1、采用十二烷基硫酸鈉采用十二烷基硫酸鈉-聚丙稀酰胺凝膠電泳（聚丙稀酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE，polyacrylamide gel electrophoresis）方法可對蛋白質(zhì)的組分進(jìn)行分離，并可精確測得蛋）方法可對蛋白質(zhì)的組分進(jìn)行分離，并可精確測得蛋白質(zhì)的分子量。常用的方法為白質(zhì)的分子量。常用的方法為SDS-PAGE不連續(xù)系統(tǒng)。不連續(xù)系統(tǒng)。 基本原理：聚丙稀酰胺是由丙稀酰胺（基本原理：聚丙稀酰胺是由丙稀酰胺（acrylamide）和）和N,N-亞甲基雙丙稀亞甲基雙丙稀酰胺（酰胺（N,N-methylene bis acrylamide）經(jīng)共聚合而成。此聚合過程是由）經(jīng)共聚合而成。此聚合過

2、程是由四甲基乙二胺（四甲基乙二胺（tetramethylethylenediamine，TEMED）和過硫酸胺）和過硫酸胺（ammonium persulfate，AP）激發(fā)的。被激活的單體和未被激活的單體）激發(fā)的。被激活的單體和未被激活的單體開始了多聚鏈的延伸，正在延伸的多聚鏈也可以隨機(jī)地接上雙丙稀酰胺，使開始了多聚鏈的延伸，正在延伸的多聚鏈也可以隨機(jī)地接上雙丙稀酰胺，使多聚鏈交叉互連成為網(wǎng)狀立體結(jié)構(gòu)，最終多聚鏈聚合成凝膠狀。多聚鏈交叉互連成為網(wǎng)狀立體結(jié)構(gòu)，最終多聚鏈聚合成凝膠狀。 采用十二烷基硫酸鈉采用十二烷基硫酸鈉-聚丙稀酰胺凝膠電泳（聚丙稀酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE，polyacr

3、ylamide gel electrophoresis）方法可對蛋白質(zhì)的組分進(jìn)行分離，并可精確測得蛋）方法可對蛋白質(zhì)的組分進(jìn)行分離，并可精確測得蛋白質(zhì)的分子量。常用的方法為白質(zhì)的分子量。常用的方法為SDS-PAGE不連續(xù)系統(tǒng)。不連續(xù)系統(tǒng)。 基本原理：聚丙稀酰胺是由丙稀酰胺（基本原理：聚丙稀酰胺是由丙稀酰胺（acrylamide）和）和N,N-亞甲基雙丙稀亞甲基雙丙稀酰胺（酰胺（N,N-methylene bis acrylamide）經(jīng)共聚合而成。此聚合過程是由）經(jīng)共聚合而成。此聚合過程是由四甲基乙二胺（四甲基乙二胺（tetramethylethylenediamine，TEMED）和過硫酸胺

4、）和過硫酸胺（ammonium persulfate，AP）激發(fā)的。被激活的單體和未被激活的單體）激發(fā)的。被激活的單體和未被激活的單體開始了多聚鏈的延伸，正在延伸的多聚鏈也可以隨機(jī)地接上雙丙稀酰胺，使開始了多聚鏈的延伸，正在延伸的多聚鏈也可以隨機(jī)地接上雙丙稀酰胺，使多聚鏈交叉互連成為網(wǎng)狀立體結(jié)構(gòu)，最終多聚鏈聚合成凝膠狀。多聚鏈交叉互連成為網(wǎng)狀立體結(jié)構(gòu)，最終多聚鏈聚合成凝膠狀。 (acrylamide)丙烯酰胺是一種白色晶體化學(xué)物質(zhì)，是生產(chǎn)聚丙烯酰胺的原料。聚丙烯丙烯酰胺是一種白色晶體化學(xué)物質(zhì)，是生產(chǎn)聚丙烯酰胺的原料。聚丙烯酰胺主要用于水的凈化處理、紙漿的加工及管道的內(nèi)涂層等。淀粉類食品酰胺主要

5、用于水的凈化處理、紙漿的加工及管道的內(nèi)涂層等。淀粉類食品在高溫（在高溫（ 120）烹調(diào)下容易產(chǎn)生丙烯酰胺。）烹調(diào)下容易產(chǎn)生丙烯酰胺。 研究表明，人體可通過消化道、呼吸道、皮膚黏膜等多種途徑接觸丙研究表明，人體可通過消化道、呼吸道、皮膚黏膜等多種途徑接觸丙烯酰胺，飲水是其中的一條重要接觸途徑。烯酰胺，飲水是其中的一條重要接觸途徑。 丙烯酰胺進(jìn)入體內(nèi)又可通過多種途徑被人體吸收，其中經(jīng)消化道吸收丙烯酰胺進(jìn)入體內(nèi)又可通過多種途徑被人體吸收，其中經(jīng)消化道吸收最快。進(jìn)入人體內(nèi)的丙烯酰胺約最快。進(jìn)入人體內(nèi)的丙烯酰胺約90被代謝，僅少量以原形經(jīng)尿液排出。被代謝，僅少量以原形經(jīng)尿液排出。丙烯酰胺進(jìn)入體內(nèi)后，會在

6、體內(nèi)與丙烯酰胺進(jìn)入體內(nèi)后，會在體內(nèi)與DNA上的鳥嘌呤結(jié)合形成加合物，導(dǎo)致上的鳥嘌呤結(jié)合形成加合物，導(dǎo)致遺傳物質(zhì)損傷和基因突變。遺傳物質(zhì)損傷和基因突變。 對接觸丙烯酰胺的職業(yè)人群和偶然暴露于丙烯酰胺人群的調(diào)查表明，對接觸丙烯酰胺的職業(yè)人群和偶然暴露于丙烯酰胺人群的調(diào)查表明，丙烯酰胺具有神經(jīng)毒性作用，但目前還沒有充足的證據(jù)表明通過食物攝入丙烯酰胺具有神經(jīng)毒性作用，但目前還沒有充足的證據(jù)表明通過食物攝入丙烯酰胺與人類某種腫瘤的發(fā)生有明顯關(guān)系。丙烯酰胺與人類某種腫瘤的發(fā)生有明顯關(guān)系。丙烯酰胺丙烯酰胺丙烯酰胺是一種有機(jī)化合物，別名丙烯酰胺是一種有機(jī)化合物，別名AM；純品為白色結(jié)晶固體，易溶于水、甲醇、乙

7、醇、丙醇，；純品為白色結(jié)晶固體，易溶于水、甲醇、乙醇、丙醇，稍溶于乙酸乙酯、氯仿，微溶于苯，在酸堿環(huán)境中可水解成丙烯酸。職業(yè)性接觸主要見于丙烯稍溶于乙酸乙酯、氯仿，微溶于苯，在酸堿環(huán)境中可水解成丙烯酸。職業(yè)性接觸主要見于丙烯酰胺生產(chǎn)和樹脂、黏合劑等的合成，在地下建筑、改良土壤、油漆、造紙及服裝加工等行業(yè)也酰胺生產(chǎn)和樹脂、黏合劑等的合成，在地下建筑、改良土壤、油漆、造紙及服裝加工等行業(yè)也有接觸機(jī)會。日常生活中，丙烯酰胺可見于吸煙、經(jīng)高溫加工處理的淀粉食品及飲用水中。有接觸機(jī)會。日常生活中，丙烯酰胺可見于吸煙、經(jīng)高溫加工處理的淀粉食品及飲用水中。 毒性毒性 丙烯酰胺屬中等毒類，對眼睛和皮膚有一定的

8、刺激作用，可經(jīng)皮膚、呼吸道和消化道吸收，丙烯酰胺屬中等毒類，對眼睛和皮膚有一定的刺激作用，可經(jīng)皮膚、呼吸道和消化道吸收，在體內(nèi)有蓄積作用，主要影響神經(jīng)系統(tǒng)，急性中毒十分罕見。密切大量接觸可出現(xiàn)亞急性中毒，在體內(nèi)有蓄積作用，主要影響神經(jīng)系統(tǒng)，急性中毒十分罕見。密切大量接觸可出現(xiàn)亞急性中毒，中毒者表現(xiàn)為嗜睡、小腦功能障礙以及感覺運(yùn)動型多發(fā)性周圍神經(jīng)病。長期低濃度接觸可引起中毒者表現(xiàn)為嗜睡、小腦功能障礙以及感覺運(yùn)動型多發(fā)性周圍神經(jīng)病。長期低濃度接觸可引起慢性中毒，中毒者出現(xiàn)頭痛、頭暈、疲勞、嗜睡、手指刺痛、麻木感，還可伴有兩手掌發(fā)紅、慢性中毒，中毒者出現(xiàn)頭痛、頭暈、疲勞、嗜睡、手指刺痛、麻木感，還可

9、伴有兩手掌發(fā)紅、脫屑，手掌、足心多汗，進(jìn)一步發(fā)展可出現(xiàn)四肢無力、肌肉疼痛以及小腦功能障礙等。脫屑，手掌、足心多汗，進(jìn)一步發(fā)展可出現(xiàn)四肢無力、肌肉疼痛以及小腦功能障礙等。 丙烯酰胺慢性毒性作用最引人關(guān)注的是它的致癌性。丙烯酰胺具有致突變作用，可引起哺乳動丙烯酰胺慢性毒性作用最引人關(guān)注的是它的致癌性。丙烯酰胺具有致突變作用，可引起哺乳動物體細(xì)胞和生殖細(xì)胞的基因突變和染色體異常。動物試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，丙烯酰胺可致大鼠多種器物體細(xì)胞和生殖細(xì)胞的基因突變和染色體異常。動物試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，丙烯酰胺可致大鼠多種器官腫瘤，如乳腺、甲狀腺、睪丸、腎上腺、中樞神經(jīng)、口腔、子宮、腦下垂體腫瘤等。但目前官腫瘤，如乳腺、甲狀

10、腺、睪丸、腎上腺、中樞神經(jīng)、口腔、子宮、腦下垂體腫瘤等。但目前還沒有充足的人群流行病學(xué)證據(jù)表明，食物攝入丙烯酰胺與人類某種腫瘤的發(fā)生有明顯相關(guān)性。還沒有充足的人群流行病學(xué)證據(jù)表明，食物攝入丙烯酰胺與人類某種腫瘤的發(fā)生有明顯相關(guān)性。國際癌癥研究機(jī)構(gòu)（國際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）對其致癌性進(jìn)行了評價(jià)，將丙烯酰胺列為）對其致癌性進(jìn)行了評價(jià)，將丙烯酰胺列為2類致癌物（類致癌物（2A），即人），即人類可能致癌物。其主要依據(jù)為，丙烯酰胺在動物和人體均可代謝轉(zhuǎn)化為致癌活性代謝產(chǎn)物環(huán)氧類可能致癌物。其主要依據(jù)為，丙烯酰胺在動物和人體均可代謝轉(zhuǎn)化為致癌活性代謝產(chǎn)物環(huán)氧丙酰胺。丙酰胺。 預(yù)防預(yù)防 職業(yè)性接觸者要通

11、過改革工藝、采取工程技術(shù)措施等手段，降低工作場所空氣中丙烯酰胺的職業(yè)性接觸者要通過改革工藝、采取工程技術(shù)措施等手段，降低工作場所空氣中丙烯酰胺的濃度；同時通過加強(qiáng)個人防護(hù)，如戴口罩、手套，穿防護(hù)服和鞋等，以防止或減少丙烯酰胺進(jìn)濃度；同時通過加強(qiáng)個人防護(hù)，如戴口罩、手套，穿防護(hù)服和鞋等，以防止或減少丙烯酰胺進(jìn)入體內(nèi)。入體內(nèi)。 日常生活中盡量避免過度烹飪食品，如溫度過高或加熱時間太長。提倡平衡膳食，減少油炸日常生活中盡量避免過度烹飪食品，如溫度過高或加熱時間太長。提倡平衡膳食，減少油炸和高脂肪食品的攝入，多吃水果和蔬菜，不要吸煙。和高脂肪食品的攝入，多吃水果和蔬菜，不要吸煙。 由于煎炸食品是我國居

12、民常吃的食物，國家應(yīng)加強(qiáng)膳食中丙烯酰胺的監(jiān)測與控制，開展我國由于煎炸食品是我國居民常吃的食物，國家應(yīng)加強(qiáng)膳食中丙烯酰胺的監(jiān)測與控制，開展我國人群丙烯酰胺的暴露評估，并研究探索減少加工食品中丙烯酰胺含量的方法人群丙烯酰胺的暴露評估，并研究探索減少加工食品中丙烯酰胺含量的方法（N,N-methylene bis acrylamide）N.N-亞甲基雙丙烯酰胺，別名亞甲基雙丙烯酰胺，別名MBA，雙叫，雙叫N.N-甲叉雙丙烯酰胺，次甲基雙丙烯酰甲叉雙丙烯酰胺，次甲基雙丙烯酰胺，胺，N.N-甲撐雙丙烯酰胺。是一種白色晶體粉末，無味，吸濕性極小。遇高溫或強(qiáng)甲撐雙丙烯酰胺。是一種白色晶體粉末，無味，吸濕性極

13、小。遇高溫或強(qiáng)光則自交聯(lián)，微溶于水、乙醇。光則自交聯(lián)，微溶于水、乙醇。 丙烯酰胺單體和交聯(lián)劑丙烯酰胺單體和交聯(lián)劑N1 N-亞甲基雙丙烯酰胺在催化劑的作用下聚合成含有酰胺亞甲基雙丙烯酰胺在催化劑的作用下聚合成含有酰胺基側(cè)鏈的脂肪族長鏈。相鄰的兩個鏈通過亞甲基橋交聯(lián)起來就形成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的基側(cè)鏈的脂肪族長鏈。相鄰的兩個鏈通過亞甲基橋交聯(lián)起來就形成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的聚丙烯酰胺凝膠。聚丙烯酰胺凝膠。 N, N -亞甲基雙丙烯酰胺又名甲撐雙丙烯酰胺亞甲基雙丙烯酰胺又名甲撐雙丙烯酰胺 , 英文縮寫名英文縮寫名 MBA, 為白色或淺黃色為白色或淺黃色粉末狀結(jié)晶粉末狀結(jié)晶 , 毒性低毒性低 , 對皮膚無刺激對皮膚

14、無刺激 , 無神經(jīng)毒性無神經(jīng)毒性 , 溶于水及乙醇、丙酮等有機(jī)溶溶于水及乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑。在它的結(jié)構(gòu)中具有兩個相同且非常活潑的反應(yīng)性官能團(tuán)劑。在它的結(jié)構(gòu)中具有兩個相同且非?；顫姷姆磻?yīng)性官能團(tuán) , 可作為交聯(lián)劑可作為交聯(lián)劑 ,能將能將線性高分子迅速轉(zhuǎn)變?yōu)轶w型高分子線性高分子迅速轉(zhuǎn)變?yōu)轶w型高分子 , 制備吸水性聚合物制備吸水性聚合物 , 還可與各種離子型單體發(fā)還可與各種離子型單體發(fā)生聚合反應(yīng)生聚合反應(yīng) ,使其在石油開采以及醫(yī)藥、水處理等行業(yè)具有廣泛用途。使其在石油開采以及醫(yī)藥、水處理等行業(yè)具有廣泛用途。N.N-亞甲基雙丙烯酰胺（甲叉）亞甲基雙丙烯酰胺（甲叉）TEMED (N,N,N,N-四甲基

15、二乙胺四甲基二乙胺 )產(chǎn)品簡介：產(chǎn)品簡介： TEMED即即N,N,N,N-Tetramethylethylenediamine，中文名為，中文名為N,N,N,N-四甲基二乙胺。分子式為四甲基二乙胺。分子式為(CH3)2NCH2CH2N(CH3)2， 分子量為分子量為116.20。 進(jìn)口分裝，用于配制進(jìn)口分裝，用于配制PAGE膠等。膠等。TEMED通過催化過硫酸銨形成自由基通過催化過硫酸銨形成自由基而加速丙烯酰胺與雙丙烯酰胺的聚合。而加速丙烯酰胺與雙丙烯酰胺的聚合。 加入加速劑加入加速劑TEMED后聚合馬上開始，應(yīng)立即將凝膠混勻，迅速灌膠。后聚合馬上開始，應(yīng)立即將凝膠混勻，迅速灌膠。保存條件：保

16、存條件： 4保存。保存。注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)： 易燃，有腐蝕性，請注意防護(hù)。易燃，有腐蝕性，請注意防護(hù)。為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。過硫酸銨過硫酸銨過硫酸銨是一種白色、無味晶體，常作強(qiáng)氧化劑使用，過硫酸銨是一種白色、無味晶體，常作強(qiáng)氧化劑使用，也可用作單體聚合引發(fā)也可用作單體聚合引發(fā)劑劑。它幾乎不吸潮，由于能達(dá)到很高的純度而具有特別好的穩(wěn)定性，便于儲存。另外，。它幾乎不吸潮，由于能達(dá)到很高的純度而具有特別好的穩(wěn)定性，便于儲存。另外，它還具有使用方便、安全等優(yōu)點(diǎn)。它還具有使用方便、安全等優(yōu)點(diǎn)。 儲存及使用注意事項(xiàng)：儲存及使用注

17、意事項(xiàng)：過硫酸銨屬于非易燃品，但由于能釋放氧而有助燃作用，因此必須在一定條件下過硫酸銨屬于非易燃品，但由于能釋放氧而有助燃作用，因此必須在一定條件下儲存。首先必須存放在干燥、密閉的容器中，其次應(yīng)避免陽光直射、熱源、潮濕等不儲存。首先必須存放在干燥、密閉的容器中，其次應(yīng)避免陽光直射、熱源、潮濕等不利因素。另外，一些雜質(zhì)如臟物、鐵銹、少量金屬以及還原劑可能引起過硫酸銨的分利因素。另外，一些雜質(zhì)如臟物、鐵銹、少量金屬以及還原劑可能引起過硫酸銨的分解，在存放和使用過程中也必須注意。由于潮濕的過硫酸銨粉末及其水溶液有漂白和解，在存放和使用過程中也必須注意。由于潮濕的過硫酸銨粉末及其水溶液有漂白和輕微的腐

18、蝕作用，因此使用過程中應(yīng)避免眼睛、皮膚和衣物直接與其接觸。輕微的腐蝕作用，因此使用過程中應(yīng)避免眼睛、皮膚和衣物直接與其接觸。 過硫酸銨的應(yīng)用：過硫酸銨的應(yīng)用：過硫酸銨提供驅(qū)動丙烯酰胺和雙丙烯酰胺聚合所必需的自由基過硫酸銨提供驅(qū)動丙烯酰胺和雙丙烯酰胺聚合所必需的自由基。須。須新鮮配制新鮮配制過硫酸銨是乳膠或丙烯酸單體聚合液、醋酸乙烯、氯乙烯等產(chǎn)品的引發(fā)過硫酸銨是乳膠或丙烯酸單體聚合液、醋酸乙烯、氯乙烯等產(chǎn)品的引發(fā)劑，同時也是苯乙烯、丙烯腈、丁二烯等膠體發(fā)生共聚作用的引發(fā)劑。劑，同時也是苯乙烯、丙烯腈、丁二烯等膠體發(fā)生共聚作用的引發(fā)劑。過硫酸銨過硫酸銨-TEMED（四甲基乙二胺）系統(tǒng)（四甲基乙二胺

19、）系統(tǒng) ：在：在Acr 和和Bis的溶液中放入這個的溶液中放入這個催化系統(tǒng)后，過硫酸銨催化系統(tǒng)后，過硫酸銨（NH4）2S2O8產(chǎn)生出游離氧原子使單體成為具有產(chǎn)生出游離氧原子使單體成為具有游離基的狀態(tài)，從而發(fā)生聚合作用。聚合的初速度和過硫酸銨濃度的平方根游離基的狀態(tài)，從而發(fā)生聚合作用。聚合的初速度和過硫酸銨濃度的平方根成正比。這種催化系統(tǒng)需要在堿性條件下進(jìn)行。例如，在成正比。這種催化系統(tǒng)需要在堿性條件下進(jìn)行。例如，在pH 8.8條件下條件下7的丙烯酰胺溶液的丙烯酰胺溶液30分鐘就能聚合完畢；在分鐘就能聚合完畢；在 pH 4.3時聚合很慢，要時聚合很慢，要90分鐘才分鐘才能完成。溫度與聚合的快慢成

20、正比。通常在室溫下就很快聚合，溫度升高聚能完成。溫度與聚合的快慢成正比。通常在室溫下就很快聚合，溫度升高聚合更快。如將混合后的凝膠溶液放在近合更快。如將混合后的凝膠溶液放在近0的地方，就能延緩聚合。一般來的地方，就能延緩聚合。一般來講，講，溫度過低，有氧分子或不純物質(zhì)存在時都能延緩凝膠的聚合。為。為了防止溶液中氣泡含有氧分子而妨礙聚合，在聚合前須將溶液分別抽氣，然了防止溶液中氣泡含有氧分子而妨礙聚合，在聚合前須將溶液分別抽氣，然后再混合。后再混合。 不連續(xù)系統(tǒng)由上層濃縮膠和下層的分離膠組成。濃縮膠（不連續(xù)系統(tǒng)由上層濃縮膠和下層的分離膠組成。濃縮膠（pH6.7，孔徑大，孔徑大）主要）主要作用是使

21、樣品濃縮，使樣品在未進(jìn)入分離膠前，被濃縮成很窄的條帶，從而提作用是使樣品濃縮，使樣品在未進(jìn)入分離膠前，被濃縮成很窄的條帶，從而提高分離效果。分離膠（高分離效果。分離膠（pH8.9，孔徑?。┩ㄟ^分子篩效應(yīng)和電荷效應(yīng)，把樣品中，孔徑?。┩ㄟ^分子篩效應(yīng)和電荷效應(yīng)，把樣品中的各組分按分子量和電荷的大小而分開。的各組分按分子量和電荷的大小而分開。 如果要利用凝膠電泳測定某一蛋白質(zhì)的分子量就必須將電荷效應(yīng)去掉或減少到如果要利用凝膠電泳測定某一蛋白質(zhì)的分子量就必須將電荷效應(yīng)去掉或減少到可以忽略不計(jì)的程度，使蛋白質(zhì)泳動率的大小完全取決于分子量。如何去除電可以忽略不計(jì)的程度，使蛋白質(zhì)泳動率的大小完全取決于分子量

22、。如何去除電荷效應(yīng)呢？現(xiàn)常用的是十二烷基硫酸鈉（荷效應(yīng)呢？現(xiàn)常用的是十二烷基硫酸鈉（SDS）。）。SDS是一種陰離子去污劑。是一種陰離子去污劑。在電泳體系中加入一定濃度的在電泳體系中加入一定濃度的SDS，SDS以一定的比例和蛋白質(zhì)分子結(jié)合成復(fù)以一定的比例和蛋白質(zhì)分子結(jié)合成復(fù)合物，使蛋白質(zhì)分子帶負(fù)電荷，這種負(fù)電荷遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了蛋白質(zhì)分子原有的電荷，合物，使蛋白質(zhì)分子帶負(fù)電荷，這種負(fù)電荷遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了蛋白質(zhì)分子原有的電荷，從而減低或消除了各種蛋白質(zhì)分子天然電荷的差異。從而減低或消除了各種蛋白質(zhì)分子天然電荷的差異。 是陰離子型表面活性劑，它能按一定比例與蛋白質(zhì)分子結(jié)合成帶負(fù)電荷的復(fù)合物，是陰離子型表面活性劑

23、，它能按一定比例與蛋白質(zhì)分子結(jié)合成帶負(fù)電荷的復(fù)合物，再與再與PAGE技術(shù)結(jié)合，則譜帶差異更加明顯、清晰，并可測定蛋白質(zhì)分子量。技術(shù)結(jié)合，則譜帶差異更加明顯、清晰，并可測定蛋白質(zhì)分子量。在有去污劑十二烷基硫酸鈉存在下的聚丙烯酰胺凝膠電泳。在有去污劑十二烷基硫酸鈉存在下的聚丙烯酰胺凝膠電泳。SDS-PAGE只是按照只是按照分子大小分離的，而不是根據(jù)分子所帶的電荷和大小分離的。分子大小分離的，而不是根據(jù)分子所帶的電荷和大小分離的。 SDS帶有大量負(fù)電荷，當(dāng)其與蛋白質(zhì)結(jié)合時，所帶的負(fù)電荷大大超過了蛋白質(zhì)原帶有大量負(fù)電荷，當(dāng)其與蛋白質(zhì)結(jié)合時，所帶的負(fù)電荷大大超過了蛋白質(zhì)原有的負(fù)電荷，因而消除或掩蓋了不同

24、種類蛋白質(zhì)間原有電荷的差異，使蛋白質(zhì)均有的負(fù)電荷，因而消除或掩蓋了不同種類蛋白質(zhì)間原有電荷的差異，使蛋白質(zhì)均帶有相同密度的負(fù)電荷，因而可利用帶有相同密度的負(fù)電荷，因而可利用Mr差異將各種蛋白質(zhì)分開。差異將各種蛋白質(zhì)分開。 最廣泛使用的不連續(xù)緩沖系統(tǒng)最早是由最廣泛使用的不連續(xù)緩沖系統(tǒng)最早是由Ornstein(1964) 和和Davis(1964) 設(shè)計(jì)的設(shè)計(jì)的, 樣品和濃縮膠中含樣品和濃縮膠中含 Tris-HCl(pH 6.8), 上下槽緩沖上下槽緩沖液含液含Tris-甘氨酸甘氨酸(pH 8.3), 分離膠中含分離膠中含Tris-HCl(pH 8.8)。系統(tǒng)中所有組。系統(tǒng)中所有組分都含有分都含有

25、0.1% 的的 SDS(Laemmli, 1970)。樣品和濃縮膠中的氯離子形。樣品和濃縮膠中的氯離子形成移動界面的先導(dǎo)邊界而甘氨酸分子則組成尾隨邊界，在移動界面的成移動界面的先導(dǎo)邊界而甘氨酸分子則組成尾隨邊界，在移動界面的兩邊界之間是一電導(dǎo)較低而電位滴度較陡的區(qū)域兩邊界之間是一電導(dǎo)較低而電位滴度較陡的區(qū)域, 它推動樣品中的蛋白它推動樣品中的蛋白質(zhì)前移并在分離膠前沿積聚。此處質(zhì)前移并在分離膠前沿積聚。此處pH值較高，值較高， 有利于甘氨酸的離子化，有利于甘氨酸的離子化，所形成的甘氨酸離子穿過堆集的蛋白質(zhì)并緊隨氯離子之后，沿分離膠所形成的甘氨酸離子穿過堆集的蛋白質(zhì)并緊隨氯離子之后，沿分離膠泳動。

26、從移動界面中解脫后，泳動。從移動界面中解脫后，SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物成一電位和蛋白質(zhì)復(fù)合物成一電位和pH值均勻值均勻的區(qū)帶泳動穿過分離膠，并被篩分而依各自的大小得到分離。的區(qū)帶泳動穿過分離膠，并被篩分而依各自的大小得到分離。 甘氨酸甘氨酸濃縮效應(yīng)：濃縮效應(yīng)：凝膠由兩種不同的凝膠層組成。上層為濃縮膠，下層為分離凝膠由兩種不同的凝膠層組成。上層為濃縮膠，下層為分離膠。濃縮膠為大孔膠，緩沖液膠。濃縮膠為大孔膠，緩沖液pH6.7，分離膠為小孔膠，緩沖液，分離膠為小孔膠，緩沖液pH8.9。在上下電泳槽內(nèi)充以在上下電泳槽內(nèi)充以Tris甘氨酸緩沖液甘氨酸緩沖液(pH8.3)，這樣便形成了凝膠孔，這樣便形成了凝

27、膠孔徑和緩沖液徑和緩沖液pH值的不連續(xù)性。在濃縮膠中值的不連續(xù)性。在濃縮膠中 HCl幾乎全部解離為幾乎全部解離為Cl-，但只，但只有極少部分甘氨酸解離為有極少部分甘氨酸解離為H2NCH2COO-。蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)一般在。蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)一般在pH5左左右，在此條件下其解離度在右，在此條件下其解離度在HCl和甘氨酸之間。當(dāng)電泳系統(tǒng)通電后，這和甘氨酸之間。當(dāng)電泳系統(tǒng)通電后，這3種離子同向陽極移動。其有效泳動率依次為種離子同向陽極移動。其有效泳動率依次為Cl-蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)H2NCH2COO-，故，故C1-稱為快離子，而稱為快離子，而H2NCH2COO- 稱為慢離子。電稱為慢離子。電泳開始后，快離子在前，

28、在它后面形成離子濃度低的區(qū)域即低電導(dǎo)區(qū)。泳開始后，快離子在前，在它后面形成離子濃度低的區(qū)域即低電導(dǎo)區(qū)。電導(dǎo)與電壓梯度成反比，所以低電導(dǎo)區(qū)有較高的電壓梯度。這種高電壓電導(dǎo)與電壓梯度成反比，所以低電導(dǎo)區(qū)有較高的電壓梯度。這種高電壓梯度使蛋白質(zhì)和慢離子在快離子后面加速移動。在快離子和慢離子之間梯度使蛋白質(zhì)和慢離子在快離子后面加速移動。在快離子和慢離子之間形成形成個穩(wěn)定而不斷向陽極移動的界面。由于蛋白質(zhì)的有效移動率恰好個穩(wěn)定而不斷向陽極移動的界面。由于蛋白質(zhì)的有效移動率恰好介于快慢離子之間，因此蛋白質(zhì)離子就集聚在快慢離子之間被濃縮成介于快慢離子之間，因此蛋白質(zhì)離子就集聚在快慢離子之間被濃縮成條狹窄帶。

29、這種濃縮效應(yīng)可使蛋白質(zhì)濃縮數(shù)百倍。條狹窄帶。這種濃縮效應(yīng)可使蛋白質(zhì)濃縮數(shù)百倍。電荷效應(yīng)電荷效應(yīng)：樣品進(jìn)入分離膠后，慢離子甘氨酸全部解離為負(fù)離子，泳動：樣品進(jìn)入分離膠后，慢離子甘氨酸全部解離為負(fù)離子，泳動速率加快，很快超過蛋白質(zhì)，高電壓梯度隨即消失。此時蛋白質(zhì)在均一速率加快，很快超過蛋白質(zhì)，高電壓梯度隨即消失。此時蛋白質(zhì)在均一的外加電場下泳動，但由于蛋白質(zhì)分子所帶的有效電荷不同，使得各種的外加電場下泳動，但由于蛋白質(zhì)分子所帶的有效電荷不同，使得各種蛋白質(zhì)的泳動速率不同而形成一條條區(qū)帶。但在蛋白質(zhì)的泳動速率不同而形成一條條區(qū)帶。但在 SDS-PAGE電泳中，電泳中，由于由于SDS這種陰離子表面活性

30、劑以一定比例和蛋白質(zhì)結(jié)合成復(fù)合物，使這種陰離子表面活性劑以一定比例和蛋白質(zhì)結(jié)合成復(fù)合物，使蛋白質(zhì)分子帶負(fù)電荷，這種負(fù)電荷遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了蛋白質(zhì)分子原有的電荷差蛋白質(zhì)分子帶負(fù)電荷，這種負(fù)電荷遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了蛋白質(zhì)分子原有的電荷差別，從而降低或消除了蛋白質(zhì)天然電荷的差別；此外，由多亞基組成的別，從而降低或消除了蛋白質(zhì)天然電荷的差別；此外，由多亞基組成的蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)和SDS結(jié)合后都解離成亞單位，這是因?yàn)榻Y(jié)合后都解離成亞單位，這是因?yàn)镾DS破壞了蛋白質(zhì)氫鍵、破壞了蛋白質(zhì)氫鍵、疏水鍵等非共價(jià)鍵。與疏水鍵等非共價(jià)鍵。與SDS結(jié)合的蛋白質(zhì)的構(gòu)型也發(fā)生變化，在水溶液結(jié)合的蛋白質(zhì)的構(gòu)型也發(fā)生變化，在水溶液中中SDS-蛋白

31、質(zhì)復(fù)合物都具有相似的形狀，使得蛋白質(zhì)復(fù)合物都具有相似的形狀，使得SDS-PAGE電泳的泳動電泳的泳動率不再受蛋白質(zhì)原有電荷與形狀的影響。因此，各種率不再受蛋白質(zhì)原有電荷與形狀的影響。因此，各種SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合蛋白質(zhì)復(fù)合物在電泳中不同的泳動率只反映了蛋白質(zhì)分子量的不同。物在電泳中不同的泳動率只反映了蛋白質(zhì)分子量的不同。Acr-Bis產(chǎn)品簡介：產(chǎn)品簡介： 40% Acr-Bis(39:1)即為含即為含40 acrylamide-bisacrylamide的水溶液，其中的水溶液，其中acrylamide和和bisacrylamide的比例為的比例為39:1。 40% Acr-Bis(39:1)常用

32、于配制各種常用于配制各種PAGE凝膠，例如凝膠，例如EMSA凝膠、凝膠、RPA凝膠等，凝膠等，可以用于蛋白或核酸等的分離，是實(shí)驗(yàn)室的常用可以用于蛋白或核酸等的分離，是實(shí)驗(yàn)室的常用 儲備液。儲備液。保存條件：保存條件： 4避光保存。避光保存。注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)： 40% Acr-Bis(39:1)有一定毒性，使用時請注意適當(dāng)防護(hù)。有一定毒性，使用時請注意適當(dāng)防護(hù)。 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。聚丙烯酰胺凝膠電泳是以聚丙烯酰胺凝膠作為載體的一種區(qū)帶電泳。這種凝膠聚丙烯酰胺凝膠電泳是以聚丙烯酰胺凝膠作為載體的一種區(qū)帶電泳。這種凝

33、膠是以丙烯酰胺單體（是以丙烯酰胺單體（Acrylamide，簡寫為，簡寫為Acr）和交聯(lián)劑）和交聯(lián)劑N，N-甲叉雙丙烯酰甲叉雙丙烯酰胺（胺（N,N-Methylena Bisacrylamide，簡寫為，簡寫為Bis）在催化劑的作用下聚合而）在催化劑的作用下聚合而成的。成的。Acr和和Bis在它們單獨(dú)存在或混合在一起時是穩(wěn)定的，且具有神經(jīng)毒性，操作時在它們單獨(dú)存在或混合在一起時是穩(wěn)定的，且具有神經(jīng)毒性，操作時應(yīng)避免接觸皮膚。但在具有自由基團(tuán)體系時，它們聚合。引發(fā)產(chǎn)生自由基團(tuán)的應(yīng)避免接觸皮膚。但在具有自由基團(tuán)體系時，它們聚合。引發(fā)產(chǎn)生自由基團(tuán)的方法有兩種，即化學(xué)法和光化學(xué)法。方法有兩種，即化學(xué)法

34、和光化學(xué)法。 蛋白上樣緩沖液蛋白上樣緩沖液(SDS-PAGE loading buffer)是一種以溴酚藍(lán)為染料，是一種以溴酚藍(lán)為染料，5倍濃縮的倍濃縮的SDS-PAGE凝膠電泳上樣緩沖液凝膠電泳上樣緩沖液,用于常規(guī)的用于常規(guī)的SDS-PAGE蛋白電泳樣品上樣。蛋白電泳樣品上樣。 本產(chǎn)品分為還原型和非還原型兩種，還原型上樣緩沖液中的巰基可使蛋白分子的本產(chǎn)品分為還原型和非還原型兩種，還原型上樣緩沖液中的巰基可使蛋白分子的鏈內(nèi)二硫鍵和鏈間二硫鍵斷裂，使通過二硫鍵連接的各亞單位彼此分離，在電泳凝膠鏈內(nèi)二硫鍵和鏈間二硫鍵斷裂，使通過二硫鍵連接的各亞單位彼此分離，在電泳凝膠上顯現(xiàn)多個蛋白條帶，選購和使用

35、時請務(wù)必注明，仔細(xì)區(qū)分。上顯現(xiàn)多個蛋白條帶，選購和使用時請務(wù)必注明，仔細(xì)區(qū)分。 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 分為還原型和非還原型兩種，還原型上樣緩沖液中含一定量的分為還原型和非還原型兩種，還原型上樣緩沖液中含一定量的DTT或巰基乙醇，或巰基乙醇，有輕微刺激性氣味，較易區(qū)分；有輕微刺激性氣味，較易區(qū)分； 含巰基的試劑有一定的毒性，為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套含巰基的試劑有一定的毒性，為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。操作。 使用說明使用說明 1. 按每按每4微升蛋白樣品加入微升蛋白樣品加入1微升蛋白上樣緩沖液的比例，混合蛋白樣品和蛋白上微升蛋白上樣緩沖液的比例，混合蛋白樣品

36、和蛋白上樣緩沖液樣緩沖液(5X)。 2. 100或沸水浴加熱或沸水浴加熱3-5分鐘，以充分變性蛋白。分鐘，以充分變性蛋白。 3. 冷卻到室溫后離心數(shù)秒鐘，混均后再離冷卻到室溫后離心數(shù)秒鐘，混均后再離30秒鐘，取上清直接上樣到秒鐘，取上清直接上樣到SDS-PAGE膠加樣孔內(nèi)即可。膠加樣孔內(nèi)即可。 4. 通常電泳時染料到達(dá)膠的底端附近（通常電泳時染料到達(dá)膠的底端附近（0.5-1cm)即可停止電泳。即可停止電泳。增加樣品密度以保證蛋白質(zhì)沉入加樣孔內(nèi)，一般上樣緩沖液中加入一定濃度的增加樣品密度以保證蛋白質(zhì)沉入加樣孔內(nèi)，一般上樣緩沖液中加入一定濃度的甘油或蔗糖，這樣可以增加樣品的比重。甘油或蔗糖，這樣可

37、以增加樣品的比重。上樣緩沖液中的甘油非常重要，起增加粘度的作用，這可以阻止樣品從梳樣孔上樣緩沖液中的甘油非常重要，起增加粘度的作用，這可以阻止樣品從梳樣孔中擴(kuò)散出來到電泳緩沖液中。中擴(kuò)散出來到電泳緩沖液中。指示劑監(jiān)測電泳的行進(jìn)過程，一般加入泳動速率較快的溴酚藍(lán)指示電泳的前沿指示劑監(jiān)測電泳的行進(jìn)過程，一般加入泳動速率較快的溴酚藍(lán)指示電泳的前沿 。 單純的固定液一般難以達(dá)到這些要求，因此在實(shí)驗(yàn)中使用兩種混和的固定單純的固定液一般難以達(dá)到這些要求，因此在實(shí)驗(yàn)中使用兩種混和的固定液。由于液。由于Carnoy首先使用的甲醇和冰乙酸混合液而稱的卡諾氏固定液是效首先使用的甲醇和冰乙酸混合液而稱的卡諾氏固定液

38、是效果良好的固定液。果良好的固定液。Carnoy固定液（甲醇固定液（甲醇:冰乙酸冰乙酸=3:l）每次使用前需臨時配）每次使用前需臨時配制，長時間放置影響固定效果，固定時間制，長時間放置影響固定效果，固定時間15分鐘至分鐘至24小時，冰箱、室溫均小時，冰箱、室溫均可。可。 甲醇甲醇：有固定、硬化和脫水的作用?？梢怨潭ò椎鞍住⑶虻鞍?、核蛋白，但對核蛋：有固定、硬化和脫水的作用?？梢怨潭ò椎鞍住⑶虻鞍?、核蛋白，但對核蛋白固定效果較差白固定效果較差(親和力小且易自溶親和力小且易自溶)。甲醇固定的特點(diǎn)是殺死快，滲透力強(qiáng)，對組。甲醇固定的特點(diǎn)是殺死快，滲透力強(qiáng)，對組織收縮較大織收縮較大(可收縮可收縮20左

39、右左右)，可使材料變硬。，可使材料變硬。冰醋酸冰醋酸：純醋酸在溫度稍變低時即形成冰晶，所以又稱為冰醋酸。常用：純醋酸在溫度稍變低時即形成冰晶，所以又稱為冰醋酸。常用0.3-0.5的的濃度作為固定液。冰醋酸對材料有膨脹作用，對核蛋白固定好，可與水、酒精、氯濃度作為固定液。冰醋酸對材料有膨脹作用，對核蛋白固定好，可與水、酒精、氯仿混合。仿混合。 考馬斯亮藍(lán)（考馬斯亮藍(lán)（Coomassie Brilliant Blue） 考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白質(zhì)濃度，是利用蛋白質(zhì)考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白質(zhì)濃度，是利用蛋白質(zhì)染料結(jié)合的原理，定量的染料結(jié)合的原理，定量的測定微量蛋白濃度的快速、靈敏的方法。測定微量蛋白濃度的快速、靈敏的方法。 考馬斯亮藍(lán)考馬斯亮藍(lán)G250存在著兩種不同的顏色形式，紅色和藍(lán)色。它和蛋白質(zhì)存在著兩種不同