1、小鼠腦缺血再灌注損傷后不同時間甘露醇干預(yù)效果的評價 專業(yè)：麻醉學(xué) 姓名：郭文義 2010-4-24Company Logo主要內(nèi)容前 言材料與方法研 究 結(jié) 果討 論結(jié) 論 前 言手術(shù)中發(fā)生心跳驟停的概率不僅威脅著每一位接受手術(shù)治療的患者的生命安全，其造成的腦缺血再灌注損傷也對現(xiàn)代臨床麻醉的心肺腦復(fù)蘇技術(shù)提出了課題和挑戰(zhàn)；近年來國內(nèi)外關(guān)于腦缺血再灌注損害的研究普遍關(guān)注于各種預(yù)處理方法的腦保護作用，而本課題則主要研究甘露醇在腦缺血再灌注損傷后的干預(yù)效果；目前，臨床急救中甘露醇脫水屬于心肺腦復(fù)蘇的后處理措施，其給藥時間問題還沒有學(xué)者關(guān)注。本課題主要通過動物實驗探討甘露醇在心肺腦復(fù)蘇中的最佳用藥時機

2、。心跳驟停后再灌注腦損傷為臨床急救復(fù)蘇中經(jīng)常面臨的問題如何減輕甚至逆轉(zhuǎn)腦損傷？多為預(yù)先給藥，臨床實際差距較大采用再灌注后給藥？近年來腦保護的措施在臨床心肺復(fù)蘇中一直列為心肺復(fù)蘇后處理措施早期應(yīng)用甘露醇液體梯度對抗復(fù)蘇后建立的血壓梯度甘露醇應(yīng)用的最佳時機是？材料與方法實驗分組和干預(yù)取健康小鼠36只隨機將其分為6組各組6只分別為： A組： 假手術(shù)組，手術(shù)但不給藥B組： 缺血再灌注損傷對照組，分離雙側(cè)頸總動脈，穿線但不結(jié)扎也不給藥C組： 再灌注即刻甘露醇干預(yù)組，恢復(fù)灌注即刻尾靜脈注射甘露醇D組： 再灌注30min甘露醇干預(yù)組，恢復(fù)灌注30min后給予甘露醇E組： 再灌注1h甘露醇干預(yù)組，恢復(fù)灌注1h

3、后給予甘露醇F組： 再灌注1.5h甘露醇干預(yù)組，恢復(fù)灌注1.5h后給予甘露醇實驗路線圖模型制備 過程麻醉頸部正中切口下頜下腺上翻分離雙側(cè)頸總動脈活結(jié)結(jié)扎動脈實現(xiàn)缺血松開活結(jié)恢復(fù)灌注觀察指標和統(tǒng)計分析 1 小鼠的行為學(xué)改變 2 存活細胞數(shù) 3 變性細胞率 4 觀察描述海馬CA1區(qū)細胞形態(tài)學(xué)變化 實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)標準差表示，采用單因素方差分析，組間進行多重比較，SPSS17統(tǒng)計軟件分析，P0.05認為有顯著性差異。研究結(jié)果存活細胞數(shù)和變性細胞率 甘露醇即刻干預(yù)組小鼠海馬CA1區(qū)存活細胞數(shù)明顯高于缺血再灌注對照組（P0.05）（如表1）；變性細胞率明顯低于缺血再灌注對照組（P0.05）（如表2），而與

4、假手術(shù)組無顯著差別（P0.05），30min后甘露醇干預(yù)組與缺血再灌注對照組比較均無顯著差別（P0.05）。 組別 存活細胞數(shù)（個）A 假手術(shù)組 23.000.89*B 缺血再灌注對照組 9.002.10C 甘露醇即刻干預(yù)組 22.001.05*D 甘露醇30min干預(yù)組 10.831.60E 甘露醇1h 干預(yù)組 10.082.22F 甘露醇1.5h干預(yù)組 9.081.99表1 各實驗組小鼠海馬CA1區(qū)正常細胞數(shù)的比較組別 變性細胞率（%）A 假手術(shù)組 7.330.82*B 缺血再灌注對照組 30.671.75C 甘露醇即刻干預(yù)組 8.170.41*D 甘露醇30min干預(yù)組 29.501.0

5、5E 甘露醇1h 干預(yù)組 29.830.75F 甘露醇1.5h干預(yù)組 30.160.75表2 各實驗組小鼠海馬CA1區(qū)變性細胞率的比較 A組 海馬CA1區(qū)錐體細胞有層次分明的45層細胞結(jié)構(gòu),胞質(zhì)均質(zhì)紅染,核大而圓，核膜完整，核仁清晰。細胞層向心側(cè)間質(zhì)呈纖維束樣結(jié)構(gòu)，排列整齊。 B組 細胞層明顯擠壓狀，僅見3層細胞結(jié)構(gòu)，排列散亂。正常錐體細胞數(shù)明顯減少，可見大量的變性壞死細胞，細胞腫脹，胞漿內(nèi)有空泡形成，胞質(zhì)嗜酸性增強，壞死細胞核呈梭形或三角形固縮，深染成藍紫色。細胞間質(zhì)水腫明顯，呈團塊狀，纖維結(jié)構(gòu)消失。 形態(tài)學(xué)結(jié)果（見圖1）C 組 絕大多數(shù)椎體細胞保持正常形態(tài)，45層細胞結(jié)構(gòu)完好。纖維結(jié)構(gòu)清晰

6、可辨。細胞間質(zhì)無水腫表現(xiàn)，比較A組更顯稀松，呈現(xiàn)脫水表現(xiàn)。 D、E、F組細胞層均存在受壓表現(xiàn)，僅見34層細胞結(jié)構(gòu)，排列散亂。雖然比較B組間質(zhì)水腫有所改善，但纖維束樣結(jié)構(gòu)凌亂不清晰，并有斷續(xù)現(xiàn)象。變性和壞死細胞數(shù)明顯增多。 圖1：各組小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細胞的形態(tài)學(xué)改變 A組 假手術(shù)組 B組 缺血再灌注損傷組 C組 即刻甘露醇干預(yù)組 D組 30分鐘甘露醇干預(yù)組 E組 60分鐘甘露醇干預(yù)組 F組 90分鐘甘露醇干預(yù)組 本實驗選取小鼠對缺血最敏感的海馬CA1區(qū)為觀察對象，采用甘露醇對小鼠腦缺血再灌注后的不同時間點進行醫(yī)學(xué)干預(yù)。觀察結(jié)果表明：再灌注即刻甘露醇干預(yù)可使小鼠海馬CA1區(qū)細胞形態(tài)，組織結(jié)構(gòu)接

7、近正常，無間質(zhì)水腫表現(xiàn)，而恢復(fù)灌注30min,1h,1.5h后甘露醇干預(yù)的效果不明顯。證實早期給予甘露醇能夠有效的逆轉(zhuǎn)腦缺血再灌注損傷后細胞的變性水腫，但是再灌注30分鐘后細胞水腫較為嚴重，再給予甘露醇救治基本無效，從而為臨床心肺腦復(fù)蘇合理用藥時間提供理論依據(jù)。 結(jié) 論根據(jù)本課題觀察結(jié)果作者認為：1. 恢復(fù)血流灌注后血壓梯度重新建立是細胞水腫形成的必備條件。再灌注早期及時應(yīng)用甘露醇建立反相的滲透壓梯度，可以有效防止腦缺血再灌注后細胞水腫的形成；2. 神經(jīng)細胞水腫是腦缺血再灌注損傷的始動環(huán)節(jié)，有效防止細胞水腫的形成可以避免過氧化物、鈣離子超載等不可逆細胞損害機制的發(fā)生；3. 本觀察組發(fā)現(xiàn)：再灌注

8、30分鐘后給與甘露醇效果不明顯，似說明細胞水腫已經(jīng)形成，多種細胞損害機制均已啟動，再給予甘露醇救治基本無效；有待進一步研究證實。12 郗東風(fēng).小鼠前腦缺血再灌注損傷模型海馬CA1區(qū)的形態(tài)學(xué)觀察 J .山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2008，39（3）：197-199.13 李曉琳.大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后海馬區(qū)-淀粉樣蛋白和突觸后致密物質(zhì)-95的表達.中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文，2006，12-19 .14 宋含平，劉志龍，鄧常青.補陽還五湯對沙鼠腦缺血后海馬CA1區(qū)細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)與細胞凋亡的影響 J .中國中醫(yī)藥信息雜志，2004，11（8）：682-683.15 Zhao H, Sapolsky RM

9、, Steinberg GK. Interrup ting reperfusion as a stroke therapy: Ischemic postconditioning reduces infarct size after focal ischemia in rats J . J Cereb Blood Flow Metab, 2006,26 (9) : 1114 - 1121.16 Zhao ZQ, Corvera JS, HalkosME, et al. Inhibition of myocardial injury by ischemic postconditioning dur

10、ing reperfusion: Comparison with ischemic p reconditioning J . Am J Physiol Heart Circ Physiol, 2003, 285 (2) : H579 - H588.17 Rosenbaum D M, Gupta G,DAmore J,et alFas （CD95APO-1）plays a role in the pathophysiology of focal cerebral ischemiaJJ Neurosci Res，2000，61(6)：686-69218 EklofB, Siesjo BK. The

11、 effect of bilateral carotid artery ligation upon the blood flow and the energy state of the rat brain J . Acta Physiol Scand, 1972, 86:1552165. 19 王雪紅.納洛酮對小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元缺血再灌注損傷干預(yù)效果的觀察. J 中國藥物與臨床，2009，11（9）：1057-1059.20 邢春平. 小鼠腦缺血再灌注后地塞米松對海馬CA1區(qū)神經(jīng)細胞形態(tài)學(xué)的影響.山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文，2009，4-24.21 何慶忠.腦復(fù)蘇的現(xiàn)代概念 J .小兒急救醫(yī)學(xué)雜志，1994，1（3）：133-135.22 Archer DP, Freymond D, Ravussin P. Use of