1、PAGE PAGE 31生物制品復習題第一章 緒論生物制品的定義：是指以天然生物材料為原料，經(jīng)物理、化學、生物化學和生物學工藝制備或以現(xiàn)代生物技術(shù)獲得的，并以分析技術(shù)控制中間產(chǎn)物和成品質(zhì)量的生物活性制劑。用于預防、診斷和治療人類疾病的一類生物制品，稱之為醫(yī)用（或人用）生物制品。醫(yī)用生物制品簡稱為生物制品。 2生物制品學的理論基礎及技術(shù)基礎？以微生物學、免疫學、生物化學、分子生物學等學科為理論基礎；以現(xiàn)代生物技術(shù)包括基因工程、發(fā)酵工程、蛋白質(zhì)工程等為技術(shù)基礎的一門新的獨立學科生物制品學。3生物制品的種類？ 主動免疫細菌類疫苗，病毒類疫苗，聯(lián)合疫苗，類毒素 被動免疫用馬血清制成：抗毒素及免疫血清，

2、有過敏源。血液制品4生物制品的種類？ （1）疫苗（主動免疫） 細菌類疫苗：由細菌、螺旋體或其衍生物制成的減毒活疫苗、滅活疫苗、重組DNA疫苗、亞單位疫苗等，如卡介苗、傷寒Vi多糖疫苗等。 病毒類疫苗：由病毒、衣原體、立克次體或其衍生物制成的減毒活疫苗、滅活疫苗、重組DNA疫苗、亞單位疫苗等，如麻疹、基因工程乙型肝炎疫苗等。 聯(lián)合疫苗：由二種或二種以上疫苗抗原的原液配置而成的具有多種免疫原性的滅活疫苗或活疫苗，如百日咳、白喉、破傷風聯(lián)合疫苗（DPT），麻疹、流行性腮腺炎、風疹聯(lián)合疫苗（MMR）等。 類毒素：由細菌產(chǎn)生的外毒素，經(jīng)解毒精致而成。如破傷風類毒素等。 疫苗類制品由于富含免疫原性強的抗原

3、，用于疾病預防的，又稱預防制品或防疫制品。（2）抗毒素及免疫血清（被動免疫）：由特定抗原免疫動物所得血漿制成的抗毒素或免疫血清，如白喉抗毒素、抗狂犬病血清、抗蝮蛇毒血清等。（3）血液制品（被動免疫）：由健康人血液或特異免疫人血漿分離、提純或基因工程技術(shù)制成的人血漿蛋白組份或血細胞組份制品，如人血白蛋白、人免疫球蛋白、人特異免疫球蛋白、人凝血因子、紅細胞濃縮物等。（4）細胞因子制品：由健康人細胞增殖分離提純或由基因工程技術(shù)制成的具有多種生物活性的多肽類或蛋白類制劑，如干擾素（IFN）、白細胞介素（IL）、集落刺激因子（CSF）、紅細胞生成素（EPO）等。（5）診斷制品 體外診斷制品：由特定抗原抗

4、體或有關(guān)生物物質(zhì)制成的免疫診斷試劑或診斷試劑盒，如傷寒、副傷寒、變形桿菌（OX19、OX2、OXK）診斷菌液、沙門菌屬診斷血清、乙型肝炎表面（HbsAg）酶聯(lián)免疫診斷試劑盒等，用于疾病的體外免疫診斷。 體內(nèi)診斷制品：由變應原或有關(guān)抗原材料制成的免疫診斷試劑，如卡介苗純蛋白衍生物（BCG-PPD）、布氏菌純蛋白衍生物（RB-PPD）、錫克試驗毒素、單克隆抗體等，用于疾病的體內(nèi)免疫診斷。5生物制品的三大作用？ 預防，治療，診斷6免疫調(diào)節(jié)劑的作用、分類及代表制劑？作用：提高人體的非特異免疫功能，以達到防病治病的效果。（1）細菌類免疫調(diào)節(jié)劑：如卡介苗及其衍生物、短棒狀桿菌、鏈球菌制劑等，可促進機體的非

5、特異性免疫增強。（2）細胞因子：如白細胞介素、腫瘤壞死因子、干擾素、集落刺激因子等，能增強機體免疫功能，可起到抗炎、抗感染、抗腫瘤的作用。7診斷試劑分為哪幾類？ 細菌學診斷試劑，病毒學診斷試劑，免疫學診斷試劑，臨床化學試劑，腫瘤診斷試劑，其他常用試劑。診斷試劑在防病治病中起著重要的“偵定作用”。8臨床化學試劑根據(jù)用途分為哪三類及它們的含義？ 用途：標準品，質(zhì)量控制物及檢測試劑盒 標準品：是指定量測定時的定標物或差比物。在相同條件下測定的待檢樣品中某物質(zhì)的定量。 質(zhì)量控制物：也叫質(zhì)控物，用來控制測定的質(zhì)量，是對整個測定的評價，以判定測定結(jié)果的可靠程度。 檢測試劑盒：由完成某物質(zhì)測定所需要的各種試

6、劑配套組裝而成，并經(jīng)過檢定證明性能可靠，測定結(jié)果準確靈敏度達到一定要求，且重復性好的商品試劑。9腫瘤標志物含義：在癌變過程中由癌基因表達而生成的抗原和生物活性物質(zhì)。它是腫瘤免疫化學診斷的主要物質(zhì)基礎。10生物制品發(fā)展歷史上重要首創(chuàng)、年代及發(fā)明者？ 創(chuàng)始人：18世紀的英國Edward Jenner 于1798年發(fā)表論文，開創(chuàng)了弱毒活病毒疫苗，即牛痘苗，這就是生物制品的誕生。19世紀末，Pasteur 把弱毒微生物命名為“疫苗”。11我國生物制品制造業(yè)創(chuàng)始年份及機構(gòu)： 創(chuàng)始于1919年，北平的天壇成立了我國第一所生物制品生產(chǎn)、研究機構(gòu)中央防疫處（即北京生物制品研究所前身）12EPI的含義和WHO倡

7、導的EPI疫苗和防止的疾病以及我國又增加的疫苗？ EPI是指擴大的免疫計劃，針對全世界健康兒童。WHO推薦的兒童計劃免疫（百日咳、白喉、破傷風聯(lián)合疫苗、麻疹疫苗、卡介苗、脊髓灰質(zhì)炎疫苗）我國增加了乙肝疫苗和流行性乙腦活疫苗。13第一代、第二代、第三代疫苗的含義以及第一個基因工程疫苗？第一代是指傳統(tǒng)疫苗，第二代疫苗的基因工程疫苗（基因重組疫苗）開發(fā)活疫苗，第三代疫苗的核酸疫苗（基因疫苗）DNA14學習生物制品基礎及技術(shù)的意義？ 生物制品是人類與疾病作斗爭的必不可少的強大武器；是多學科、多科技的結(jié)晶；是生命制品；又是反生物恐怖的重要手段。 生物制品的GMP管理GMP的中文意思是藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范

8、。藥品生產(chǎn)管理部門和質(zhì)量管理部門負責人不得相互兼任。主要工作室的照明宜為300勒克斯。驗證是證明任何程序、生產(chǎn)過程、設備、物料、活動或系統(tǒng)確實能達到預期結(jié)果的有文件證明的一系列活動。在潔凈區(qū)域中，細菌污染的最大來源是操作人員。質(zhì)量管理部門是唯一能批準原材料合格與否，可否使用的部門。制藥企業(yè)的藥品生產(chǎn)人員，尤其是與藥品直接接觸的人員，其健康狀況如何，將可能直接或間接地威脅藥品質(zhì)量。為此，有必要采取一定的措施以保證他們的身體狀況維持在一定的水平，這主要是從以下方面予以控制：入廠前的體格檢查，定期的健康檢查，生病或皮膚表面有害傷口時的報告與處理。潔凈室（區(qū)）的溫度和相對濕度應與藥品生產(chǎn)工藝要求相適應

9、，無特殊要求外，溫濕度的控制范圍為18-26，45-65%成品的制檢與銷售記錄要保存至該批成品有效期后一年。10取樣中最主要的影響因素是樣品代表性和所取樣品數(shù)。11藥品質(zhì)量是生產(chǎn)出來的。12潔凈室（區(qū)）應定期輪換使用兩種以上（包括兩種）消毒劑進行消毒。13藥品生產(chǎn)車間其潔凈級別可劃分為100級、1萬級、10萬級、30萬級。14注射用水的儲存可采用4以下存放，80以上保溫，65以上保溫循環(huán)。151988年3月根據(jù)國家主席令正式頒布了我國的藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范16GMP根據(jù)其適用范圍可分為三類：國際性的GMP，國家性質(zhì)的GMP，行業(yè)性的GMP17GMP的基本內(nèi)容是什么？三個方面：（1）人員 （2）

10、硬件 （3）軟件 包含了14個部分，共88條。第三章 有關(guān)生物制品檢定與標準化1生物制品檢定的目的意義？ 制品的質(zhì)量是生產(chǎn)出來的，檢定只是客觀地反映產(chǎn)品的質(zhì)量水平。通過檢定可以發(fā)現(xiàn)制品中存在的質(zhì)量問題，提出改進意見。從而促進質(zhì)量的提高。檢定是制品質(zhì)量控制基本內(nèi)容之一，是質(zhì)量保證的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。2生物制品檢定的前提和依據(jù)？ 生物制品是藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GMP），在GMP的要求下生產(chǎn)的制品，才能保證質(zhì)量，這是前提。 依據(jù)是生物制品規(guī)程，它是國家技術(shù)法規(guī)，對項目、方法、質(zhì)量指標有明確規(guī)定。3生物制品檢定的對象？ 生物制品檢定的對象有原料的檢定，包括菌毒種、血源、生物材料、化學材料、水；輔料的檢定，包

11、裝材料的檢定，內(nèi)外包裝材料、標簽、防偽標志和使用說明等；中間產(chǎn)品的檢定，即原液、中間品等；半成品的檢定和成品的檢定。從性質(zhì)來分為三方面：理化、安全性、效力。4半微量凱氏定氮法的原理？ 原理：量取一定體積樣品（含氮量12mg左右）于凱氏定氮瓶中，加濃硫酸進行消化至澄明藍綠色，使樣品中的含氮物質(zhì)經(jīng)消化后變?yōu)榱蛩徜@，用氫氧化鈉釋放氨，用硼酸吸收，以標準酸進行滴定，由滴定的毫升數(shù)求出總氮量。5酚試劑法的原理？ 原理是在堿性溶液中，蛋白質(zhì)與銅離子形成復合體，再與酚試劑反應呈深蘭色，顯色強度與蛋白質(zhì)含量成正比。6聚丙烯酰胺凝膠電泳的雙重作用？ 聚丙烯酰胺凝膠電泳是目前分辨力最好的一種電泳方法，不僅具有電泳

12、作用，而且有分子篩效果。7免疫電泳的特點？ 免疫電泳是瓊脂電泳與免疫擴散相聯(lián)合的技術(shù)，應用于可溶性抗原和抗體系統(tǒng)的檢定。8電泳的特點？ 根據(jù)蛋白質(zhì)的等電點不同，在不同環(huán)境中所帶電荷的差異，以及分子大小的不同。使它們在電場中泳動速度不同而被分離開來，這就是電泳。9鱟試驗的原理？ 革蘭陰性菌細胞壁成分內(nèi)毒素，可激活鱟變形細胞溶解物中的凝固酶原成為凝固蛋白，再經(jīng)交連酶的作用，進而聚合為纖維狀凝膠，由此創(chuàng)立了細菌內(nèi)毒素檢測的凝膠鱟試驗技術(shù)。本法靈敏度高，特異性好，簡便。10外源性污染檢查主要包括哪些方面檢查？ 包括野毒檢查、支原體檢查、乙肝表面抗原(HbsAg)、丙肝抗體（HCAb）和艾滋抗體（HIA

13、b）的檢查、殘余細胞DNA檢查4個方面。11血液制品中檢查有關(guān)病毒所用試劑的要求：必須是國家批批檢合格的試劑。12理想的效力試驗應具備的條件？ 理想的效力試驗應具備的條件是（1）試驗方法具最佳代表性（2）試驗方法應簡便易行，重復性好（3）結(jié)果應明確（4）試驗結(jié)果要能與流行病學調(diào)查基本取得一致（5）所用試驗動物應標準化13什么叫ED50和CCID50？ ED50：動物半數(shù)能抗病癥的劑量，稱為半數(shù)有效量，用ED50表示。 CCID50：能使半數(shù)組織培養(yǎng)細胞感染的病毒劑量，稱為半數(shù)組織細胞培養(yǎng)感染量，用CCID50表示。14活病毒感染細胞，引起細胞病變在顯微鏡下檢查的主要有哪三種現(xiàn)象？ 活病毒感染細

14、胞后，可引起細胞圓縮、細胞破碎、細胞融合等現(xiàn)象。15什么叫Lf，并簡單描述？ Lf是指絮狀單位，能和一個單位抗毒素最先發(fā)生絮狀沉淀反應的類毒素（或毒素）量稱為一個絮狀單位。16生物制品規(guī)程的性質(zhì)：是國家標準和技術(shù)法規(guī)。17什么叫標準品及使用標準品的作用？ 用一已知效價的制品作為對照來校正試驗結(jié)果，這種對照品就是標準品或參考品。18制備標準品的最基本要求：準確和穩(wěn)定19生物制品檢定規(guī)范化管理的基本要求？（1）檢定實驗室設計布局（2）檢定實驗室、設備、儀器、儀表、小容器玻璃器皿、量具（3）試劑、溶液、標準品、檢定菌毒種的管理（4）檢定操作（5）檢定人員（6）取樣（7）實驗動物管理20生物制品的質(zhì)量

15、檢定主要分哪幾大類？ 檢定操作細則的編制，檢定記錄和檢定報告單第四章 生物制品的培養(yǎng)基1培養(yǎng)基的定義：人工配制的含有適合微生物生產(chǎn)繁殖所需營養(yǎng)成分的混合物。2培養(yǎng)基是能滿足微生物生長需要的一種營養(yǎng)物質(zhì)，其成分包括氮源、碳源、無機鹽、維生素及其它促細胞生長因子、水、凝固物質(zhì)、指示劑、緩沖劑、抑制劑等九種物質(zhì)。3有機氮源：包括各種蛋白胨、氨基酸、酵母浸膏和動植物組織的浸出液。4化學消毒劑按殺滅微生物能力的大小，可分為高效，中效和低效三類。高效消毒劑能殺滅包括細菌芽孢和真菌孢子在內(nèi)的所有微生物，如過氧乙酸、戊二醛、環(huán)氧乙烷等；中效消毒劑能殺滅除細菌芽孢之外的各種微生物，如甲醛、碘伏、石炭酸等；低效消

16、毒劑只能殺滅細胞繁殖體，如氯已定、苯扎溴銨等。5水處理工作中，膜分離法包括微孔過濾、超過濾、電滲析、反滲透。6什么是離子交換樹脂的化學特性？ 兩個規(guī)律：一是化合價越大，吸附能力越大；二是同價金屬離子，原子量越大，被吸附能力越強。其選擇性順序為：Fe3+Al3+Ca2+Mg2+K+Na+H+ 7離子交換樹脂結(jié)構(gòu)分為幾部分？ 通常分為兩個部分：一部分稱為母體骨架，不參與交換反應，另一部分是連接在骨架上的活性基團，活性基團上的可交換離子能與水中同種離子進行交換。8注射用水：以純化為水源，經(jīng)蒸餾而制備，供輸液和注射用的水。9什么是滅菌？：是用化學藥品或物理方法清除或殺滅所有活的微生物（致病微生物、非致

17、病微生物以及它們的芽孢在內(nèi)）的方法。10滅菌時間的含義及分幾部分？ 滅菌時間是指當滅菌柜室達到規(guī)定溫度后為達到滅菌要求所需的持續(xù)時間。有三部分組成：（1）熱穿透時間 （2）熱死亡時間 （3）安全時間11滅菌效果監(jiān)測是指什么？ 滅菌效果監(jiān)測是指生物指示劑監(jiān)測，利用對熱耐受力最強的嗜熱脂肪芽孢桿菌的死亡情況來判斷效果。它隨同物品一起滅菌后應置于55-60溫箱中孵育7天后判別結(jié)果。12簡述壓力蒸汽滅菌器的滅菌原理？（1）細菌蛋白質(zhì)在含水多的環(huán)境中遇熱易凝固（2）蒸汽傳導快，滲透力強 （3）蒸汽中大量潛伏熱，可迅速提高溫度13生物制品培養(yǎng)基有幾種？ 無菌試驗用培養(yǎng)基，菌種保存培養(yǎng)基，鑒別培養(yǎng)基，產(chǎn)菌培

18、養(yǎng)基，產(chǎn)毒培養(yǎng)基，細胞培養(yǎng)基6種。14細胞合成所需氨基酸是什么？ L谷氨酰胺是所有細胞培養(yǎng)液中必不可少的氨基酸成分。15常用合成培養(yǎng)液適用細胞 合成培養(yǎng)液名稱 適用細胞 MEM 哺乳動物細胞系 DMEM 多種細胞，特別是雜交瘤細胞 IMEM 腫瘤細胞 HamF10 雜交瘤細胞，二倍體細胞 HamF12 雜交瘤細胞，二倍體細胞 MeCay5A 腫瘤細胞，原代細胞，淋巴細胞 RPMI1640 正常細胞，白血病細胞，腫瘤細胞16生產(chǎn)用注射用水工藝流程： 自來水預處理過濾離子交換微孔過濾超過濾多效蒸餾注射用水 第五章 生物制品的分包裝生物制品成品保存，除了要注意保溫外，還要注意避光。無菌室用雙碟培養(yǎng)基

19、收雜菌，其中沙門氏培養(yǎng)基主要收陰性小桿菌。酒精的殺菌作用，在于使菌體蛋白脫水變性而死。生產(chǎn)記錄必須填寫清楚整齊；需要改時，應更改并簽名，且使原數(shù)據(jù)仍可辨認。無菌分裝驗證試驗中選擇分裝樣本應3000瓶。無菌分裝驗證可接受的合格標準為污染率0.1%清潔和消毒潔凈房間應從高級別到低級別。在灌封過程中，應隨機，按規(guī)定階段（前中后）抽取樣品，貼上瓶簽作檢定用。嚴格遵循SOP的主要目的是為了把人為的誤差降低到最小限度與原設計目的相吻合。10藥品應在潔凈環(huán)境與無菌環(huán)境的條件下生產(chǎn)。11藥品生產(chǎn)工藝中使用的水，包括飲用水，純化水，注射用水。12每一生產(chǎn)階段完成后必須進行清場，并填寫記錄。13標簽，使用說明書按

20、品種、規(guī)格專柜（庫）存放，憑批包裝指令發(fā)放，專人保管、領(lǐng)用、銷毀、并有發(fā)放、使用、銷毀記錄。14無菌工作服的式樣和穿戴方式能包蓋全部頭發(fā)，胡須及腳部，并能阻留人體脫落。15分包裝的作用？（1）保護內(nèi)裝物：防止劣化變質(zhì)，防止破損，防止浸入或泄漏（2）方便使用：單元化包裝，多劑量包裝，組合包裝（3）構(gòu)成商品，促進銷售：一個獨立的包裝，都有具體的品名、規(guī)格、批號、生產(chǎn)日期、有效期以及生產(chǎn)廠家的封口保證。（4）物流合理化16潔凈區(qū)（室）的布置：人、物流通道分開，保證生產(chǎn)安全，應有28冷庫和-25以下低溫冰箱等。 安全防護技術(shù)什么是化學危險品？ 凡是具有燃燒、爆炸、毒害、腐蝕、放射等危險性，并在一定條件

21、下能引起燃燒、爆炸、導致人體中毒、灼傷、死亡等事故和財產(chǎn)受損毀的化學物品均稱為化學危險品?；瘜W危險品的種類：世界上有化學危險品約6000多種，其中用途廣泛的有2000多種?；瘜W危險品的分類：我國分為十大類：爆炸品、易燃液體、自燃物品、遇水燃燒物品、易燃固體、壓縮氣體和液化氣體、氧化劑、毒害品、腐蝕物品、放射性物品。鋼瓶剩余壓力的要求：瓶內(nèi)氣體得不用盡，必須留有剩余壓力，一般不得小于0.05mPa。毒害品有哪些？包括氰化物，氟化鈉等。氫氣與空氣的比例是多少會發(fā)生爆炸？當兩者之比達到4.1% 74.1% 時，遇到明火就會發(fā)生爆炸。放射性試驗室的配置法？采用三區(qū)配置法：非活性區(qū)，低活性區(qū)，高活性區(qū)。

22、防護監(jiān)測區(qū)的要求：在污染源的周圍，要修出大于50米的防護監(jiān)測區(qū)，作為定期監(jiān)測環(huán)境污染的范圍。何為外源性感染？是指病原體來自感染者體外，包括患者，帶菌者，帶菌動物及外界環(huán)境。10何為內(nèi)源性感染？是指病原體來自感染者本身，這大多數(shù)為體內(nèi)的正常菌群感染，當機體免疫功能降低或正常菌群平衡失調(diào)時引發(fā)二重感染。11氣溶膠的種類？生物制品生產(chǎn)中產(chǎn)生的氣溶膠有三種：滴核、干粉和粉塵。12何為放射性廢物放置衰變法？對半衰期短（T1/230天的固體或液體放射性廢物，集中放置大約10個半衰，可按一般廢物處理。13微生物感染途徑有哪些？一般的感染途徑有：接觸感染，經(jīng)口感染，動物咬、抓傷和昆蟲媒介，經(jīng)呼吸道吸入。14什

23、么是易燃液體？ 常溫下液體存在，具有易燃性和揮發(fā)性。閃點在45以下的物品是易燃物品。15爆炸的分類：物理性爆炸、化學性爆炸和混合氣體爆炸。16毒物經(jīng)何途徑進入人體？主要經(jīng)呼吸道、皮膚、消化道等途徑進入人體，引起毒害。17放射源的防護：、射線可選用鉛、鐵、水泥等作為防護屏的材料、射線可采用鋁、有機玻璃塑料等作為防護屏材料。18低濃度的放射氣體和氣溶膠的排放要求：可通過高出周圍150米內(nèi)建筑3米以上的排氣煙囪排入大氣，經(jīng)大氣擴散稀釋后，濃度可低于相應的限制濃度。19如何控制放射源的質(zhì)和量？ 在不影響效果的情況下，應盡量減少放射源的強度、能量和毒性。20呼吸道防護設備的類型：有密閉型和寬松型兩種類型

24、。第七章 細菌類疫苗1細菌性疫苗的定義：用細菌、螺旋體或其衍生物制成，進入人體后，使機體自身產(chǎn)生抵抗相應細菌能力的生物制品，稱為細菌類疫苗。2細菌性疫苗除了按細菌名稱、按細菌組成成份、按細菌存活狀態(tài)和按生產(chǎn)工藝進行分類，還可以按給藥方法、按疫苗外觀、按菌株來源、按菌型數(shù)和按治療疾病的名稱進行分類。細菌性疫苗的用途主要用于防止細菌性傳染病的發(fā)生和流行。細菌性疫苗生產(chǎn)中加入適當佐劑，其優(yōu)點在于注射次數(shù)少，劑量小，可增強疫苗的免疫原性，且接種反應輕微，佐劑種類很多，國內(nèi)主要使用Al(OH)33工作種子批：有一定數(shù)量的來自主種子批經(jīng)傳代、擴增獲得的菌株，其生物學特征應于原始種子批一致。工作種子批用于生

25、產(chǎn)疫苗。4百日咳菌可分四種相變，相菌毒力最強，有免疫原性，相菌毒力消失，無免疫原性。根據(jù)百日咳菌主要的凝集因子可將相菌分為1、2、3，1、2和1、3三個血清型。百日咳菌種從啟開，接種于改良包-姜氏或活性炭半綜合培養(yǎng)基上，于35-37培養(yǎng)不超過72小時。經(jīng)過擴量轉(zhuǎn)種，最后到用于生產(chǎn)時不應超過12代。提取百日咳菌主要保護性抗原FHA和PT，經(jīng)5%30%蔗糖密度梯度離心去除重液的內(nèi)毒素，收集輕液的PT和FHA。收獲之百日咳菌體混懸于pH7.07.4磷酸緩沖溶液中制成原液，采用最終濃度為0.1%甲醛溶液，放置3723天殺菌脫毒處理。用于生產(chǎn)百日咳疫苗的菌種，在生產(chǎn)前需進行菌種的檢定，檢定項目有形態(tài)及培

26、養(yǎng)特性、血清學試驗、皮膚壞死試驗、毒力試驗和效價測定。百日咳用發(fā)酵罐液體培養(yǎng)法生產(chǎn)，收集菌體的方法有兩種，一種是離心沉淀法，此法可除去游離的毒性物質(zhì)；另一種是用酸沉淀法，但此法上清夜中毒性物質(zhì)有可能同時沉出。百日咳菌的抗原結(jié)構(gòu)比較復雜，除了有耐熱的菌體O抗原和不耐熱的表面K抗原。百日咳菌還有25種有抗原性的生物學活性物質(zhì)，其中百日咳毒素；絲狀血凝素兩種物質(zhì)是主要的保護性抗原。提純這兩種免疫原制成百日咳組分疫苗。5A群多糖菌苗的生化檢定項目有蛋白含量測、核酸含量、磷含量和氧-乙?；?。多糖抗原為T細胞不依賴抗原，接種嬰幼兒僅產(chǎn)生LgM抗體，而不能產(chǎn)生回憶反應，亦無加強應答這是多糖類疫苗所共存的

27、問題。莢膜多糖是分群的物質(zhì)基礎，根據(jù)腦膜炎球雙菌和肺炎球菌的莢膜多糖的化學結(jié)構(gòu)及免疫學特征可將腦膜炎球菌分成13個血清群；肺炎球菌可分成84個血清型等，其可分成不同的血清型。生產(chǎn)A群腦膜炎雙球多糖疫苗用液體培養(yǎng)基，其培養(yǎng)基配方中不應含有與加入的0.1%十六烷基三甲基溴化銨形成沉淀的成分，亦不應含有對人體有害成分或其他過敏物資。6A群腦膜炎雙球多糖疫苗生產(chǎn)工藝中去核酸步驟：上清夜中加入十六烷基三甲基溴化銨。混勻后離心收集沉淀物。將十六烷基三甲基溴化銨-多糖沉淀物均勻地懸浮于蒸餾水內(nèi)，加等量的2M氯化鈣使十六烷基三甲基溴化銨多糖復合物分解，攪拌混懸液1小時，加無水乙醇至最終濃度為25%V/V，沉淀

28、核酸和大量可溶性蛋白，靜置3小時，離心去除沉淀，保留完全澄清的上清夜。7腦膜炎雙球菌多糖疫苗生產(chǎn)工藝中沉淀多糖步驟：在上清夜內(nèi)加入乙醇至最終濃度為80%V/V沉淀A群多糖，離心收集沉淀。用一定量的無水乙醇至少洗三次，去除殘余十六烷基三甲基溴化銨和氯化鈣，沉淀物約再用一定量的丙酮洗二次，真空干燥，將粗制多糖保存在-20以下待進一步精制。8聯(lián)合疫苗就是采用多種具有免疫原性的抗原制成多價疫苗，一次注射這種疫苗可達到預防的目的。9生物反應器必須具備密封性能良好，可避免一切外來的不需要的微生物污染。它的用途是給動植物細胞或微生物的生長代謝提供一個最優(yōu)化的環(huán)境，從而促使其生長并在其生長代謝過程中產(chǎn)生出最大

29、量最優(yōu)質(zhì)的所需產(chǎn)物。微生物發(fā)酵的生物反應器，它主要由如下一些部分組成：罐體、攪拌系統(tǒng)、加溫和冷卻系統(tǒng)、進出氣系統(tǒng)、進出液系統(tǒng)、檢測和控制系統(tǒng)，管線和接頭也是整套設備中不可缺少的組成部分。10霍亂弧菌的抗原結(jié)構(gòu)和其他革蘭陰性菌類同，都具有熱不穩(wěn)定的鞭毛抗原和熱穩(wěn)定的菌體抗原?；魜y弧菌菌體抗原即O抗原。鞭毛抗原又稱H抗原。菌體抗原的脂多糖（LPS）成分具有血清分型意義。11結(jié)核桿菌菌體分胞漿和細胞壁兩部分。現(xiàn)已證明胞漿內(nèi)微粒系核糖體和核糖酸，是產(chǎn)生免疫的有效成分。胞壁是激發(fā)機體遲法型變態(tài)反應和抗感染免疫的物質(zhì)基礎，也是一種良好的免疫佐劑。12炭疽桿菌的抗原結(jié)構(gòu)可分為菌體抗原、莢膜抗原和毒素抗原三種

30、。菌體多糖抗原免疫動物不能產(chǎn)生保護作用。毒素抗原中的保護性抗原（PA）組份或PA65片段免疫動物均具保護作用，是炭疽有效的保護性抗原。13半合成培養(yǎng)基由天然有機物和化學成份已知的化合物組成。疫苗生產(chǎn)用培養(yǎng)基要求能使細菌保持原有的各種特性，能使細菌擴量繁殖，達到生產(chǎn)的目的。生產(chǎn)菌種用培養(yǎng)基要求能使細菌保持原有的各種特性，又能使菌種達到長期保藏的目的。14卡介苗是從牛體分離的一株牛型結(jié)核桿菌，對人有致病力，用加入牛膽汁的甘油土豆培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)這株結(jié)核桿菌，約每23星期傳代一次，前后共傳代了231代，經(jīng)約13年時間，終于獲得一株獨立穩(wěn)定的減毒株。15在微生物培養(yǎng)過程中需要在線檢測的主要物化參數(shù)有溫度

31、、溶解氧濃度、酸堿度、攪拌速度、罐壓和進出液流量。16目前，百日咳疫苗的培養(yǎng)主要以發(fā)酵罐培養(yǎng)技術(shù)進行生產(chǎn)，請以ApplicomBIO1200型為例，敘述其主要步驟和基本內(nèi)容。（1）發(fā)酵罐的清潔：物理、化學方法清洗（2）培養(yǎng)基的加入和滅菌：一般以120，滅菌2030分鐘。（3）菌種接種：以無菌操作方式將擴量制備的菌種壓入發(fā)酵罐。 （4） 培養(yǎng)：培養(yǎng)參數(shù)設定，溫度3637；通氣總流量100L/min溶氧10%15%；pH7.2；攪拌轉(zhuǎn)速275r/min；培養(yǎng)時間810小時。（5）培養(yǎng)過程中檢測：細菌形態(tài)；細菌濃度；pH值。17簡述多糖疫苗生產(chǎn)通則？ 流腦菌大罐液體培養(yǎng) 液體培養(yǎng)物、離心（分離菌體）

32、 棄去沉淀 上清夜+1%0十六烷基三甲基溴化銨 沉淀抗原沉淀物+0.9M Cacl2溶液 解離、離心 懸液+95%酒精至80% 離心 棄去沉淀物（核酸） 上清+95%酒精至80%離心 沉淀物（初制多糖抗原） 棄去上清抗原抽干溶解于10%飽和醋酸鈉溶液+2倍量冷酚溶液離心、此法重復23次 上清液 棄去沉淀物（蛋白）透析（除去殘余酚）透析液 超速離心，10萬g 3小時 上清液+95%乙醇至75% 棄去沉淀物 離心 棄去上清 沉淀物（精制多糖抗原） 溶解除菌過濾 配制原苗凍干成品第八章 病毒類疫苗1疫苗發(fā)展三個時期及三次革命？三個時期：古典疫苗時期；病毒培養(yǎng)疫苗時期；基因重組疫苗時期三次革命：組織培

33、養(yǎng)技術(shù)（第一次）；基因重組技術(shù)（第二次）；核酸（DNA）疫苗技術(shù)（第三次）2疫苗分類（按理化性狀分類）： （1）根據(jù)有無被滅活分為滅活及減毒活疫苗 （2）根據(jù)病毒有無被裂解分為全病毒疫苗、裂解疫苗、亞單位疫苗、表面抗原疫苗等（3）按有無佐劑可分為佐劑疫苗和無佐劑疫苗（4）按疫苗的物理狀態(tài)可分為液體疫苗、凍干疫苗等3常用病毒培養(yǎng)方法及病毒檢測方法？ 病毒培養(yǎng)方法：細胞培養(yǎng)法、雞胚培養(yǎng)法、動物培養(yǎng)法、病毒檢測方法：血清學方法（中和試驗、血凝及血凝抑制試驗、補體結(jié)合實驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗）外源性病毒檢查；活病毒量測定；滅活病毒效力測定。4疫苗的安全性應注意的問題？ 減毒活疫苗防止毒力返祖；滅活疫苗滅

34、活不徹底，后果嚴重；污染外源因子和致敏原的問題，檢查十分重要。5活疫苗與滅活疫苗的優(yōu)缺點？疫苗種類優(yōu) 點缺 點活1一般僅通過自然途徑免疫一次，可產(chǎn)生廣譜的抗體，并具細胞免疫作用1毒株有毒力回升，返祖的危險2可自然傳播給接觸者疫2產(chǎn)生局部的分泌性lgA，有局部免疫作用。3可能發(fā)生嚴重副反應4有污染外源因子或生物活性物質(zhì)之可能苗3免疫持久性長，可能在局部消除野型病毒5可因病毒干擾影響免疫效果6不易保存，易被熱滅活滅1較為安全1一般需多次接種及加強免疫活疫2能制備多價混合疫苗2不能誘生局部抗體，一般無細胞免疫作用。苗3穩(wěn)定，耐熱性相對較好3需要病毒抗原高濃度6病毒類疫苗生產(chǎn)對毒種和細胞的要求？ 毒種

35、要求：必須經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局批準。主要質(zhì)控項目（鑒別試驗、病毒外源因子檢查、猴體神經(jīng)毒力試驗、免疫原性檢查（抗體陽轉(zhuǎn)率或保護率）細胞的要求：原代細胞、二倍體細胞、傳代細胞（一般不能用作疫苗生產(chǎn)）、細胞質(zhì)控7脊髓灰質(zhì)炎疫苗：屬微小核糖核酸病毒科，單股正鏈RNA，無外膜，病毒對理化因素的抵抗力較強，對有機溶劑不敏感，對溫度敏感，56 30分鐘即可滅活，-20以下可保存數(shù)年。Salk首先用猴睪丸或腎組織培養(yǎng)三個型病毒，經(jīng)甲醛滅活制成脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗（IPV），Sabin通過猴組織傳代培養(yǎng)和蝕斑篩選方法，研制出三個型的減毒活疫苗（OPV）。我國是從昆明一4歲女孩分離型病毒，用原代猴腎細胞和2BS株

36、人二倍體細胞，劑型是口服糖丸。生產(chǎn)毒種的專項檢定：家兔試驗（Rct特征與d特征、SV40序列測定）；病毒原液的專項檢定：MAPREC試驗、猴體神經(jīng)毒力試驗。存在問題：服苗后腸道排毒與有關(guān)病例。發(fā)展趨勢：全球基本消滅，主張使用IPV；開發(fā)和使用聯(lián)合疫苗，如DTP-IPV等；發(fā)展重組DNA，如三型嵌合減毒活疫苗等。8減毒活疫苗的生產(chǎn)工藝流程： 人二倍體細胞原代細胞制備 （37靜止或轉(zhuǎn)瓶擴增傳代） （37靜止或轉(zhuǎn)瓶23天） 單層細胞 對照細胞外源因子檢查 （棄細胞生長液） （血吸附試驗、觀察細胞病變） 病毒接種、換液 （3035培養(yǎng)35天） 細胞洗滌、換液（基礎液洗滌23次，3035培養(yǎng)，細胞病變達

37、+以上）病毒收獲（釋放性病毒：單瓶1次收獲或再換液培養(yǎng)多次收液） （不易釋放性病毒：消化、收集感染細胞）病毒釋放及保存（超聲波或細胞粉碎機處理感染細胞使病毒釋放）（經(jīng)干冰酒精速凍后置-60以下保存） 病毒原液合并、澄清無菌試驗、病毒滴定（單瓶收獲病毒液合并后用0.450.6m濾膜澄清過濾）半成品配制無菌試驗（加入病毒保護劑或凍干保護劑）分裝及凍干 成品檢定鑒別試驗、物理檢查、病毒滴定、 熱穩(wěn)定性試驗、無菌試驗、水分、異常毒性試驗、牛血清蛋白殘留量9麻疹疫苗：副粘液病毒群，為RNA病毒，有6條多肽，呈多形態(tài)或球形中間是長形核蛋白，外圍是脂蛋白，外膜上有兩種糖蛋白表面抗原血凝素與血溶素。對熱不穩(wěn)定

38、，對紫外線和有機溶劑敏感，56 30分鐘可被滅活，37半衰期為2小時，4可維持滴度數(shù)周，-60以下可保存較長。國內(nèi)：滬191株1960年上海分離，由原代人胚腎細胞傳33代，原代人羊膜細胞傳39代，適應到原代雞胚細胞5代后，將培養(yǎng)溫度從37降低到31至底10代后用于疫苗生產(chǎn)。存在問題：原發(fā)性免疫與繼發(fā)性免疫失敗；發(fā)病年齡后移和小年齡發(fā)??；接種后的神經(jīng)系統(tǒng)反應。發(fā)展趨勢：開發(fā)鼻腔接種和氣溶膠疫苗或口服疫苗；使用聯(lián)合疫苗（MMR）（麻、腮、風）和開發(fā)MMRV（麻、腮、風、水痘）；發(fā)展重組DNA疫苗，如痘苗病毒載體活疫苗。10腮腺炎疫苗：屬副粘液病毒，單股DNA，有囊膜，膜上有糖蛋白構(gòu)成的血凝素、血溶

39、素和神經(jīng)氨酸酶。僅有一個抗原型，不耐酸，對有機溶劑敏感，對熱極不穩(wěn)定，5620分鐘即可滅活，-60以下可保存較長時間?，F(xiàn)國內(nèi)毒株：S79：1979年上海生物制品研究 所通過國際交往獲得JL株病毒，經(jīng)雞胚細胞選育建立，1984年獲國家批準。國內(nèi)外多用SPF雞胚細胞。11風疹疫苗：國內(nèi)：BRD-株：北京生物制品研究所上世紀80年代分離，經(jīng)人二倍體細胞（2BS）低溫（30）傳2630減毒。我國用2BS株和MRC-5株，靜止或傳瓶培養(yǎng)多次收獲病毒液的方法。臨床效果：一次免疫的抗體陽轉(zhuǎn)率均95%，90%以上可維持15年。12水痘減毒活疫苗：即水痘帶狀庖疹病毒（VZV），雙鏈DNA，呈圓形。最外層為糖蛋白

40、和脂質(zhì)構(gòu)成的包膜，無血凝素與血溶素。V-Z極為脆弱，對溫度、有機溶劑及胃蛋白酶極為敏感。在常溫下易被滅活，-70以下較穩(wěn)定，pH7.8或6.2易失活。疫苗簡史：1974年日本首先研制Oka株，1978年比利時史克公司用該株生產(chǎn)疫苗，1981年美國默克公司開始生產(chǎn)Oka株疫苗，于1995年3月獲FDA批準。上海所于1996年從日本引進Oka毒株和生產(chǎn)技術(shù)，2000年獲得生產(chǎn)文號產(chǎn)品上市。Oka株是至今WHO唯一認可的。水痘病毒不易從細胞內(nèi)釋放，需收集感染細胞用超聲波等方法處理釋放病毒。13甲型肝炎減毒活疫苗：屬小RNA病毒科，為單股RNA病毒，球形顆粒，無脂蛋白外膜，對有機溶劑及理化因子的抵抗力

41、較強，對紫外線敏感，耐高溫，乙醚和酸堿，604小時不能完全滅活。HAV只有一個血清型。現(xiàn)用毒株：H2株：KMB-17株人二倍體細胞傳15代；L-A-1株：經(jīng)2BS株人二倍體細胞傳4代。病毒培養(yǎng)時間長（最長28天左右），需收集感染細胞用凍融或超聲波等方法破碎細胞釋放病毒。14乙型腦炎減毒活疫苗：單股正鏈RNA球形病毒，有脂蛋白包膜，有血凝素，含有中和抗體和血凝抑制劑反應的抗原決定簇，Ph79時穩(wěn)定，加熱5630分鐘即被滅活，-70保存2年，0.2%甲醛也可滅活。毒株是SA14-14-2，地鼠腎細胞轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)方法。臨床使用：8月齡以上健康兒童，7歲時加強1劑。15乙型腦炎滅活疫苗：毒株是P3強毒株，

42、用地鼠腎細胞和Vero細胞轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)方法。臨床使用：為減少甲醛引起的疼痛，需加入亞硫酸氫鈉溶液中和甲醛后再進行接種。存在問題：動物外源因子問題；副反應發(fā)生率較高。16狂犬病疫苗：屬彈狀病毒科，為單股負鏈RNA和核蛋白衣殼，有脂蛋白的包膜，血凝素，在pH6.4和4條件下能凝集鵝紅細胞。對紫外線、日光和溫度敏感，56數(shù)10分鐘即被滅活，pH小于4或大于7.5易使病毒滅活?！敖侄尽笔钳?cè)蚱渌倓游锇l(fā)病時，存在于痰液內(nèi)及神經(jīng)系統(tǒng)中的天然狂犬病毒?！肮潭ǘ尽笔怯伞敖侄尽蓖ㄟ^家兔腦內(nèi)生長而對家兔的潛伏期固定于一定天數(shù)的減毒株。簡史：上世紀50年代開始，研制未經(jīng)純化的雞胚或鴨胚疫苗；60年代末原代地鼠腎細胞

43、滅活疫苗；70年代中期，研制人二倍體細胞培養(yǎng)，1977年WHO推薦使用；80年代出現(xiàn)用其他細胞培養(yǎng)，研究出Vero細胞純化疫苗；2001年10月，國家又規(guī)定必須生產(chǎn)純化疫苗，我國生產(chǎn)兩種細胞基質(zhì)的純化疫苗，即地鼠腎細胞和Vero細胞純化疫苗。四種類型：人二倍體細胞、Vero細胞、原代地鼠腎細胞、原代雞胚細胞。17流行性感冒疫苗：甲、乙、丙三個型。甲型以流行形式出現(xiàn)，乙型局部爆發(fā)，丙型以散在病例形式出現(xiàn)。多發(fā)性流行，病毒易變異（抗原轉(zhuǎn)變、抗原漂移），乙型與丙型毒株僅有抗原性漂移。毒株是根據(jù)每年2月底WHO國際流感合作中心確認的流行毒株型別，通常為三株即甲1型、甲3型和乙型。培養(yǎng)方法：雞胚培養(yǎng)收集

44、尿囊液病毒，經(jīng)純化或裂解純化，甲醛滅活制成純化全病毒疫苗（不能去除病毒的脂質(zhì)體成分）、裂解純化疫苗（去除了病毒脂質(zhì)體成分，保留病毒的HA、NA和內(nèi)部抗原，免疫效果及反應性均較好）或亞單位疫苗（免疫效果不如全病毒疫苗裂和解純化疫苗）。發(fā)展趨勢：細胞培養(yǎng)疫苗、開發(fā)減毒活疫苗、開發(fā)氣霧或鼻用途徑疫苗、開發(fā)新型佐劑、開發(fā)DNA疫苗。18乙型肝炎疫苗：為環(huán)狀雙鏈DNA，HBV有三種抗原抗體系統(tǒng)，即HBSAg-抗HBS；HBeAg-抗HBe；HBcAg-抗HBc；抗HBS具主要保護作用。三種抗原表達系統(tǒng)：酵母系統(tǒng)、哺乳動物細胞系統(tǒng)及痘苗病毒載體系統(tǒng)。發(fā)展趨勢：研究多種分子量HBSAg亞單位疫苗、開發(fā)新型佐

45、劑疫苗、開發(fā)聯(lián)合疫苗、基因重組可食性植物疫苗、載體活疫苗。19腎綜合征出血熱疫苗：為單股負鏈RNA病毒，有包膜，即G1和G2糖蛋白，復制時出現(xiàn)三種特征性包涵體（顆粒包涵體、絲狀包涵體、顆粒-絲狀包涵體），37以上易滅活，5630分鐘可使病毒滅活而仍保留其抗原性，-70以下可長時期保持活性。毒種：我國型用Z10株，型用L99株，沙鼠腎細胞培養(yǎng)生產(chǎn)型疫苗，用地鼠腎細胞培養(yǎng)生產(chǎn)型疫苗，并生產(chǎn)、型雙價疫苗。滅活方法：甲醛或-丙內(nèi)酯48過夜，37水解。20病毒類新疫苗研究的技術(shù)路線？ 傳統(tǒng)疫苗技術(shù)；基因重組疫苗（重組亞單位疫苗、重組活疫苗、基因缺失活疫苗、核酸可食性植物疫苗）合成肽疫苗技術(shù)；抗獨特型抗體

46、疫苗技術(shù)。 類毒素和抗毒素制品1細菌毒素：是指許多致病性細菌能產(chǎn)生一些毒性物質(zhì)，稱為細菌毒素。分為外毒素和內(nèi)毒素。2內(nèi)毒素：是菌體細胞壁的結(jié)構(gòu)成分，細菌在生活狀態(tài)時不能釋放出來，只有在細菌死亡之后菌體自溶或用人工方法使細菌崩解后才能釋放至外界環(huán)境中。3外毒素：是指細菌在生長過程中所產(chǎn)生的毒素，可從菌體擴散或自溶后釋放到菌體外者，稱為外毒素。4類毒素：由外毒素經(jīng)甲醛作用及加溫處理去除毒性而仍保留其免疫原性者稱為類毒素。它是一種自動免疫制劑。5脫毒：毒素變成類毒素的過程稱為脫毒。6精制類毒素：將原制類毒素用適宜方法加以提純，或?qū)⒃仆舛舅靥峒兒笤倬疲芍瞥删祁惗舅亍?毒性逆轉(zhuǎn)發(fā)生條件：類毒素

47、稀釋，溫度，游離甲醛濃度8MLD（最小致死量）：一定時間內(nèi)殺死全部試驗動物的最小毒素量。9LD50（半數(shù)致死量）：一定時間內(nèi)殺死半數(shù)試驗動物的最小毒素量。10LF（絮狀反應單位）：與一個國際單位抗毒素混合后最先出現(xiàn)絮狀沉淀反應的毒素（或類毒素）量。11抗毒素定義：系指用細菌外毒素或類毒素免疫動物取得的免疫血清。12抗毒素種類：是免疫血清的一種。為抗菌、抗病毒和抗毒血清三大類。13類毒素的用途：作為自動免疫制劑，制備抗毒素作人工被動免疫制劑。14影響脫毒的主要因素：溫度，pH（7.07.5），甲醛濃度，含氮量。15類毒素制造重要環(huán)節(jié)：溫度，pH，糖量，氣量，氮源和生長因子的補充，培養(yǎng)時間。16影

48、響免疫血清（漿）效價因素：為獲抗毒效價高的免疫血清（漿），馬匹，免疫原（外毒素或類毒素）及免疫方法是重要的條件。17類毒素生產(chǎn)工藝通則： 精制 脫毒精制毒素 毒素精制類毒素 吸附類毒素 精制類毒素加佐劑 脫毒 精制18衡量抗毒素精制效果優(yōu)劣主要指標： （1）純凈度 （2）提純系數(shù)（通稱R植，即精制品每克蛋白所含單位數(shù)與原血漿每克蛋白所含單位數(shù)的比值） （3）收獲率（精制品總單位數(shù)與原血漿總單位的比值（%）第十章 血液制品1血液制品是指哪一類制品？ 血液制品是由健康人的血漿或特異免疫人血漿分離、提純或由重組DNA技術(shù)制成的血漿蛋白組份或血細胞組份制品，如人血白蛋白、人免疫球蛋白、人凝血因子（天然

49、或重組）、紅細胞濃縮物等，用于診斷、治療或被動免疫預防。2為保證血液制品無傳播病毒疾病的危險，對每一份血漿應作哪些病毒的檢測？ （1）丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）：用賴氏法檢測應不高與25U （2）乙肝表面抗原（HbsAg）：陰性 （3）血清電泳：白蛋白含量應不低于血漿蛋白總量的50%，電泳圖譜正常 （4）梅毒：應為陰性 （5）HIV-1/HIV-2抗體：應為陰性 （6）HCV抗體：應為陰性3根據(jù)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)常用蛋白質(zhì)分離方法分為幾種類型？ 蛋白質(zhì)分離方法大致可分以下幾類： （1）根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度不同，即按蛋白質(zhì)親水性和疏水性的差異，進行分離的方法。包括鹽析法、有機溶劑法、疏水層析法、等電點

50、沉淀法 （2）根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小、形狀和密度差異進行分離的方法。有凝膠過濾層析法（分子篩）、透析法、超濾法、離心和超離心法等。 （3）根據(jù)蛋白質(zhì)所帶電性的不同進行分離。如離子交換層析法、制備電泳等 （4）根據(jù)蛋白質(zhì)立體結(jié)構(gòu)中的特定位電與某種特定配體的特異親和力進行分離，這種方法叫親和層析法。4在低溫乙醇法中，稱之為“五變系統(tǒng)”的哪五個重要差數(shù)，在實際應用中作用？ 影響蛋白質(zhì)沉淀反應的因素主要有五個，稱為“五變系統(tǒng)”。pH、乙醇、濃度、溫度、蛋白濃度、離子強度。Cohn6法用于分離白蛋白，Cohn9接Cohn6法用于提制免疫球蛋白。在實際應用中的作用是簡化了操作，縮短了生產(chǎn)周期。5血源性病毒的基

51、本性質(zhì)及其危害性？病毒 大小脂包膜基因組疾病HBV42+DNA乙肝HCV3060+RNA丙肝HDV2839+RNA丁肝HIV-180100+RNAAIDSHIV-2100+RNAAIDSHTLV90140+RNA成人T淋巴細胞白血病PVB191826DNA可引起暫時性病毒血癥HAV2732DNA甲肝CMV200+DNA巨細胞病毒減毒染血癥6主要血液制品的品種及臨床用途？ 名稱 用 途 白蛋白 休克、低蛋白血癥、腦水腫、胸腹水 免疫球蛋白 肌注免疫球蛋白 預防某些傳染病 靜注免疫球蛋白 預防或治療感染癥、免疫缺陷性疾病 組胺免疫球蛋白 支氣管哮喘、過敏癥 特異性免疫球蛋白 預防和治療相應傳染病、

52、感染癥 纖維蛋白原制劑 低纖維蛋白血癥 纖維蛋白粘合劑 局部止血、組織修補、軟骨粘連 因子制劑 A種血友病 凝血酶原復合物（PCC） 因子、缺乏癥 因子制劑 B種血友病 凝血酶制劑 外科局部及上消化道止血 因子X 制劑 因子 缺乏癥 抗凝血酶制劑 彌散性血管內(nèi)凝血癥 纖維蛋白溶酶原制劑 血栓、新生兒纖維肺 纖維結(jié)合蛋白制劑 庖疹性角膜炎及潰瘍 C1酯酶抑制劑 遺傳性血管神經(jīng)水腫 1-抗胰蛋白酶制劑 某些肺氣腫、急性肺損傷 1-巨球蛋白酶制劑 放射性損傷及潰瘍 轉(zhuǎn)鐵蛋白制劑 低轉(zhuǎn)鐵蛋白癥7常用的病毒滅活/去除技術(shù)有哪些？病毒檢測技術(shù)是保證血液制劑安全性的重要環(huán)節(jié)之一。病毒滅活處理技術(shù)是最理想的方

53、法，普遍采用的加熱法、有機溶劑/表面活性劑法、低pH孵放法，還有光化學法（紫外線+化學試劑）、加壓法、酶消化法以及去除病毒的納米過濾（即膜過濾）法。方法試劑處理條件滅活病毒種類原理備注加 熱法 巴斯德法（濕熱法）干熱法液態(tài)，60，10小時凍干，80，72小時凍干，100，68小時脂包膜，非脂包膜脂包膜，非脂包膜利用熱力對病毒和蛋白破壞作用的差異需加保護劑有機溶劑/表面活性劑（S/D）法 磷酸三丁酯、聚山梨酯80或曲通-10024 68小時脂包膜破壞病毒包膜脂質(zhì)鑲嵌層結(jié)構(gòu)丙內(nèi)脂/紫外線照射法-丙內(nèi)酯254nm波長，1J/cm2，10分鐘脂包膜，非脂包膜使病毒核酸突變，阻礙其復制需專門設備低pH法

54、Ph4.0，25，21天脂包膜使病毒在酸性條件下，隨時間和溫度影響而滅活適用于IgG制劑8血液制品質(zhì)量控制的基本原則及目的？血液制品質(zhì)量控制一般應從該制劑的安全性、有效性和穩(wěn)定性三方面考慮。9血漿蛋白的精制目的及常用方法？ 精制目的是為了控制蛋白制品在一定濃度，除去雜質(zhì)，調(diào)整適當?shù)膒H，經(jīng)除菌過濾，分裝凍干并經(jīng)質(zhì)量檢定合格后，方能作為正式制品，提供給臨床用于患者的治療及疾病預防。 常用方法：脫醇、脫鹽、純化及濃縮常用方法；配制；除菌過濾；真空冷凍干燥；離心機及超濾技術(shù)。第十一章 基因工程產(chǎn)品1基因工程的概念和一般步驟有哪些？ 所謂基因工程是指在體外將核酸分子插入病毒、質(zhì)粒等載體分子，構(gòu)成遺傳物

55、質(zhì)新組合，并使之轉(zhuǎn)入到原先沒有這類分子的宿主細胞內(nèi)，且能持續(xù)穩(wěn)定地復制和表達。 步驟： （1）從復雜的生物有機體基因組中經(jīng)酶切消化步驟，分離出帶有目的基因的DNA片段。 （2）在體外將外源DNA片段連接到能夠自我復制并具有選擇記號的載體分子上，形成重組DNA分子。 （3）將重組DNA分子轉(zhuǎn)移到適當?shù)氖荏w細胞（宿主細胞），并隨之一起擴殖。 （4）從大量的細胞繁殖群體中，篩選出含有重組DNA分子的受體細胞克隆，從中提取已經(jīng)得到的擴增的目的基因。2限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶的特點有那些？ 三個基本特征：（1）對DNA分子雙鏈有特異性識別序列部位；（2）2個單鏈斷裂部位在DNA分子上的分布，不是彼

56、此直接相對；（3）斷裂的結(jié)果形成的DNA片段往往具有互補的單鏈延伸末端即所謂的粘性末端，這是由型酶作用的結(jié)果，而型酶酶切后只形成鈍端，不形成粘性末端。3什么是質(zhì)粒？其一般的生物學性質(zhì)有哪些？ 質(zhì)粒是一些細菌的亞細胞結(jié)構(gòu)，是存在于多種細菌染色體外的遺傳單位，它們是一類雙鏈、閉環(huán)的DNA分子，常含有一些特殊編碼的基因。4作為外源基因的克隆載體，質(zhì)粒應該具有哪些基本特征？ 克隆載體的質(zhì)粒必須具有下列基本條件： （1）具有對一種或數(shù)種限制酶都存在一個識別位點，并在插入外源DNA及酶切后不影響質(zhì)粒的復制。 （2）在限制位點插入外源DNA形成的重組質(zhì)粒，必須能進入寄主細胞。 （3）必須能夠為寄主細胞提供易

57、于檢測的表型形狀作為標記，在寄主細胞內(nèi)能自我復制、穩(wěn)定地遺傳。 （4）具有較低的分子量和較高的拷貝數(shù)，操作起來簡單方便。5什么叫細菌轉(zhuǎn)化？ 宿主細胞得到外源的基因，轉(zhuǎn)入DNA的遺傳物質(zhì)，引起遺傳性質(zhì)的轉(zhuǎn)變。6Southern blot的基本原理是什么？ 根據(jù)毛細血管作用的原理，使在電泳凝膠中分離的DNA片段轉(zhuǎn)移并結(jié)合在適當?shù)臑V模上，然后通過同DNA或RNA探針的雜交作用檢測這些被“吸印”的DNA片段，這種實驗方法稱DNA吸印雜交技術(shù)。由于它是由R.Southern于1975年首先設計出來的，故又稱為薩瑟恩DNA吸印雜交技術(shù)。7作為生產(chǎn)用的工程菌株，需要做哪些方面的檢測？ 作為生產(chǎn)用的工程菌株，

58、需要做以下方面的檢測： （1）工程菌種的必要檢定：質(zhì)粒圖譜（酶切圖譜）；電鏡檢查；對各代工程菌的其他檢測項目（劃種平板、涂片革蘭染色、抗生素抗性、生化反應等均需與原代一致） （2）表達產(chǎn)物的檢定：免疫印跡法；表達產(chǎn)物的氨基酸序列分析；表達產(chǎn)物的功能分析；其他。（3）工程菌種的歷史 （4）工程菌種的性質(zhì) （5）文字記錄文件（6）工程菌的穩(wěn)定性8高密度發(fā)酵過程中應注意哪些問題？ 高密度發(fā)酵過程一般可以在對數(shù)生長期工程菌的表達逐漸達到最佳平臺期。9常用于蛋白分離的層析技術(shù)有哪些？其基本原理是什么/蛋白分離的層析技術(shù)有凝膠過濾：其原理是利用分子大小進行分離；離子交換法：其原理是在不溶性介質(zhì)上引進帶電基

59、團（酯化、氧化、醚化）形成不同介質(zhì)；疏水層析：其原理是在介質(zhì)表面引進有疏水作用的基團，如短鏈烷基、聚醚、苯基等，使表面含有疏水基團的目的蛋白與之作用而吸附上去，起到分離純化的目的；親和層析：其原理是利用生物大分子的特異性（如抗原性），可以與另外一些物質(zhì)（如抗體）進行專一性的可逆結(jié)合進行層析；徑向?qū)游觯浩湓硎怯芍芗皩游鼋橘|(zhì)組成，液體在柱內(nèi)的流向是從柱的一端流向另一端。10制訂基因工程純化工藝時要注意哪些問題？ （1）純度應盡可能高 （2）收獲率盡可能高 （3）投資盡可能少 （4）工藝路線盡可能簡短 （5）注意提高經(jīng)濟效益第十二章 診斷試劑1簡述診斷試劑的意義及在防治疾病中起什么作用？診斷試劑

60、是檢測相關(guān)抗原、抗體或機體免疫狀態(tài)的實驗診斷制劑。主要在防治疾病中起“探針”作用。2診斷試劑在首要質(zhì)量標準是什么？都有其嚴格的質(zhì)量標準（1）靈敏度：表示該試劑具有檢測出最低量被檢物質(zhì)的能力，是診斷試劑的首要診斷試劑（2）特異性 （3）精密性 （4）準確性 （5）穩(wěn)定性 （6）安全性 （7）簡易性 3診斷試劑生產(chǎn)的標準化應如何進行？ 診斷試劑生產(chǎn)的標準化應從生產(chǎn)的各個環(huán)節(jié)進行，原材料和半成品、成品的質(zhì)量控制等。4要保證試劑質(zhì)量的一致性，必須進行那些工作？特別注意那些問題？要保證試劑質(zhì)量的一致性，必須進行全面質(zhì)量管理和控制，特別注意試劑的批內(nèi)差異和批間差異。5什么叫標準品，它有什么作用？標準品是一