1、 /7題目：巨噬細胞吞噬作用的觀察一實驗目的通過小鼠腹腔巨噬細胞對異物吞噬作用的觀察，了解巨噬細胞在非特異性免疫中的功能。掌握小鼠等實驗動物腹腔巨噬細胞采集和制片的方法。學習小鼠腹腔注射的操作方法和步驟。二實驗原理向小鼠腹腔內(nèi)注射無菌淀粉肉湯，排異反應使小鼠產(chǎn)生大量巨噬細胞，且巨噬細胞吞噬淀粉肉湯后不會對細胞造成傷害，反而被“喂養(yǎng)”。連續(xù)多天注射使小鼠腹腔內(nèi)聚集大量巨噬細胞。臺盼藍是一種生物染料，專一染色死細胞?；罴毎募毎|(zhì)膜對臺盼藍有不透過性。巨噬細胞吞噬含有臺盼藍的淀粉肉湯后，可以消化其中的淀粉和蛋白質(zhì)，但是不能消化其中的臺盼藍，因此臺盼藍會聚集在溶酶體中。是一種溶酶體染色的方法當向小鼠

2、腹腔中注射雞紅細胞時，雞紅細胞作為外源物質(zhì)，會被小鼠細胞識別并吞噬，在適當?shù)牡臅r機，我們就有可以在顯微鏡下觀察到巨噬細胞吞噬雞紅細胞的過程三實驗材料及設備實驗材料：連續(xù)23天向腹腔中注射含臺盼藍的淀粉肉湯的小鼠一只雞紅細胞懸液生理鹽水實驗設備：普通光學顯微鏡載玻片、蓋玻片若干注射器染色皿若干、吸水紙、滴管、剪刀、白瓷板等四川大學實驗報告生命科學學院專業(yè)生物技術(shù)2016級生技班612組姓名同實驗者2018年3月26日四川大學實驗報告 /7 /7生命科學學院專業(yè)生物技術(shù)2016級生技班612組姓名同實驗者2018年3月26日小鼠處理與巨噬細胞采集連續(xù)2-3天(每天一次)向小鼠腹腔中注射含臺盼藍的淀

3、粉肉湯。選擇已注射淀粉肉湯3小時以上的小鼠一只。一人控制住小鼠，露出腹部，另一人用注射器向小鼠腹腔中注射1ml雞紅細胞懸液。按摩小鼠腹部。20-30分鐘后，再注射1-15ml生理鹽水(0.9%NaCl)按摩小鼠腹部。3分鐘后，引頸法處死小鼠迅速在腹腔剪開一個不大的開口(注意要剪開腹部的肌肉層)，用無針頭的注射器吸取腹腔液。在載玻片上滴2-3滴腹腔液，加上蓋玻片，在顯微鏡下觀察。觀察在不同倍數(shù)下觀察樣本，找到正在消化或者吞噬雞紅細胞的巨噬細胞。注意避免玻片液體干涸。五.實驗結(jié)果圖1小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞血紅細胞裝片（100X物鏡不染色）左上角示未知種類細胞100 x物鏡放大倍數(shù)，光鏡下可見隨機分

4、布的不同種類的細胞。巨噬細胞體積最大，未吞噬雞紅細胞時呈邊緣不規(guī)則的球狀，可見胞質(zhì)中存在不均勻分布內(nèi)含物。部分巨噬細胞中可見一個或多個顏色更深的橄欖形雞紅細胞。小鼠紅細胞呈現(xiàn)兩面凹的圓餅狀，并且存在一種外表呈不規(guī)則突出的細胞，大小和紅細胞相似。巨噬細胞較為固定，可見小鼠紅細胞在生理鹽水中懸浮飄動。長時間錄像觀察可見巨噬細胞伸出偽足緩慢移動。六實驗討論1.實驗結(jié)論：當小鼠腹腔中的巨噬細胞遇到雞紅細胞以后，雞紅細胞屬于外源性抗原。非特異性識別作用使巨噬細胞迅速聚集并開始吞噬雞紅細胞。在顯微鏡光鏡下可見正在或已被巨噬細胞吞噬的雞紅細胞。2.討論一：在光鏡下可觀察到腹腔提取液中存在外表呈不規(guī)則突出的細

5、胞，它是什么細胞，為什么？a)猜想一：該細胞為小鼠血小板圖2紅細胞血小板巨噬細胞電鏡觀察查詢資料可知：血小板是從骨髓成熟的巨核細胞胞漿解脫落下來的小塊胞質(zhì)。所以血小板并沒有細胞結(jié)構(gòu)，且體積遠小于紅細胞。和觀察結(jié)果不符，故不是小鼠血小板。b）猜想二：該細胞為部分失水的小鼠紅細胞光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)這樣一組細胞（圖三）中下是正常的小鼠紅細胞，右上可以看出是略微有些皺縮的小圖4可見扁形形狀的未知細胞鼠紅細胞，而左上為未知細胞?？蓤D3未知細胞萎縮紅細胞正常紅細胞對比見三者體積相似，顏色相似，左上未知細胞的偽足數(shù)量也和右側(cè)失水皺縮紅細胞凸角數(shù)相似。同時由圖四可見該未知細胞有一個面較平整。和小鼠紅細胞扁平形狀相

6、對應。故此可推測出該細胞為部分失水的小鼠紅細胞。產(chǎn)生的原因可能是載玻片上的生理鹽水不斷蒸發(fā)，導致邊3.討論二：在巨噬細胞周圍，有時細胞“吐出”的透明空泡，這是詔it聲am毛緣的鹽濃度升高，造成紅細胞失水。什么原理?巨噬細胞除了非特異性識別外來抗原和衰老死亡體細胞外，還兼有分泌能力。在某些情況下，巨噬細胞四川大學實驗報告 /7生命科學學院專業(yè)生物技術(shù)2016級生技班612組姓名同實驗者2018年3月26日可以通過形成空泡來將水解酶分泌到細胞外，抵抗病原體的侵襲，由于水解酶溶解時無色，故觀察時容易表現(xiàn)為一個透明的空泡。團3更組質(zhì)粒pOiRed-Monunur-ClAarATHP-1細*Z4h后用電鎖觀顯細腿理悲拮果卩皿切玄JI.軸胞頃中充備尢小平一的空泡”型皚糕形秦正肯皿繃胞質(zhì)中北溝丈小不一的空電知腿抉罐曲到一邊；3.地胞核鑽邑質(zhì)雄軸*積舉在鞍周呈早期調(diào)亡熬更14.細胞核彈芭履固嫦、碎裂*呈晚期閒亡改呃.且通過文獻查詢可知，部分巨噬細胞在凋亡期也會產(chǎn)生空泡。七參考文獻李津嬰，許燕群.紅細胞形態(tài)學對溶血性疾病的診斷意義J.診斷學理論與實踐,2010,(3):214-217.翟中和，王喜忠，丁明孝等.細胞生物學M.高等理科教育，2004(1):123