1、關(guān)于艾滋病實驗室檢測技術(shù)及職業(yè)暴露第一張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2我省艾滋病檢測實驗室建設(shè)情況 目前我省艾滋病檢測實驗室已達(dá)630個 1個艾滋病確證中心實驗室（省疾控中心） 6個艾滋病確證實驗室（濟南、青島、淄博、煙臺、臨沂疾控中心、山東出入境檢驗檢疫局國際旅行衛(wèi)生保健中心） 18個艾滋病篩查中心實驗室（含5個艾滋病確證實驗室） 610個艾滋病篩查實驗室。 目前已驗收16個待驗收艾滋病篩查實驗室2個、確證實驗室1個第二張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月3我省艾滋病確證實驗室建設(shè)情況1995年2月6日，山東省衛(wèi)生防疫站艾滋病確證實驗室通過衛(wèi)生部驗收。2005年2月18日，

2、青島市疾控中心艾滋病確證實驗室通過驗收。2009年4月8日濟南、淄博、煙臺市疾控中心艾滋病確證實驗室通過驗收。2013年4月1日臨沂疾控中心艾滋病確證實驗室通過驗收。第三張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月4我省艾滋病檢測實驗室檢測能力省疾控中心：艾滋病抗體的篩查、確證；CD4淋巴細(xì)胞；病毒載量；耐藥；新發(fā)感染；嬰幼兒早期診斷、HBV、HCV、TP?？贵w確證：濟南、青島、淄博、煙臺、臨沂市CDC（待建濰坊市CDC ）。CD4淋巴細(xì)胞：濟南、青島、煙臺、菏澤、泰安、濟寧、臨沂、濰坊市CDC 艾滋病抗體篩查：610個實驗室。第四張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月5省CDC實驗室檢測能

3、力2013年8月23日順利通過資質(zhì)認(rèn)定、食品檢驗機構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定、實驗室認(rèn)可“三合一”現(xiàn)場評審.實驗室認(rèn)可項目： 27類1313項實驗室資質(zhì)認(rèn)定（計量認(rèn)證）項目：22類740項食品檢驗機構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定項目： 5類573項艾防所通過項目：艾滋病抗體篩查、確證 CD4T淋巴細(xì)胞檢測 病毒載量 乙肝、丙肝確證第五張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月6歷年篩查實驗室考核情況第六張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月7目標(biāo)1：確證實驗室目前全部建在疾控系統(tǒng)目標(biāo)：2015年底，17市疾控全部建立，鼓勵醫(yī)療衛(wèi)生系統(tǒng)建立艾滋病確證實驗室。山東省衛(wèi)生廳關(guān)于進(jìn)一步加強全省艾滋病檢測工作的通知 魯衛(wèi)疾控字2013

4、28號（2013年5月9日下發(fā)）第七張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月8目標(biāo)2：艾滋病篩查實驗室目標(biāo)：2013年底，皮膚病性病防治機構(gòu)、婦幼保健機構(gòu)、采供血機構(gòu)（單采漿站）及各類二級以上（含二級）醫(yī)療機構(gòu)要建立艾滋病篩查實驗室。山東省衛(wèi)生廳關(guān)于進(jìn)一步加強全省艾滋病檢測工作的通知 魯衛(wèi)疾控字201328號（2013年5月9日下發(fā)）第八張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月9目標(biāo)3：艾滋病檢測點1、目前全省尚未建立2、目標(biāo)：2015年底，所有的鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院、社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心和一級醫(yī)療機構(gòu)都建立艾滋病檢測點，鼓勵具備條件的鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院、社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心和一級醫(yī)療機構(gòu)建立艾滋病篩查實驗室。山東

5、省衛(wèi)生廳關(guān)于進(jìn)一步加強全省艾滋病檢測工作的通知 魯衛(wèi)疾控字201328號（2013年5月9日下發(fā)）第九張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月10目標(biāo)4：擴大檢測1、腎透析人群2、醫(yī)院侵入性診療人群3、計劃生育門診就診人群4、單位體檢人群5、無償獻(xiàn)血人群 五類人群全部進(jìn)行丙肝檢測山東省衛(wèi)生廳關(guān)于印發(fā)山東省艾滋病擴大檢測工作活動方案的通知 魯衛(wèi)疾控字201329號（2013年5月9日下發(fā)）第十張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月11二、艾滋病實驗室檢測技術(shù)（一）HIV (ELISA、金標(biāo)、PA、化學(xué)發(fā)光、WB)（二）TP (ELISA、 TPPA 、 TRUST)（三）HCV (ELIS

6、A、RIBA)（四）BED （ELISA、親和力)第十一張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月12 2009 2006艾滋病檢測工作有關(guān)的技術(shù)規(guī)范和指南2006200820112011 2008 2004第十二張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月13ELISA 第十三張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月14OD值S/CO值 雙波長的優(yōu)點CUTOFF值OD是optical density（光密度）的縮寫，表示被檢測物吸收掉的光密度 。S/CO=OD/CUTOFF使用雙波長的優(yōu)點可以消除 反應(yīng)板條上的劃痕手印的干擾。仔細(xì)閱讀和理解說明書,嚴(yán)格按照說明書要求操作第十四張，PPT共八十

7、七頁，創(chuàng)作于2022年6月15常見問題原因分析及解決辦法(1)試劑1.觀察外包裝，內(nèi)主份有無漏液，注意效期等。2.仔細(xì)閱讀說明書，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作。3.操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘，保證酶等液體的初始反應(yīng)溫度及活性劑的溶解。 第十五張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月16(2)加樣過程應(yīng)注意的問題 1.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣。 2. 漏加樣品或加樣量不足的 3.加液器的校正 4.加樣時間過長 5.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長 6.洗板機不足，不能及時洗板 第十六張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月17(3)孵育過程中出現(xiàn)的問題

8、1.溫箱孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底； 2.孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合，難以清洗徹底。3.孵育時溫度不符合說明書的規(guī)定范圍。1.按規(guī)定加蓋封板膜。 2.按說明步驟嚴(yán)格控制孵育時間。3. 嚴(yán)格控制溫育儀器（水箱、溫箱、全自動酶免）的溫度，建議在儀器內(nèi)放置測量工具（全自動酶免除外）。（解決辦法）第十七張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月18(4)洗板過程中易出現(xiàn)的問題1.采用手工洗板,孔與孔之間液體容易交叉，切不可隨意洗板。2.采用洗板機洗板時，洗液注入孔中量不足，導(dǎo)致洗板不徹底，造成本底高。3.由于血液中纖維原蛋白，造成洗板針堵塞，抽吸不完全，

9、造成洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差，直接影響本底。 4.反應(yīng)板過多，不能保證及時洗板，造成洗板等待時間過長，影響結(jié)果。 5.洗板前先將孔內(nèi)液體甩出包被板。解決辦法1.禁止手工洗板。 2.保證洗液注滿各孔。3.洗板時注意觀察是否有堵孔現(xiàn)象，保持洗板針暢通。4.合理安排操作（洗板）時間。5.洗板前不要先將孔內(nèi)液體甩出包被板，以免酶液沾于孔邊緣。第十八張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月19(5)顯色過程中易出現(xiàn)的問題1.顯色劑配制后放置時間過長或使用已經(jīng)變色失效的顯色劑 2. 用排槍加A、B混合液時，加樣槽不夠干凈，造成花板3.不同廠家試劑的顯色液混用第十九張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6

10、月20(6)終止和讀數(shù)時的注意事項1加完終止后30分鐘內(nèi)讀取數(shù)據(jù)。2讀板時板底如果不清潔，就會導(dǎo)致所讀的數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確，所以在讀數(shù)前盡量保證酶標(biāo)板的底部是清潔的。 第二十張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月21酶聯(lián)免疫吸附試驗優(yōu)缺點優(yōu)點1、價格低2、一般實驗室均可操作3、不需特殊儀器設(shè)備4、適用于大面積查體缺點1、易出假陽性2、不適用于單個樣本測定第二十一張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月22快速檢測法優(yōu)先使用項目包括: VCT、母嬰傳播、臨床評估、農(nóng)村血檢、術(shù)前檢測、緊急事件等。技術(shù)角度的考慮包括:需要快速得到結(jié)果、免去試劑和樣本的冷鏈運輸環(huán)節(jié)、小空間實驗室的成本效益、 檢測的簡單

11、性等。第二十二張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月23快速檢測反應(yīng)模式免疫層析實驗滲濾實驗（間接法/雙抗原夾心法）第二十三張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月24免疫層析實驗樣本：血漿/血清/全血（唾液）不同部位固定不同抗原可區(qū)分HIV-1/HIV-2,質(zhì)控線：抗人IgG一般需時15-30min弱陽性結(jié)果較難判斷+Y+YHIV抗原HIV特異性抗體 金標(biāo)HIV抗原顯色第二十四張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月25 HIV 使用試驗步驟將檢測條的外包裝撕去 血清和EDTA抗凝血漿 EDTA抗凝全血加入50 uL樣品 加入 50 uL樣品 過15分鐘讀結(jié)果 加1滴示蹤緩沖液 最多

12、60 分鐘(HIV) 過15分鐘讀結(jié)果 最多60 分鐘(HIV)第二十五張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月26結(jié)果解釋 陽性 陰性 無效 無效15分鐘后讀結(jié)果，對結(jié)果的解釋不要超過1小時。第二十六張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月27檢測要注意問題Determine HIV-1/2 試驗只能使用人類血清、血漿和全血，對其他標(biāo)本結(jié)果可能不準(zhǔn)確。反應(yīng)線的強度不一定與標(biāo)本中的抗體滴度相關(guān)。含EDTA以外抗凝劑的全血或血漿標(biāo)本給出的結(jié)果可能不正確。陰性結(jié)果應(yīng)當(dāng)與臨床癥狀和風(fēng)險因子一起考慮。陽性結(jié)果應(yīng)當(dāng)用第二種方法證實。結(jié)合臨床證據(jù)對結(jié)果做過評價后才能作出診斷。第二十七張，PPT共八十七

13、頁，創(chuàng)作于2022年6月28第二十八張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月29滲濾實驗原理：雙抗原夾心法樣本:血漿/血清（若有過濾裝置，則可測全血）可將抗原固定于不同位置，區(qū)分HIV-1和HIV-2實驗需幾步：加樣本，加洗液，加信號試劑。一般在5-15min完成弱陽性結(jié)果較難判斷+Y+YHIV抗原HIV特異性抗體 金標(biāo)HIV抗原顯色第二十九張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月30免疫滲濾原理的產(chǎn)品構(gòu)造示意圖第三十張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月31結(jié)果第三十一張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月32優(yōu)點：快速、簡便、易操作可檢測100份以內(nèi)小批量樣品需要很少的設(shè)備和試

14、劑檢測地點可擴展到實驗室以外只需對技術(shù)人員做適當(dāng)培訓(xùn)大部分為一步法在短時間(30分鐘)內(nèi)出結(jié)果結(jié)果易目測判讀可在室溫下保存第三十二張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月33缺點 不宜一次檢測100份以上的大批量樣品比ELISA法價格略高。結(jié)果判讀不客觀，易受主觀因素影響第三十三張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月34快速檢測試劑選擇 1.必須使用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)的快速試劑； 2.試劑必須在有效期內(nèi)使用； 3.根據(jù)檢測目的，選擇試劑初篩選擇敏感性高的試劑，復(fù)檢選擇特異性高的試劑；4.推薦使用臨床評估質(zhì)量好并且近幾年連續(xù)考評結(jié)果穩(wěn)定的試劑。 第三十四張，PPT共八十七頁，

15、創(chuàng)作于2022年6月35第三十五張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月36三代與四代比較（快速試劑）四代試劑不僅可以檢測出血清/血漿/全血樣本中的HIV-1和HIV-2抗體，還可以檢測出p24抗原。p24抗原是感染HIV病毒后產(chǎn)生的一種蛋白質(zhì)，比HIV抗體出現(xiàn)的要早，在艾滋病感染初期、窗口期內(nèi)可以通過檢測p24抗原來判斷是否感染HIV。四代試劑比三代試劑平均提前5天可以檢測出HIV感染者。靈敏度為92.31%，特異性為99.66%。目前國內(nèi)尚未上市第三十六張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月37復(fù)核試驗方法選擇替代組合WB檢測結(jié)果陽性一致率（%）EIA1 +RT135100100EI

16、A1 +RT234900100RT1+EIA135100100RT1+EIA233800100RT1+RT23575098.5EIA1+EIA23341099.7第三十七張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月38免疫層析結(jié)果判讀記錄儀第三十八張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月39第三十九張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月40自動生成報告第四十張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月41結(jié)果導(dǎo)出Excel第四十一張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月42第四十二張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月43免疫層析結(jié)果判讀記錄儀優(yōu)點： 1.檢測結(jié)果的保存 2.自動生成報

17、告 3.結(jié)果可導(dǎo)出缺點： 1.不適合批量操作第四十三張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月44快速檢測，是艾滋病實驗室多了一種檢測方法。快速檢測，是為了更多、更快的的發(fā)現(xiàn)感染者。快速檢測，不是為了取代實驗室，但不能因為有了實驗室而放棄使用快速檢測。第四十四張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月45明膠顆粒凝集試驗（PA）將提純后的HIV抗原連接到有色明膠顆粒上，制成致敏顆粒。當(dāng)加入的檢測標(biāo)本中有HIV抗體存在時，即可使致敏顆粒凝集，出現(xiàn)肉眼可見的淺色凝集環(huán)（斑）；而若標(biāo)本中無HIV抗體，致敏顆粒即在重力作用下沉人U型板底，形成一個深色紅點。第四十五張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年

18、6月461、加入樣品稀釋液孔號75l25l25l13212、加入測試樣品25l孔號1321棄去3、樣品倍比稀釋孔號1321最終稀釋倍數(shù)1：1625l25l25l1：8第四十六張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月475、混勻，加蓋，室溫2個小時6、結(jié)果判讀致敏顆粒4、加入明膠顆粒最終稀釋倍數(shù)孔號13211：32未致敏顆粒25l25l1：16第四十七張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月48第四十八張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月49優(yōu)點：凝集試驗具有操作簡便，經(jīng)一步即可迅速得出結(jié)果，不需任何儀器等優(yōu)點該方法的敏感性及特異性與EL1SA方法相近不需特殊儀器該方法的敏感性及特異性

19、與EL1SA方法相近溶血標(biāo)本不影響結(jié)果缺點與不足：判定結(jié)果用肉眼觀察，無法保存。 為了保存試驗結(jié)果，需配備數(shù)碼相機。應(yīng)選用高質(zhì)量的U型板第四十九張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月50唾液檢測試劑Oralquick第五十張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月51用一次性采樣環(huán)收集約 5 l 血樣用采樣盤沿上/下牙床外表面采樣一周 將樣本轉(zhuǎn)入小瓶 中攪動唾液檢測試劑Oralquick第五十一張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月52插入檢測設(shè)備 20分鐘后讀取結(jié)果 無效陰性陽性第五十二張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月53優(yōu)點:簡單、易操作、反應(yīng)時間短適用于吸毒人群缺點：價

20、格高影響因素多（口腔雜質(zhì)、反應(yīng)溫度等）第五十三張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月544.化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)（Chemiluminescence immunoassay）化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)是將化學(xué)發(fā)光體系與免疫反應(yīng)相結(jié)合，用于檢測微量抗原或抗體的一種新型標(biāo)記免疫測定技術(shù)。其特點在于靈敏度高、測定范圍寬、使用范圍廣 ，快速、簡便，并在測試中不使用有害試劑，無放射污染等。第五十四張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月55化學(xué)發(fā)光檢測使窗口期由43.6天縮短為38.3天，雖然只縮短了12.2%，但卻將殘余風(fēng)險降低了46.4%。數(shù)據(jù)來源: Residual risk of transfu

21、sion-transmitted viral infections in Shenzhen, China, 2001 through 2004方法學(xué)窗口期（天）殘余風(fēng)險ELISA43.61/17501CLIA38.31/32637可以降低殘余風(fēng)險第五十五張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月56評估本次評估使用隨機抽樣方式抽取已知血清標(biāo)本 1556份，其中陽性標(biāo)本 501份，陰性標(biāo)本為 1055 份?？泼罇|雅：靈敏度100%；特異度99.43%；準(zhǔn)確度99.61%。阿克蘇： 靈敏度100%；特異度99.15%；準(zhǔn)確度99.42%結(jié)論：科美東雅CLIA試劑HIV抗體初篩結(jié)果與生物梅里埃（Ag

22、+Ab）ELISA試劑比較有較高的靈敏度、特異性。統(tǒng)計分析表明：二者準(zhǔn)確度顯著性檢驗無差異(u=0.7765，u1.96， P0.05)。將第一次兩種試劑檢出的15份假陽性標(biāo)本（科美東雅6份，生物梅里埃9份），分別進(jìn)行重復(fù)檢測，結(jié)果均陰性。二次結(jié)果匯總統(tǒng)計：兩種試劑檢測結(jié)果一致，符合率為100%。第五十六張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月57HIV-1新發(fā)感染血清學(xué)方法檢測美國已將用BED方法監(jiān)測新發(fā)感染率納入了國家艾滋病常規(guī)監(jiān)測體系，全美所有需要進(jìn)行新發(fā)感染檢測的樣品均寄至紐約州公共衛(wèi)生實驗室，統(tǒng)一檢測，統(tǒng)一質(zhì)控，統(tǒng)一數(shù)據(jù)處理。2006年6月美國CDC發(fā)布了“資源有限國家BED檢測/

23、監(jiān)測HIV-1新發(fā)感染指南” 性病艾滋病預(yù)防控制中心于2004年將該方法引進(jìn)國內(nèi)。建立了適合于我國的BED方法的窗口期（168天）和4個關(guān)鍵校正系數(shù)（=0.8098，=0.7571，=0.9315，=0.0685） 第五十七張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月58原理其原理是根據(jù)HIV特異性IgG占總IgG抗體的比例隨著感染時間的延長而逐漸增高。應(yīng)用BED-CEIA進(jìn)行新近感染檢測只適用于HIV陽性樣品。由于個體間抗體生成的變異性，對個體而言，BED結(jié)果的預(yù)測值偏低，而且在個體水平上，BED檢測可能產(chǎn)生一定的假陽性和假陰性，但在人群水平上，假陽性的數(shù)目與假陰性的數(shù)目相近，因此可以相互抵消

24、彼此的作用。美國FDA將BED-CEIA歸為“只應(yīng)用于監(jiān)測目的，不能用于個體診斷和臨床”的實驗方法。第五十八張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月59第五十九張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月60建議：各實驗室盡量多參加實驗室能力驗證（PT）工作！國家級PT艾滋病抗體篩查和確證 3次/年梅毒抗體 3次/年乙肝表面抗原 3次/年HCV抗體檢測 3次/年WB條帶判讀 3次/年BED 2次/年CD4檢測 2次/年耐藥檢測 2次/年基因序列判讀 1次/年濾紙片干血斑HIV-DNA 1次/年省級PT篩查實驗室 1次/年篩查中心實驗室 2次/年第六十張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月6

25、1三、職業(yè)暴露第六十一張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月62第六十二張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月63第六十三張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月64第六十四張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月65第六十五張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月66第六十六張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月67第六十七張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月68第六十八張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月69第六十九張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月70第七十張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月71第七十一張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月72第七十二張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月73第七十三張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月74第七十四張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月75機構(gòu)分布2011年，26個省份（系統(tǒng)）報告有艾滋病防治工作人員發(fā)生職業(yè)暴露，總例數(shù)為1043（比2010年增加15.4% ）765例暴露者及時服用了抗病毒藥物，并接受了咨詢與隨訪檢測，到目前為止未發(fā)現(xiàn)職業(yè)暴露后感染HIV的案例。第七十五張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月76第七十六張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月77第七十七張，PPT共八十七頁，創(chuàng)作于2022年6月78