1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上XXXXXXXXXXX有限公司膠囊用明膠微生物限度檢查方法適用性試驗(yàn)方案 文件編號(hào)：YZF-QC-001-01起草人： （QC） 年 月 日審核人： （QA） 年 月 日批準(zhǔn)人： （質(zhì)量負(fù)責(zé)人） 年 月 日目 錄.驗(yàn)證目的.驗(yàn)證原理.驗(yàn)證人員.相關(guān)文件.驗(yàn)證內(nèi)容.驗(yàn)證周期7.驗(yàn)證綜合結(jié)論1. 驗(yàn)證目的 建立微生物限度檢查方法適用性試驗(yàn)驗(yàn)證，通過驗(yàn)證確認(rèn)檢測(cè)所采用的方法適合于本公司所用原料膠囊用明膠的微生物限度的測(cè)定。2. 驗(yàn)證原理 通過試驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果，比較實(shí)驗(yàn)組中試驗(yàn)菌的恢復(fù)生長(zhǎng)結(jié)果來評(píng)價(jià)整個(gè)驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確性、有效性和重現(xiàn)性。3. 驗(yàn)證人員職位姓名負(fù)責(zé)內(nèi)容QC檢驗(yàn)員負(fù)責(zé)

2、驗(yàn)證方案的起草和實(shí)施，并對(duì)所測(cè)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性負(fù)責(zé)。QC負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的審核及按照規(guī)定的取樣計(jì)劃對(duì)標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)操作程序的準(zhǔn)確執(zhí)行，負(fù)責(zé)組織實(shí)施。QA負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)驗(yàn)證實(shí)施過程中的監(jiān)督檢查，取樣，確保結(jié)果的可靠性。審核人負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案及報(bào)告的審核和批準(zhǔn)。4. 相關(guān)文件 中國(guó)藥典2015版四部通則1105、通則11065. 驗(yàn)證內(nèi)容 通過驗(yàn)證以確認(rèn)所采用的方法適合于該產(chǎn)品需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)的測(cè)定；確認(rèn)所采用的方法適合于該產(chǎn)品控制菌的檢查。根據(jù)樣品特性制訂檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)條件，按制定的方法進(jìn)行試驗(yàn)，根據(jù)驗(yàn)證結(jié)果判斷是否符合驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)。若符合，就按驗(yàn)證的方法和條件進(jìn)行藥品的微生物限度檢查；若不符合，重新建立

3、制訂檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)條件，再進(jìn)行驗(yàn)證，直至驗(yàn)證結(jié)果符合設(shè)立的驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)。5.1微生物計(jì)數(shù)法驗(yàn)證 當(dāng)建立產(chǎn)品的微生物限度檢查時(shí)，應(yīng)進(jìn)行需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)的驗(yàn)證，以確認(rèn)所采用的方法適合于該藥品的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)的測(cè)定。驗(yàn)證試驗(yàn)可與供試品的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)同時(shí)進(jìn)行。5.1.1驗(yàn)證用菌種 枯草芽孢桿菌CMCC（B）63501（第一代） 金黃色葡萄球菌CMCC（B）26003（第一代） 銅綠假單胞菌CMCC（B）44102（第一代） 白色念珠菌CMCC（F）98001（第一代） 黑曲霉CMCC（F）98003（第一代）5.1.2驗(yàn)證依據(jù)：中國(guó)藥典2015版四部5.1

4、.3驗(yàn)證步驟5.1.3.1菌液制備5.1.3.1.1分別接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，經(jīng)3035培養(yǎng)1824小時(shí)后，分別取金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌的肉湯培養(yǎng)物0.9%無菌氯化鈉溶液1ml+9ml 0.9%無菌氯化鈉溶液，10倍稀釋至10-610-7，細(xì)菌數(shù)為不大于100cuf/ml，做活菌計(jì)數(shù)備用。5.1.3.1.2接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中，經(jīng)2025培養(yǎng)2到3天后，取12環(huán)白色念珠菌斜面培養(yǎng)物加入9ml 0.9%無菌氯化鈉溶液，10倍稀釋至10-410-7，菌液為不大于100 cfu/ml，做活菌

5、計(jì)數(shù)備用。5.1.3.1.3接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中，經(jīng)2025培養(yǎng)57天后，取黑曲霉斜面培養(yǎng)物，加35ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液將孢子洗脫，吸出孢子懸液1ml+9ml 0.9%無菌氯化鈉溶液，10倍稀釋至10-4，菌液為不大于100cuf/ml，做活菌計(jì)數(shù)備用。5.1.3.2 陰性對(duì)照 為確認(rèn)試驗(yàn)條件是否符合要求，應(yīng)進(jìn)行陰性對(duì)照試驗(yàn)。5.1.3.3 計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn) 5.1.3.3.1供試液制備 取供試品10g，加45 PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，振搖，放置45水浴保溫使其完全溶解，搖勻，作為1:10供試液，

6、備用。 5.1.3.3.2試驗(yàn)組： 取1:10的供試液加入試驗(yàn)菌，使1ml供試液中含菌量不大于100cfu。注入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，按平皿法測(cè)定其菌數(shù)。 5.1.3.3.3菌液組： 取不含中和劑及滅活劑的相應(yīng)稀釋液替代供試液同試驗(yàn)組操作。測(cè)定所加的試驗(yàn)菌數(shù)。 5.1.3.3.4供試品對(duì)照組：取制備好的供試液。以稀釋液替代菌液同試驗(yàn)組操作。按菌落計(jì)數(shù)方法測(cè)定供試品本底菌數(shù)。 5.1.3.3.4陰性對(duì)照組： 取0.9%無菌氯化鈉溶液，空白對(duì)照。5.1.4結(jié)果至少應(yīng)進(jìn)行3次獨(dú)立試驗(yàn)。若試驗(yàn)組的菌回收率均0.52，則照該供試液制備方法和計(jì)數(shù)法測(cè)定供試品的需氧菌總數(shù)、

7、霉菌和酵母菌總數(shù)；若任一次試驗(yàn)中試驗(yàn)組的菌回收率不在范圍內(nèi)，應(yīng)采用自然沉降法、培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀集菌法、薄膜過濾法、中和法等方法或聯(lián)合使用這些方法消除供試品的抑菌活性，并重新進(jìn)行方法驗(yàn)證，使試驗(yàn)組菌回收率在規(guī)定范圍內(nèi)。5.1.4.1試驗(yàn)組的菌回收率=(試驗(yàn)組平均菌落數(shù)-供試品對(duì)照組平均菌落數(shù))/菌數(shù)組平均菌落數(shù)5.1.4.2連續(xù)3批驗(yàn)證的菌落計(jì)數(shù)結(jié)果 5.1.4.2.1規(guī)格：0#藍(lán)白 批號(hào)： 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果（常規(guī)法） 單位（cuf/ml）技術(shù)方法試驗(yàn)菌株菌濃度（ml）試驗(yàn)次數(shù)菌液組供試品對(duì)照組實(shí)驗(yàn)組回收率實(shí)際回收率理論需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)大腸埃希菌10-610.5210-620.5210-630.

8、52金黃色葡萄球菌10-610.5210-620.5210-630.52枯草芽孢桿菌10-610.5210-620.5210-630.52白色念珠菌10-510.5210-520.5210-530.52黑曲霉10-510.5210-520.5210-530.52霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)白色念珠菌10-510.5210-520.5210-530.52黑曲霉10-510.5210-520.5210-530.52 檢驗(yàn)人： 復(fù)核人： 日期： 年 月 日 5.1.4.2.2規(guī)格：0#藍(lán)白 批號(hào)： 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果（常規(guī)法） 單位（cuf/ml）技術(shù)方法試驗(yàn)菌株菌濃度（ml）試驗(yàn)次數(shù)菌液組供試品對(duì)照組實(shí)驗(yàn)組回收

9、率實(shí)際回收率理論需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)大腸埃希菌10-610.5210-620.5210-630.52金黃色葡萄球菌10-610.5210-620.5210-630.52枯草芽孢桿菌10-610.5210-620.5210-630.52白色念珠菌10-510.5210-520.5210-530.52黑曲霉10-510.5210-520.5210-530.52霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)白色念珠菌10-510.5210-520.5210-530.52黑曲霉10-510.5210-520.5210-530.52 檢驗(yàn)人： 復(fù)核人： 日期： 年 月 日 5.1.4.2.3規(guī)格：0#藍(lán)白 批號(hào)： 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果（常規(guī)法

10、） 單位（cuf/ml）技術(shù)方法試驗(yàn)菌株菌濃度（ml）試驗(yàn)次數(shù)菌液組供試品對(duì)照組實(shí)驗(yàn)組回收率實(shí)際回收率理論需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)大腸埃希菌10-610.5210-620.5210-630.52金黃色葡萄球菌10-610.5210-620.5210-630.52枯草芽孢桿菌10-610.5210-620.5210-630.52白色念珠菌10-510.5210-520.5210-530.52黑曲霉10-510.5210-520.5210-530.52霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)白色念珠菌10-510.5210-520.5210-530.52黑曲霉10-510.5210-520.5210-530.52 檢驗(yàn)人： 復(fù)

11、核人： 日期： 年 月 日 5.1.5 結(jié)論 5.2控制菌檢查法的驗(yàn)證 當(dāng)建立產(chǎn)品的微生物限度檢查時(shí)，應(yīng)進(jìn)行控制菌檢查法的驗(yàn)證，以確認(rèn)所采用的方法適合于該產(chǎn)品的的控制菌檢查方法測(cè)定。若產(chǎn)品的組分或原檢驗(yàn)條件發(fā)生改變可能影響檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)，檢驗(yàn)方法應(yīng)進(jìn)行重新驗(yàn)證。驗(yàn)證試驗(yàn)也可與供試品的控制菌檢查同時(shí)進(jìn)行。5.2.1驗(yàn)證用菌種 大腸埃希菌CMCC（B）44102（第一代） 乙型付傷寒沙門菌CMCC（B）50094（第一代）5.2.2驗(yàn)證依據(jù)：中國(guó)藥典2015年版四部5.2.3 大腸埃希菌、沙門菌檢查法 5.2.3.1菌液制備 分別接種大腸埃希菌、乙型付傷寒沙門菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，經(jīng)

12、3035培養(yǎng)1824小時(shí)后，分別取大腸埃希菌、乙型付傷寒沙門菌的肉湯培養(yǎng)物1ml+9ml 0.9%無菌氯化鈉溶液，10倍稀釋至10-610-7，細(xì)菌數(shù)為10100cuf/ml，做活菌計(jì)數(shù)備用。 5.2.3.2 陰性對(duì)照 為確認(rèn)試驗(yàn)條件是否符合要求，應(yīng)進(jìn)行陰性對(duì)照試驗(yàn)。5.2.3.3 控制菌檢查方法適用性試驗(yàn)5.2.3.3.1 供試液制備：同需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證。5.2.3.2.2大腸埃希菌5.2.3.2.2.1試驗(yàn)組 取供試品10ml及不大于100cuf/ml大腸埃希菌接種至100ml的增菌培養(yǎng)基中，依相應(yīng)大腸埃希菌檢查法進(jìn)行檢查。5.2.3.2.2.2 陰性對(duì)照組 取PH

13、7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液10ml加至100ml的增菌培養(yǎng)基中，依相應(yīng)大腸埃希菌檢查法進(jìn)行檢查。5.2.3.2.2.3陽(yáng)性對(duì)照組 取不大于100cuf/ml大腸埃希菌1ml接種至100ml的增菌培養(yǎng)基中，依相應(yīng)大腸埃希菌檢查法進(jìn)行檢查。5.2.3.2.3沙門氏菌5.2.3.2.3.1試驗(yàn)組 取供試品10g及不大于100cuf/ml乙型副傷寒沙門菌接種至200ml的增菌培養(yǎng)基中，依相應(yīng)沙門菌檢查法進(jìn)行檢查。5.2.3.2.3.3陰性對(duì)照組 取PH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液10ml加至200ml的增菌培養(yǎng)基中，依相應(yīng)沙門氏菌檢查法進(jìn)行檢查。5.2.3.2.3.4陽(yáng)性對(duì)照組 取不大于cuf/m乙型副傷寒沙門菌1ml接種至200ml的增菌培養(yǎng)基中，依相應(yīng)沙門菌檢查法進(jìn)行檢查。5.2.3.2.4 結(jié)果 至少應(yīng)進(jìn)行3次獨(dú)立試驗(yàn)。陽(yáng)性對(duì)照組應(yīng)檢出試驗(yàn)菌，陰性對(duì)照組應(yīng)無菌生長(zhǎng)。若試驗(yàn)組檢出試驗(yàn)菌，照該供試液制備方法和控制菌檢查法進(jìn)行該供試品控制菌的檢查；若試驗(yàn)組未檢出試驗(yàn)菌，應(yīng)采用自然沉降法、培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀集菌法、薄膜過濾法、中和法等方法或聯(lián)合使用這些方法消除供試品的抑菌活性，并重新進(jìn)行方法驗(yàn)證。5.2.3.2.4.1驗(yàn)證連續(xù)三批的觀察結(jié)果 5.2.3.2.4.1.1大腸埃希菌驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果供試品規(guī)格批號(hào)項(xiàng)目試驗(yàn)組陰性對(duì)照組陽(yáng)性對(duì)照組