1、現(xiàn)代生物技術(shù)的組成生物技術(shù)、基因工程、細(xì)胞工程、發(fā)酵工程、蛋白質(zhì)工程、分子進(jìn)化工程、酶的定向進(jìn)化、生物工程下游技術(shù)生物技術(shù)：是利用生物體系，應(yīng)用先進(jìn)的生物學(xué)和工程學(xué)技術(shù)，加工或不加工底物原料，以提供所需的各種產(chǎn)品，或達(dá)到某種目的的一門新型跨學(xué)科技術(shù)基因工程：用人工的方法把不同生物的遺傳物質(zhì)分離出來(lái)，在體外進(jìn)行剪切、拼接、重組，通過(guò)載體將目標(biāo)基因?qū)氲剿拗骷?xì)胞或個(gè)體，從而改變宿主遺傳特性或獲得基因表達(dá)產(chǎn)物的技術(shù)細(xì)胞工程：是指以細(xì)胞為基本單位，在體外條件下進(jìn)行培養(yǎng)，繁殖，或按人們的需求設(shè)計(jì)改變細(xì)胞的某些生物學(xué)特征，從而獲得某些有用的物質(zhì)，或改良生物品種和創(chuàng)造新品的技術(shù)發(fā)酵工程：利用生物細(xì)胞的某種特

2、性，通過(guò)現(xiàn)代化工程技術(shù)手段進(jìn)行工業(yè)規(guī)?；a(chǎn)人類所需產(chǎn)品的技術(shù)蛋白質(zhì)工程：是以蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，功能研究為基礎(chǔ)，運(yùn)用生物化學(xué)，分子生物學(xué)，遺傳工程的方法，借助計(jì)算機(jī)信息處理技術(shù)的支持，從改變或合成編碼蛋白質(zhì)的基因入手，定向的改造天然蛋白質(zhì)或設(shè)計(jì)全新的人工蛋白質(zhì)分子，使之具有特定的結(jié)構(gòu)性質(zhì)和功能，能更好的為人類服務(wù)的一種生物技術(shù)分子進(jìn)化工程：是在試管或?qū)嶒?yàn)室中模擬生物分子的進(jìn)化，使長(zhǎng)期的自然進(jìn)化在實(shí)驗(yàn)中短期能實(shí)現(xiàn)酶的定向進(jìn)化：是在試管中模擬自然進(jìn)化過(guò)程的人工進(jìn)化策略，利用酶基因的突變或同類酶基因片段的重組，構(gòu)建某個(gè)酶的隨機(jī)基因突變庫(kù)，通過(guò)基因操作的方法使這些基因在微生物在表達(dá)，人工控制條件篩選出人們所

3、需的酶生物工程下游技術(shù)：指從基因工程中獲得的動(dòng)，植物和微生物的有機(jī)體或器官上，從細(xì)胞工程，發(fā)酵工程和酶工程產(chǎn)物中把目標(biāo)化合物分離純化出來(lái)，使之達(dá)到商業(yè)應(yīng)用的目的的過(guò)程酶工程：是利用酶，細(xì)胞器或細(xì)胞所具有的特異催化功能，或通過(guò)對(duì)酶的分子結(jié)構(gòu)修飾或改造以改善酶的特性，借助于生物反應(yīng)器和工藝優(yōu)化，有效的發(fā)揮酶的催化特性生產(chǎn)人類所需產(chǎn)品的技術(shù)基因工程的基本過(guò)程獲得目的基因?qū)⒛康幕蚺c載體連接形成重組DNA將重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞篩選出能表達(dá)目的基因的受體細(xì)胞基因工程的工具酶：基因工程操作中，作為工具對(duì)基因進(jìn)行切割和拼接等操作的酶，到目前為止，常用工具酶共300多種工具酶的分類：限制性內(nèi)切酶、連接酶、聚

4、合酶、堿性磷酸酶、逆轉(zhuǎn)錄酶限制性內(nèi)切酶：內(nèi)切核酸酶中能夠識(shí)別DNA分子上某些特定的核甘酸序列并且將其切開的酶，稱為限制性內(nèi)切酶有三種：I型限制性內(nèi)切酶n型限制性內(nèi)切酶出型限制性內(nèi)切酶I型限制性內(nèi)切酶：是多聚體蛋白，具有切割DNA勺功能，作用時(shí)需要ATP、Mg+和S-腺昔蛋氨酸的存在2+.II型限制性內(nèi)切酶：是一類分子量較小的單體蛋白，作用時(shí)僅需要Mg存在即可維持活性，它可在特殊位點(diǎn)切割DNA產(chǎn)生具有黏性末端或其他形式的DNA子片段。EcoRI是最早發(fā)現(xiàn)的II型限制性內(nèi)切酶III型限制性內(nèi)切酶：識(shí)別一定的位點(diǎn),但切割位點(diǎn)通常在識(shí)別位點(diǎn)一側(cè)24bp-26bp處I型限制性內(nèi)切酶和III型限制性內(nèi)切酶

5、的切點(diǎn)不固定，不能產(chǎn)生可利用的DNA片段。II型限制性內(nèi)切酶具有控制和預(yù)測(cè)的位點(diǎn)特異性切割的性質(zhì)，并且產(chǎn)生固定的DNM段。基因工程所用的PM制性內(nèi)切酶都是II型限制性內(nèi)切酶II型限制性內(nèi)切酶的識(shí)別特點(diǎn)和切割特性：II型限制性內(nèi)切酶識(shí)別序列的長(zhǎng)度，一般為4-8個(gè)堿基，最常見的為6個(gè)堿基；其識(shí)別位點(diǎn)一般都是回文結(jié)構(gòu)；產(chǎn)生不同的末端：黏性末端、平齊末端黏性末端：限制性內(nèi)切酶錯(cuò)位切割DNAZ鏈而形成的互補(bǔ)的單鏈末端（雙鏈DNA中沒有配對(duì)的堿基末端）平齊末端：有些限制性內(nèi)切酶在同一位點(diǎn)平齊切割DNAB條鏈，而形成兩端平整的DNA分子同裂酶：是指來(lái)自不同有機(jī)體但識(shí)別和切割相同DNA序列的酶同尾酶：來(lái)源不同

6、，識(shí)別序列不同，但切割DNA子后產(chǎn)生的黏性末端相同雜種位點(diǎn)：由一對(duì)同尾酶分別產(chǎn)生的黏性末端共價(jià)結(jié)合形成的位點(diǎn)。一般不能被原來(lái)的任何一種同尾酶識(shí)別限制性內(nèi)切酶的主要用途：在特異性位點(diǎn)上切割DNA產(chǎn)生特意新限制性內(nèi)切酶切割的DNA片段建立DNA分子的限制性內(nèi)切酶物理圖譜用限制性內(nèi)切酶切出相同的黏性末端，以便重組DNA構(gòu)建基因圖庫(kù)DNAM合酶：以DNAM莫板，將DNA由5'端點(diǎn)開始復(fù)制到3'端的酶。常用：大腸桿菌DNAM合酶I大片段（Klenow片段）、耐熱DNA聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶（依賴于RNA勺DNAM合酶）、T4噬菌體DN咪合酶、T7噬菌體DN咪合酶及其改造的測(cè)序酶Klenow片段

7、作用：補(bǔ)平限制性內(nèi)切酶切割DNA所產(chǎn)生的3'凹端以（32P）標(biāo)記的dNTP補(bǔ)平3'凹端，可對(duì)DN6子進(jìn)行末端標(biāo)記對(duì)DN6子的3'突出尾進(jìn)行末端標(biāo)記在cDNA克隆中，用于合成cDNA第二鏈應(yīng)用雙脫氧鏈末端終止法進(jìn)行DNAM序耐熱DNAM合酶的作用：DNA測(cè)序通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對(duì)DNA分子的特定序列進(jìn)行體外擴(kuò)增DNA連接酶：能夠?qū)啥蜠N硼接起來(lái)的酶叫做DNA連接酶連接酶分類：大腸桿菌連接酶（需要NAD+只能連接黏性末端DNM段）T4噬菌體DNW接酶（需要ATP,能連接黏性末端，也能連接平齊末端）影響連接反應(yīng)的因素：溫度DNAC端特性DNA末端的濃度和分子量堿性磷酸酯酶：是

8、催化從單鏈或雙鏈DN用口RNA子中除去5'磷酸基，即脫磷酸作用S1核酸酶：來(lái)源：是從米曲霉中提取的活性：特異性單鏈核甘酸外切酶，能降解單鏈DN用口單鏈RNA不能降解其雙鏈DN府口RNA的雜合子基因工程的產(chǎn)承載并攜帶目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞，并使目的基因得以復(fù)制或表達(dá)的DN6子理想載體的特征：插入外源基因前后均能在宿主細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行獨(dú)立和穩(wěn)定的DNA自我復(fù)制有適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切酶單一酶切位點(diǎn)，且位于DNAM制的非必需區(qū)具有能夠直接觀察的表型特征，作為重組DNA擇的標(biāo)志。易于從宿主細(xì)胞中分離，并進(jìn)行純化載體的分類：按照介導(dǎo)的作用目的（克隆載體、表達(dá)載體）按照導(dǎo)入的受體生物（原核生物大腸桿菌載體、酵母

9、載體、植物載體、動(dòng)物載體）根據(jù)賦予宿主的形狀（F質(zhì)粒、R質(zhì)粒、降解質(zhì)粒）原核生物載體：細(xì)菌質(zhì)粒載體、入噬菌體載體、M13噬菌體載體、柯斯質(zhì)粒載體藍(lán)白斑篩選重組子的原理：lacZ編碼3半乳糖昔酶的“肽，在異丙基硫代-3-D-半乳糖昔的誘導(dǎo)下，使呈色底物5-澳-4-氯-3-口引喋-3-D-半乳糖昔被分解為半乳糖和深藍(lán)色的物質(zhì)5-澳-4-靛藍(lán)。因此攜帶空載體的大腸桿菌呈藍(lán)色菌落。外源基因的插入使a肽失活，因此攜帶外源基因的重組子菌落呈白色入噬菌體DNA入噬菌體顆粒中的DN端一線TOZ鏈DNA子，長(zhǎng)48502bp。兩端各有12個(gè)堿基的5'凸出，黏性末端是互補(bǔ)的，進(jìn)入細(xì)胞的入DNA®過(guò)

10、兩端的黏性末端環(huán)化。包含3個(gè)部分：左臂（構(gòu)成頭部和尾部外殼蛋白基因）中臂（非必需區(qū)，可用于改造）右臂（入DNA復(fù)制和溶菌有關(guān)的蛋白質(zhì)編碼基因）柯斯質(zhì)粒載體：一類由人工構(gòu)建的含有入DNA的cos位點(diǎn)和質(zhì)粒復(fù)制子的特殊類型的質(zhì)粒載體。也叫黏性質(zhì)?；蝠ち；蚪M組成：1個(gè)質(zhì)粒復(fù)制起始區(qū)域復(fù)制子1個(gè)入噬菌體黏性末端片段cos位點(diǎn)至少1個(gè)限制酶的單一識(shí)別切割位點(diǎn)至少1個(gè)抗藥性選擇標(biāo)記基因特點(diǎn)：具有質(zhì)粒載體的特性具有入噬菌體載體的特性具有高容量的克隆能力。可插入30-45kb的外源DNA基因工程的受體：基因工程的受體是指在轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)、雜交中接受外源基因，并能支持質(zhì)粒、病毒進(jìn)行復(fù)制擴(kuò)增和表達(dá)的細(xì)胞或生物體，受

11、體也叫宿主受體應(yīng)具備的性能：具有接受外源基因的能力，并利于表達(dá)能表達(dá)由導(dǎo)入的重組體分子提供的某些表型特征,以利于轉(zhuǎn)化子細(xì)胞的選擇和鑒定不適合于在人體體內(nèi)或非培養(yǎng)條件下生存，有利于安全基因工程的研究方法目的基因的制備重組體DNAt入受體細(xì)胞目的基因：是指根據(jù)基因工程的目的和設(shè)計(jì)所需要的某些制備方法：目的基因與載體的重組克隆子和篩選與表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)DNA分子的片段，它含有一種或幾種遺傳信息的全套密碼目的基因的直接分離法（限制性內(nèi)切酶法、物理化學(xué)法、酶促逆轉(zhuǎn)錄合成法）基因文庫(kù)篩選法（鳥槍法、基因組文庫(kù)法、cDNA文庫(kù)法）聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法基因的化學(xué)合成法酶促逆轉(zhuǎn)錄合成法：利用逆轉(zhuǎn)錄酶以mRN朋模板合成

12、相應(yīng)的DNA方法。主要用于合成分子量大而又不知其序列的基因基因組文庫(kù)：指匯集某一基因組所有DNA列的重組DNA體。通常是以入噬菌體作為載體構(gòu)建的cDNA文庫(kù)：以某種生物成熟的mRN徼模板逆轉(zhuǎn)錄而成的cDNA序列的重組DNA群體。常以人噬菌體和質(zhì)粒作為載體構(gòu)建聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法（PCR：當(dāng)知道目的基因的序列或其兩側(cè)的序列時(shí)，可以通過(guò)合成一對(duì)與模板DNA互補(bǔ)的引物，十分有效的擴(kuò)增出含有目的基因的DNA段反應(yīng)體系：作為模板的目的DN際列與目的基因兩條鏈的各自3'端序列互補(bǔ)的DNA引物2+TaqDN臊合酶4種核甘酸4XdNTP反應(yīng)buffer:Mg基本過(guò)程：變性（高溫90-96C下使DNA分子解

13、鏈）退火（降溫25-65C使DNA分子重新配對(duì)，引物與模板結(jié)合）延伸（72c下，Taq酶作用，合成DNA分子）目的基因與載體的重組：（基因重組）：利用限制性內(nèi)切核酸酶和其他一些酶類，切割和修飾載體DNA和目的基因，并將兩者連接起來(lái)。這種連接主要靠T4DNA1接酶。包括：亞克隆、黏性末端連接、平端連接、人工接頭連接、同聚物加尾連接亞克?。喊袲NA片段從某一類型的載體無(wú)性繁殖到另一類型的載體的過(guò)程稱為亞克隆。黏性末端連接：同一限制酶切位點(diǎn)連接不同限制酶切位點(diǎn)連接平端連接：具有平末端的酶切載體只能與平末端的目的基因連接人工接頭連接：是人工合成具有特定限制性內(nèi)切核酸酶識(shí)別和切割序列的雙股平端DN即序列

14、。將人工接頭接在目的基因片段和載體DNA上，使它們具有新的內(nèi)切核酸酶位點(diǎn)，應(yīng)有相應(yīng)的內(nèi)切核酸酶切割，就可以得到互補(bǔ)的黏性末端重組體DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞：在目的基因與載體連接成重組DNA分子后，下面的重要工作主要是將重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增和篩選，獲得大量的重組DNA分子么這就是外源基因的無(wú)性繁殖，即克隆根據(jù)受體生物，將重組體導(dǎo)入受體細(xì)胞分為：大腸桿菌轉(zhuǎn)化法、酵母轉(zhuǎn)化法、植物細(xì)胞轉(zhuǎn)化法、動(dòng)物細(xì)胞轉(zhuǎn)化法大腸桿菌轉(zhuǎn)化法：氯化鈣轉(zhuǎn)化法電穿孔法轉(zhuǎn)導(dǎo)氯化鈣轉(zhuǎn)化法（是將重組體通過(guò)與膜蛋白結(jié)合進(jìn)入受體細(xì)胞，并在受體細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定維持和表達(dá)的過(guò)程），通常采用的是大腸桿菌的感受態(tài)細(xì)胞操作方法：將對(duì)數(shù)長(zhǎng)期的大腸桿菌

15、細(xì)胞懸浮于用冰預(yù)冷的低滲CaCl2溶液中，使細(xì)胞通透性增加；將重組DNA加入感受態(tài)細(xì)胞懸浮液，使DNAWCa2破成復(fù)合物，吸附于細(xì)胞表面，經(jīng)42c短暫熱處理，促使外源DNAS入感受態(tài)細(xì)胞電穿孔法（利用高壓脈沖使細(xì)胞膜形成小孔而導(dǎo)入外源DNA的技術(shù)）酵母轉(zhuǎn)化法：完整細(xì)胞轉(zhuǎn)化法原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法植物細(xì)胞轉(zhuǎn)化法：載體轉(zhuǎn)化法基因直接轉(zhuǎn)化法基因直接轉(zhuǎn)化法：是指不需要載體，而利用物理、化學(xué)的方法將外源基因?qū)胧荏w植物細(xì)胞的技術(shù)?？寺∽拥暮Y選與表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)：將重組DNA導(dǎo)入受體后的下一個(gè)工作是：從轉(zhuǎn)化細(xì)菌菌落中篩選出含有陽(yáng)性重組DNA分子的菌落，或檢測(cè)轉(zhuǎn)化后的受體能否表達(dá)目標(biāo)產(chǎn)物?？寺∽拥暮Y選鑒定方法：利用抗

16、生素抗性基因篩選報(bào)告基因檢測(cè)方法基因工程在食品中的應(yīng)用1、基因工程與食品原料改良2、基因工程與食品貯藏保鮮核酸分子雜交（點(diǎn)雜交、SouthernblotDNANorthernblot-DN菌落雜交技術(shù)）利用噬菌斑的形成進(jìn)行篩選利用遺傳互補(bǔ)作用進(jìn)行篩選重組DNA電泳對(duì)食品原料品質(zhì)的直接改良培育抗性動(dòng)植物新品種改良微生物的菌種特性PG基因工程AC%成酶基因工程5、基因工程與食用疫苗3、基因工程與食品加工4、基因工程與食品新資源的開發(fā)對(duì)食品原料的直接改良：改良植物蛋白品質(zhì)通過(guò)基因工程改良脂肪酸的組成通過(guò)基因工程增加果實(shí)的甜度提高果實(shí)可溶性固形物的含量提供維生素、微量礦物元素的含量改良植物淀粉提高動(dòng)物

17、源食品的生成效率及品質(zhì)轉(zhuǎn)基因食品：是指用轉(zhuǎn)基因生物制造、生產(chǎn)的食品原料、食品及食品添加劑等，簡(jiǎn)稱GMF實(shí)質(zhì)等同性：是如果某種轉(zhuǎn)基因食品成分與和已經(jīng)存在的某一食品或成分在實(shí)質(zhì)上相同，那么在安全性方面，前者可以與后者等同處理。發(fā)酵工程|:利用生物細(xì)胞（或酶）的某種特新，通過(guò)現(xiàn)代化工程技術(shù)書段進(jìn)行工業(yè)化規(guī)?；a(chǎn)人類所需產(chǎn)品的技術(shù)發(fā)酵工業(yè)生產(chǎn)上常用的微生物主要是細(xì)菌、放線菌、酵母菌、霉菌、其他微生物（藻類、病毒）原生質(zhì)體育種：細(xì)胞壁是微生物細(xì)胞間進(jìn)行物質(zhì)交換的主要障礙之一，將細(xì)胞壁除去后，在原生質(zhì)體融合時(shí)又加入融合促進(jìn)劑可導(dǎo)致原生質(zhì)體間高頻率的雜交原生質(zhì)體制備原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體再生融合子的選擇發(fā)酵

18、培養(yǎng)基：人工制備的、適合不同微生物生長(zhǎng)繁殖以及積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)物培養(yǎng)基應(yīng)滿足的條件：來(lái)源豐富、供應(yīng)充足、價(jià)廉物美單位質(zhì)量的底物產(chǎn)生最大的菌體和產(chǎn)物得率產(chǎn)物合成速率高副產(chǎn)物的生成少減小通風(fēng)攪拌、后期產(chǎn)物的提取、純化難度低按培養(yǎng)基外觀的物理狀態(tài)分類：固體培養(yǎng)基：比較適合于菌種的分離和保存以及曲霉和真菌的生產(chǎn)。主要成分有、效皮、大米、小米、小米、木屑、稻糠和瓊脂等半固體培養(yǎng)基：即配好的液體培養(yǎng)基中加入瓊脂，一般用量為0.5%-0.8%,主要用于鑒定菌種，觀察細(xì)菌運(yùn)動(dòng)特征,及噬菌體的效價(jià)測(cè)定液體培養(yǎng)基：80%-90%1水，其中配有可溶性的或不溶性的營(yíng)養(yǎng)成分，它流動(dòng)性好、輸送方便，由于氧氣、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和

19、能量的傳遞，有利于發(fā)酵參數(shù)的控制，是搖瓶發(fā)酵和大規(guī)模工業(yè)發(fā)酵最常用的培養(yǎng)基發(fā)酵工業(yè)中常用的原料：工業(yè)上常用碳源（碳源是合成菌體和目的產(chǎn)物的碳成分，為微生物菌種的生長(zhǎng)繁殖提供能源）工業(yè)上常用氮源（氮源分為無(wú)機(jī)氮源和有機(jī)氮源，有機(jī)氮源有利于微生物生長(zhǎng)）無(wú)機(jī)鹽（根據(jù)微生物對(duì)無(wú)機(jī)鹽的需求量，將無(wú)機(jī)鹽分為主要元素和微量元素兩類）水（天然水含有不同類型和不同量的礦物質(zhì)，具有一定的硬度和堿度，水的質(zhì)量對(duì)微生物的生長(zhǎng)和發(fā)酵產(chǎn)物的形成具有一定影響，通常利用絮凝法、離子交換法、電滲析法、反滲析法進(jìn)行處理）生長(zhǎng)因子（生長(zhǎng)因子是一類對(duì)微生物正常代謝必不可少且不能用簡(jiǎn)單的碳源或氮源自行合成的有機(jī)物。需要量不大，但卻是有

20、些微生物代謝所必需的）前體（指在產(chǎn)物合成過(guò)程中，被菌體直接用于產(chǎn)物合成而自身結(jié)構(gòu)無(wú)顯著改變的物質(zhì)）產(chǎn)物促進(jìn)劑發(fā)酵培養(yǎng)基加熱滅菌的應(yīng)用：實(shí)罐滅菌法（分批式滅菌）連續(xù)滅菌法發(fā)酵過(guò)程的優(yōu)化與控制：生物培養(yǎng)基與發(fā)酵同時(shí)受到細(xì)胞內(nèi)部遺傳特性和外部發(fā)酵條件兩個(gè)方面的制約。1、溫度對(duì)發(fā)酵的影響及其控制發(fā)酵熱：包括生物熱、攪拌熱、蒸發(fā)熱、輻射熱生物熱：發(fā)酵初期，呼吸作用緩慢，產(chǎn)生熱量少；對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期菌體繁殖快，代謝旺盛。產(chǎn)生熱量多；平衡期菌體濃度大，代謝旺盛，產(chǎn)生熱量最多；發(fā)酵后期產(chǎn)熱不多攪拌熱：機(jī)械攪拌帶動(dòng)發(fā)酵液運(yùn)動(dòng)，造成液體之間、液體與設(shè)備之間的摩擦作用，產(chǎn)生熱量，稱為攪拌熱蒸發(fā)熱：通風(fēng)時(shí)，引起發(fā)酵液部分熱

21、量通過(guò)罐體向外輻射。溫度對(duì)發(fā)酵的影響和控制措施低于最低生長(zhǎng)溫度，微生物不生長(zhǎng)，一定溫度內(nèi)，菌體隨溫度上升而生長(zhǎng)代謝加快，溫度上升，酶失活速度加快。同一種微生物的不同生長(zhǎng)階段對(duì)溫度的敏感性不同，延遲期對(duì)溫度十分敏感，穩(wěn)定生長(zhǎng)期對(duì)溫度不敏感。同一株生產(chǎn)菌在不同的發(fā)酵溫度下會(huì)產(chǎn)生不同的代謝產(chǎn)物；同一菌株，其細(xì)胞生長(zhǎng)和代謝產(chǎn)物積累的最適溫度往往不同2、溶解氧對(duì)發(fā)酵過(guò)程的影響溶解氧濃度對(duì)發(fā)酵的影響及監(jiān)控發(fā)酵前期：需氧量不斷大幅度增加，此時(shí)需氧超過(guò)供氧，溶氧明顯下降；發(fā)酵中后期：呼吸強(qiáng)度變化不大，溶解氧濃度變化較?。话l(fā)酵后期：菌體衰老，呼吸減弱，溶氧濃度也逐漸上升影響氧傳遞的因素溶氧的控制措施：a提高飽和

22、溶解氧濃度b降低發(fā)酵液中氧濃度c提高液相體積氧傳遞系數(shù)3、pH對(duì)發(fā)酵的影響及其控制微生物對(duì)pH的需求（大多數(shù)細(xì)菌的最適pH值為6.5-7.5，霉菌最適pH為4.0-5.8，酵母菌白最適pH為3.8-6.0）生長(zhǎng)和發(fā)酵產(chǎn)物最適pH值（往往是不同的）酶的激活或抑制（pH的改變通過(guò)引起某些酶的激活或抑制，使菌體代謝途徑發(fā)生改變，代謝產(chǎn)物發(fā)生變化）引起發(fā)酵液pH下降的因素（碳源比高）引起發(fā)酵液pH上升的因素（氮源比例失衡）發(fā)酵過(guò)程中pH的控制（根據(jù)不同微生物特性、根據(jù)發(fā)酵過(guò)程中的pH要求，控制適當(dāng)?shù)膒H）發(fā)酵過(guò)程pH值調(diào)節(jié)和控制（調(diào)節(jié)原始pH值，選用不同代謝速度的碳源和氮源，補(bǔ)料，加入弱酸或弱堿）4、

23、二氧化碳對(duì)發(fā)酵的影響和控制二氧化碳既是微生物的代謝產(chǎn)物，也是某些微生物代謝的基質(zhì)，對(duì)生長(zhǎng)具有直接影響。常用通風(fēng)攪拌的方法控制5、發(fā)酵過(guò)程的中間補(bǔ)料措施發(fā)酵過(guò)程可以分為分批發(fā)酵、分批補(bǔ)料發(fā)酵、連續(xù)發(fā)酵補(bǔ)料：是指發(fā)酵過(guò)程中補(bǔ)某些維持微生物的生長(zhǎng)和代謝產(chǎn)物積累所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（補(bǔ)充碳源、補(bǔ)充氮源、補(bǔ)充微量元素/無(wú)機(jī)鹽、補(bǔ)充前體）6、泡沫控制發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生大量泡沫的原因：外界引進(jìn)的氣流被機(jī)械地分散形成泡沫發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生的氣體聚結(jié)形成的發(fā)酵泡沫產(chǎn)生泡沫的不利影響：引起發(fā)酵液溢出排氣口，造成逃液，導(dǎo)致產(chǎn)物損失泡沫上升到罐頂，使培養(yǎng)基從攪拌軸處滲出，造成菌體污染泡沫會(huì)減少裝料系數(shù)，降低設(shè)備利用率影響通風(fēng)攪拌

24、效果及氧傳遞，造成發(fā)酵異常影響菌體正常呼吸作用使微生物群體的非均一性增加是微生物菌體提早自溶泡沫的消除：機(jī)械法（機(jī)械力打碎泡沫，促使氣泡破裂）化學(xué)法（使用化學(xué)消泡劑）7、雜菌與噬菌體污染的控制發(fā)酵工程在食品工業(yè)中的應(yīng)用1、傳統(tǒng)發(fā)酵食品生產(chǎn)傳統(tǒng)發(fā)酵糧食食品一一黃酒的生產(chǎn)傳統(tǒng)發(fā)酵蔬菜食品一一泡菜的生產(chǎn)傳統(tǒng)發(fā)酵肉制品一一火腿的生產(chǎn)2、發(fā)酵法生產(chǎn)功能性食品真菌多糖生物活性肽一谷胱甘肽傳統(tǒng)發(fā)酵豆類食品傳統(tǒng)發(fā)酵乳制品-油的生產(chǎn)酸乳的生產(chǎn)功能性微生態(tài)制劑功能性微量元素功能性不飽和脂肪酸3、發(fā)酵法生產(chǎn)食品添加劑黃原膠有機(jī)酸一乳酸色素一紅曲色素防腐劑4、發(fā)酵工程與食品廢棄物的處理一一食品工業(yè)廢水的處理方法（物理

25、法、化學(xué)法、生物法）曝氣活性污泥工藝：向食品加工廢水中不斷地充入空氣，使水中有足夠的溶解氧，為好氧微生物生長(zhǎng)繁殖創(chuàng)造良好的條件，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間后，就會(huì)產(chǎn)生一種褐色絮狀泥粒，其中含有大量的微生物，這種充滿微生物的絮狀泥粒，叫做活性污泥?；钚晕勰嘟Y(jié)構(gòu)松散，表面積很大，具有很強(qiáng)的吸附和氧化分解有機(jī)物的能力酶：是由活細(xì)胞產(chǎn)生的，對(duì)其特異底物具有高效催化作用的生物大分子根據(jù)酶分子的組成分類：?jiǎn)渭兠福ㄓ行┟阜肿觾H由氨基酸組成，沒有輔助因子，如月尿酶、淀粉酶）結(jié)合酶（是除了在其組成中含有氨基酸組成的蛋白質(zhì)部分外，還含有非蛋白成分）酶的活性中心：指必需基團(tuán)在空間結(jié)構(gòu)上彼此靠近，組成具有特定空間結(jié)構(gòu)的區(qū)域，能與底

26、物特異結(jié)合并將底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物亞嗎：是利用微生物發(fā)酵生產(chǎn)酶制劑，或利用酶、細(xì)胞器或細(xì)胞所具有的特異催化功能，或通過(guò)對(duì)酶的分子結(jié)構(gòu)修飾或改造以改善酶的特性，借助于生物反應(yīng)器和工藝優(yōu)化，有效的發(fā)揮酶的催化特性生產(chǎn)人類所需產(chǎn)品的技術(shù)酶的生產(chǎn)方式：化學(xué)合成法、從生物體內(nèi)直接提取分離、微生物發(fā)酵生產(chǎn)制取特定的酶（主要方式）從生物體內(nèi)直接提取分離：采用各種技術(shù)，直接從動(dòng)植物或微生物的細(xì)胞或組織中將酶提取出來(lái)微生物發(fā)酵生產(chǎn)制取特定的酶發(fā)酵方法與控制：根據(jù)微生物培養(yǎng)方式不同，可分為固體培養(yǎng)發(fā)酵、液體培養(yǎng)發(fā)酵固體培養(yǎng)發(fā)酵：以秋皮、米糠為基本原料，加無(wú)機(jī)鹽和適量水分進(jìn)行微生物培養(yǎng)的方法液體培養(yǎng)發(fā)酵：利用合成的液體培

27、養(yǎng)基在發(fā)酵罐內(nèi)進(jìn)行攪拌通氣培養(yǎng)，是目前主要方式提高酶產(chǎn)量的方法：通過(guò)酶的合成調(diào)節(jié)機(jī)制提高酶的產(chǎn)量（誘導(dǎo)酶合成調(diào)節(jié)、酶合成的反饋?zhàn)瓒?、分解代謝對(duì)酶合成的阻遏作用）、通過(guò)基因突變提高酶產(chǎn)量、通過(guò)基因重組提高酶產(chǎn)量、通過(guò)發(fā)酵條件控制提高酶產(chǎn)量、添加誘導(dǎo)物、添加表面活性劑、添加產(chǎn)酶促進(jìn)劑分解代謝對(duì)酶合成的阻遏作用：又叫葡萄糖阻遏。葡萄糖利用某些容易利用的碳源，其分解代謝產(chǎn)物阻遏某些誘導(dǎo)酶體系編碼的基因轉(zhuǎn)錄的現(xiàn)象酶工程的研究?jī)?nèi)容：化學(xué)酶工程、生物酶工程化學(xué)酶工程：也稱為初級(jí)酶工程，是指自然酶、修飾酶、固定化酶及化學(xué)人工酶（模擬酶）的研究與應(yīng)用生物酶工程：是酶學(xué)和以DNA重組技術(shù)為主的現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)相

28、結(jié)合的產(chǎn)物，因而也叫高級(jí)酶工程化學(xué)酶工程：自然酶的開發(fā)固定化酶（指經(jīng)過(guò)一定改造后被限制在一定的空間內(nèi),能模擬體內(nèi)酶的作用方式，并可反復(fù)連續(xù)的進(jìn)行有效催化反應(yīng)的酶）化學(xué)修飾酶（通過(guò)對(duì)酶分子的化學(xué)修飾,以改變酶的結(jié)構(gòu)、改善酶的性能。常采用酶分子功能基團(tuán)修飾和交聯(lián)反應(yīng)、酶與高分子結(jié)合等方法）人工合成酶（化學(xué)合成的具有與天然酶相似功能的催化物質(zhì)。在深入了解酶的結(jié)構(gòu)和功能及催化作用機(jī)理的基礎(chǔ)上，模擬酶的功能，用化學(xué)方法合成的催化劑?？梢允堑鞍踪|(zhì)，也可以是較簡(jiǎn)單的大分子物質(zhì)）酶的固定化技術(shù)：可大致分為四類，即吸附法、包埋法、共價(jià)結(jié)合法、交聯(lián)法酶分子的化學(xué)修飾：指在體外利用修飾劑所具有的各類化學(xué)基團(tuán)的特性，

29、直接或經(jīng)一定的活化步驟后與酶分子上的某種氨基酸殘基產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)，使某些化學(xué)物質(zhì)或基團(tuán)結(jié)合到酶分子上，或?qū)⒚阜肿拥哪巢糠謩h除或置換，從而改造酶分子的結(jié)構(gòu)與功能方法：金屬離子置換修飾、大分子結(jié)合修飾、肽鏈有限水解修飾、交聯(lián)修飾、酶分子側(cè)鏈基團(tuán)修飾金屬離子置換修飾：有些酶分子中含有金屬離子，而且往往是活性中心的組成部分，對(duì)酶的催化功能起重要作用。酶分子中的金屬取代可以改變某些酶的專一性、穩(wěn)定性及抑制作用過(guò)程：酶的分離純化、除去原有的金屬離子、加入置換離子大分子結(jié)合修飾：利用水溶性大分子與酶的側(cè)鏈基團(tuán)共價(jià)結(jié)合，使酶的空間構(gòu)象發(fā)生改變，從而改變酶的特性與功能肽鏈有限水解修飾：通過(guò)肽鏈的有限水解，使酶的構(gòu)

30、象發(fā)生變化，從而改變酶的特性和功能的方法交聯(lián)修飾：應(yīng)用雙功能基團(tuán)試劑使酶分子內(nèi)或分子間肽鏈發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)的修飾酶分子側(cè)鏈基團(tuán)修飾：通過(guò)基團(tuán)專一性試劑與酶分子側(cè)鏈上特定的功能團(tuán)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，引起酶分子的空間構(gòu)想發(fā)生改變，從而改變酶分子特性和功能的修飾方法。（可用于研究各種基團(tuán)在酶分子中的作用和影響）化學(xué)人工酶：用有機(jī)化學(xué)和生物學(xué)方法合成的具有特定催化功能的酶的模擬物。人工酶的制作：半合成酶（與金屬或金屬有機(jī)物的結(jié)合）全合成酶（小分子有機(jī)物全合成酶、抗體酶、印記酶）抗體酶：在免疫球蛋白的易變區(qū)引入催化基團(tuán)形成的人工合成酶（拷貝法、引入法、誘導(dǎo)法）印記酶：分子印跡是指以天然生物材料為骨架，通過(guò)模板產(chǎn)生

31、特異性識(shí)別空腔的技術(shù)。印記酶是用分子印跡技術(shù)制備的人工酶，又稱人工聚合物酶制備生物印記酶的過(guò)程：使蛋白質(zhì)變性，擾亂其天然構(gòu)象，使其構(gòu)象柔曲更有可塑性加入模板分子，使模板分子與變性蛋白質(zhì)充分混合代模板分子與蛋白質(zhì)相互作用后，用交聯(lián)劑交聯(lián)蛋白質(zhì)，固定其與模板分子相結(jié)合的構(gòu)象待透析或其他方法除去模板分子，產(chǎn)生具有新的活性中心的蛋白質(zhì)空穴酶的定向進(jìn)化：是在試管中模擬自然進(jìn)化過(guò)程的人工進(jìn)化策略，利用酶基因的突變或在同類酶基因片段的重組，構(gòu)建某個(gè)酶的隨機(jī)基因突變庫(kù)，通過(guò)基因操作的方法使這些基因在微生物中表達(dá)，人工控制條件篩選出人們所需的酶（基本策略：構(gòu)建基因突變庫(kù)途徑：點(diǎn)突變、體外重組）典型酶分子定向進(jìn)化

32、步驟：選擇目的基因構(gòu)建基因變異庫(kù)變異基因與表達(dá)載體連接克隆基因向宿主的轉(zhuǎn)導(dǎo)篩選進(jìn)化的基因分離改良的基因多次反復(fù)循環(huán)上述進(jìn)化，積累改良結(jié)果，最后得到所需酶基因點(diǎn)突變的方法：易錯(cuò)PCR化學(xué)誘變劑介導(dǎo)的隨機(jī)突變易錯(cuò)PCR是通過(guò)使用特定條件的PCRM基因進(jìn)行體外擴(kuò)增，使擴(kuò)增的基因出現(xiàn)少量堿基誤配，引起突變，構(gòu)建突變庫(kù)，然后選擇或篩選獲得突變體（關(guān)鍵是控制突變率）易錯(cuò)PC幅通過(guò)采用提高鎂離子濃度、加入鎰離子、改變體系中四種dNTP的濃度、使用低保真的Taq酶創(chuàng)造隨機(jī)突變體外重組：DNA列改組、體外隨機(jī)引導(dǎo)重組、交錯(cuò)延伸技術(shù)、基因家族改組DNA序列改組：又稱有性PCR即從正突變基因庫(kù)中分離出的DNAffi

33、DNA酶活限制性內(nèi)切酶隨機(jī)切成片段，隨機(jī)片段經(jīng)過(guò)不加引物的多次PCR循環(huán)，在PCR循環(huán)過(guò)程中隨機(jī)片段之間互為模板和引物進(jìn)行擴(kuò)增，直到獲得全長(zhǎng)的基因交錯(cuò)延伸技術(shù)：選擇兩個(gè)親本基因，使它們變性成單鏈，在PCR反應(yīng)中，把常規(guī)的退火和延伸合并為一步，并大大縮短其反應(yīng)時(shí)間，引物在DNA聚合酶催化下只能合成出非常短的新生鏈，經(jīng)變性的新生鏈再作為引物與體系內(nèi)同時(shí)存在的不同模板退火并進(jìn)一步延伸，重復(fù)這一過(guò)程直到全長(zhǎng)序列形成酶反應(yīng)器：以酶活固定化酶作為催化劑進(jìn)行酶促反應(yīng)的裝置根據(jù)幾何形狀或結(jié)構(gòu)分類：罐型、管型、膜型按進(jìn)料和出料方式：分批性、半分批性、連續(xù)式反應(yīng)器按其功能結(jié)構(gòu)：膜反應(yīng)器、液固反應(yīng)器、氣液固三相反應(yīng)

34、器按照結(jié)構(gòu)的不同：攪拌罐式反應(yīng)器、填充床反應(yīng)器、流化床式反應(yīng)器、鼓泡式反應(yīng)器、模式反應(yīng)器、噴射式反應(yīng)器固定床式反應(yīng)器：將顆粒狀、板狀或纖維狀的固定化酶填充在固定床中，底物按一定方向通過(guò)固定進(jìn)行反應(yīng)的裝置酶?jìng)鞲衅鳎阂怨潭ɑ缸鳛楦惺芷?，以基礎(chǔ)電極作為換能器的生物傳感器根據(jù)感受器與基礎(chǔ)電極結(jié)合方式不同分為：電極緊接型、液流系統(tǒng)型酶?jìng)鞲衅鞯闹苽洌哼x擇酶（選擇能專一性催化目的物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的酶）酶與固相載體結(jié)合成固定化酶選擇基礎(chǔ)電極酶工程在食品工業(yè)中的應(yīng)用：1、酶工程在食品加工淀粉糖加工乳制品加工2、酶工程與食品添加劑高甜度甜味劑：阿斯巴甜3、酶工程與功能性食品配料4、酶工程提高食品資源利用效率5、

35、新型酶制劑及其應(yīng)用微生物原果膠酶的研究進(jìn)展植酸酶的研究進(jìn)展果蔬加工魚肉制品加工油脂改良啤酒釀造烘烤食物5'-鳥甘酸和5'-肌甘酸單甘脂3-環(huán)糊精的酶法生產(chǎn)低聚糖果葡糖漿水解動(dòng)植物蛋白酵母提取物提高植物原料的淀粉提取率釀酒工業(yè)與出酒率的提高氨肽酶和竣肽酶及其在蛋白水解物脫苦中的應(yīng)用漆酶的研究進(jìn)展極端酶研究進(jìn)展細(xì)胞工程|:是指以細(xì)胞為基本單位，在體外條件下進(jìn)行培養(yǎng)，繁殖，或按人們的需求設(shè)計(jì)改變細(xì)胞的某些生物學(xué)特征，從而獲得某些有用的物質(zhì)，或改良生物品種和創(chuàng)造新品的技術(shù)。進(jìn)行體外培養(yǎng)細(xì)胞，需要從外部調(diào)節(jié)、內(nèi)部調(diào)控兩方面著手細(xì)胞群體的生長(zhǎng)，一般分為滯后期、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、穩(wěn)定器、衰亡期細(xì)胞

36、全能性：一個(gè)與合子具有相同遺傳內(nèi)容的體細(xì)胞具有產(chǎn)生完整生物個(gè)體的潛在能力細(xì)胞工程主要內(nèi)容：大規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)（包括單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)、組織培養(yǎng)、器官培養(yǎng)）細(xì)胞融合（又稱體細(xì)胞雜交，是利用自然或人工的方法使兩個(gè)或幾個(gè)不同的細(xì)胞融合為一個(gè)細(xì)胞）細(xì)胞拆分（又稱細(xì)胞質(zhì)工程，是通過(guò)物理或化學(xué)方法將細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核分開,再進(jìn)行不同細(xì)胞間核質(zhì)的重新組合，重建成新細(xì)胞。也包括各種細(xì)胞器的分離和重新組合）繁殖生物學(xué)技術(shù)（主要包括體外受精技術(shù)、胚胎移植技術(shù)、動(dòng)物克?。┤旧w工程（是按照人們的需要來(lái)添加或減少一種生物的染色體，或用別的生物的染色體來(lái)替換）染色體組工程（是改變?nèi)旧w組數(shù)的技術(shù)）細(xì)胞工程的主要技術(shù)：無(wú)菌操作計(jì)數(shù)細(xì)

37、胞培養(yǎng)技術(shù)細(xì)胞融合技術(shù)細(xì)胞拆分技術(shù)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)：要取材和除菌配置培養(yǎng)基、滅菌、接種細(xì)胞培養(yǎng)（是指在動(dòng)物、植物和微生物細(xì)胞在體外無(wú)菌條件下的保存和生長(zhǎng)）細(xì)胞融合技術(shù)：是指不同的細(xì)胞在離體條件下接觸，其細(xì)胞膜發(fā)生分子重排，導(dǎo)致細(xì)胞合并、染色體等遺傳物質(zhì)重組的過(guò)程。又稱原生質(zhì)體融合細(xì)胞融合的操作程序：原生質(zhì)體的制備、誘導(dǎo)細(xì)胞使之發(fā)生融合、篩選雜種細(xì)胞、雜種細(xì)胞的培養(yǎng)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的主要方法：生物學(xué)法化學(xué)因子誘導(dǎo)細(xì)胞融合電誘導(dǎo)細(xì)胞融合化學(xué)因子誘導(dǎo)細(xì)胞融合：采用化學(xué)融合劑促進(jìn)細(xì)胞融合（主要化學(xué)融合劑有聚乙二醇PEG二甲基亞碉DMSO高級(jí)脂肪酸衍生物、脂質(zhì)體、鈣離子）（PEG勺優(yōu)點(diǎn)：通用性好，能誘發(fā)植物細(xì)胞

38、融合，促使動(dòng)物細(xì)胞融合）電誘導(dǎo)細(xì)胞融合：在電場(chǎng)中使細(xì)胞極化成偶極子，并沿電力線排列成串，然后用高強(qiáng)度、短時(shí)間的電脈沖擊穿細(xì)胞膜，使其產(chǎn)生小孔，從而使兩個(gè)或幾個(gè)相互靠近的細(xì)胞融合在一起（對(duì)原生質(zhì)體損害小、效率高、具有普遍性）原生質(zhì)體的再生：原生質(zhì)體重新生長(zhǎng)出細(xì)胞壁，回復(fù)到完整細(xì)胞形態(tài)的過(guò)程影響再生因素：菌體生長(zhǎng)狀態(tài)酶濃度及作用時(shí)間再生培養(yǎng)基殘存菌體的分離原生質(zhì)體的密度融合子：原生質(zhì)體融合后，來(lái)自兩個(gè)親本的遺傳物質(zhì)經(jīng)過(guò)交換并發(fā)生重組而形成的子代雜合子篩選手段：直接法：對(duì)于營(yíng)養(yǎng)互補(bǔ)型的親本，可以不補(bǔ)充兩親本生長(zhǎng)所需營(yíng)養(yǎng)物的再生基本培養(yǎng)基上直接篩選；對(duì)于以抗藥性作為選擇標(biāo)記的融合，可從含藥物的平板培養(yǎng)

39、基上分離鑒定；對(duì)形態(tài)特征或色素方法的標(biāo)記，其融合子可根據(jù)色素、形態(tài)特征來(lái)分析鑒定間接法：將融合液涂布于營(yíng)養(yǎng)豐富的再生培養(yǎng)基上，使未融合的和融合的都生長(zhǎng)出來(lái)，然后用影印法接種在對(duì)應(yīng)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基或選擇培養(yǎng)基上，經(jīng)過(guò)對(duì)照選出雜合子動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)：將動(dòng)物細(xì)胞或組織從機(jī)體中取出，分散成單個(gè)細(xì)胞，給予必要的生長(zhǎng)條件，模擬體內(nèi)生長(zhǎng)環(huán)境，在無(wú)菌、適溫、豐富的營(yíng)養(yǎng)條件下，使細(xì)胞在體外繼續(xù)生長(zhǎng)和增殖。整個(gè)過(guò)程細(xì)胞不出現(xiàn)分化，不形成組織根據(jù)是否能貼附于支持物上生長(zhǎng)的特性，分為：懸浮型細(xì)胞：是指生長(zhǎng)時(shí)呈懸浮狀態(tài)的細(xì)胞貼附型細(xì)胞：是指貼附于支持物上生長(zhǎng)的細(xì)胞。多數(shù)細(xì)胞為貼附型，生長(zhǎng)時(shí)能貼附在支持物上原代培養(yǎng)：以直接取自生

40、物體細(xì)胞、組織或器官開始的培養(yǎng)傳代：將細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)容器轉(zhuǎn)移或移植到另一個(gè)培養(yǎng)容器，即傳代或傳代培養(yǎng)細(xì)胞接觸抑制：細(xì)胞在貼壁生長(zhǎng)過(guò)程中，隨著細(xì)胞分裂，數(shù)量不斷增加，最后形成一個(gè)單層，此時(shí)細(xì)胞間相互接觸，細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)停止，數(shù)量不再增加動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基：根據(jù)培養(yǎng)基的來(lái)源及成分的明確程度劃分為：天然培養(yǎng)基階段：直接采用某些組織的凝塊、生物性液體和組織提取液等作為細(xì)胞額培養(yǎng)基優(yōu)點(diǎn)：營(yíng)養(yǎng)成分豐富、培養(yǎng)效果好缺點(diǎn)：成分復(fù)雜、來(lái)源受限合成培養(yǎng)基階段（在合成培養(yǎng)基中都或多或少加入一定比例的天然培養(yǎng)基，比例由百分之幾到百分之幾十不等，實(shí)際操作中，這種培養(yǎng)基應(yīng)成為半合成培養(yǎng)基）無(wú)血清培養(yǎng)基：為深入研究細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育

41、、分裂繁殖以及衰老分化的生物學(xué)機(jī)制而研制的，主要是由基礎(chǔ)培養(yǎng)基和替代血清的補(bǔ)充因子組成（補(bǔ)充因子：用來(lái)替代血清中含有的動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)所需要的各種因子）無(wú)血清培養(yǎng)基作用：避有了血清的批次、質(zhì)量、成分等對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)造成的污染、毒性作用和不利于產(chǎn)品純化等不良影響。可使不同細(xì)胞在最有利于細(xì)胞生長(zhǎng)和表達(dá)目的產(chǎn)物的環(huán)境中維持高密度培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)方式：灌注懸浮培養(yǎng)、貼壁細(xì)胞培養(yǎng)、固定化細(xì)胞培養(yǎng)、微載體培養(yǎng)懸浮培養(yǎng)（非貼壁依賴性細(xì)胞培養(yǎng)）：是指利用旋轉(zhuǎn)、振搖或攪拌的方法使細(xì)胞始終處于懸浮狀態(tài)，并在此狀態(tài)下生長(zhǎng)繁殖的方法。主要用于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞培養(yǎng)。如來(lái)源于血液、淋巴組織的細(xì)胞核腫瘤細(xì)胞優(yōu)點(diǎn)：對(duì)設(shè)備要求簡(jiǎn)單、并可借鑒微生物發(fā)酵的部分經(jīng)驗(yàn)和放大規(guī)律缺點(diǎn)：培養(yǎng)的細(xì)胞密度低且容易發(fā)生變