1、淋球菌培養(yǎng)及鑒定淋球菌培養(yǎng)及鑒定黃景維黃景維2014-10-31什么是淋球菌？什么是淋球菌？共同點(diǎn)：革蘭陰性球菌、單個(gè)或成雙排共同點(diǎn)：革蘭陰性球菌、單個(gè)或成雙排列、無(wú)芽孢、無(wú)鞭毛、有菌毛列、無(wú)芽孢、無(wú)鞭毛、有菌毛 觸酶試驗(yàn)（觸酶試驗(yàn)（+） 氧化酶試驗(yàn)（氧化酶試驗(yàn)（+）不同點(diǎn)：對(duì)糖分解能力、硝酸鹽還原能不同點(diǎn)：對(duì)糖分解能力、硝酸鹽還原能力和力和DNA合成酶合成酶 淋球菌即淋病奈瑟菌，屬于奈瑟菌屬。淋球菌即淋病奈瑟菌，屬于奈瑟菌屬。淋球菌形態(tài)淋球菌形態(tài)淋球菌，是一種革蘭陰性雙球菌，呈卵淋球菌，是一種革蘭陰性雙球菌，呈卵圓形或腎形，成對(duì)排列，直徑約圓形或腎形，成對(duì)排列，直徑約0608m，常位于多形核

2、白細(xì)胞的胞漿內(nèi)，常位于多形核白細(xì)胞的胞漿內(nèi)，慢性期則在細(xì)胞外。，慢性期則在細(xì)胞外。生長(zhǎng)適宜溫度為生長(zhǎng)適宜溫度為3738，淋菌不耐，淋菌不耐熱，干燥環(huán)境存活熱，干燥環(huán)境存活12小時(shí)，小時(shí)，555分鐘分鐘立即死亡，附著在衣褲和臥具上的淋菌立即死亡，附著在衣褲和臥具上的淋菌最多只能生存最多只能生存24小時(shí)，一般消毒劑易將小時(shí)，一般消毒劑易將其殺死。其殺死。淋球菌形態(tài)淋球菌形態(tài)致病性致病性傳染方式：成人傳染方式：成人 性接觸性接觸 初生嬰兒初生嬰兒 患病母親產(chǎn)道感染患病母親產(chǎn)道感染 致病物質(zhì)：菌毛致病物質(zhì)：菌毛 外膜蛋白外膜蛋白PI：中性粒細(xì)胞受損中性粒細(xì)胞受損 外膜蛋白外膜蛋白PII：黏附黏附 外膜

3、蛋白外膜蛋白PIII：阻抑抗體活性阻抑抗體活性 IgA1酶酶:破壞粘膜局部抗體破壞粘膜局部抗體所致疾病所致疾病男性男性急性淋菌性前尿道炎急性淋菌性前尿道炎 女性女性淋菌性宮頸炎、尿道炎淋菌性宮頸炎、尿道炎 初生嬰兒初生嬰兒膿漏眼膿漏眼 發(fā)展：發(fā)展：男性男性后尿道炎、前列腺炎、精囊炎后尿道炎、前列腺炎、精囊炎、附睪炎等、附睪炎等 女性女性子宮內(nèi)膜炎、輸卵管炎等子宮內(nèi)膜炎、輸卵管炎等 后遺癥：不育、不孕、異位妊娠后遺癥：不育、不孕、異位妊娠淋球菌感染淋球菌感染淋病是由奈瑟淋球菌所致的泌尿生殖系淋病是由奈瑟淋球菌所致的泌尿生殖系統(tǒng)感染。統(tǒng)感染。不僅可引起男性尿道炎、女性宮頸或尿不僅可引起男性尿道炎、

4、女性宮頸或尿道炎，還可經(jīng)血行播散引起菌血癥。道炎，還可經(jīng)血行播散引起菌血癥。臨床表現(xiàn)因感染的人群不同，部位不同臨床表現(xiàn)因感染的人群不同，部位不同而有差別而有差別實(shí)驗(yàn)室鑒別淋球菌實(shí)驗(yàn)室鑒別淋球菌直接涂片直接涂片：取尿道或?qū)m頸膿性分泌物涂取尿道或?qū)m頸膿性分泌物涂片，作革蘭染色，鏡下可見(jiàn)大量多形核片，作革蘭染色，鏡下可見(jiàn)大量多形核白細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)數(shù)量不等的革蘭陰白細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)數(shù)量不等的革蘭陰性雙球菌。涂片對(duì)女性檢出率低，有假性雙球菌。涂片對(duì)女性檢出率低，有假陰性，必要時(shí)應(yīng)作培養(yǎng)。陰性，必要時(shí)應(yīng)作培養(yǎng)。細(xì)菌培養(yǎng)細(xì)菌培養(yǎng)：標(biāo)本在選擇性培養(yǎng)基上培養(yǎng)標(biāo)本在選擇性培養(yǎng)基上培養(yǎng)，可出現(xiàn)典型菌落，氧化酶試驗(yàn)

5、陽(yáng)性，可出現(xiàn)典型菌落，氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性，鏡檢可見(jiàn)到革蘭陰性雙球菌，鏡檢可見(jiàn)到革蘭陰性雙球菌，還還可用檢測(cè)淋球菌可用檢測(cè)淋球菌DNA，直接免疫熒光，直接免疫熒光試驗(yàn)協(xié)助確診。試驗(yàn)協(xié)助確診。淋球菌培養(yǎng)淋球菌培養(yǎng)淋球菌是淋病的病原菌，為實(shí)驗(yàn)室確診淋球菌是淋病的病原菌，為實(shí)驗(yàn)室確診淋病提供依據(jù)。（培養(yǎng)法為確診淋病的淋病提供依據(jù)。（培養(yǎng)法為確診淋病的金標(biāo)準(zhǔn)）金標(biāo)準(zhǔn)）淋球菌藥敏試驗(yàn)，測(cè)定藥物抑菌或殺菌淋球菌藥敏試驗(yàn)，測(cè)定藥物抑菌或殺菌能力，以便準(zhǔn)確有效利用藥敏進(jìn)行治療。能力，以便準(zhǔn)確有效利用藥敏進(jìn)行治療。淋球菌培養(yǎng)條件淋球菌培養(yǎng)條件淋球菌的營(yíng)養(yǎng)要求較復(fù)雜，所用的培養(yǎng)淋球菌的營(yíng)養(yǎng)要求較復(fù)雜，所用的培養(yǎng)基中應(yīng)含

6、有動(dòng)物蛋白及細(xì)菌生長(zhǎng)所需的基中應(yīng)含有動(dòng)物蛋白及細(xì)菌生長(zhǎng)所需的各種因子。目前國(guó)內(nèi)常用的是血液瓊脂各種因子。目前國(guó)內(nèi)常用的是血液瓊脂或巧克力瓊脂。或巧克力瓊脂。國(guó)外常用的培養(yǎng)基有國(guó)外常用的培養(yǎng)基有Thayer-Martin(T-M)培養(yǎng)基、培養(yǎng)基、NewYork City(NYC)培養(yǎng)基培養(yǎng)基和和Martin-Lewis(ML)培養(yǎng)基等培養(yǎng)基等。T-M培養(yǎng)基培養(yǎng)基T-M培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基是在GC基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，加入血基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，加入血紅蛋白紅蛋白(1%)、抗生素、抗生素(萬(wàn)古霉素萬(wàn)古霉素3g/ml、粘、粘菌素菌素7.5g/ml和制霉菌素和制霉菌素12.5g/ml)和淋球菌和淋球菌增菌劑，使絕大多數(shù)雜

7、菌被抑制而淋球菌增菌劑，使絕大多數(shù)雜菌被抑制而淋球菌菌落長(zhǎng)得較大，在乎皿中幾乎呈純培養(yǎng)，菌落長(zhǎng)得較大，在乎皿中幾乎呈純培養(yǎng)，從而大大提高了由子宮頸、尿道，尤其是從而大大提高了由子宮頸、尿道，尤其是咽和直腸部位分離出淋菌的陽(yáng)性率。咽和直腸部位分離出淋菌的陽(yáng)性率。 淋球菌培養(yǎng)條件淋球菌培養(yǎng)條件淋球菌對(duì)外環(huán)境變化頗為敏感，對(duì)寒冷和淋球菌對(duì)外環(huán)境變化頗為敏感，對(duì)寒冷和干燥抵抗力很弱。因此，為了保證培養(yǎng)有干燥抵抗力很弱。因此，為了保證培養(yǎng)有足夠的成功率，取材后應(yīng)立即接種，標(biāo)本足夠的成功率，取材后應(yīng)立即接種，標(biāo)本離體時(shí)間越短越好。離體時(shí)間越短越好。培養(yǎng)的最適溫度為培養(yǎng)的最適溫度為3537，超過(guò)，超過(guò)38.

8、5或低于或低于30便生長(zhǎng)不良。因此，孵育的溫便生長(zhǎng)不良。因此，孵育的溫度要恒定。度要恒定。淋球菌為需氧菌，但最初從人體分離時(shí)，淋球菌為需氧菌，但最初從人體分離時(shí)，為促進(jìn)生長(zhǎng)，需用為促進(jìn)生長(zhǎng)，需用5%二氧化碳環(huán)境培養(yǎng)。二氧化碳環(huán)境培養(yǎng)。淋球菌培養(yǎng)關(guān)鍵淋球菌培養(yǎng)關(guān)鍵取材部位準(zhǔn)確取材部位準(zhǔn)確女性病人標(biāo)本：取宮頸內(nèi)膜分泌物女性病人標(biāo)本：取宮頸內(nèi)膜分泌物 男性病人標(biāo)本：取尿道口膿性分泌物男性病人標(biāo)本：取尿道口膿性分泌物培養(yǎng)基預(yù)溫培養(yǎng)基預(yù)溫立即接種立即接種最好床邊接種最好床邊接種合適的培養(yǎng)基合適的培養(yǎng)基CO2培養(yǎng)培養(yǎng)淋球菌鑒定淋球菌鑒定分泌物分泌物直接涂片染色直接涂片染色 分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)可疑菌落可疑菌落

9、 涂片染色涂片染色生化反應(yīng)生化反應(yīng)初步報(bào)告初步報(bào)告生長(zhǎng)特性生長(zhǎng)特性平板生長(zhǎng)特性平板生長(zhǎng)特性經(jīng)經(jīng)24h48h的培養(yǎng)后，可形成圓形、凸起的培養(yǎng)后，可形成圓形、凸起、濕潤(rùn)、光滑、半透明或灰白色菌落，似、濕潤(rùn)、光滑、半透明或灰白色菌落，似露水珠，易乳化，直徑為露水珠，易乳化，直徑為0.5mm 1.0mm。平板生長(zhǎng)形態(tài)平板生長(zhǎng)形態(tài)鏡檢形態(tài)鏡檢形態(tài)從菌落上取材作涂片，革蘭染色后可見(jiàn)從菌落上取材作涂片，革蘭染色后可見(jiàn)到菌的大小及染色的深度有差異，排列到菌的大小及染色的深度有差異，排列也不一致，呈典型革蘭陰性雙球菌。也不一致，呈典型革蘭陰性雙球菌。鏡檢形態(tài)鏡檢形態(tài)鏡檢形態(tài)鏡檢形態(tài)來(lái)自泌尿生殖道符合初步鑒定標(biāo)準(zhǔn)

10、的分來(lái)自泌尿生殖道符合初步鑒定標(biāo)準(zhǔn)的分離株，一般可診斷為淋球菌，準(zhǔn)確率達(dá)離株，一般可診斷為淋球菌，準(zhǔn)確率達(dá)98%。對(duì)于菌落形態(tài)不典型的分離株，來(lái)自咽對(duì)于菌落形態(tài)不典型的分離株，來(lái)自咽部、眼睛或其他泌尿生殖道外部位的分部、眼睛或其他泌尿生殖道外部位的分離株，應(yīng)作確診試驗(yàn)。離株，應(yīng)作確診試驗(yàn)。鑒定試驗(yàn)鑒定試驗(yàn)氧化酶試驗(yàn)氧化酶試驗(yàn)糖分解試驗(yàn)（葡萄糖、麥芽糖、蔗糖）糖分解試驗(yàn)（葡萄糖、麥芽糖、蔗糖）30過(guò)氧化氫試驗(yàn)過(guò)氧化氫試驗(yàn)鑒定依據(jù)鑒定依據(jù)形態(tài)染色典型：革蘭陰性球菌形態(tài)染色典型：革蘭陰性球菌培養(yǎng)特性：光滑、濕潤(rùn)、易乳化菌落培養(yǎng)特性：光滑、濕潤(rùn)、易乳化菌落生化反應(yīng)：氧化酶陽(yáng)性、僅分解葡萄糖生化反應(yīng)：氧化酶陽(yáng)性、僅分解葡萄糖（麥芽糖、乳糖、蔗糖、果糖均不分解（麥芽糖、乳糖、蔗糖、果糖均不分解）奈瑟菌屬鑒定奈瑟菌屬鑒定菌名菌名生長(zhǎng)生長(zhǎng)產(chǎn)酸產(chǎn)酸硝酸鹽還硝酸鹽還原原DNA酶酶巧克力平皿上特巧克力平皿上特點(diǎn)點(diǎn)巧克力或血瓊脂(22)營(yíng)養(yǎng)瓊脂(35)葡萄糖麥芽糖乳糖蔗糖果糖淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌-+-光滑,灰白色,透明腦膜炎奈瑟腦膜炎奈瑟菌菌-+-光滑,灰,無(wú)色,透明,個(gè)別淡黃粘膜奈瑟菌粘膜奈瑟菌+-+-黃綠,光滑卡他布蘭漢卡他布蘭漢d+-+灰白棕色、易乳化分泌物分泌物男性確診男性確診女性（其女性（其