1、膿毒癥患者IL-10等細(xì)胞因子和CECs水平變化以及與預(yù)后關(guān)系周凱1 胡迎春2 (瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院急診科 四川省瀘州市 646000 )四川省衛(wèi)生廳科研課題(編號:100141) 周凱，四川自貢，男，1979年04月23日，本科，瀘州醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 急診科 主治醫(yī)師 重癥醫(yī)學(xué)，646000，瀘州市太平街25號瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院急診要 目的 研究多種細(xì)胞因子及循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞（CECs）在膿毒癥中的變化規(guī)律，分析其與膿毒癥患者預(yù)后關(guān)系。 方法 應(yīng)用 ELISA 方法檢測 32例膿毒癥患者和32例正常健康成人體檢者第 1d、第 3d 和第 5d的周圍血液標(biāo)本中TN

2、F-、IL-6、IL-10、CRP和CECs水平，比較兩組標(biāo)本細(xì)胞因子水平的差異，并比較膿毒癥組死亡患者和治愈患者第1d的血清細(xì)胞因子和CECs水平差異。結(jié)果 膿毒癥患者第1d、第3d和第5d血清TNF-、IL-6、CRP和CECs均明顯高于正常對照組（P0.05），且隨病情的發(fā)展差異逐漸增大。而IL-10的水平在第3d開始升高。死亡組第1d的IL-6和CECs水平高于治愈組，IL-10低于治愈組。結(jié)論 CECs、TNF-、IL-6、IL-10和CRP的檢測對膿毒癥患者預(yù)后判斷有指導(dǎo)意義。在膿毒癥早期，IL-10水平降低，IL-6和CECs的水平升高可判斷膿毒癥患者預(yù)后不佳。【關(guān)鍵詞】：膿毒癥

3、；細(xì)胞因子；C反應(yīng)蛋白；循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞；IL-10 and Other Cytokines and CECs Levels and Relationship with Prognosis in patients with SepsisZhou Kai 1 HuYingChun 2a physician of Luzhou Medical College Hospital Emergency Department 646,000 China;Abstract Objective To study a variety of cytokines and circulating endothelial

4、cells (CECs) in sepsis changes and to discover its impact on disease outcome . Methods 32 cases were detected by ELISA in patients with sepsis and 32 cases of normal healthy adult volunteers Section 1d, 3d and 5d of the peripheral blood samples, TNF-, IL-6, IL-10, CRP and CECs level, compared two sp

5、ecimens of different cytokine levels and mortality in patients with sepsis compared and cure patients of 1d serum levels of cytokines and CECs difference . Results in patients with sepsis first 1d, 3d and 5d of serum TNF-, IL-6, CRP and CECs were significantly higher than the control group (P 0.05),

6、 and with differences in the disease progresses gradually increasing . The levels of IL-10 in the first 3d started to rise. Article 1d of the death group was higher than cure groups to IL-6 and CECs more apparent. Conclusion CECs, TNF-, IL-6, IL-10 and CRP testing in patients with sepsis diagnosis a

7、nd prognosis of guiding significance in the early stage of sepsis , IL-10 levels decreased , IL-6 and CECs in levels were significantly elevated in patients with sepsis may determine the prognosis is poor.Keywords sepsis ; Cytokine ; C -reactive protein ; circulating endothelial cells ;膿毒癥是病原微生物侵襲人體

8、引起的，機(jī)體感染后引起全身性的炎癥反應(yīng)，其嚴(yán)重性體現(xiàn)在其進(jìn)一步發(fā)展導(dǎo)致膿毒性休克以及多臟器功能失常，最終導(dǎo)致死亡。為了更好的防治膿毒癥，需要找到一種靈敏、準(zhǔn)確度高，又可了解病情的嚴(yán)重程度及判斷預(yù)后的檢測方法幫我們更好的指導(dǎo)應(yīng)用于臨床。既往已有研究指出在膿毒癥的發(fā)生和發(fā)展過程中有多種炎癥細(xì)胞因子起著重要的作用，同時過度炎癥反應(yīng)可導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能失調(diào)。循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞（CECs）是為血管內(nèi)皮損傷性疾病的標(biāo)志物。我們檢測我院收治的膿毒癥患者周圍血中循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞(CECs)、腫瘤壞死因子-（TNF-）、白介素10（IL-10）、白介素6（IL-6）和C反應(yīng)蛋白（CRP）等指標(biāo)的變化，并研究其對疾

9、病轉(zhuǎn)歸的影響。1 資料與方法1.1 臨床資料觀察組為我院2011年6月2012年12月收治的膿毒癥患者共32例。膿毒癥診斷及評判標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)根據(jù)國際膿毒癥會議制定的標(biāo)準(zhǔn)1。統(tǒng)計30d內(nèi)患者病死率。排除嚴(yán)重慢性器質(zhì)性病變患者者、免疫缺陷病凝血功能障礙及嚴(yán)重血液疾病患者。男20例，女12例，平均年齡63.5歲（39歲76歲）。該組患者的原發(fā)病為2例心臟手術(shù)后，全身多處傷3例，顱腦外傷4例。中重度燒傷患者5例，胃、腸穿孔術(shù)后5例，重度擠壓綜合征患者6例，重癥急性胰腺炎7例。1.2 標(biāo)本收集所有膿毒癥患者一經(jīng)確診，即分別于第1、3d和5d收集其周圍靜脈血20ml，注入含2%EDTA-Na2的試管中，采用密

10、度梯度離心法分離單個核細(xì)胞,同時分離血清保存于-20冰箱保存待測。對照組為本院保健科體檢的32名健康成人，男19例，女13例，平均年齡57.7歲（3671歲），取血制備標(biāo)本方法同上。1.3 血清多種細(xì)胞因子、CRP及周圍血循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞水平的的檢測 血清細(xì)胞因子及循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞的檢測采用酶標(biāo)免疫法測定（ELISA法）。設(shè)空白及陰性對照孔，嚴(yán)格按試劑盒說明書操作。終止反應(yīng)后即用自動酶標(biāo)儀測定吸光度（A）值。以標(biāo)準(zhǔn)品稀釋濃度的對數(shù)值為X軸，吸光度值為Y軸，繪制X-Y關(guān)系圖，根據(jù)標(biāo)本的吸光度值查出相應(yīng)的細(xì)胞因子及循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞的含量。采用免疫濁度分析法檢測CRP。1.4 統(tǒng)計分析 本文數(shù)據(jù)采用軟件SPSS

11、17.0進(jìn)行統(tǒng)計分析,計量資料以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差（s）表示，采用t檢驗，當(dāng)P0.05時，認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2 結(jié)果2.1 血清TNF、IL-6、IL-10、CECs的水平 膿毒癥組患者發(fā)病過程中TNF-、IL-6、CECs的水平均明顯高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01），而且3者水平在病程的發(fā)展中呈逐漸上升趨勢，發(fā)病第5d的TNF、IL-6和CECs水平明顯高于第1d（P0.05）。而第1d的IL-10水平與對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但第5d的IL-10水平高于對照組組（P0.05），見表1。膿毒癥患者第1d的CRP水平較正常成人組顯著增高（P0.05），并且第3和第5d的CRP水平呈上

12、升趨勢，3天的CRP水平比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01），見表1。表1膿毒癥患者TNF-、IL-6、IL-10、CRP和CECs的水平變化項目膿毒癥組（n=32）對照組（n=32）1d3d5dTNF0.900.37*#1.140.44*1.360.34*0.310.07IL-61.150.40*#1.530.38*1.920.31*0.360.13IL-100.810.48#1.120.33*1.220.32*0.760.36CRP65.2023.33*#79.7628.62*87.2430.52*7.343.37CECs3.541.13*4.561.56*5.242.00*#1.300.54注

13、：膿毒癥組與對照組比較，*P0.05，*P0.01；膿毒癥組第1d與第5d比較，#P0.05。2.2 早期IL-10、TNF-、IL-6、CRP和CECs的水平與疾病轉(zhuǎn)歸的關(guān)系32例膿毒癥組患者中治愈24例（75%），死亡8例（25%）。死亡組（n=8）和治愈組（n=24）在發(fā)病第1d的血清IL-10、TNF-、IL-6、CRP和CECs的水平，結(jié)果見表2，死亡組8例患者在早期IL-6、CRP和CECs水平和治愈組相比增高明顯，其中死亡組的IL-10、IL-6和CECs水平與治愈組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01）。表2死亡組和治愈組的IL-10等細(xì)胞因子和CECs水平比較nIL-10IL-

14、6TNFCRPCECs治愈組240.830.320.900.370.880.1957.1329.8278.4727.72死亡組80.380.291.420.311.100.273.161.365.602.31t4.775.231.9131.9238.54P0.0410.0370.240.000.003 討論膿毒癥是導(dǎo)致住院患者死亡的重要原因之一。文獻(xiàn)稱膿毒癥是不是一兩種內(nèi)源性因子引起。它是全身過度炎癥反應(yīng)，絕大多數(shù)是由多種內(nèi)源性細(xì)胞因子共同作用引發(fā)的。但是，當(dāng)免疫反應(yīng)過強(qiáng)或過弱，TNF-、IL-1、IL-6和IL-8等細(xì)胞因子共同作用引發(fā)的全身炎癥反應(yīng)可能導(dǎo)致膿毒血癥。早期起關(guān)鍵作用的是細(xì)胞因

15、子，在內(nèi)毒素的作用下，單核細(xì)胞產(chǎn)生炎癥因子如腫瘤壞死因子-（TNF-）和白細(xì)胞介素-1（IL-1），這些炎癥因子能促進(jìn)中性粒細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞粘附，激活凝血系統(tǒng)，釋放大量炎性介質(zhì)，包括其他細(xì)胞因子、白三烯及蛋白酶等，同時也產(chǎn)生抗炎性介質(zhì)如IL-10等2。內(nèi)皮細(xì)胞襯覆于血管內(nèi)壁，是維持血流動力學(xué)的穩(wěn)定和血管組織平衡的重要因子，在體內(nèi)和體外各種因素的刺激下，其通過釋放活性物質(zhì)作用于血管平滑肌細(xì)胞而引起血管的收縮或舒張。研究表明，內(nèi)皮細(xì)胞能通過表達(dá)多種炎癥介質(zhì)促進(jìn)全身的炎癥反應(yīng)和，這些炎癥介質(zhì)和凝血調(diào)節(jié)因子會激活凝血系統(tǒng)3。正常生理狀況下每天有極少量的內(nèi)皮細(xì)胞因衰老、脫落而進(jìn)入全身的循環(huán)系統(tǒng)，形成循環(huán)內(nèi)

16、皮細(xì)胞(CECs)。在病理狀態(tài)下，因血管損傷，周圍血中的循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)量明顯增多。循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞的檢測是目前人體內(nèi)可敏感而特異反映血管內(nèi)皮損傷的重要指標(biāo)4。我們的結(jié)果顯示，膿毒癥組患者的循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞水平和健康對照者相比，前者明顯高于后者，提示膿毒癥患者血管內(nèi)皮損傷較正常人明顯。人類已知促進(jìn)全身炎癥反應(yīng)的細(xì)胞因子主要有TNF-、IL-1、IL-6和IL-8等，此外還有負(fù)性調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的抗炎癥細(xì)胞因子如IL-10，其可抑制TNF的產(chǎn)生，增強(qiáng)急性時相反應(yīng)物質(zhì)和免疫球蛋白的作用。這些細(xì)胞因子不僅決定全身炎癥也可能導(dǎo)致器官組織的功能衰竭或受損。促炎和抗炎兩類細(xì)胞因子的協(xié)調(diào)平衡對維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定至關(guān)重要

17、，監(jiān)測兩類細(xì)胞因子的血濃度可指導(dǎo)判斷膿毒癥的發(fā)展轉(zhuǎn)歸。TNF-通過激活細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)參與早期臟器損害過程及失血、凝血、免疫防御和炎癥等過程，導(dǎo)致全身代謝亢進(jìn)、微循環(huán)損傷和膿毒癥，誘發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合征。對膿毒癥的動物模型研究表明，抑制TNF可以改善器官功能并提高存活率。研究表明全身性感染患者血清IL-10水平和疾病嚴(yán)重程度成負(fù)相關(guān)，IL-10可作為其監(jiān)測指標(biāo)評價全身炎癥反應(yīng)和膿毒癥的程度5。兩組標(biāo)本結(jié)果顯示，膿毒癥組的IL-10水平明顯低于正常，TNF-和IL-6水平明顯高于正常，表明膿毒癥組患者機(jī)體存在過度的炎癥反應(yīng)，在疾病發(fā)展的過程中過多地釋放細(xì)胞因子，IL-10是主要的抗炎癥細(xì)胞因子。

18、IL-10的抗炎作用主要通過單核-巨噬細(xì)胞抗原提呈作用而發(fā)揮免疫抑制的作用，另外IL-10可以抑制細(xì)胞內(nèi)氧自由基的產(chǎn)生。我們的結(jié)果顯示，膿毒癥組患者第1d的IL-10水平與正常組無統(tǒng)計學(xué)差異，隨病情發(fā)展逐漸升高，第3d、第5d均較前升高，提示膿毒癥患者抗炎癥細(xì)胞因子IL-10釋放的峰值時相和促炎性因子TNF-和IL-6不同步，因此在膿毒癥患者促炎機(jī)制和抗炎反應(yīng)的不協(xié)調(diào)平衡，是導(dǎo)致膿毒癥的重要原因。CRP是是評價創(chuàng)傷和炎癥反應(yīng)程度的一個敏感指標(biāo)，是疾病早期人體抵抗各種外界損傷時參與急性期反應(yīng)時限的一種糖蛋白，對機(jī)體有利，但長時間持續(xù)存在會引起過度的炎癥反應(yīng)，加重病情并最終導(dǎo)致膿毒癥的發(fā)生。膿毒癥

19、組血清CRP水平較正常組明顯升高可證明以上觀點6。綜上所述，我們還可得出，在膿毒癥早期，IL-10水平降低，IL-6和CECs的水平較正常明顯升高，可根據(jù)血清IL-10水平降低，IL-6和CECs水平同時明顯升高可判斷膿毒癥患者預(yù)后不佳。參考文獻(xiàn)1 Baker CC, Chaudry IH, Gaines HO, et al. Evaluation of factors affecting mortality rate after sepsis in murine cecal ligation and puncture modelJ. Surgery,1983,94:3312 Baker CC, Chaudry IH, Gaines HO, et al. Evaluation offactors affecting mortality rate after sepsis in murine cecal ligation and puncture modelJ. Su