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1、成分使用濃度1L體系添加量Tris-HCl(pH100mM12.114g8.0)NaCl1M58.44gEDTA10 mM3.7224gTPS法 抽DNA (96孔板大量提?。┤?cm長的水稻葉片放在96孔取樣板,加入兩顆5mm鋼珠,加 400ulTPS,用力將皮蓋蓋緊(否則會交叉污染),組織破碎儀(70HZ , 60s150s【根據(jù)葉片老嫩程度調(diào)節(jié)】),短暫離心后放65C烘箱 20min40min,期間震蕩混勻三次。配平后,4000rpm,30min;準(zhǔn)備96孔淺孔板,并標(biāo)號,加入200ul異丙醇.將離心后的上清取 200ul轉(zhuǎn)移到板中;-20C沉淀 3min(或 4C沉淀 15min),
2、4000rpm,30min (注意配平);倒掉異丙醇,加 400ul(或者 500ul)75%乙醇,4000rpm,15min;倒掉70%乙醇,倒扣離心,最好不要超過500rpm。通風(fēng)櫥晾干2小時,加100-300ul水溶解。PCR反應(yīng)時取24ul做模板即可;成分使用濃度4L體系添加量CTAB2%80gTris-HCl(pH 8.0)100mM48.456gNaCl1M233.76gEDTA二鈉鹽20 mM29.7792gCTAB法 抽DNA (單管少量提?。┤?cm長的水稻葉片放在2ml的tube中,放入液氮中用筷子搗碎后 (或者放入1顆6mm鋼珠,用組織破碎儀打碎),加750U1CTAB放
3、65C 烘箱30min1h,期間震蕩混勻三次。用連續(xù)加樣器加500ul氯仿,震蕩混勻后,12,000rpm,10min準(zhǔn)備新的2ml的Tube,加入500ul異丙醇,并編號,將離心后的上 清吸取500ul轉(zhuǎn)移到新的EP管中,檢查蓋子是否蓋嚴(yán),上下顛倒混勻;-20C沉淀 3min(或 4C沉淀 15min), 12,000rpm,10min;倒掉異丙醇,加 750ul(或者1ml)75%乙醇,上下顛倒混勻, 12,000rpm,5min;倒掉70%乙醇,通風(fēng)櫥晾干2小時,加200-500ul水溶解。PCR反 應(yīng)時取13ul做模板即可;CTAB法 抽DNA (單管大量提取)取5cm長的水稻葉片放在2ml的tube中,放入液氮中用筷子搗碎后(或者放入1顆6mm鋼珠,用組織破碎儀打碎),加750ulCTAB, 放65C烘箱30min1h,期間震蕩混勻三次。用連續(xù)加樣器加500ul氯仿,震蕩混勻后,12,000rpm,10min準(zhǔn)備96孔深孔板,并標(biāo)號,加入500ul異丙醇.將離心后的上清取500ul轉(zhuǎn)移到板中;-20C沉淀 3min(或 4C沉淀 15min), 4000rpm,30min (注意配平);倒掉異丙醇,加 750ul(或者 1ml)75%乙醇,4000rpm,15min;倒掉70%乙醇
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