1、第1次關(guān)于轉(zhuǎn)基因分析的全球會(huì)議“需要在國(guó)際和區(qū)域間協(xié)調(diào)統(tǒng)一“ Roger Wood 和和 Andrew Damant WC2B 6NH ，倫敦，帝國(guó)大道125號(hào)，民航大廈，食品標(biāo)準(zhǔn)局談及到廣義的、而不僅僅是轉(zhuǎn)基因生物時(shí)，應(yīng)包括以下幾點(diǎn)：食品法典和歐盟的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可接受的標(biāo)準(zhǔn)分析方法食品法典審議的方法，檢測(cè)和確定來(lái)自于生物技術(shù)的食品一般方法和標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)量不確定度方面（取樣和分析） 采用歐洲網(wǎng)絡(luò)轉(zhuǎn)基因生物實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)基因檢測(cè)分析方法定義的最低性能要求（弊）從事控制進(jìn)出口食品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室評(píng)估能力的準(zhǔn)則第8步在1997年6月的食品法典委員會(huì)上通過(guò)（見(jiàn)CAC/GL 27-1997)要求3 .下列標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)被參

2、與食品進(jìn)出口監(jiān)測(cè)的實(shí)驗(yàn)室采納： ISO / IEC導(dǎo)則25 ： 1990規(guī)定了檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)遵守的一般標(biāo)準(zhǔn)“校準(zhǔn)和監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室職權(quán)范圍的一般要求“ ; 注：現(xiàn)在改為英文的ISO / IEC 17025:2005 參加適當(dāng)?shù)姆稀皣?guó)際統(tǒng)一議定書(shū)的（化學(xué)）分析實(shí)驗(yàn)室的能力測(cè)試 “理論與應(yīng)用化學(xué)65 （1993）21322144;在1995年7月的第21屆會(huì)議上，已被食品法典委員會(huì)采納 規(guī)定要求的食品分析水平測(cè)試計(jì)劃 注：最新議定書(shū)理論與應(yīng)用化學(xué)， 2006，78 （ 1 ），145-196現(xiàn)已通過(guò)了食品法典委員會(huì) 凡提供、使用的分析方法應(yīng)該有以食品法典已審定的原則規(guī)定的根據(jù) 使用內(nèi)部質(zhì)量控制程序，如這

3、里所講的“分析化學(xué)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制統(tǒng)一準(zhǔn)則，“理論與應(yīng)用化學(xué)67（ 1995 ）649-6664 .上文提到參與評(píng)估的實(shí)驗(yàn)室機(jī)構(gòu)應(yīng)遵守一般實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)，如ISO / IEC導(dǎo)則58:1993中規(guī)定了 “校準(zhǔn)和檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系統(tǒng)的通用操作與認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)” 。 歐洲議會(huì)和2004年4月29 國(guó)會(huì)制定（ EC ）882/2004條例 官方控制以確保核查遵守飼料和食品法、動(dòng)物健康和動(dòng)物福利法規(guī)第11條 取樣和分析方法使用的采樣和分析方法應(yīng)遵守官方控制或相關(guān)社區(qū)的規(guī)則（ a ）如果沒(méi)有這樣的規(guī)則存在，以國(guó)際公認(rèn)的規(guī)則或協(xié)議為準(zhǔn)。例如歐洲標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)（CEN）已接受或在國(guó)家立法中商定的準(zhǔn)則（ b ）若上述情

4、況均不存在，按與目的相符的其他方法或按照發(fā)達(dá)國(guó)家科學(xué)議定書(shū)執(zhí)行 凡第1款不適用的， 驗(yàn)證的分析方法可采取發(fā)生在單個(gè)實(shí)驗(yàn)室的符合國(guó)際公認(rèn)協(xié)議的準(zhǔn)則。 3 .附件三詳細(xì)列出了符合標(biāo)準(zhǔn)的所有可能的分析方法第12條 官方實(shí)驗(yàn)室 1 .主管部門(mén)應(yīng)指定在官方控制可進(jìn)行樣品分析的實(shí)驗(yàn)室 然而，主管當(dāng)局可能只指定實(shí)驗(yàn)室，運(yùn)營(yíng)、評(píng)估以及認(rèn)可按照以下歐洲標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行： EN ISO / IEC 17025 “能力測(cè)試和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室的一般規(guī)定” EN 45002 “評(píng)估測(cè)試實(shí)驗(yàn)室的一般標(biāo)準(zhǔn)” EN 45003 “校準(zhǔn)和測(cè)試實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可制度通用的運(yùn)作和認(rèn)可準(zhǔn)則”， 考慮到不同標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)試辦法規(guī)定了通用的飼料和食品法。 （注：這

5、些提法現(xiàn)已更新與關(guān)于認(rèn)證機(jī)構(gòu)的新的歐盟條例( 2008年6月23日通過(guò) ？) )一致附件三：分析方法的特征分析方法應(yīng)符合以下標(biāo)準(zhǔn)特點(diǎn)： 準(zhǔn)確性; 適用性（矩陣和濃度范圍內(nèi)） ; 檢測(cè)限; 限制度; 精度; 可重復(fù)性; 再現(xiàn)性; 恢復(fù)性; 選擇性; 敏感性; 線性; 測(cè)量不確定度; 可根據(jù)需要選擇的其他標(biāo)準(zhǔn)。 第1 （ e ）中提到的精確值應(yīng)通過(guò)一個(gè)已按國(guó)際認(rèn)可的協(xié)議執(zhí)行的合作試驗(yàn)賦予（例如：ISO 5725:1994或化學(xué)的國(guó)際統(tǒng)一協(xié)議）或按已有的依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)兼容性測(cè)試的分析方法執(zhí)行。 重復(fù)性和有效值應(yīng)表示為國(guó)際公認(rèn)的形式（如95 置信區(qū)間按ISO5725:1994或理論與應(yīng)用化學(xué)定義） 。協(xié)作實(shí)

6、驗(yàn)的結(jié)果應(yīng)公開(kāi)發(fā)表或免費(fèi)提供。 分析方法只能在單一的實(shí)驗(yàn)室予以審定的情況下，他們應(yīng)當(dāng)按照化學(xué)統(tǒng)一的指導(dǎo)方針審定，或按依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)兼容性測(cè)試已確定績(jī)效標(biāo)準(zhǔn)的分析方法執(zhí)行。 （單個(gè)實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證分析方法的化學(xué)統(tǒng)一指導(dǎo)方針（MichaelThompson, Stephen L R Ellison and Roger Wood,理論與應(yīng)用化學(xué)。 2002，74 （ 5 ），835-355 ）現(xiàn)已被歐盟和食品法典接受。 ）什么是標(biāo)準(zhǔn)的分析方法？為什么要引入？傳統(tǒng)的方法（具體的分析方法） 分析師被剝奪了選擇的自由，因此，某些情況下，不得不使用一些不恰當(dāng)?shù)姆椒? 程序抑制了自動(dòng)化的使用; 想改變無(wú)法令人滿意的或劣于

7、另一目前可用方法的分析方法，在行政上很難實(shí)施。標(biāo)準(zhǔn)方法（方法的表型特征） 這個(gè)“標(biāo)準(zhǔn)”的做法與目前食品法典和歐盟采用的程序相比，擁有更大的靈活性 在食品分析的某些領(lǐng)域中，提供了許多分析方法，其中有一些符合有關(guān)法規(guī)特點(diǎn)、但由于時(shí)間的限制還未經(jīng)食品法典或歐盟審議。 如:沒(méi)有具體規(guī)定的方法 但是， “標(biāo)準(zhǔn)法”也可能意味著接受由食品法典，歐盟等設(shè)定的單個(gè)標(biāo)準(zhǔn) 如:方法是否不夠好？法典委員會(huì)的分析和取樣方法 審議檢測(cè)和鑒定轉(zhuǎn)基因食品的方法 一般方法和標(biāo)準(zhǔn)方法 （論文CX/MAS 08/29/8)）轉(zhuǎn)基因食品分析的審定和質(zhì)量控制要求指南考慮到： 標(biāo)準(zhǔn)的做法和已確定的特征（ LOD技術(shù)， LoQ等） 實(shí)驗(yàn)室

8、質(zhì)量測(cè)量的不確定度基于DNA分析方法的附加要求 -擴(kuò)增長(zhǎng)度-是否有該方法的具體操作規(guī)則-定性和定量PCR檢測(cè)方法是否有區(qū)別 -是否能開(kāi)展單一或多重P CR擴(kuò)增基于蛋白質(zhì)方法的附加要求： -試劑應(yīng)與反應(yīng)時(shí)間所需耗試劑等量附件一：當(dāng)一種轉(zhuǎn)基因食品的檢測(cè)方法CCMAS表示贊同時(shí)，該信息可提供給食品法典方法的說(shuō)明-該方法的目的和意義-科學(xué)依據(jù)-該方法所需要的規(guī)范的預(yù)測(cè)模型/數(shù)學(xué)模型方法的優(yōu)化信息-引物對(duì)/熒光寡核苷酸探針測(cè)試-選擇性測(cè)試-穩(wěn)定性測(cè)試-靈敏度測(cè)試-穩(wěn)定性測(cè)試-交叉反應(yīng) 實(shí)際應(yīng)用的方法-適用性-操作特點(diǎn)和實(shí)用性的方法-操作技能要求 分析控制需要指出的方法驗(yàn)證/性能 -擴(kuò)增長(zhǎng)度-該方法是否是

9、儀器化的或化學(xué)特異性的 -是否需進(jìn)行單一或多重P CR擴(kuò)增-基于PCR技術(shù)和免疫學(xué)方法驗(yàn)證的標(biāo)準(zhǔn)是否有差別附件二:適用于分析轉(zhuǎn)基因食品法典定義-精度-適用性-動(dòng)態(tài)范圍-范圍的量化-檢測(cè)限（ LOD值） -定量限（ LOQ） -實(shí)用性-重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差（ RSDr） -再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差（ RSDR） -回復(fù)-穩(wěn)定性 -靈敏度-選擇性-真實(shí)性附件三：定量PCR審定法 每個(gè)特征給定和預(yù)期值的信息， 如：重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差和再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差信息分析控制驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)和給出結(jié)果的解釋信息 重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差（ RSDr ） 建議：重復(fù)性相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差25 或接近這個(gè)值在該方法的整個(gè)動(dòng)態(tài)范圍是可行的。 再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差（ RSD

10、R ） 建議：再現(xiàn)性相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差35 或接近該值在標(biāo)準(zhǔn)濃度及大多數(shù)的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)是可行的。 RSDR 50 左右是可行的極限的定量下限。 附件四：定性聚合酶鏈反應(yīng)方法的審定 附件五：基于蛋白質(zhì)方法的審定 定性和定量方法的審議 附件六：轉(zhuǎn)基因食品的水平測(cè)試 得分標(biāo)準(zhǔn)信息來(lái)自logtransformed 數(shù)據(jù)庫(kù) 注：?jiǎn)柧矸治龇椒夹g(shù)委員會(huì)/lap/rsccom/amc/amc_index.htm下載法典準(zhǔn)則的測(cè)量不確定度(CAC/GL 54-2004) 引言使用ISO / IEC 17025:1999，分析師能意識(shí)到相關(guān)的每個(gè)分析結(jié)果的不確定性、并估計(jì)該不確定性，這是重要和必須

11、的。 測(cè)量的不確定性可能來(lái)自一些程序。為了達(dá)到食品法典的控制目的，食品分析實(shí)驗(yàn)室被要求使用可行的通用的檢測(cè)或驗(yàn)證方法，并在納入日常使用之前，驗(yàn)證他們的程序。因此，這些實(shí)驗(yàn)室提供了一系列可以用來(lái)估算其測(cè)量不確定度的分析數(shù)據(jù)。只適用于定量分析的準(zhǔn)則 大多數(shù)定量分析結(jié)果采取 “a 2u 或 a U”的形式記錄 其中“a”是被測(cè)量濃度真實(shí)值（分析結(jié)果）的最優(yōu)估計(jì)，“u ”是 標(biāo)準(zhǔn)的不確定性，而“ U ” （相當(dāng)于2u）是擴(kuò)大 的不確定性。 “a 2u”代表了置信區(qū)間為95 的范圍， 即在該范圍內(nèi)找到的真實(shí)值可信度是95 。 “ U ” 或“的2 u” 常見(jiàn)于分析師的報(bào)告中， 以下簡(jiǎn)稱(chēng)“計(jì)量不確定性“

12、，可用不同方式進(jìn)行估計(jì)。.結(jié)果在不確定度外，高于檢測(cè)限.結(jié)果高于檢測(cè)限，檢測(cè)限在不確定度內(nèi).結(jié)果低于檢測(cè)限，檢測(cè)限在不確定度以?xún)?nèi).結(jié)果在不確定范圍內(nèi)，低于檢測(cè)限檢測(cè)上限 這意味著法典的規(guī)定和執(zhí)法界限是不同的 規(guī)范的制定應(yīng)該受到贊賞測(cè)量的不確定性是否同時(shí)適用于采樣和分析？ 測(cè)量不確定性適用于整個(gè)測(cè)量過(guò)程。 對(duì)于分析者來(lái)說(shuō)，一直考慮單一的“分析” 測(cè)量不確定性，但現(xiàn)在越來(lái)越多地認(rèn)識(shí)到必須對(duì)整個(gè)系統(tǒng)加以考慮，并且“抽樣” 測(cè)量不確定性的重要性正在日益增加。 法典委員會(huì)的分析和取樣方法 第29次會(huì)議，布達(dá)佩斯，匈牙利，2008，10/3-14/3 測(cè)量不確定性指導(dǎo) （論文 CX/MAS 08/29/9

13、 ） 取樣不確定性指導(dǎo) （論文 CX/MAS 08/29/9- Add 1.)同意： 準(zhǔn)備分析測(cè)量確定性的近一步指導(dǎo)意見(jiàn) 進(jìn)一步進(jìn)行基于以下論文的討論： 歐洲分析化學(xué)組織 /國(guó)際分析化學(xué)溯源性合作組織 /波蘭華沙分析測(cè)量技術(shù)展/北歐技術(shù)試驗(yàn)協(xié)作機(jī)構(gòu)指南關(guān)于“取樣測(cè)量不確定性的評(píng)估“和做好準(zhǔn)備北歐技術(shù)試驗(yàn)協(xié)作機(jī)構(gòu)報(bào)告604 （不是將來(lái)，現(xiàn)在立即行動(dòng) ） 目的的實(shí)施在于認(rèn)真仔細(xì)的考慮- 難點(diǎn)在于轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品部門(mén)的執(zhí)行！統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)“一種歐洲的觀點(diǎn)” Andrew Damant英國(guó)食品標(biāo)準(zhǔn)局立法-1條例（ EC ）No 1829/2003- CRLGMFF法律規(guī)定第32條 CRL GMFF的操作按照條例（

14、 EC ）No 641/2004執(zhí)行-附件一規(guī)定給申請(qǐng)授權(quán)者提供檢測(cè)方法類(lèi)型的參考信息 - 包括分析方法的信息-申請(qǐng)人還提供了與寄主側(cè)翼序列相鄰的完整插入序列以便構(gòu)建一種特異性事件檢測(cè)方法 還提供食品和飼料樣品以及對(duì)照樣品立法-2CRL - GMFF開(kāi)展的活動(dòng)與歐洲轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)室的網(wǎng)絡(luò)協(xié)調(diào)一致 ENGL“定義轉(zhuǎn)基因檢測(cè)分析方法的最低執(zhí)行需求” （ EC ）No 1981/2006條例-第6條和附件二提供一些國(guó)家實(shí)驗(yàn)室關(guān)于協(xié)助CRL測(cè)試和驗(yàn)證檢測(cè)與鑒定方法的參考細(xì)節(jié)驗(yàn)證過(guò)程申請(qǐng)者/EFSA檢測(cè)方法不可信的潛在要求細(xì)節(jié)補(bǔ)充信息潛在要求” 測(cè)試停止“潛在要求EFSA接受對(duì)照樣品方法相關(guān)數(shù)據(jù)（第一步）科

15、學(xué)評(píng)估方法樣品文獻(xiàn)（第二步）CRL試驗(yàn)測(cè)試樣品和方法（第三步）共同研究探討（第四步）結(jié)果報(bào)告（第五步）轉(zhuǎn)基因測(cè)試分析方法最低執(zhí)行需求的定義最初發(fā)表于2005年第一階段（步驟2和3 ） - 由申請(qǐng)人提交的執(zhí)行方法數(shù)據(jù)和部分官員檔案的評(píng)估;第二階段（第4步） 協(xié)作試驗(yàn)之后的全面確認(rèn)研究的執(zhí)行，方法、數(shù)據(jù)的評(píng)估 目前正在修訂第一階段 接受標(biāo)準(zhǔn)的方法實(shí)用性 方法的實(shí)用范圍，分析方法的參考等可行性 設(shè)備 時(shí)間 實(shí)際困難特異性 特異性事件活動(dòng)范圍 包括1/10th和至少和至少5目標(biāo)濃度目標(biāo)濃度 精確度 在參照值 25%以?xún)?nèi)以?xún)?nèi) R2系數(shù)系數(shù) 0.98 PCR效率 -3.1斜坡 -3.6RSDr 超過(guò)整個(gè)動(dòng)

16、力學(xué)范圍 25 LOQ 1/10th的目標(biāo)濃度,并且RSDr 25 LOD值 1/20th的目標(biāo)濃度的目標(biāo)濃度 穩(wěn)定性 偏離不超過(guò)30第二階段 執(zhí)行需求的方法 RSDR 35 的目標(biāo)濃度， 50 終濃度 0.2 真實(shí)性 超出整個(gè)范圍在公認(rèn)的參考 值值 25%以?xún)?nèi)以?xún)?nèi)標(biāo)準(zhǔn)是否滿足？適用性 ？可行性 特異性 動(dòng)態(tài)范圍 精確性 ？ R2的系數(shù) PCR效率 RSDr LOD LOQ 穩(wěn)定性 ？RSDR 真實(shí)性 問(wèn)題？目前為止，已進(jìn)行了 32個(gè)協(xié)作試驗(yàn) -3 花粉（提取+ R T- PCR法） RSDR = 17.7 至43.9 -29的DNA（僅R T- PCR檢測(cè)） RSDR = 12 至33.5 獲得的大多數(shù)精確數(shù)據(jù)只涉及RT - PCR檢測(cè)（即D