1、美天旎公司MACS(磁珠分選)相關(guān)產(chǎn)品一、MACS微珠(MicroBeads)MACS微珠是一種與高度特異性單克隆抗體相偶聯(lián)的超順磁化微粒，用于目的細(xì)胞或者去除細(xì)胞的磁性標(biāo)記。微珠直彳5約有50nm，比細(xì)胞小200多倍，體積為細(xì)胞的百萬分之一，光學(xué)顯微鏡下不可見。微珠由多聚糖和氧化鐵組成，無毒性，對細(xì)胞無損傷，可以生物降解。MACS微珠與流式細(xì)胞儀兼容，不會(huì)影響細(xì)胞的光散射特性；磁性標(biāo)記只占用2030%的結(jié)合位點(diǎn)，不影響細(xì)胞的熒光抗體標(biāo)記。此外，MACS微珠可以最大限度地避免細(xì)胞活化；無需解離磁珠，可以直接進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)：如流式細(xì)胞儀分析或分選、細(xì)胞培養(yǎng)、分子生物學(xué)研究、回輸給人或者動(dòng)物。MAC

2、S微珠主要有三種：直標(biāo)微珠、間標(biāo)微珠、多選微珠。其中間標(biāo)微珠有抗免疫球蛋白微珠、抗生物素微珠或鏈霉親和素微珠、抗熒光素微珠。多選微珠是專門為分選細(xì)胞亞群而研制的一種微珠。這種微珠通過特殊的方式與抗體偶聯(lián)，在第一次陽性分選完成后，與細(xì)胞結(jié)合的多選微珠可以被解離試劑剪切下來，陽性分選的細(xì)胞可以進(jìn)行再次陽性分選或者去除分選。MACS技術(shù)分選的CD8陽性T細(xì)胞(箭頭所示為磁性結(jié)合在細(xì)胞表面的微珠)二、MACS分選柱(SeparationColumn)MACS分選柱是一類填充有不同規(guī)格鐵珠的塑料容器，鐵珠表面有親水包被，因此不會(huì)損傷細(xì)胞。在磁場外MACS分選柱不帶有磁性，但是當(dāng)置于一個(gè)永久性磁場一MAC

3、S分選器中時(shí)，分選柱內(nèi)的鐵珠可以使分選器的磁場增弓H1000倍，足以滯留僅標(biāo)記有極少量微珠的目的細(xì)胞；磁性標(biāo)記細(xì)胞從分選柱中通過時(shí)可以受到均勻的磁力作用，從而提高分選純度和回收率。手動(dòng)操作在30分鐘內(nèi)可完成，自動(dòng)分選僅需2.5-10分鐘，得到的細(xì)胞可立即用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。此外，大多數(shù)MACS分選柱都是無菌包裝，一次性使用，可以滿足細(xì)胞培養(yǎng)所需的無菌條件。MSLSXSLargeCellairtoMACSCSDLD卬M三、MACS分選器(MACSSeparators)MACS分選器由永久性磁鐵和支架構(gòu)成。與分選柱一起組成高強(qiáng)度的梯度磁場。根據(jù)應(yīng)用范圍分為研究用和臨床應(yīng)用的MACS分選器，根據(jù)操作方式分

4、為手動(dòng)和自動(dòng)分選器。1、MiniMACS分選器和OctoMACS分選器MiniMACS分選器是專為手動(dòng)分選動(dòng)、植物細(xì)胞，細(xì)菌、病毒、細(xì)胞器和mRNA等分子而設(shè)計(jì)的。該設(shè)備價(jià)格低廉，快速分選，應(yīng)用廣泛，易于操作，是獲得少量高純度細(xì)胞的理想設(shè)備。OctoMACS分選器把8個(gè)MiniMACS分選器連在一起，可以在一臺(tái)儀器上同時(shí)進(jìn)行8個(gè)標(biāo)本的分選。MiniMACSOctoMACS2、MidiMACS分選器和QuadroMACS分選器MidiMACS分選器是MiniMACS分選器的擴(kuò)大版本，與LS和LD分選柱配合使用，可陽性選擇或者去除大量高純度細(xì)胞。QuadroMACS分選器把4個(gè)MidiMACS分選

5、器連在一起，可以同時(shí)進(jìn)行多個(gè)分選過程，或者同時(shí)進(jìn)行多個(gè)樣本分選，也可將一個(gè)大的樣本分成數(shù)個(gè)部分同時(shí)分選。3、VarioMACS分選器VarioMACS分選器有多種適配器，可以使用MS、LS、LD和CS分選柱?？捎糜陉栃赃x擇和去除分選：既可高純度地分選出稀有細(xì)胞（如頻率低至10-8）,也可用來從細(xì)胞懸液中去除多達(dá)2X108非目的細(xì)胞。牝門口MAC"4、SuperMACSII分選器設(shè)計(jì)的SuperMACSII分選器專門用于大量細(xì)胞分選，一次分選的總細(xì)胞數(shù)大于1011,同時(shí)該儀器也適用于少量細(xì)胞的分選。uperMACSII分選器備有三個(gè)適配器，除了科分選柱和autoMACS分選柱外，其它所

6、有各型MACS分選柱均可用于SuperMACSII分選器。SuperMACSII5、科MACS分選器科MACS分選器是為分子生物學(xué)和蛋白生化分選設(shè)計(jì)的分選器。同時(shí)容納4個(gè)科分選柱，可以分選出高純度分子，如mRNA、序列特異性核酸或者蛋白。MMACS6、autoMACS分選儀7、CliniMACS分選種類分選柱容量適配分選器2X108總細(xì)胞MS分選柱MiniMACS、VarioMACS、SuperMACS107個(gè)標(biāo)記細(xì)胞2X108總細(xì)胞大細(xì)胞分選柱MiniMACS、VarioMACS、SuperMACS手動(dòng)陽性分選或者強(qiáng)107個(gè)標(biāo)記細(xì)胞陽性細(xì)胞去除分選2X109總細(xì)胞LS分選柱MidiMACS、

7、VarioMACS、SuperMACS108個(gè)標(biāo)記細(xì)胞2X1010總細(xì)胞XS分選柱SuperMACS109個(gè)標(biāo)記細(xì)胞5X108總細(xì)胞LD分選柱MidiMACS、VarioMACS、SuperMACS108個(gè)標(biāo)記細(xì)胞手動(dòng)去除分選CS分選柱2X108個(gè)標(biāo)記細(xì)胞VarioMACS、SuperMACSD分選柱109個(gè)標(biāo)記細(xì)胞SuperMACS4X109總細(xì)胞自動(dòng)分選AutoMACS分選柱AutoMACS2X108個(gè)標(biāo)記細(xì)胞6-12X10 10總細(xì)胞CliniMACSMACSMiniMACSCliniMACS6-12X108個(gè)標(biāo)記細(xì)胞分子生物學(xué)分選F分選柱1011gmRNAM分選柱5011gmRNAMi

8、ltenyi磁柱選擇及標(biāo)記問題(主要針對Miltenyi產(chǎn)品)一、標(biāo)記策略用MACS進(jìn)行磁分離，最重要的參數(shù)就是高質(zhì)量的標(biāo)記。對陽性細(xì)胞的標(biāo)記應(yīng)盡可能強(qiáng)，而背景要盡可能低，才能獲得對磁標(biāo)記的陽性細(xì)胞和未標(biāo)記的陰性細(xì)胞的最好分辨。有多種不同的標(biāo)記策略可供參考：1、直接標(biāo)記直接標(biāo)記是最快速和最特異的磁標(biāo)記方法。2、間接標(biāo)記幾乎所有的單克隆抗體或多克隆抗體都可以用于間接標(biāo)記。用無標(biāo)記的、生物素化的或FITC、PE或APC結(jié)合的一抗標(biāo)記細(xì)胞，再用抗免疫球蛋白、抗生物素、鏈霉菌親和素、抗FITC、抗PE、或抗APC的微珠分別進(jìn)行磁標(biāo)記。間接標(biāo)記可以放大磁標(biāo)記，用于分離表達(dá)比較弱的標(biāo)記很有用。在間接標(biāo)記中

9、，以使用生物素化的或PE表記的一抗結(jié)果特異性最好。二、磁分離柱的選擇下表為德國Miltenyi公司的分離柱種類，其中MS,LS,XS柱適合于正性細(xì)胞選擇，如果磁標(biāo)記很強(qiáng)，也可用于負(fù)性選擇。LargeCellColumns與MS柱相比，孔徑較大，適合于人和動(dòng)物大細(xì)胞的正性選擇，如巨核細(xì)胞。新的LD柱是為最方便的負(fù)選設(shè)計(jì)，代替了AS和BS柱。LD柱和CD及D柱即使在磁標(biāo)記很弱的情況下也能獲得最高的負(fù)選效率?？坪蚆柱是為分子生物學(xué)方面的應(yīng)用而設(shè)計(jì)的。三、分選策略分選策略也要根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行選擇1、正性選擇(positiveselection)因此一般首先應(yīng)該考慮正選策略。正選具有速度快和單克隆抗體的

10、特異性磁珠對細(xì)胞功能和活力的影響很小，優(yōu)勢，大多數(shù)情況下，正選省時(shí)省錢。2、負(fù)性選擇(negativeselection)如果正選策略不適合您的實(shí)驗(yàn)，比如有可能因抗體結(jié)合引起細(xì)胞活化或沒有針對靶細(xì)胞的特異性抗體，可以選擇負(fù)選策略。MACS對許多細(xì)胞類型提供了合適的試劑盒，含有滴定好的針對非靶細(xì)胞的混合抗體。附：Miltenyi分離柱技術(shù)指標(biāo)及圖片戴分離懿碧最大在吸附細(xì)胞數(shù)霞大上殿繳8赦，_1亦2x10*i他0Ms爆*2x10*-',xa2X1LargectHk即楨。將1042x10必叫WM6跺4x1皿LOMJUiMACS，1%fx*-D*10-310ugMrniMACS<lugeRWV爐1USISXSLar«eCMmJIqMACSCSDLDMiltenyi的柱子回收方法準(zhǔn)備使用回收的柱子時(shí)，抗體孵育始，即將柱子置于新鮮的75%酒精中，柱的容器內(nèi)盛滿酒精，自動(dòng)流下，既消毒，又de-gas,去除氣泡十分關(guān)鍵。洗抗體時(shí)，即開始洗柱子，將回收柱架于消毒過的長試管口上。換新的酒精自然滴下，換PBS+0.1%FBS沖洗之，最后用MACSBuff