1、食品中常規(guī)工程的微生物檢驗(yàn)食品中常規(guī)工程的微生物檢驗(yàn)1食品中菌落總數(shù)的測定食品中菌落總數(shù)的測定菌落總數(shù)的定義菌落總數(shù)的定義菌落總數(shù)：是指食品檢樣經(jīng)過處置，在一菌落總數(shù)：是指食品檢樣經(jīng)過處置，在一定條件下培育后，所得定條件下培育后，所得1g或或1mL或或1cm2外表積檢樣中所含細(xì)菌菌落的總數(shù)。外表積檢樣中所含細(xì)菌菌落的總數(shù)。 測定原理：菌落總數(shù)是指食品檢樣經(jīng)過處置，在一定條件菌落總數(shù)是指食品檢樣經(jīng)過處置，在一定條件下培育后如培育基成分，培育溫度和時(shí)間，下培育后如培育基成分，培育溫度和時(shí)間，PHPH，需氧性質(zhì)等，所得，需氧性質(zhì)等，所得1ml (g) 1ml (g) 檢樣中所含檢樣中所含菌落的總數(shù)。

2、本方法規(guī)定的培育條件下所得結(jié)菌落的總數(shù)。本方法規(guī)定的培育條件下所得結(jié)果，只包括一群在培育瓊脂上生長的嗜中溫性果，只包括一群在培育瓊脂上生長的嗜中溫性需氧的菌落總數(shù)。菌落總數(shù)主要作為斷定食品需氧的菌落總數(shù)。菌落總數(shù)主要作為斷定食品被污染程度的標(biāo)志，也可以運(yùn)用這一方法察看被污染程度的標(biāo)志，也可以運(yùn)用這一方法察看細(xì)菌在食品中繁衍的動態(tài)，以便對被檢樣品進(jìn)細(xì)菌在食品中繁衍的動態(tài)，以便對被檢樣品進(jìn)展衛(wèi)生學(xué)評價(jià)時(shí)提供根據(jù)。展衛(wèi)生學(xué)評價(jià)時(shí)提供根據(jù)。 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康? 1、學(xué)習(xí)或均技術(shù)的技術(shù)方法；、學(xué)習(xí)或均技術(shù)的技術(shù)方法；2 2、掌握食品細(xì)菌總數(shù)的測定報(bào)告方式。、掌握食品細(xì)菌總數(shù)的測定報(bào)告方式。二、實(shí)

3、驗(yàn)資料二、實(shí)驗(yàn)資料1 1、電熱恒溫培育箱、冰箱、恒溫水浴鍋、托盤天平、電熱恒溫培育箱、冰箱、恒溫水浴鍋、托盤天平、電爐、吸管、廣口瓶、三角瓶、玻璃珠、平皿、試管、電爐、吸管、廣口瓶、三角瓶、玻璃珠、平皿、試管、試管架、酒精燈、均質(zhì)器或乳缽、滅菌刀或剪刀、滅試管架、酒精燈、均質(zhì)器或乳缽、滅菌刀或剪刀、滅菌鑷子、菌鑷子、75%75%酒精棉球、玻璃蠟筆、登記薄酒精棉球、玻璃蠟筆、登記薄2 2、培育基和試劑：、培育基和試劑：75%75%乙醇、生理鹽水、乙醇、生理鹽水、15%15%氫氧化氫氧化鈉溶液、營養(yǎng)瓊脂培育基鈉溶液、營養(yǎng)瓊脂培育基實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)一 食品中細(xì)菌總數(shù)的測定食品中細(xì)菌總數(shù)的測定1 1、檢驗(yàn)程

4、序、檢驗(yàn)程序菌落總數(shù)檢驗(yàn)程序：菌落總數(shù)檢驗(yàn)程序： 檢樣檢樣做成幾個(gè)適當(dāng)倍數(shù)的稀釋液做成幾個(gè)適當(dāng)倍數(shù)的稀釋液選擇選擇2-32-3個(gè)適宜稀釋度各以個(gè)適宜稀釋度各以1ml1ml之量之量分別入滅菌平皿內(nèi)分別入滅菌平皿內(nèi)每皿內(nèi)參與每皿內(nèi)參與460C460C適量營養(yǎng)瓊脂適量營養(yǎng)瓊脂菌落數(shù)菌落數(shù)報(bào)告報(bào)告三、實(shí)驗(yàn)方法三、實(shí)驗(yàn)方法1 1以無菌操作，將檢樣以無菌操作，將檢樣25g25g或或25ml25ml剪碎以后，放于剪碎以后，放于含有含有225ml225ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi)瓶滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi)瓶內(nèi)預(yù)先置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖內(nèi)預(yù)先置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠或滅

5、菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做成或研磨做成1 1：1010的均勻稀釋液。的均勻稀釋液。 固體檢樣在參與稀釋液后，最好置滅菌均質(zhì)器中固體檢樣在參與稀釋液后，最好置滅菌均質(zhì)器中以以8000r/min100000r/min8000r/min100000r/min的速度處置的速度處置1min1min，做成，做成1 1：1010的的均勻稀釋液。均勻稀釋液。2 2用用1ml1ml滅菌吸管汲取滅菌吸管汲取1 1：1010稀釋液稀釋液1ml1ml，沿管壁徐徐注，沿管壁徐徐注入含有入含有9ml9ml滅菌生理鹽水或其他稀釋的試管內(nèi)留意吸管尖滅菌生理鹽水或其他稀釋的試管內(nèi)留意吸管尖端不要觸及管內(nèi)稀釋液，下同，振搖試管

6、混合均勻，做端不要觸及管內(nèi)稀釋液，下同，振搖試管混合均勻，做成成1 1：100100的稀釋液。的稀釋液。3 3另取另取1ml1ml的滅菌吸管，按上項(xiàng)操作順序作的滅菌吸管，按上項(xiàng)操作順序作1010倍遞增稀倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次，即換用釋液，如此每遞增稀釋一次，即換用1 1支支1ml1ml滅菌吸管。滅菌吸管。2 2、檢樣稀釋及培育、檢樣稀釋及培育4 4根據(jù)食品衛(wèi)生規(guī)范要求或?qū)z樣污染情況的估根據(jù)食品衛(wèi)生規(guī)范要求或?qū)z樣污染情況的估計(jì)，選擇計(jì)，選擇2 23 3個(gè)適宜稀釋度，分別在作個(gè)適宜稀釋度，分別在作1010倍遞增稀倍遞增稀釋的同時(shí)，即以汲取該稀釋度的吸管移釋的同時(shí)，即以汲取該稀釋度的吸

7、管移1ml1ml稀釋液于稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度作兩個(gè)平皿。滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度作兩個(gè)平皿。5 5稀釋液移入平皿后，應(yīng)及時(shí)將涼至稀釋液移入平皿后，應(yīng)及時(shí)將涼至460C460C營養(yǎng)瓊營養(yǎng)瓊脂培育基脂培育基 可放置在可放置在46461 10C0C水浴鍋內(nèi)保溫水浴鍋內(nèi)保溫 注入平皿注入平皿15ml15ml20mL20mL，并轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻，同，并轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻，同時(shí)將營養(yǎng)瓊脂培育基傾入加有時(shí)將營養(yǎng)瓊脂培育基傾入加有1ml1ml稀釋液不含樣品稀釋液不含樣品的滅菌平皿內(nèi)作空白對照。的滅菌平皿內(nèi)作空白對照。 6 6等瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置等瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置36361 10C0C恒

8、恒溫箱內(nèi)培育溫箱內(nèi)培育48482 2h h取出，計(jì)算平板內(nèi)菌落數(shù)目乘取出，計(jì)算平板內(nèi)菌落數(shù)目乘以倍數(shù)，即得以倍數(shù)，即得1g1g1mL1mL樣品所含菌落總數(shù)。樣品所含菌落總數(shù)。 3、菌落計(jì)算方法、菌落計(jì)算方法1菌落計(jì)數(shù)方法菌落計(jì)數(shù)方法 做平板菌落計(jì)數(shù)時(shí)，可用肉眼觀查，必要時(shí)用做平板菌落計(jì)數(shù)時(shí)，可用肉眼觀查，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防脫漏。在記下各平板的菌落數(shù)放大鏡檢查，以防脫漏。在記下各平板的菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)。后，求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)。2菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告平板菌落數(shù)的選擇平板菌落數(shù)的選擇 選取菌落數(shù)在選取菌落數(shù)在30300之間的平板作為菌落總數(shù)之間的

9、平板作為菌落總數(shù)測定規(guī)范。一個(gè)稀釋度運(yùn)用兩個(gè)平板，應(yīng)采用兩測定規(guī)范。一個(gè)稀釋度運(yùn)用兩個(gè)平板，應(yīng)采用兩個(gè)平板平均數(shù)，其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生個(gè)平板平均數(shù)，其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長時(shí)，那么不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的長時(shí)，那么不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)，假設(shè)片狀菌落不到平板作為該稀釋度的菌落數(shù)，假設(shè)片狀菌落不到平板的一半，而其他的一半中菌落分布又很均勻，平板的一半，而其他的一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個(gè)平板后乘即可計(jì)算半個(gè)平板后乘2以代表全皿菌落數(shù)。平皿以代表全皿菌落數(shù)。平皿內(nèi)如有鏈狀菌落生長時(shí)菌落之間無明顯界限，內(nèi)如有鏈狀菌落生長時(shí)菌落之間無明顯

10、界限，假設(shè)僅有一條鏈，可視為一個(gè)菌落數(shù)；假設(shè)有不假設(shè)僅有一條鏈，可視為一個(gè)菌落數(shù)；假設(shè)有不同來源的幾條鏈，那么應(yīng)將每條鏈作為一個(gè)菌落同來源的幾條鏈，那么應(yīng)將每條鏈作為一個(gè)菌落計(jì)。計(jì)。 稀釋度的選擇稀釋度的選擇 應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在3030300300之間的稀釋度，之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。假設(shè)有兩上稀釋度，其生長乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。假設(shè)有兩上稀釋度，其生長的菌落數(shù)均在的菌落數(shù)均在3030300300之間，那么視兩者之比如何之間，那么視兩者之比如何來決議。假設(shè)其比值小于或等于來決議。假設(shè)其比值小于或等于2 2，應(yīng)報(bào)告其平均，應(yīng)報(bào)告其平均數(shù)；假設(shè)大于數(shù)；假設(shè)大于2 2那么報(bào)

11、告其中較小的數(shù)字。那么報(bào)告其中較小的數(shù)字。 假設(shè)一切稀釋度平均菌落數(shù)均大于假設(shè)一切稀釋度平均菌落數(shù)均大于300300，那么，那么應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。 假設(shè)一切稀釋度的平均菌落數(shù)均小于假設(shè)一切稀釋度的平均菌落數(shù)均小于3030，那么，那么應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。 假設(shè)一切稀釋度均無菌落生長，那么以小于假設(shè)一切稀釋度均無菌落生長，那么以小于1 1乘以最低稀釋倍數(shù)報(bào)告之。乘以最低稀釋倍數(shù)報(bào)告之。 假設(shè)一切稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30300之間，其中一部分大于300

12、或小于30時(shí)，那么以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。菌落數(shù)的報(bào)告 菌落數(shù)在100以內(nèi)時(shí)，按其實(shí)有數(shù)報(bào)告，大于100時(shí)，采用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法計(jì)算。為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)，也可用10的指數(shù)來表示。2食品中大腸菌群的測定食品中大腸菌群的測定大腸菌群的定義大腸菌群的定義:大腸菌群并非細(xì)菌學(xué)分類命大腸菌群并非細(xì)菌學(xué)分類命名，而是衛(wèi)生細(xì)菌領(lǐng)域的用語，它不代表某一名，而是衛(wèi)生細(xì)菌領(lǐng)域的用語，它不代表某一個(gè)或某一屬細(xì)菌，而指的是具有某些特性的一個(gè)或某一屬細(xì)菌，而指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌，這些細(xì)菌在生化及組與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌，這些細(xì)菌

13、在生化及血清學(xué)方面并非完全一致，其定義為：需氧及血清學(xué)方面并非完全一致，其定義為：需氧及兼性厭氧、在兼性厭氧、在3724 h能分解乳糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、能分解乳糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、需氧和兼性厭的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。需氧和兼性厭的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。普通以為該菌群細(xì)菌可包括大腸埃希氏菌、檸普通以為該菌群細(xì)菌可包括大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產(chǎn)氣克雷白氏菌和陰溝腸桿菌等。檬酸桿菌、產(chǎn)氣克雷白氏菌和陰溝腸桿菌等。 大腸菌群大腸菌群= =大腸桿菌嗎？大腸桿菌嗎？大腸菌群包括大腸桿菌。大腸菌群指可大腸菌群包括大腸桿菌。大腸菌群指可以發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰型無芽以發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰型無芽孢桿菌。孢桿菌。

14、大腸埃希氏菌大腸埃希氏菌(E. coli)(E. coli)習(xí)慣稱為大腸桿習(xí)慣稱為大腸桿菌，分類于腸桿菌科，歸屬于埃希氏菌菌，分類于腸桿菌科，歸屬于埃希氏菌屬。屬。大腸菌群的衛(wèi)生意義大腸菌群的衛(wèi)生意義大腸菌群數(shù)的高低，闡明了糞便污染的程大腸菌群數(shù)的高低，闡明了糞便污染的程度，也反映了對人體安康危害性的大小。度，也反映了對人體安康危害性的大小。食品中有糞便污染，那么可以推測該食品食品中有糞便污染，那么可以推測該食品中存在著腸道致病菌污染的能夠性，埋伏中存在著腸道致病菌污染的能夠性，埋伏著食物中毒和流行病的要挾，必需看作對著食物中毒和流行病的要挾，必需看作對人體安康具有潛在的危險(xiǎn)性。人體安康具有潛

15、在的危險(xiǎn)性。 國標(biāo)法國標(biāo)法國家規(guī)范：國家規(guī)范采用三步法，即：乳糖發(fā)酵國家規(guī)范：國家規(guī)范采用三步法，即：乳糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)、分別培育和證明實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)、分別培育和證明實(shí)驗(yàn)。乳糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)：樣品稀釋后，選擇三個(gè)稀釋度，乳糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)：樣品稀釋后，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種三管乳糖膽鹽發(fā)酵管。每個(gè)稀釋度接種三管乳糖膽鹽發(fā)酵管。363611培培育育24242h2h，察看能否產(chǎn)氣。，察看能否產(chǎn)氣。 分別培育：將產(chǎn)氣發(fā)酵管培育物轉(zhuǎn)種于伊紅美藍(lán)分別培育：將產(chǎn)氣發(fā)酵管培育物轉(zhuǎn)種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，瓊脂平板上，363611培育培育18-24h18-24h，察看菌落形狀。，察看菌落形狀。 證明實(shí)驗(yàn)：挑取平板上的可疑菌落

16、，進(jìn)展革蘭氏證明實(shí)驗(yàn)：挑取平板上的可疑菌落，進(jìn)展革蘭氏染色察看。同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管染色察看。同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管363611培育培育24242h2h，察看產(chǎn)氣情況。察看產(chǎn)氣情況。 報(bào)告：根據(jù)證明為大腸桿菌陽性的管數(shù)，查報(bào)告：根據(jù)證明為大腸桿菌陽性的管數(shù)，查MPNMPN表，表，報(bào)告每報(bào)告每100ml100mlg g大腸菌群的大腸菌群的MPNMPN值。值。 實(shí)驗(yàn)二實(shí)驗(yàn)二 食品中大腸菌群的測定食品中大腸菌群的測定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊弧?shí)驗(yàn)?zāi)康? 1、學(xué)習(xí)食品中大腸菌群檢測程序、方法；、學(xué)習(xí)食品中大腸菌群檢測程序、方法；2 2、掌握食品中大腸菌群檢測結(jié)果的報(bào)告、掌握食品中大腸菌群檢測結(jié)果的報(bào)告方式。方式。二、

17、實(shí)驗(yàn)資料二、實(shí)驗(yàn)資料1 1、設(shè)備和資料、設(shè)備和資料溫箱、水浴鍋、天平、顯微鏡、均質(zhì)器溫箱、水浴鍋、天平、顯微鏡、均質(zhì)器或乳缽、溫度計(jì)、平皿、試管、發(fā)酵管、或乳缽、溫度計(jì)、平皿、試管、發(fā)酵管、吸管、載玻片、接種針吸管、載玻片、接種針2 2、培育基及試劑、培育基及試劑乳糖乳糖膽鹽發(fā)酵管、乳糖發(fā)酵管、蛋白膽鹽發(fā)酵管、乳糖發(fā)酵管、蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑、麥康凱、伊紅美藍(lán)胨水、靛基質(zhì)試劑、麥康凱、伊紅美藍(lán)瓊脂瓊脂EMBEMB、遠(yuǎn)騰氏瓊脂、革蘭氏染色、遠(yuǎn)騰氏瓊脂、革蘭氏染色液液三、實(shí)驗(yàn)方法與步驟三、實(shí)驗(yàn)方法與步驟1 1、采樣及稀釋、采樣及稀釋以無菌操作將檢樣以無菌操作將檢樣25g25g或或25ml25ml放

18、于放于含有含有225ml225ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi)瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃滅菌玻璃瓶內(nèi)瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做珠或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做成成1 1：1010的均勻稀釋液。固體檢樣最好用的均勻稀釋液。固體檢樣最好用無菌均質(zhì)器，以無菌均質(zhì)器，以8000r/min8000r/min10000r/min10000r/min的速度處置的速度處置1min1min，做成，做成1 1：1010的稀釋液。的稀釋液。用用1ml1ml滅菌吸管汲取滅菌吸管汲取1 1：1010稀釋液稀釋液1ml1ml，注入含有注入含有9ml9ml滅菌

19、生理鹽水或其他稀釋液滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi)，振搖混勻，做成的試管內(nèi)，振搖混勻，做成1 1：100100的稀釋的稀釋液，換用液，換用1 1支支1ml1ml滅菌吸管，按上述操作依滅菌吸管，按上述操作依次作次作1010倍遞增稀釋液倍遞增稀釋液根據(jù)食品衛(wèi)生要求或?qū)z驗(yàn)樣品污染情況估計(jì)，根據(jù)食品衛(wèi)生要求或?qū)z驗(yàn)樣品污染情況估計(jì)，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種3 3管。也可直接用管。也可直接用樣品接種。樣品接種。2. 2. 乳糖初發(fā)酵實(shí)驗(yàn)乳糖初發(fā)酵實(shí)驗(yàn) 即通常所說的假定實(shí)驗(yàn)。其目的在于檢查樣品中即通常所說的假定實(shí)驗(yàn)。其目的在于檢查樣品中有無發(fā)酵乳糖產(chǎn)生氣體的細(xì)菌。有

20、無發(fā)酵乳糖產(chǎn)生氣體的細(xì)菌。 將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，接種量在將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，接種量在1ml1ml以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管；以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管；1ml1ml及及1ml1ml以下以下者，用單料乳糖發(fā)酵管。每一個(gè)稀釋度接種者，用單料乳糖發(fā)酵管。每一個(gè)稀釋度接種3 3管，置管，置36361 10C0C溫箱內(nèi)，培育溫箱內(nèi)，培育24242 2h h，如一切乳糖膽，如一切乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，那么可報(bào)告為大腸菌群陰性，鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，那么可報(bào)告為大腸菌群陰性，如有產(chǎn)生者，那么按以下程續(xù)進(jìn)展如有產(chǎn)生者，那么按以下程續(xù)進(jìn)展3.3.分別培育分別培育 將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別

21、轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂板或?qū)a(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂板或麥康凱瓊脂平板上，置麥康凱瓊脂平板上，置36361 10C0C溫箱內(nèi)，培育溫箱內(nèi)，培育18h 18h 24h24h，然后取出，察看菌落形狀并作革蘭氏染，然后取出，察看菌落形狀并作革蘭氏染色鏡檢和復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)。色鏡檢和復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)。4.4.乳糖復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)乳糖復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn) 即通常所說的證明實(shí)驗(yàn)，其目的在于證明從乳即通常所說的證明實(shí)驗(yàn)，其目的在于證明從乳糖初酵管實(shí)驗(yàn)呈陽性反響的試管內(nèi)分別到的革蘭氏糖初酵管實(shí)驗(yàn)呈陽性反響的試管內(nèi)分別到的革蘭氏陰性無芽胞桿菌，確能發(fā)酵乳糖產(chǎn)生氣體。陰性無芽胞桿菌，確能發(fā)酵乳糖產(chǎn)生氣體。 在上述的選擇性培育基上，挑取

22、可疑大腸菌群1 2個(gè)進(jìn)展革蘭氏染色，同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管，置3610C的溫箱內(nèi)培育242h，察看產(chǎn)氣情況。 凡乳糖發(fā)酵管產(chǎn)氣，革蘭氏染色為陰性無芽胞桿菌，即報(bào)告為大腸桿菌陽性；凡乳糖發(fā)酵管不產(chǎn)氣或革蘭氏染色為陽性，那么報(bào)告為大腸桿菌為陰性。5.報(bào)告 根據(jù)證明為大腸菌群陽性的管數(shù)，查MPN檢索表，報(bào)告每100mlg食品中大腸菌群的最能夠數(shù)。 3糞大腸菌群的檢驗(yàn)糞大腸菌群的檢驗(yàn) 根據(jù)國家公布的食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)規(guī)范方法(GB4789.3-2019)，糞大腸菌群系指一群能在44 24h內(nèi)發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣和利用色氨酸產(chǎn)生靛基質(zhì)，需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。表8-3中的大腸艾希氏菌I型即屬糞大腸

23、菌群。糞大腸菌群的獨(dú)一來源是糞便，因此，唯有糞大腸菌群是糞便污染確實(shí)切目的。在被檢樣品中，假設(shè)有糞大腸菌群存在，那么在大腸菌群檢驗(yàn)中也被計(jì)入。因此，也有將大腸菌群數(shù)稱為總大腸菌群數(shù)者。實(shí)驗(yàn)三實(shí)驗(yàn)三 霉菌和酵母菌的檢驗(yàn)霉菌和酵母菌的檢驗(yàn)儀器：儀器：冰箱：冰箱：25。 恒溫培育箱：恒溫培育箱： 281。 均質(zhì)器。均質(zhì)器。 恒溫振蕩器。恒溫振蕩器。 顯微鏡：顯微鏡：10100。 電子天平：感量電子天平：感量 0.1 g。 無菌錐形瓶無菌錐形瓶:容量容量 500 mL、250 mL。 無菌廣口瓶：無菌廣口瓶：500 mL。 無菌吸管：無菌吸管：1 mL(具具0.01 mL 刻度刻度)、10 mL(具具0.1 mL 刻度刻度)。 無菌平皿：直徑無菌平皿：直徑 90 mm。 無菌試管無菌試管: 10 mm75 mm。 無菌牛皮紙袋、塑料袋。無菌牛皮紙袋、塑料袋。 培育基和試劑培育基和試劑 馬鈴薯馬鈴薯-葡萄糖葡萄糖-瓊脂培育基瓊脂培育基孟加拉紅培育基孟加拉紅培育基結(jié)果與報(bào)告結(jié)果與報(bào)告 計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)計(jì)計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)