1、復(fù)旦大學(xué)分子標(biāo)記技術(shù)的類型原理及應(yīng)用第一頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)主要內(nèi)容主要內(nèi)容類類 型型2原理及應(yīng)用原理及應(yīng)用341 概概 述述致致 謝謝第二頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)概概 述述 分子標(biāo)記技術(shù)(Molecular Markers) 1974年,Grozdicker 等人在鑒定溫度敏感表型的腺病毒DNA突變體時， 利用限制性內(nèi)切酶酶解后得到的DNA片段的差異，首創(chuàng)了DNA分子標(biāo)記。第三頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué) 所謂分子標(biāo)記分子標(biāo)記是根據(jù)基因組DNA存在豐富的多態(tài)性而發(fā)展起來的可直接反映生物個體在DNA水平上的差異的一類新型的遺傳標(biāo)記,它是繼形態(tài)學(xué)標(biāo)記、細(xì)胞學(xué)標(biāo)記、生化標(biāo)記之后最為可靠的遺傳標(biāo)記技術(shù)。第

2、四頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué) 廣義的分子標(biāo)記是指可遺傳的并可檢測的DNA序列或蛋白質(zhì)分子。 通常所說的分子標(biāo)記是指以DNA多態(tài)性為基礎(chǔ)的遺傳標(biāo)記。 分子標(biāo)記技術(shù)本質(zhì)上都是以檢測生物個體在基因或基因型上所產(chǎn)生的變異來反映基因組之間差異。第五頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)類型及原理類型及原理 現(xiàn)已出現(xiàn)的分子標(biāo)記技術(shù)有幾十種，部分分子標(biāo)記技術(shù)所屬類型如下：u建立在Southern雜交基礎(chǔ)上的分子標(biāo)記技術(shù) 限制性內(nèi)切酶片段長度多態(tài)性標(biāo)記(RFLP )； 染色體原位雜交(CISH)。第六頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)u 以重復(fù)序列為基礎(chǔ)的分子標(biāo)記技術(shù) 衛(wèi)星DNA (Satellite DNA ) ； 小衛(wèi)星DNA ( Mi

3、nisatellite DNA ) ； 簡單序列重復(fù)SSR( Simple Sequence Repeat )，即微衛(wèi)星DNA。第七頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)u以PCR為基礎(chǔ)的分子標(biāo)記技術(shù) 隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA( RAPD )； 擴(kuò)增片段長度多態(tài)性 (AFLP) ； 單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)； cDNA-擴(kuò)增片段長度多態(tài)性(cDNA-AFLP )； 靶位區(qū)域擴(kuò)增多態(tài)性(TRAP)； 序列特征化擴(kuò)增區(qū)域(SCAR)； 相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性(SRAP )。第八頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)u 以mRNA為基礎(chǔ)的分子標(biāo)記技術(shù) 表達(dá)序列標(biāo)簽(ESTs) ； 差異顯示(DD) ； 逆轉(zhuǎn)錄PCR (RT-PCR) ；

4、 差異顯示逆轉(zhuǎn)錄PCR (DDRT-PCR) ； 特征性差異分析(RAD) ； 基因表達(dá)系列分析(SAGE) 。第九頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)u 以單個核甘酸的變異為核心的分子標(biāo)記技術(shù) 單核苷酸多態(tài)性標(biāo)記(SNP) u 以特定序列為核心的分子標(biāo)記技術(shù) 線粒體DNA分子標(biāo)記(mtDNA) 第十頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)代表性分子標(biāo)記技術(shù)代表性分子標(biāo)記技術(shù)的原理的原理 限制性片段長度多態(tài)性限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)由Grozdicker創(chuàng)立，并于1980 年由Bostein 再次提出。原理：限制性內(nèi)切酶能識別并切割基因組DNA分子中特定的位點(diǎn)，如果因堿基的突變、插入或缺失，或者染色體結(jié)構(gòu)的變化而導(dǎo)致

5、生物個體或種群間該酶切位點(diǎn)的消失或新的酶切位點(diǎn)的產(chǎn)生。第十一頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué) 那么利用特定的限制性內(nèi)切酶切割不同個體的基因組DNA， 就可以得到長短、數(shù)量、種類不同的限制性DNA片段，通過電泳和Southern雜交轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜或尼龍膜上, 選用一定的DNA標(biāo)記探針與之雜交，放射自顯影后就可得到反映個體特異性的DNA限制性片段多態(tài)性圖譜。第十二頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué) 探針： 通常是隨機(jī)克隆的與被檢測物具有一定同源性的單拷貝或低拷貝基因組片段或cDNA片段。其中cDNA 探針保守性較強(qiáng)，許多同科物種cDNA 探針都可以作為通用探針。限制性片段長度多態(tài)性限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)第

6、十三頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)u應(yīng)用 在基因突變分析、基因定位、基因診斷、個體識別、親緣鑒定、物種分類和進(jìn)化關(guān)系研究，以及組建高密度的遺傳圖譜和育種操作等方面都有一定的應(yīng)用和重要的實(shí)用價值。限制性片段長度多態(tài)性限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)第十四頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)限制性片段長度多態(tài)性限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)u優(yōu)點(diǎn) 標(biāo)記廣泛存在于生物體內(nèi)，不受組織、環(huán)境和發(fā)育階段的影響。 RFLP 標(biāo)記的等位基因是共顯性的，不受雜交的影響，可區(qū)分純合基因與雜合基因。 可產(chǎn)生的標(biāo)記數(shù)目很多，可覆蓋整個基因組。第十五頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)u缺點(diǎn) 標(biāo)記技術(shù)需要酶切, 對DNA 質(zhì)量要求高； RFLP 的多態(tài)

7、性程度偏低； 分子雜交時會用到放射性同位素，對人體和環(huán)境 都有害； 探針的制備、保存和發(fā)放也很不方便； 分析程序復(fù)雜、技術(shù)難度大、費(fèi)時、成本高。限制性片段長度多態(tài)性限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)第十六頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)染色體原位雜交染色體原位雜交(CISH) 染色體原位雜交在原位雜交技術(shù)中應(yīng)用最廣泛，它是一種基于Southern 雜交的分子標(biāo)記技術(shù)。原理：該技術(shù)利用特異性核酸片段作探針, 直接同染色體DNA 片段雜交, 在染色體上顯示特異DNA 。第十七頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)染色體原位雜交染色體原位雜交(CISH)u探針 可采用同位素標(biāo)記探針, 雜交后通過放射自顯影顯示雜交信號, 也可以

8、采用非放射性大分子如生物素、地高辛等標(biāo)記特異核酸片段,雜交信號經(jīng)酶聯(lián)顯色或熒光顯色得以顯示。u優(yōu)點(diǎn) 準(zhǔn)確、直觀u缺點(diǎn) 技術(shù)非常復(fù)雜第十八頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)u簡單序列重復(fù)(SSR)即微衛(wèi)星DNA 微衛(wèi)星是指以少數(shù)幾個核苷酸( 1 6 個) 為單位 多次串聯(lián)重復(fù)的DNA序列。 微衛(wèi)星由核心序列和兩側(cè)的保守側(cè)翼序列構(gòu)成。保守的側(cè)翼序列使微衛(wèi)星特異地定位于染色體某一區(qū)域，核心序列重復(fù)數(shù)的差異則形成微衛(wèi)星的高度多態(tài)性。簡單序列重復(fù)簡單序列重復(fù)(SSR)第十九頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)u原理： 由于重復(fù)次數(shù)的不同及重復(fù)程度的不完全造成了每個位點(diǎn)的多態(tài)性。 根據(jù)其兩端的保守序列設(shè)計(jì)一對特異性引物， PCR

9、擴(kuò)增，再經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳即可顯示不同基因型個體在這個SSR位點(diǎn)的多態(tài)性。簡單序列重復(fù)簡單序列重復(fù)(SSR)第二十頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)u應(yīng)用 是種群研究和進(jìn)化生物學(xué)最常用的分子標(biāo)記之一，廣泛地應(yīng)用于生物雜交育種、遺傳連鎖圖譜、種群遺傳多樣性、系統(tǒng)發(fā)生等研究領(lǐng)域。簡單序列重復(fù)簡單序列重復(fù)(SSR)第二十一頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)u優(yōu)點(diǎn) 分布廣泛、多態(tài)性豐富、雜合度高、通用性好以及擴(kuò)增反應(yīng)所需模板量少、重復(fù)性好，共顯性遺傳、檢測方便、結(jié)果穩(wěn)定。u缺點(diǎn) 增大了基因型錯誤判別的可能性。簡單序列重復(fù)簡單序列重復(fù)(SSR)第二十二頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD) 建立

10、在PCR基礎(chǔ)上的一種可對整個未知序列的基因組進(jìn)行多態(tài)性分析的DNA分子標(biāo)記技術(shù)。第二十三頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)u原理原理：1.利用一個隨機(jī)引物( 一般為10個堿基) 通過PCR反應(yīng)非定點(diǎn)地擴(kuò)增DNA片段；2.擴(kuò)增片段經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳或聚丙烯酰胺電泳分離；3.溴化乙錠染色或銀染等專一性染色技術(shù)即可記錄RAPD 指紋； 4.進(jìn)行DNA 多態(tài)性分析。隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)第二十四頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué) RAPD所用的一系列隨機(jī)引物其序列各不相同，結(jié)合位點(diǎn)不同，擴(kuò)增得到的DNA片段的區(qū)域不同。 如果基因組的這些區(qū)域發(fā)生DNA片斷或堿基的插入、缺失等突變， 就可能導(dǎo)致這些特定結(jié)合

11、位點(diǎn)、擴(kuò)增片斷發(fā)生相應(yīng)的變化。而使RAPD擴(kuò)增產(chǎn)物在電泳圖譜中DNA帶數(shù)增加、減少或片斷長度發(fā)生相應(yīng)變化。從而可以檢測出基因組DNA在這些區(qū)域的多態(tài)性。隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)第二十五頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)u應(yīng)用 RAPD技術(shù)廣泛應(yīng)用于天然居群內(nèi)及居群間的遺傳變異、種質(zhì)資源搜集、品種鑒定、種間或?qū)匍g遺傳關(guān)系、遺傳圖譜構(gòu)建、基因定位與分離等方面的研究。第二十六頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)u 優(yōu)點(diǎn)： 技術(shù)簡單，實(shí)驗(yàn)周期短，信息量大，檢測速度快；DNA用量少； 實(shí)驗(yàn)設(shè)備簡單，不需DNA探針， 設(shè)計(jì)引物也不需要預(yù)先克隆標(biāo)記或進(jìn)行序列分析；

12、不依賴于種屬特異性和基因組的結(jié)構(gòu)，合成一套引物可以用于不同生物基因組分析； 用一個引物就可擴(kuò)增出許多片段，幾乎覆蓋整個基因組，而且不需要同位素，安全性好。隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)第二十七頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)u缺點(diǎn)：實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性和重復(fù)性差 顯性遺傳，不能識別雜合子位點(diǎn)，這使得遺傳分析相對復(fù)雜，在基因定位、作連鎖遺傳圖時，會因顯性遮蓋作用而使計(jì)算位點(diǎn)間遺傳距離的準(zhǔn)確性下降； RAPD對反應(yīng)條件相當(dāng)敏感，包括模板濃度、Mg2+濃度，所以實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性差。隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)第二十八頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué) AFLP 是1992年由荷蘭Key gene公司

13、的科學(xué)家Zabeau和Vos發(fā)展起來的一種檢測DNA多態(tài)性的分子標(biāo)記方法。擴(kuò)增片段長度多態(tài)性擴(kuò)增片段長度多態(tài)性(AFLP)第二十九頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)u原理1.基因組DNA經(jīng)限制性內(nèi)切酶雙酶切后， 形成分子量大小不等的隨機(jī)限制性片段；2.將特定的雙鏈接頭連接在這些DNA片段的兩端, 形成一個帶接頭的特異片段；擴(kuò)增片段長度多態(tài)性擴(kuò)增片段長度多態(tài)性(AFLP)第三十頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)3.通過接頭序列和PCR引物3末端的選擇性堿基的識別，擴(kuò)增那些兩端序列能與選擇性堿基配對的限制性酶切片段；4.通過聚丙烯酰胺凝膠電泳，將特異的限制性片段分離開來；5.然后利用成像系統(tǒng)和分析軟件檢測凝膠上DNA指紋

14、的多態(tài)性。第三十一頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)u應(yīng)用 AFLP作為一種高效的指紋技術(shù)，已在遺傳育種研究中發(fā)揮它的優(yōu)勢。 在醫(yī)學(xué)、農(nóng)業(yè)、林業(yè)、畜牧業(yè)、漁業(yè)等領(lǐng)域中得到了廣泛的應(yīng)用。擴(kuò)增片段長度多態(tài)性擴(kuò)增片段長度多態(tài)性(AFLP)第三十二頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)u優(yōu)點(diǎn) 高度特異性，實(shí)驗(yàn)周期短， 可信度高，檢測速度快。u缺點(diǎn) 技術(shù)過程復(fù)雜，實(shí)驗(yàn)成本較高， 且受專利保護(hù)。擴(kuò)增片段長度多態(tài)性擴(kuò)增片段長度多態(tài)性(AFLP)第三十三頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué) SNP主要是指在基因組水平上由于單個核苷酸的變異所引起的DNA 序列多態(tài)性。也即SNP 是同一物種不同個體間染色體上遺傳密碼單個堿基的變化。 主要表現(xiàn)為基因組核苷

15、酸水平上的變異引起的DNA序列多態(tài)性，包括單堿基的轉(zhuǎn)換或顛換、以及單堿基的插入或缺失等。單核苷酸多態(tài)性標(biāo)記單核苷酸多態(tài)性標(biāo)記(SNP)第三十四頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)單核苷酸多態(tài)性標(biāo)記單核苷酸多態(tài)性標(biāo)記(SNP)u原理：SNP 與RFLP及SSR 標(biāo)記的不同有2 個方面：其一，SNP 不再以DNA 片段的長度變化作為檢測手段，而直接以序列變異作為標(biāo)記；其二，SNP 標(biāo)記分析完全摒棄了經(jīng)典的凝膠電泳，代之以最新的DNA 芯片技術(shù)。對成千上萬個克隆測序，用計(jì)算機(jī)分析數(shù)據(jù)和顯示最終結(jié)果。第三十五頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)u 檢測 DNA芯片技術(shù)，最新報道的微芯片電泳(Microchip electroph

16、oresis) ，可以高速度地檢測臨床樣品的SNP。 雜交型芯片將等位基因特異寡核苷酸共價固定在載體表面，用熒光標(biāo)記引物擴(kuò)增基因組DNA，再與芯片上的寡核苷酸雜交形成信號，并行讀取芯片上不同SNP 熒光信號，獲得SNP 信息。單核苷酸多態(tài)性標(biāo)記單核苷酸多態(tài)性標(biāo)記(SNP)第三十六頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)u 應(yīng)用 種群生物學(xué)特征、遺傳性疾病檢測、疾病關(guān)聯(lián)分析及特定功能基因或片段的分型等研究，在基因組作圖和數(shù)量性狀定位等方面也有越來越多的應(yīng)用。u 優(yōu)點(diǎn) 數(shù)量多，分布廣泛，檢測快速、 易于實(shí)現(xiàn)自動化，遺傳穩(wěn)定性高。u 缺點(diǎn) 成本高，錯誤信號多。單核苷酸多態(tài)性標(biāo)記單核苷酸多態(tài)性標(biāo)記(SNP)第三十七頁，

17、共54頁。復(fù)旦大學(xué) ESTs( Expressed Sequence Tags)是在人類基因組計(jì)劃實(shí)施過程中，由美國國立衛(wèi)生研究院生物學(xué)家Venter J提出的發(fā)現(xiàn)基因的新戰(zhàn)略。 ESTs是指從cDNA文庫中隨機(jī)挑取克隆并對其3或5端進(jìn)行單輪測序所獲得的短cDNA序列，一般長度為300500bp。表達(dá)序列標(biāo)簽表達(dá)序列標(biāo)簽標(biāo)記技術(shù)標(biāo)記技術(shù)(EST)第三十八頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)u原理 由于ESTs是短的核苷酸序列，而且根據(jù)構(gòu)建文庫時所采用引物的差異，所測定的序列可以是cDNA的各個區(qū)段，包括5末端和3末端，以及5上游非翻譯區(qū)( UTR)和3UTR，也可以是cDNA的任何內(nèi)部序列。因?yàn)閏DNA來源

18、于mRNA, 所以每一個EST均代表了文庫構(gòu)建原組織的基因組DNA中一個表達(dá)基因的部分轉(zhuǎn)錄片段。表達(dá)序列標(biāo)簽表達(dá)序列標(biāo)簽標(biāo)記技術(shù)標(biāo)記技術(shù)(EST)第三十九頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)u數(shù)據(jù)庫 目前常用的含有ESTs子數(shù)據(jù)庫的有： NCBI的GenBank； 歐洲分子生物實(shí)驗(yàn)室的EMBL； 日本國家數(shù)據(jù)庫DDBJ。u 應(yīng)用 構(gòu)建遺傳學(xué)圖譜、分 離與鑒定新基因、 基因差異表達(dá)的研究、基因的定位克隆 用于制備cDNA芯片等。表達(dá)序列標(biāo)簽表達(dá)序列標(biāo)簽標(biāo)記技術(shù)標(biāo)記技術(shù)(EST)第四十頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)u優(yōu)點(diǎn) 數(shù)量多，分布廣泛，檢測快速、 易于實(shí)現(xiàn)自動化，遺傳穩(wěn)定性高。u缺點(diǎn) 獲得的基因組信息不全，費(fèi)用高，

19、 對DNA質(zhì)量和cDNA文庫要求高。表達(dá)序列標(biāo)簽表達(dá)序列標(biāo)簽標(biāo)記技術(shù)標(biāo)記技術(shù)(EST)第四十一頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性(SRAP) 是基于PCR 技術(shù)的新型分子標(biāo)記技術(shù)u原理利用基因外顯子里G、C含量豐富， 而啟動子和內(nèi)含子里A、T含量豐富的特點(diǎn)設(shè)計(jì)兩套引物，對開放讀碼框架進(jìn)行擴(kuò)增。u 應(yīng)用適合于不同作物的基因定位、基因克隆和遺傳圖譜構(gòu)建等第四十二頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性(SRAP)u 優(yōu)點(diǎn) 簡便、穩(wěn)定、容易得到選擇條帶序列，在基因組中分布均勻。u 缺點(diǎn) 一套SRA P標(biāo)記引物并不能夠?qū)λ械纳锒纪ㄓ茫孕璨粩嚅_發(fā)出適合不同

20、生物的引物。此外，SRAP標(biāo)記是對開放讀碼框進(jìn)行擴(kuò)增，所以對基因相對較少的著絲粒附近以及端粒的擴(kuò)增會較少。第四十三頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué) TRAP是由Hu和Vick于2003年建立起來的一種新型DNA分子標(biāo)記技術(shù)。 該技術(shù)是利用生物信息工具和表達(dá)序列標(biāo)簽數(shù)據(jù)庫信息，產(chǎn)生目標(biāo)候選基因區(qū)域的多態(tài)性標(biāo)記。靶位區(qū)域擴(kuò)增多態(tài)性靶位區(qū)域擴(kuò)增多態(tài)性(TRAP)第四十四頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)u原理1.它是以基因組DNA為模板，采用兩個人工合成的長度為1620 bp的核苷酸的固定引物與隨機(jī)引物；2.利用設(shè)計(jì)好的引物，通過PCR方法對基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增；靶位區(qū)域擴(kuò)增多態(tài)性靶位區(qū)域擴(kuò)增多態(tài)性(TRAP)第四十五頁

21、，共54頁。復(fù)旦大學(xué)3.PCR產(chǎn)物利用聚丙烯酰胺凝膠電泳的方法進(jìn)行檢測，然后通過放射自顯影或銀染技術(shù)觀察不同的帶型(即多態(tài)性)；4.通過擴(kuò)增產(chǎn)物的多態(tài)性來反映基因組相應(yīng)區(qū)域( DNA) 的多態(tài)性，從而形成圍繞侯選目標(biāo)基因序列的多態(tài)性標(biāo)記。靶位區(qū)域擴(kuò)增多態(tài)性靶位區(qū)域擴(kuò)增多態(tài)性(TRAP)第四十六頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)u應(yīng)用 植物的遺傳圖譜構(gòu)建、重要性狀基因標(biāo)記、種質(zhì)資源的多樣性研究、分子標(biāo)記輔助育種等。u優(yōu)點(diǎn) 操作簡單，重復(fù)性好，效率高。靶位區(qū)域擴(kuò)增多態(tài)性靶位區(qū)域擴(kuò)增多態(tài)性(TRAP)第四十七頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)多樣性芯片技術(shù)多樣性芯片技術(shù)(DArT) Jaccoud等2001年開發(fā)的多樣性微陣列技術(shù)是依賴芯片雜交技術(shù)來辨別不同基因組之間多態(tài)性的方法。第四十八頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)多樣性芯片技術(shù)多樣性芯片技術(shù)(DArT)u原理將不同樣本的基因組DNA 等量混合后進(jìn)行限制性內(nèi)切酶消化，酶切后的片段與接頭連接，用與接頭對應(yīng)的選擇性引物擴(kuò)增連接產(chǎn)物得到基因組代表性片段，并通過一系列過程將該基因組代表固定到玻片上制備芯片，待測樣品DNA 采用文庫構(gòu)建相同的方法進(jìn)行處理，不同樣本基因組代表擴(kuò)增產(chǎn)物分別標(biāo)記不同顏色的熒光作為探針，而后混和對芯片進(jìn)行雜交。第四十九頁，共54頁。復(fù)旦大學(xué)由于不同樣本的基因組DNA 序列有差異，因而與芯片上同一點(diǎn)序列雜交的效率不一致，芯片上只有與探針DNA 互