1、乳與乳制品病原微生物檢驗(yàn)方法溶血性鏈球菌的檢驗(yàn) YLNB4.51儀器及器材1.1 恒溫培養(yǎng)箱：361。1.2 恒溫水浴鍋：361。1.3 顯微鏡。1.4 離心機(jī)：4000 r/min1.5 均質(zhì)器或滅菌乳缽。1.6 滅菌平皿：直徑90mm。1.7 滅菌試管：10mm100mm 、16mm160mm1.8 滅菌吸管：1mL、5mL 、10mL。1.9 冰箱：041.10 滅菌錐形瓶：100mL。1.11 架盤藥物天平：0g500g,精確至0.5g。1.12 滅菌棉簽、鑷子等。2. 培養(yǎng)基和試劑2.1 葡萄糖肉浸液肉湯：按GB 4789.28中4.1規(guī)定，在肉浸液肉湯內(nèi)加入1%葡萄糖。 2.2 肉

2、浸液肉湯：按GB 4789.28中4.1規(guī)定。2.3 匹克氏肉湯：按GB 4789.28中4.62規(guī)定。2.4 血瓊脂平板：按GB 4789.28中4.6規(guī)定。2.5 人血漿。2.6 0.25%氯化鈣。2.7 滅菌生理鹽水。2.8 桿菌肽藥敏紙片(含0.04單位)。3. 檢驗(yàn)程序檢 樣25g(ml)+225ml滅菌生理鹽水361血 平 板葡萄糖肉浸液肉湯或匹克氏肉湯24h361 24h血平板（分純培養(yǎng)）361 24h觀 察 溶 血桿菌肽敏感試驗(yàn)革蘭氏染色鏈激酶試驗(yàn)報(bào) 告4. 方法4.1 樣品處理按無(wú)菌操作稱取食品檢樣25g （mL），加入225mL滅菌生理鹽水，研成勻漿制成混懸液。4.2 培養(yǎng)

3、將上述混懸液吸取5mL，接種于50mL葡萄糖肉浸液肉湯；或直接劃線接種于血平板，如檢樣污染嚴(yán)重，可同時(shí)按上述量接種匹克氏肉湯，經(jīng)361培養(yǎng)24h，接種血平板，置361培養(yǎng)24h，挑起乙型溶血圓形突起的細(xì)小菌落，在血平板上分純，然后觀察溶血情況及革蘭氏染色，并進(jìn)行鏈激酶試驗(yàn)及桿菌肽敏感試驗(yàn)。4.3 形態(tài)與染色本菌呈球形或卵圓形，直徑0.51m，鏈狀排列，鏈長(zhǎng)短不一，短者48個(gè)細(xì)胞組成，長(zhǎng)者2030個(gè)，鏈的長(zhǎng)短常與細(xì)菌的種類及生長(zhǎng)環(huán)境有關(guān)；液體培養(yǎng)中易呈長(zhǎng)鏈；在固體培養(yǎng)基中常呈短鏈，不形成芽孢，無(wú)鞭毛，不能運(yùn)動(dòng)。4.4 培養(yǎng)特性該菌營(yíng)養(yǎng)要求較高，在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)不良，在加有血液、血清培養(yǎng)基中生長(zhǎng)

4、較好。溶血性鏈球菌在血清肉湯中生長(zhǎng)時(shí)管底呈絮狀或顆粒狀沉淀。血平板上菌落為灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直徑約0.50.75mm，為圓形突起的細(xì)小菌落，乙型溶血鏈球菌周圍有24mm界限分明、無(wú)色透明的溶血圈。4.5 鏈激酶試驗(yàn)致病性乙型溶血性鏈球菌能產(chǎn)生鏈激酶(即溶纖維蛋白酶)，此酶能激活正常人體血液中的血漿蛋白酶原，使成血漿蛋白酶，而后溶解纖維蛋白。吸取草酸鉀血漿0.2mL，加0.8mL滅菌生理鹽水，混勻，再加入1824h361培養(yǎng)的鏈球菌培養(yǎng)物0.5mL及0.25%氯化鈣0.25mL(如氯化鈣已潮解，可適當(dāng)加大至0.3%0.35%)，振蕩搖勻，置于361水浴中10min，血漿混合物自行凝固(凝固程度至試管倒置，內(nèi)容物不流動(dòng))。然后觀察凝塊重新完全溶解的時(shí)間，完全溶解為陽(yáng)性，如24h后不溶解即為陰性。草酸鉀人血漿配制：草酸鉀0.01g放入滅菌小試管中，再加入5mL人血，混勻，經(jīng)離心沉淀，吸取上清液即為草酸鉀人血漿。4.6 桿菌膚敏感試驗(yàn)挑取乙型溶血性鏈球菌液，涂布于血平板上