湖 南 省 食 品 安 全 地 方 標(biāo) 準(zhǔn) 3/005 2013 水產(chǎn)品中 氧氟沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星和恩諾沙星 殘留 量 測(cè)定 高效液相色譜法 2013布 2013施 湖南省 衛(wèi)生廳 發(fā)布 3/ 005 2013 I 前言 本標(biāo)準(zhǔn) 首次發(fā)布。3/ 005 2013 1 水產(chǎn)品 中 氧氟沙星、諾氟沙星 、環(huán)丙沙星和 恩諾沙星 殘留 量 測(cè)定 高效 液相色譜法 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了 新鮮及冷凍 水產(chǎn)品 中 氧氟沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星和 恩諾沙星 殘留 量 的 高效 液相色譜測(cè)定方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于 新鮮及冷凍 水產(chǎn)品 可食部分 氧氟沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星和恩諾沙星 殘留 量 的 測(cè)定 。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件 對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的 引用文件，其最新版本 （包括所有的修改單） 適用于本 文件 。 3 方法提要 采用 酸性 水 溶液 提取 試樣中 待測(cè)物 ， 經(jīng) 固相萃取 柱凈化 ， 用 帶熒光檢測(cè)器的高效液相色譜儀 測(cè)定 ，外 標(biāo)法定量。 4 試劑和材料 除另有說(shuō)明外，所用試劑均為分析純， 實(shí)驗(yàn)用 水為 符合 6682規(guī)定的 一 級(jí)水 。 腈 :色譜 純 。 醇 :色譜 純 。 酸：優(yōu)級(jí)純 。 四丁基溴化銨。 7 四丁基溴化 銨 （ 稱取 ，溶解 于 1 用 適量 磷酸調(diào) 。 5%甲醇水溶液： 取 水稀釋到 100 流動(dòng)相：乙腈 +四丁基溴化 銨 溶液（ 7 , = 6+94 (V+V)。 標(biāo)準(zhǔn) 物質(zhì)： 氧氟沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星 ， 純度 均 高 于 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 ： 分別 稱取 確到 氧氟沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星 標(biāo)準(zhǔn) 物質(zhì) ， 用 乙腈 溶解， 定容 至 100 配制成濃度為 100 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。 4 冰箱中 冷藏 避光保存 ，保存期 不超過(guò) 3個(gè)月 。 混合標(biāo)準(zhǔn)中間液：準(zhǔn)確移取適量各標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液， 用乙腈稀釋，配制成濃度為 1 的混 合標(biāo)準(zhǔn)中間液。 4 冰箱中 冷藏 避光 保存 ，保存期 不超過(guò) 一周 。 標(biāo)準(zhǔn) 工作 溶 液 ：準(zhǔn)確移取適量 的 混合標(biāo)準(zhǔn)中間液 ， 用流動(dòng)相 稀釋 ,配制 成 2 g/L、 5 g/L、 25 g/L、50 g/L、 500 g/準(zhǔn) 工作 溶 液 。 臨用前配制。 微孔濾膜： m ，有機(jī)相型。 ： 60 或者 性能 相當(dāng)者 。 注： 出這一信息是為了方便本標(biāo)準(zhǔn)的使用者，并不涉及商業(yè)目的。鼓勵(lì)標(biāo)準(zhǔn)使用者嘗試不同 廠家或型號(hào)的固相萃取小柱。 5 儀器和設(shè)備 005 2013 2 效液相色譜儀 ，帶熒光檢測(cè)器 。 析天平 ： 感量 g。 渦混勻器。 心機(jī) : 5 000 r/ 水浴超聲器 。 氮吹儀。 離心管： 50 玻璃試管： 5 固相萃取裝置 。 6 分析 測(cè)定 品制備 冷凍樣品在進(jìn)行制備前，需拿出在常溫下回溫散凍。然后按照以下處理方法進(jìn)行樣品制備。 所有樣品只取可食部分。 魚：去鱗、去皮，沿脊背取肌肉；蝦 、蟹類 ：去頭、去殼、去腸線，取肌肉部分。樣品切成不大于0.5 0.5 置于研磨機(jī)中研磨均勻 。 在制樣的操作過(guò)程中，應(yīng)防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化。制備好的樣品置于 保存。 提取 準(zhǔn)確稱取 樣品 (5g,置于 50 中 , 加入 8.0 溶液 (7 , 渦旋混合 1 超聲提取 20 再以 5 000 r/0 集全部 上清液 于另一只干凈的離心管中。將殘?jiān)貜?fù)上述步驟提取一次 。合并上清液 ， 用四丁基溴化銨溶液 (7 , 以 5 000 r/0 上清液待用 。 化 固相萃取柱 依次用 3 3 溶液 （ 7 , 活化 后 ， 準(zhǔn)確移取上述上清液 2.0 再 依次用 3 溶液 （ 7 , 2 醇水淋洗 ，抽干 。最后用 3集洗脫液于 小 玻璃試管中， 45 下氮?dú)?吹干。用 1.0 渦旋混勻 后 ,經(jīng) 微孔濾膜過(guò)濾后 作為試樣溶液 ，供高效液相色譜分析。 高效液相色譜 測(cè)定 參考 色譜條件 色譜柱： 3柱 (150 4.6 粒徑 5m) ，或 其它等效柱 。 流動(dòng)相： 乙腈 +四丁基溴化 銨 溶液（ 7 , = 6+94（ v+v）。 流速： 1 mL/ 進(jìn)樣量： 20 L。 柱溫： 40 。 檢測(cè)波長(zhǎng)： 氧氟沙星 83 490 其余 ： 80 450 定 取適量 樣品 溶液和標(biāo)準(zhǔn) 工作溶液 或空白樣品添加標(biāo)準(zhǔn)工作溶液 ， 按 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液或空白樣品添加標(biāo)準(zhǔn)工作溶液 作單點(diǎn)或者多點(diǎn)校準(zhǔn) ， 并用 色譜圖峰面積積分值定量 ，外標(biāo)法測(cè)定 。 樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中各化合物的響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍內(nèi)。在上述色譜條件下， 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中各化合物的 液相色譜圖 參 見(jiàn)附錄 空白樣品添加標(biāo)準(zhǔn)物的液相色譜 圖 參見(jiàn)附錄 3/ 005 2013 3 白試驗(yàn) 除不加 樣品 外， 均按照測(cè)定步驟 進(jìn)行 平行實(shí)驗(yàn) 。 7 結(jié)果計(jì)算 和表述 樣品 中 氧氟沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星 或 恩諾沙星 的含量由色譜數(shù)據(jù)處理軟件或按下式計(jì)算獲得： 1 V 樣品中 氧氟沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星或恩諾沙星 的含量 （ g/ A 樣品 中 相應(yīng)藥物 的峰面積； 標(biāo)準(zhǔn)工作 溶 液中 相應(yīng)藥物 的峰面積； 標(biāo)準(zhǔn)工作 溶 液中 相應(yīng)藥物 的濃度（ ng/ 提取樣品所用提取液的總體積（ 固相萃取凈化上樣的體積（ 過(guò)柱后定容所用流動(dòng)相 體積（ m 供試樣品 的 質(zhì)量 （ g） 。 測(cè)定結(jié)果用兩次平 行測(cè)定的算術(shù)平均值 表示 ，保留三位有效數(shù)字。 8 方法線性范圍、靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度 線性范圍 各化合物混合 標(biāo)準(zhǔn)工作 溶 液 的 線性范圍為 2 g/L500 g/L。 靈敏度 本方法各化合物 的定量 下 限 均為 4 g/ 準(zhǔn)確度 本方法在 4 g/10 g/100 g/1000 g/ 個(gè) 添加濃度的回收率 如下 ： 諾氟沙星 環(huán)丙沙星 恩諾沙星 重復(fù)性 本方法 的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 15%。 005 2013 4 附錄 A (資料性附錄 ) 高效液相 色譜圖 0 02 0 4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0 1 4 0 分鐘0 2 4 6