1、藥物的含量測定方法與驗證 藥物的含量 含量測定 效價測定 藥物含量測定方法 容量分析法 光譜分析法 色譜分析法第1頁/共37頁藥物的含量測定方法與驗證 方法選擇中的供試品因素 化學原料藥的含量測定首選容量分析法 藥物制劑的含量測定首選色譜分析法 藥物制劑的定量檢查首選光譜分析法 含量測定方法須準確、穩(wěn)定、耐用第2頁/共37頁第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點第3頁/共37頁一、容量分析法（滴定法） 基本術語 滴定：將滴定劑通過滴管滴入待測溶液中的過程 滴定劑：濃度準確已知的試樣溶液 指示劑：滴定分析中能發(fā)生顏色改變而指示終點的試劑 滴定終點：滴定分析中指示劑發(fā)生顏色改變的那一點（實際） 化學計量

2、點：滴定劑與待測溶液按化學計量關系反應完全的那一點（理論） 滴定誤差：滴定終點與化學計量點不一致產(chǎn)生的誤差第4頁/共37頁一、容量分析法（滴定法） 特點 方法簡便易行 方法耐用性高 測定結果準確 方法專屬性差 適用范圍：較多用于化學原料藥物的含量測定第5頁/共37頁一、容量分析法（滴定法） 有關計算 滴定度：每1ml某摩爾濃度的滴定液所相當?shù)谋粶y藥物的重量。中國藥典用mg表示。 滴定度的計算MabmmlmgT)/(第6頁/共37頁一、容量分析法（滴定法） 有關計算 含量的計算 直接滴定法 所配制滴定液濃度與規(guī)定濃度不一致時：%100%WTV含量FTT規(guī)定摩爾濃度實際摩爾濃度F%100%100%

3、WFTVWTV含量第7頁/共37頁一、容量分析法（滴定法） 有關計算 含量的計算 間接滴定法：生成物滴定法 簡接滴定法：剩余量滴定法%100)V%AWTFVFABBA（含量%100)VV%SB0BWTFAB（含量第8頁/共37頁二、光譜分析法 紫外-可見分光光度法（200400760nm） 朗伯-比耳定律 A為吸收度，l為液層厚度，c為溶液濃度，E為吸收系數(shù)。 E：單位液層厚度時的吸收度。有兩種表示法 摩爾吸收系數(shù)：在一定波長下，溶液濃度為1mol/L，厚度為1cm時的吸收度。用表示。 百分吸收系數(shù)：在一定波長下，溶液濃度為1%（W/V），厚度為1cm時的吸收度。用 表示。EclA%11cmE

4、第9頁/共37頁二、光譜分析法 紫外-可見分光光度法 特點與適用范圍 簡便易行 靈敏度高，可達10-4g/ml10-7g/ml。 準確度較高，相對誤差為2%5%。 專屬性較差 較少應用于原料藥含量測定，多用于制劑的定量檢查。第10頁/共37頁二、光譜分析法 紫外-可見分光光度法 儀器校正與檢定 波長：常用儀器中氘燈的486.02nm與656.10nm譜線校正，或用鈥玻璃的尖銳吸收峰。 吸光度的準確度：與規(guī)定的吸收系數(shù)比較。 雜散光的檢查 對溶劑的要求：截止波長 測定法：波長掃描與吸光度讀數(shù)第11頁/共37頁二、光譜分析法 紫外-可見分光光度法 含量測定方法 對照品比較法 吸收系數(shù)法 計算分光光

5、度法 比色法rrxxCAAC100%WDCx含量D為稀釋倍數(shù)。為稀釋倍數(shù)。%100)()E%11%11rcmxcmE（含量第12頁/共37頁二、光譜分析法 熒光分析法 特點與適用范圍 靈敏度高，可達10-10g/ml10-12g/ml. 濃度太大會有“自熄滅”作用，故適用于低濃度的溶液。 干擾因素多，須做空白試驗。 取樣少，方法快速。衍生化試劑提高了適用范圍第13頁/共37頁二、光譜分析法 熒光分析法 干擾的排除 溶劑：進一步純化溶劑，空白試驗 溶液：適當?shù)臐舛龋瑴p少雜質(zhì)，降低溶氧，調(diào)節(jié)pH 玻璃量器：高潔凈度 溫度：穩(wěn)定的溫度第14頁/共37頁二、光譜分析法 熒光分析法 含量測定 相對定量方

6、法測定 線性范圍較窄rrbribiiCRRRRC式中：Ci為供試品溶液的濃度，Cr為對照品溶液的濃度，Ri為供試品溶液的讀數(shù)，Rib為供試品溶液試劑空白的讀數(shù)，Rr為對照品溶液的讀數(shù)，Rrb為對照品溶液試劑空白的讀數(shù)。第15頁/共37頁三、色譜分析法 特點與適用范圍 高靈敏度 高專屬性 高效能與高速度 適用于藥物制劑，尤其復方制劑的含量測定。 分類 依據(jù)分離原理：吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、分子排阻色潽等 依據(jù)分離方式：紙色譜法，薄層色譜法，柱色譜法，氣相色譜法，高效液相色譜法等第16頁/共37頁三、色譜分析法 高效液相色譜法 藥品標準對HPLC方法改變的要求 對儀器的一般要求 色譜柱：

7、填料，孔徑與粒徑，柱直徑，溫度，pH等 檢測器：通用型檢測器與選擇性檢測器，對流動相的要求 流動相：反相系統(tǒng)與正相系統(tǒng)第17頁/共37頁三、色譜分析法 高效液相色譜法 系統(tǒng)適用性試驗 色譜柱的理論塔板數(shù) 色譜峰的分離度 色譜系統(tǒng)的重復性：RSD2.0% 色譜峰的拖尾因子22/1)/(54. 5WtnR2121)(2WWttRRR105. 02dWThd1為極大峰至峰前沿之間的距離。T應在0.951.05之間。第18頁/共37頁三、色譜分析法 高效液相色譜法 測定法 外標法：一點法；兩點法；工作曲線法 內(nèi)標法第19頁/共37頁三、色譜分析法 氣相色譜法 檢測器、固定液及特殊指定的色譜柱材料不能更

8、換 對儀器的一般要求 載氣 色譜柱填料，柱管材質(zhì)，固定液 檢測器種類，使用溫度 進樣方式 系統(tǒng)適用性試驗 測定法：多采用內(nèi)標法第20頁/共37頁第二節(jié) 樣品分析的前處理方法第21頁/共37頁樣品分析的前處理方法 在分析含金屬或鹵素、氮、硫、磷等元素的有機藥物前，需進行適當?shù)乃幤非疤幚怼?分類 不經(jīng)有機破壞的前處理方法 經(jīng)有機破壞的前處理方法第22頁/共37頁樣品分析的前處理方法 不經(jīng)有機破壞的前處理方法 直接測定法含金屬或C-M不牢固的有機金屬藥物 配位滴定法 氧化還原滴定法 經(jīng)水解后測定法鹵素聯(lián)脂肪碳鏈（溶于適當溶劑再水解） 堿水解后測定法 酸水解后測定法 經(jīng)氧化還原后測定法鹵素聯(lián)芳環(huán)牢固（

9、一般用于測碘） 第23頁/共37頁樣品分析的前處理方法 經(jīng)有機破壞的前處理方法 濕法破壞 硫酸-硫酸鹽法凱氏定氮法 硝酸-高氯酸法 硝酸-硫酸法 其它濕法 干法破壞 高溫熾灼法 氧瓶燃燒分解后測定法第24頁/共37頁經(jīng)有機破壞的前處理方法 硫酸-硫酸鹽法凱氏定氮法 將含氮藥物與硫酸在凱氏定氮燒瓶中共熱，藥物分子中有機結構被氧化分解（亦稱“消解”或“消化”）成二氧化碳和水，有機結合的氮則轉變?yōu)闊o機氮，并與過量的硫酸結合為硫酸氫銨及硫酸銨，經(jīng)氫氧化鈉堿化后釋放出氮氣，并隨水蒸氣餾出，用硼酸溶液或定量的酸滴定液吸收后，再用酸或堿滴定液滴定。 高溫熾灼法 將含待測元素的有機藥物經(jīng)高溫灼燒灰化，使有機結

10、構分解而待測元素轉化為無機元素或可溶性無機鹽，以供分析。根據(jù)分析對象與目的不同，常加無水碳酸鈣、硝酸鎂、氫氧化鈣、氧化鋅等輔助灰化。 氧瓶燃燒法第25頁/共37頁第三節(jié) 藥品質(zhì)量標準分析方法驗證第26頁/共37頁藥品質(zhì)量標準分析方法驗證 方法驗證的目的 需驗證的分析項目：鑒別試驗；雜質(zhì)定量或限度檢查；含量測定等 驗證內(nèi)容：準確度；精密度；專屬性；檢測限/定量限；線性及范圍；耐用性等第27頁/共37頁一、準確度 含量測定方法的準確度 原料藥的含量測定 制劑的含量測定 雜質(zhì)定量測定方法的準確度 使用雜質(zhì)對照品 缺少雜質(zhì)對照品 數(shù)據(jù)要求第28頁/共37頁二、精密度 標準偏差（SD）與相對標準偏差（R

11、SD） 驗證內(nèi)容 重復性 中間精密度 重現(xiàn)性 數(shù)據(jù)要求第29頁/共37頁三、專屬性 鑒別反應 含量測定和雜質(zhì)測定 陰性對照 陽性對照 純度測試第30頁/共37頁四、檢測限/定量限 檢測限常用方法 目視法：非儀器法 信噪比法：色譜法 標準偏差法：光譜法 定量限：信噪比要求不同 數(shù)據(jù)要求第31頁/共37頁五、線性及范圍 線性 回歸方程 相關系數(shù) 范圍 原料藥和制劑含量測定 制劑含量均勻度檢查 溶出度或釋放度中的溶出量測定 特殊元素含量測定 雜質(zhì)測定第32頁/共37頁六、耐用性 耐用性 典型的變動因素 被測溶液 環(huán)境因素 液相色譜法中典型因素 氣相色譜法中典型因素第33頁/共37頁七、驗證內(nèi)容的選擇 非定量分析方法 定量分析方法 微量定量分析方法第34頁/共37頁七、驗證內(nèi)容的選擇項目內(nèi)容項目內(nèi)容鑒別鑒別元素或雜質(zhì)檢查元素或雜質(zhì)檢查含量測定及含量測定及溶出量測定溶出量測定定量定量限度限度準確度準確度精密度精密度 重復性重復性中間精密度中間精密度 專屬性專屬性檢測限檢測限 定量限定量限線性線性范