1、LOGO尿中尿中-氨基乙酰丙酸的測(cè)定氨基乙酰丙酸的測(cè)定 預(yù)防醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心預(yù)防醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心 一、原理一、原理 尿中尿中-ALA-ALA與乙酰乙酸乙酯縮合生成與乙酰乙酸乙酯縮合生成吡啶化合吡啶化合 物。此化合物用乙酸乙酯萃取，與對(duì)物。此化合物用乙酸乙酯萃取，與對(duì)二甲氨基二甲氨基 苯甲醛反應(yīng)生成紅色化合物，在波長(zhǎng)苯甲醛反應(yīng)生成紅色化合物，在波長(zhǎng)554nm554nm處比色定量。處比色定量。1.1.分光光度計(jì)分光光度計(jì)2.2.水浴鍋水浴鍋3.3.離心機(jī)離心機(jī)二、儀器二、儀器三、試劑三、試劑 1. 去離子水去離子水2. 乙酸乙酯。乙酸乙酯。3. 乙酰乙酸乙酯。乙酰乙酸乙酯。4. 乙酸鹽緩沖液乙酸鹽

2、緩沖液(pH4.6) 5. -ALA標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)溶液6. 顯色劑顯色劑四、采樣、運(yùn)輸和保存四、采樣、運(yùn)輸和保存 用塑料瓶收集鉛作業(yè)工人尿樣用塑料瓶收集鉛作業(yè)工人尿樣50mL50mL，盡快帶回盡快帶回 實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室( (夏季運(yùn)輸時(shí)最好冷藏夏季運(yùn)輸時(shí)最好冷藏) )，測(cè)比，測(cè)比重后，放重后，放44冰箱可保存二周。冰箱可保存二周。 五、實(shí)驗(yàn)步驟五、實(shí)驗(yàn)步驟離心管號(hào)離心管號(hào)0123456(1) 標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液，標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液，ml00.10.30.50.71.0 0 (2) 水，水，ml2.01.91.71.51.31.01.0(3) 尿樣，尿樣，ml0000001.0(4) 緩沖液，緩沖液，ml222222

3、2 (5) 乙酰乙酸乙酯，乙酰乙酸乙酯，ml0.40.40.40.40.40.40.4ALA含量，含量，ug01.03.05.07.010 ？ 2.2.沸水浴沸水浴1212分鐘，取出冷卻至室溫分鐘，取出冷卻至室溫; ;3.3.每管加乙酸乙酯每管加乙酸乙酯 4ml, 4ml,加塞振搖加塞振搖60-8060-80次次, ,離心離心5min;5min;4.4.各取各取2mL2mL萃取層于另萃取層于另7 7支比色管中，各加支比色管中，各加2mL2mL顯色劑，混顯色劑，混 勻，靜置勻，靜置10min10min，5.554nm5.554nm處，以零管為參比，比色處，以零管為參比，比色6.6.以吸光度為縱坐

4、標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，ALAALA含量為橫坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線；含量為橫坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線；7.7.從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣品管中從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣品管中ALAALA的含量的含量 。1.1.六、計(jì)算六、計(jì)算1.1.按式按式(1)(1)計(jì)算尿樣換算成標(biāo)準(zhǔn)比重計(jì)算尿樣換算成標(biāo)準(zhǔn)比重(1.020)(1.020)下的濃度的校正系數(shù)下的濃度的校正系數(shù)(k)(k)。 2.按式按式(2)計(jì)算尿中計(jì)算尿中ALA的濃度。的濃度。 式中：式中：X尿中尿中ALA的濃度，的濃度，mg/L；m樣品管中樣品管中ALA含量，含量，g；V 分析時(shí)所取尿樣的體積，分析時(shí)所取尿樣的體積，mL。正常值：正常值：4mg/L4mg/L七、本卷須知七、本卷須知 1. 1.接觸者的尿樣采集時(shí)間不限接觸者的尿樣采集時(shí)間不限, ,采樣時(shí)應(yīng)避免污染。采樣時(shí)應(yīng)避免污染。 2. 2.煮沸時(shí)間應(yīng)從比色管放進(jìn)水浴后煮沸時(shí)間應(yīng)從比色管放進(jìn)水浴后, ,水重新沸騰水重新沸騰, , 開(kāi)始計(jì)算時(shí)間，不得少于開(kāi)始計(jì)算時(shí)間，不得少于12min12min。 3. 3.尿中尿中-ALA-ALA含量高或顏色較深時(shí)含量高或顏色較深時(shí), ,可減少取樣量?？蓽p少取樣量。 4. 4.本法中紅