1、大學(xué)本科畢業(yè)設(shè)計（論文）開題 報 告題目 不同品種梨果實中多酚含量及抗氧化性能分析指導(dǎo)教師院（系、部）專業(yè)班級學(xué)號姓名日期理學(xué)院生物 11-2 班143月25日教務(wù)處印制一、選題的目的、意義和研究現(xiàn)狀1、選題的目的與意義梨在植物分類學(xué)上屬于薔薇科（ Rosaceae）、梨亞科（ Pomaceae）、梨屬（ Pyrus L），喬木落葉果樹，可分為兩大梨系，即東方和西方梨系 1 。據(jù)統(tǒng)計，全世界梨屬植物有 35個種，我國梨屬植物有14 個種，分別屬于砂梨系統(tǒng)、白梨系統(tǒng)、秋子梨系統(tǒng)和西洋梨系統(tǒng)。而我國北方主要栽培有秋子梨系統(tǒng)和白梨系統(tǒng)，其中比較常見的品種有雪花梨，蘋果梨，白梨，鴨梨，水晶梨，南國梨和

2、花蓋梨。目前梨雖為高產(chǎn)量水果卻并沒有帶來高收益，主要原因有惡劣天氣帶來的不可避免的出現(xiàn)殘次果而降低商品價值和供求關(guān)系不平衡導(dǎo)致梨果滯銷積壓，而有限的保存條件會造成一定的損耗。加工可以消耗殘次果和滯銷果，提高產(chǎn)品附加值，增加經(jīng)濟利益，目前主要的加工手段有制汁、制罐頭等。梨類富含豐富的水分，糖，有機酸，鉀、氮、鐵等礦物質(zhì)2-3 ，膳食纖維，多種維生素，還有豐富的酚類物質(zhì)。已有的關(guān)于蘋果多酚、茶多酚、葡萄多酚的研究報道認為，多酚具有抗氧化 4-5 、抗衰老 6 等重要的生理功能，但對梨多酚的研究剛剛開始，其中酚類物質(zhì)因具有抗氧化、 清除自由基和抑菌等作用， 在食品和醫(yī)藥等方面有著廣泛的應(yīng)用，需求量日

3、益增加，這就需要更多的酚類物質(zhì)提取資源。 不同品種梨的酚類物質(zhì)會有不同，其抗氧化活性也不盡相同。本研究利用北方常見的蘋果梨，水晶梨，花蓋梨和白梨為材料，對其含有的多酚含量及抗氧化性能進行比較分析，為梨的加工利用提供理論參考，同時為消費者提供選擇依據(jù)。2、研究現(xiàn)狀目前，多酚的提取方法有很多種，主要有：溶劑萃取法。這種方法是傳統(tǒng)的提取工藝，該法利用有機溶劑浸提水果粉末。溶劑常用乙酸乙酯 ,萃取后 ,將乙酸乙酯相減壓蒸餾濃縮 ,干燥后即得多酚產(chǎn)品。但由于溶劑萃取法存在溶劑用量大、 溶劑回收設(shè)備投資大、 溶劑損耗大 ,以及產(chǎn)品中存在有機殘留等缺點,該方法在很大程度上限制了多酚的生產(chǎn)和應(yīng)用。離子沉淀提取

4、法。 離子沉淀提取法是根據(jù)多酚能與無機鹽中的金屬離子反應(yīng)生成沉淀的特性來生產(chǎn)多酚 ,是一種較廉價的生產(chǎn)高純度水果多酚的方法。 該法的優(yōu)點是使用的有機溶劑較少 ,成本低 ,選擇性強 ,所得產(chǎn)品無毒且純度好產(chǎn)品色澤、 水溶性也較好 ,因而易被食品工業(yè)和醫(yī)藥工業(yè)接受 ,適合中、小規(guī)模生產(chǎn)。此法的缺點是在制備過程中需調(diào)節(jié)酸堿度 ,造成部分酚類物質(zhì)因氧化而被破壞 ,在沉淀過濾、溶解過程中多酚損失大 ,工藝操作控制比較嚴格 ,廢渣、廢液處理量較大。超臨界萃取法。是利用超臨界流體作溶劑進行萃取分離的方法。該法具有無毒、溶劑回收簡單方便、耗能少、產(chǎn)品純度高的優(yōu)點,但是操作必須確保整個系統(tǒng)處于超臨界狀態(tài)下才能有

5、萃取分離的效果,對設(shè)備要求高、一次性投資大、不利于工業(yè)化生產(chǎn)。7-8微波輔助提取法。微波提取技術(shù)(MAE) 是近年來興起的生物活性物質(zhì)提取技術(shù),其原理是利用不同組分吸收微波能力的差異,使萃取體系中的某些組分被選擇性加熱,從而使得被萃取物質(zhì)從體系中分離 ,進入到介電常數(shù)較小、 吸收能力相對較差的萃取劑中 ,達到較高的提取率。目前主要的多酚分離純化主要有：沉淀分離法。沉淀分離法是對植物多酚進行粗分離的常用方法。此種方法的關(guān)鍵技術(shù)是選擇合適的沉淀劑。常用沉淀劑有四類 ,即無機鹽類、生物堿、蛋白質(zhì)類和高分子聚合物。沉淀分離法雖然減少了有機溶劑的使用量 ,生產(chǎn)安全性好 ,成本低 ,產(chǎn)品的純度、色澤、水溶

6、性均好 ,但極易造成植物多酚被氧化破壞，影響產(chǎn)品品質(zhì)與得率。膜分離法。是一種以膜兩側(cè)的壓力差為動力 ,對酚類提取物進行分離、 純化的技術(shù)。超濾是膜分離法中用途最廣泛的方法之一。該方法在常溫條件下操作 ,不破壞植物多酚。層析分離法。植物多酚的分離純化常用樹脂層析分離法。近年來 ,國內(nèi)外采用連續(xù)制備層析分離成功的報道很多。已有研究者釆用樹脂層析分離法對苦瓜多酚、獼猴桃多酚、蘋果多酚等多酚物質(zhì)進行了分離純化研究。目前，對于水果的酚類物質(zhì)及抗氧化活性研究較多，比如：對不同蘋果果實中的綠原酸、兒茶素、表兒茶素、根皮素、槲皮素等主要酚類物質(zhì)含量的研究、草莓酚類物質(zhì)分離純化的研究、 不同地區(qū)釀酒葡萄果實中的

7、酚類物質(zhì)含量及抗氧化能力分析等，而對不同品種梨的抗氧化活性研究較少。鄒麗紅等 9 為了探明砂梨褐變的內(nèi)在機制 ,為砂梨貯藏與加工過程中品種選擇和褐變控制提供理論依據(jù)。以 11 個砂梨品種的成熟果實為試驗材料，測定總酚與酚類物質(zhì)組成及含量。結(jié)果表明，不同品種酶促褐變程度有很大差別。綠原酸、兒茶素、蘆丁和沒食子酸是梨果肉中含量較高的酚類物質(zhì)。史國安等 10報道沙梨果汁具有顯著的清除羥自由基能力和較強的抗氧化活性。趙金偉等 11 通過對 DPPH 自由基、羥自由基 ( OH)和亞硝酸根離子的清除能力實驗，測定蘋果梨幼果和成熟果果皮中提取的酚類物質(zhì)抗氧化活性。結(jié)果表明：蘋果梨酚類物質(zhì)對 DPPH 自由

8、基、 OH 和亞硝酸根離子均有較好的清除效果，其中幼果中提取的酚類物質(zhì)清除效果要好于成熟果果皮。研究方案及預(yù)期結(jié)果二、研究方案及預(yù)期結(jié)果1、研究內(nèi)容本實驗通過微波輔助提取法提取北方常見的蘋果梨，水晶梨，花蓋梨和白梨中的多酚物質(zhì)并進行含量的測定，來研究多酚對DPPH 自由基的清除率測定、 對羥基自由基（ ?OH）的清除率測定以及對亞硝酸根的清除率測定，從而分析對抗氧化性的影響，最終得出分析結(jié)果。2、技術(shù)路線不同品種梨果實中多酚含量及抗氧化性能分析抗氧化性研究福林多酚法對對對亞酚測定DPPH?OH硝酸提多酚的清除的 清根的取含量能力除 能清除力能力2.1 不同品種梨果實中多酚的微波輔助提取法提取稱

9、取不同品種梨果實粉末5.00g 于 250mL 錐形瓶中 ,加入濃度為 60% 的乙醇溶解,料液比為 1:10,于 320w 功率下進行微波提取。提取液3000r /min 離心 10 min , 同樣條件下離心兩次 ,取上清液 ,冷卻 ,定容至 100mL。122.2 福林酚法測定不同品種梨果實中多酚含量以沒食子酸為標準物質(zhì)制作標準曲線:準確稱 0.1g 沒食子酸 ,定容至 100mL,取溶液 1mL, 定容至 50mL ,使溶液濃度為 0.02 mg/mL。分別取 0、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、1.8 mL 沒食子酸標準液 ,使其與 1 mL 的 Folin - Ciocal

10、teu 試劑反應(yīng) ,混勻 ,加入 3mL 10 %的 Na2CO3 ,加蒸餾水補足 10 mL ,室溫靜置 20 min ，測其 750 nm 處的吸光值。以沒食子酸濃度為橫坐標,以 A 750 值為縱坐標制做標準曲線。總酚測定 :吸取樣品溶液 1 mL ,加入 1 mL 蒸餾水、 1 mL Folin - 酚試劑、 3 mL 10% 的 Na2CO3 ,測其 750 nm 處的吸光值 ,根據(jù)標準曲線的回歸方程 ,求得待測液中多酚的含量。2.3 不同梨果實的抗氧化性能分析2.3.1 不同梨果實中的多酚物質(zhì)對DPPH 自由基的清除率測定DPPH 在有機溶劑中是一種穩(wěn)定的自由基，其乙醇溶液呈紫色，

11、在517 nm 附近有強吸收。分光光度法測定加入梨果干多酚提取液后吸光度吸收的下降以表示其對 DPPH 清除能力，此抗氧化能力用清除率表示，清除率越大，抗氧化性越強。取一定質(zhì)量的提取物利用 80%乙醇定容，然后稀釋成不同的濃度， 從中取樣液 2mL，加入 2.0 10-4mol/L 的 DPPH 溶液 2mL，搖勻，在暗處靜置 30min，在波長 517nm 處測定吸光度 13 。按公式計算： DPPH 自由基清除率 /%=(A0 Aj ） /A0100.式中：A0 表示溶劑加 DPPH 后的吸光度； Aj 表示樣液加 DPPH 后的吸光度。不同梨果實中的多酚物質(zhì)對OH 的清除率測定取 6mm

12、ol/L 硫酸亞鐵溶液 2mL 加入不同濃度多酚提取物2mL ，然后加入6mmol/L 的雙氧水 2mL ，靜置 10min 后加入 6mmol/L 的水楊酸溶液 2mL，搖勻靜置 30min，在510nm波長處測定吸光度14。按公式計算： OH清除率 /%=1-(A1-A2)/A3100.式中： A1表示某質(zhì)量濃度酚類物質(zhì)反應(yīng)后的吸光度；A2表示不添加水楊酸時酚類物質(zhì)的吸光度；A3表示空白對照的吸光度。不同梨果實中的多酚物質(zhì)對亞硝酸根的清除率測定取一定濃度的樣品溶液2mL ，加入 20g/mL的亞硝酸鈉 1mL，在 37恒溫保持 30min，取出后加入 0.4%對氨基苯磺酸溶液 1mL，混勻

13、靜置 5min，加入 0.2%鹽酸萘乙二胺溶液 5mL。加水至 10mL 靜置 15min 在 538nm 波長處測定吸光度，通過標準曲線計算亞硝酸根殘留量 15。按公式計算： 亞硝酸根清除率 /%=（亞硝酸鈉加入量亞硝酸鈉殘留量）/亞硝酸鈉加入量 100.3、論文框架1、引言2、材料與方法3、結(jié)果與分析4、討論5、結(jié)論4、預(yù)期結(jié)果4.1 進行不同品種梨果實多酚含量比較，得到多酚含量最高的梨的品種。4.2 進行不同品種梨果實抗氧化活性比較，得到抗氧化活性最強的梨的品種。4.3 根據(jù)多酚含量和抗氧化性的比較，得到最適合工業(yè)化生產(chǎn)的梨的品種。三、研究進度1.第一周第三周：查閱相關(guān)的國內(nèi)外文獻，撰寫

14、開題報告。2.第四周第五周：仔細查閱資料，撰寫論文大綱。3.第六周第七周：開始進行不同品種梨果實多酚提取。4.第八周：進行不同梨果實多酚含量測定。5.第九周第十周：對多酚物質(zhì)進行抗氧化性能分析。6.第十一周第十二周：畢業(yè)論文的撰寫完成初稿。7.第十三周：指導(dǎo)教師指導(dǎo)修改論文，形成論文成稿，裝訂成冊并上交。四、主要參考文獻1 曹玉芬 ,劉鳳之 ,王昆 ,等 .梨種質(zhì)資源主要描述標準比較分析J. 植物遺傳資源學(xué)報 ,2005,6(4):460-463.2 陳艷秋 ,曲柏宏 ,牛廣才 ,等.蘋果梨果實礦質(zhì)元素含量及其品質(zhì)效應(yīng)的研究 J.吉林農(nóng)業(yè)科學(xué) , 2000, 25(6): 44-48.3 韓苗

15、苗 ,張先 ,李范洙 .蘋果梨果實生長過程中碳水化合物的變化 J. 延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)學(xué)報 , 2009, 31(2):113-118.4 TSENG YH, YANG JH, MAU JL. Antioxidant properties of polysaccharides from Ganoderma tsugaeJ. Food Chemistry, 2008, 107（2） : 732-738.5 劉杰超 ,王思新 ,焦中高 ,等.蘋果多酚提取物抗氧化活性的體外試驗 J. 果樹學(xué)報 , 2005, 22(2): 106-110.6 李軍 ,林麗文 ,辛勤 ,等.綠茶多酚抗衰老作用研究 J. 食

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