1、基因組文庫和cDNA文庫的比較01基因組文庫02cDNA文庫03兩者比較基因組文庫基因組文庫u概念u文庫構建（原核）u文庫構建（真核） 01 概念基因組文庫：某種生物基因組的全部遺傳信息通過克隆載體貯存在一個受體菌的群體中，這個受體菌群體就是該種生物的基因組文庫。公式:N=ln（1-P）/ln（1-f）,實際克隆子數(shù)應為2N3N或更大。 01 文庫構建（原核）物理學方法：機械類或超聲波等物理學方法：機械類或超聲波等生物化學方法：限制酶部分切割生物化學方法：限制酶部分切割制備基因組制備基因組DNA并片段化并片段化重組重組DNA導入受體菌細胞并擴增導入受體菌細胞并擴增DNA片段與載體重組連接片段與

2、載體重組連接篩選鑒定基因組文庫篩選鑒定基因組文庫原核生物基因組較小，一般采用質粒載體原核生物基因組較小，一般采用質粒載體或或載體。載體。 01 文庫構建（真核）a.構建 噬菌體型基因組文庫真核生物和原核生物基因組真核生物和原核生物基因組文庫構建的原理和過程基本文庫構建的原理和過程基本相似，方法有異（原核采用相似，方法有異（原核采用質粒載體或質粒載體或載體）。下面載體）。下面介紹三種方法：介紹三種方法： 01 文庫構建（真核）b.構建 Cosmid基因組文庫由于篩選困難、重組效率低、文由于篩選困難、重組效率低、文庫不易貯存，庫不易貯存，CosmidCosmid使用不如使用不如噬菌體載體普遍。噬菌

3、體載體普遍。 01 文庫構建（真核）c.構建酵母人工染色體型基因組文庫酵母人工染色體酵母人工染色體基因組文庫基因組文庫u概念u文庫制備 02 概念cDNA文庫：以mRNA為模板，經反轉錄酶催化，在體外反轉錄成cDNA，與適當?shù)妮d體連接后轉化受體菌，則每個細菌含有一段cDNA，并能繁殖擴增，這樣包含著細胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合稱為該組織細胞的cDNA文庫。公式:N=ln（1-P）/ln（1-f） 02 文庫構建l細胞總RNA的制備及mRNA的分離 包括mRNA、tRNA、rRNAlcDNA第一條鏈的合成 oligo引導合成法、隨機引物引導合成法l雙鏈cDNA的合成 四種常用方法lcD

4、NA與載體的連接和噬菌體顆粒的包裝及轉染或質粒的轉化 02 文庫構建引導合成第一鏈引導合成第一鏈oligo 02 文庫構建雙鏈雙鏈 合成方法合成方法DNA 02 文庫構建大腸桿菌大腸桿菌 酶降解取代法酶降解取代法RNaseH 02 文庫構建寡聚引物引導法寡聚引物引導法Oligo 02 文庫構建PCR法法比較比較u cDNA文庫優(yōu)點u 基因組文庫優(yōu)點 03 cDNA文庫優(yōu)點真核生物克隆序列直接應用于基因工程，基因組文庫不能。以mRNA為原料，研究RNA病毒的基因組結構和基因克隆分離。復雜性低、篩選簡易。其克隆子數(shù)為基因組文庫的十分之一。假陽性概率低?；蚪M克隆子復雜，假陽性概率高。 03 基因組文庫優(yōu)點基因組文庫含有全部基因，cDNA文庫只含有全部蛋白質編碼的結構基因且受材料影響 cDNA文庫能反映mRNA信息，但不能直接獲得基因的內含子序列和基因編碼區(qū)外大量的調控序列信息。需要基因組文庫。cDNA文庫中，高豐度mRN