(zhǎng)。    106 106 危害  灰綠曲霉生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)逐漸被白曲霉替代，并會(huì)出現(xiàn)少量其它真菌的生長(zhǎng)。     107 嚴(yán)重危害  以白曲霉為主，后期會(huì)出現(xiàn)一些黃曲霉、青霉等危害真菌的生長(zhǎng)。  在本判定方法中，初步將儲(chǔ)糧真菌的危害劃分為級(jí)，級(jí)為安全儲(chǔ)藏，危害真菌孢子計(jì)數(shù)為未檢出（檢出限為 105個(gè) /g）。級(jí)為危害真菌生長(zhǎng)初期，主要生長(zhǎng)的真菌為灰綠曲霉，后期會(huì)出現(xiàn)少量的白曲霉等其它真菌。在這時(shí)期真菌對(duì)儲(chǔ)糧品質(zhì)危害較小，用常規(guī)測(cè) 溫設(shè)備一般不會(huì)檢出糧堆中發(fā)熱現(xiàn)象。但它將預(yù)示著在未來(lái)一段時(shí)間內(nèi)糧堆有可能出現(xiàn)發(fā)熱、發(fā)霉現(xiàn)象。級(jí)危害真菌的生長(zhǎng)進(jìn)入了中期，灰綠曲霉生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)逐漸被白曲霉所替代，還有一些其它真菌也開(kāi)始生長(zhǎng)，在這時(shí)期對(duì)儲(chǔ)糧的品質(zhì)會(huì)造成一定的影響，糧堆中有可能會(huì)出現(xiàn)小范圍的發(fā)熱和發(fā)霉現(xiàn)象。級(jí)主要以一些發(fā)熱真菌生長(zhǎng)為主，這時(shí)糧堆中會(huì)出現(xiàn)較大范圍的發(fā)熱、發(fā)霉現(xiàn)象。會(huì)對(duì)儲(chǔ)糧造成嚴(yán)重的危害，后期還有可能產(chǎn)生真菌毒素。上述所描述的是儲(chǔ)糧危害真菌生長(zhǎng)的一般規(guī)律，不同糧種危害真菌生長(zhǎng)變化存在著一定的差異。在儲(chǔ)糧過(guò)程中這些真菌危害的程度和發(fā)展進(jìn) 程主要 7 / 7 取決于糧堆中糧食的水分和環(huán)境溫度的變化。采用本方法，通過(guò)定期檢測(cè)糧堆中危害真菌的生長(zhǎng)變化，可進(jìn)行儲(chǔ)糧真菌危害的預(yù)測(cè)。  4 技術(shù)經(jīng)濟(jì)論證結(jié)論，預(yù)期的經(jīng)濟(jì)效益  本標(biāo)準(zhǔn)從真菌孢子的角度對(duì)糧食的真菌危害進(jìn)行分析，填補(bǔ)了我國(guó)儲(chǔ)糧危害真菌早期檢測(cè)技術(shù)的空白，為深化糧食質(zhì)量安全的研究奠定基礎(chǔ)條件。項(xiàng)目的研究成果為全社會(huì)共享，將用于我國(guó)儲(chǔ)備糧的質(zhì)量監(jiān)控，有助于實(shí)現(xiàn)糧食質(zhì)量的快