NSCLC患者EGFR基因突變檢測(cè)腺癌的驅(qū)動(dòng)基因LCMC(美國(guó))MSN(法國(guó))中國(guó)日本EGFR17%13%40%50%KRAS22%28%7%15%ELM4-ALK7%2%7%5%BRAF2%2%2%1%HER21%1%NA3%PIK3CA1%1%4%NAPTENNANA6%NAMET擴(kuò)增1%1%5%4%Nil46%33%29%22%KrisASCO2011PlanchardELCC2012WuJSMO2011MitsudomiJCCO2010

97%的基因突變互相排斥單個(gè)突變數(shù)ALKAKTBRAFEGFRHER2KRASMEK1METNRASPIK3CAALK(38)X1211AKT(1)XBRAF(9)X1EGFR(89)X13HER2(3)XKRAS(114)X11MEK1(2)X11METAMP(3)XNRAS(2)XPIK3CA(6)XKrisMG.etal.ASCO2011,Abstract#CRA7506.

5中國(guó)人肺腺癌各基因構(gòu)成比圖關(guān)于“驅(qū)動(dòng)基因”近50%NSCLC驅(qū)動(dòng)基因已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)雙基因同時(shí)突變罕見對(duì)已知的靶點(diǎn)，已有很多上市或在研的藥物驅(qū)動(dòng)基因突變狀態(tài)與人種、性別、病理類型、吸煙狀況等有關(guān)，不同類型用藥不同。NSCLC基因檢測(cè)的意義基因檢測(cè)決定了分子靶向治療2011年我國(guó)制定了:中國(guó)非小細(xì)胞肺癌患者表皮生長(zhǎng)因子受體基因突變檢測(cè)專家共識(shí)EGFR基因突變檢測(cè)的臨床意義EGFR-TKI一線治療必須進(jìn)行EGFR基因突變的檢測(cè)，國(guó)內(nèi)外均推薦EGFR基因突變陽(yáng)性的NSCLC給予EGFR-TKI一線治療優(yōu)勢(shì)人群不代表個(gè)體：盡管在女性、亞裔、不吸煙或少吸煙、腺癌EGFR基因突變發(fā)生頻率較高，但在鱗癌、腺鱗癌，甚至SCLC中也可檢測(cè)到EGFR基因突變。EGFR基因突變檢測(cè)的臨床意義化療能改變EGFR突變狀態(tài)264例一線化療的Шb~IV期NSCLC患者的血DNA標(biāo)本，EGFR突變率在化療后顯著降低（23.1%對(duì)34.5%，P<0.001）提示檢測(cè)更有必要，決定TKI一線治療的時(shí)機(jī)國(guó)內(nèi)EGFR基因突變率在我國(guó)未經(jīng)選擇的NSCLC中EGFR突變約30%，腺癌突變約42.5%，非腺癌約9.5%。2012年基康公司共收到1500名患者樣品，全部完成檢測(cè)，其中108名患者的樣品因DNA質(zhì)量不合格而終止檢測(cè)，因此共有1392名患者已出檢測(cè)結(jié)果，其中660名患者突變陽(yáng)性（47%），其中腺癌、腺鱗癌、BAC為52%，鱗癌為14%。銅陵檢測(cè)結(jié)果（ARMS法）送檢66份標(biāo)本,11份無(wú)結(jié)果，55份有結(jié)果，檢出率83.33%，不同標(biāo)本檢出率n有結(jié)果檢出率手術(shù)3030100%淋巴結(jié)活檢66100%氣管鏡13538.5%肺穿11872.7%胸腔鏡11100%胸水55100%合計(jì)665583.33%EGFR突變率55份有結(jié)果的標(biāo)本中，29份EGFR突變陽(yáng)性，突變率55.7%EGFR突變類型n檢出率L858R1448.3%19-del1137.9%L858R+19-del310.3%G719X14.2%合計(jì)293.5%EGFR突變與病理類型突變率腺癌男44.4%(8/18)女68%(17/25)腺鱗癌男33.33%(1/3)女100%（1/1）鱗癌男14.3%(1/7)女50%(1/2)合計(jì)55.7%(24/42)EGFR基因突變檢測(cè)的一般原則為使患者盡可能地從最有效的治療中受益，所有NSCLC，只要條件許可，都應(yīng)進(jìn)行EGFR突變的檢測(cè)，特別是肺腺癌。檢測(cè)標(biāo)本冰凍組織外科手術(shù)標(biāo)本：最好標(biāo)本，可獲得高質(zhì)量腫瘤DNA，取得可靠檢測(cè)結(jié)果---廣泛使用穿刺活檢、支氣管鏡標(biāo)本：量少，但腫瘤DNA質(zhì)量仍好，獲得較可靠檢測(cè)結(jié)果---使用受限檢測(cè)標(biāo)本固定包埋組織外科手術(shù)標(biāo)本：可得足量腫瘤DNA，雖然DNA片段化，但仍獲得可靠檢測(cè)結(jié)果---使用受限支氣管鏡、穿刺活檢標(biāo)本：可得腫瘤DNA量少且片段化，獲得較可靠檢測(cè)結(jié)果，有時(shí)DNA量少。---極度受限標(biāo)本的處理新鮮組織（手術(shù)、穿刺、支纖鏡下活檢樣本等）含有腫瘤組織50%以上；重量≥10ｍg（約米粒大小，盡量提供所有穿刺樣本），經(jīng)PBS或生理鹽水沖洗干凈。取癌組織的中心位置組織塊，切至厚度在0.5cm以下，浸沒于75～100%的乙醇中60分鐘以上；可在4℃冰箱暫時(shí)保存。送檢前可倒掉試管內(nèi)的乙醇，倒入所提供的標(biāo)準(zhǔn)試管，擰緊蓋子，常溫運(yùn)輸，確保樣本在3天內(nèi)到達(dá)。標(biāo)本的處理癌性胸水脫落細(xì)胞盡量收集更多胸水，離心后去掉上清，沉淀物必須>1毫升。如需長(zhǎng)途運(yùn)輸，加入乙醇浸泡60分鐘以上。為符合托運(yùn)要求，可付運(yùn)前可離心后倒掉試管內(nèi)的乙醇，倒入所提供的標(biāo)準(zhǔn)試管，擰緊蓋子，常溫運(yùn)輸，確保3天內(nèi)到達(dá)。EGFR檢測(cè)方法測(cè)序法ARMS法敏感度10~30%(變異)1~0.1%(變異)發(fā)現(xiàn)突變已知和未知已知石蠟包埋組織成功率低高假陽(yáng)性（交叉污染）多少假陰性多少檢測(cè)流程復(fù)雜漫長(zhǎng)，污染多簡(jiǎn)單快速儀器成本高低試劑成本低略高EGFR檢測(cè)方法北京協(xié)和張靜報(bào)道：82例NSCLC直接測(cè)序法中24例無(wú)結(jié)果，ARMS法均有結(jié)果，且16例檢測(cè)到變異中華病理學(xué)雜志，2008,37（5）有結(jié)果變異率測(cè)序法70.7%（58/82例）43.1%(25/58例）ARMS法100%（82/82例）51.2%(42/82例）

關(guān)于胸水EGFR突變的檢測(cè)用胸水檢測(cè)腫瘤EGFR突變需要敏感方法用胸水中細(xì)胞及無(wú)細(xì)胞液均可檢測(cè)EGFR突變，且檢出率基本相同目前缺少胸水與腫瘤組織直接對(duì)比（配對(duì)樣本檢測(cè)）數(shù)據(jù)，故對(duì)其敏感度與特異性尚無(wú)結(jié)論胸膜轉(zhuǎn)移和胸水的對(duì)比研究本研究的目的：探索胸腔積液與胸膜轉(zhuǎn)移灶EGFR突變檢測(cè)的一致性，從而判斷當(dāng)存在胸膜轉(zhuǎn)移灶時(shí)，胸液EGFR基因突變狀態(tài)檢測(cè)的價(jià)值。收集2011年4月-2012年12月間就診于上海長(zhǎng)海醫(yī)院呼吸科符合入組條件患者的胸液標(biāo)本及相應(yīng)的胸膜轉(zhuǎn)移病灶組織，共35對(duì)樣本。研究步驟胸膜轉(zhuǎn)移灶樣本采集電子胸腔鏡在局麻下進(jìn)行胸腔鏡檢查術(shù)鏡下見病灶后以活檢4-6塊組織，10%中性福爾馬林固定，后包埋成蠟塊每例蠟塊切取10-12片5μm厚連續(xù)切片，切片在37℃烘箱內(nèi)烤片3h后常溫保存研究步驟胸腔積液樣本采集每例患者同時(shí)收集胸水100-200ml，常溫靜置30min后取上清15ml，-80℃保存，為待檢測(cè)的胸液上清；在去除上清液后，將剩余沉淀物室溫1000g轉(zhuǎn)速離心10min，包裹細(xì)胞沉淀，常規(guī)固定、包埋并切片（具體同胸膜轉(zhuǎn)移灶標(biāo)本），為待檢測(cè)的胸液沉淀；每例蠟塊切取10-12片5μm厚連續(xù)切片，切片在37℃烘箱內(nèi)烤片3h后常溫保存。胸膜活檢組織EGFR突變狀況病人數(shù)EGFR突變突變率%P男性18633.30.094女性171164.7有吸煙史101100.007無(wú)吸煙史251664胸液沉淀與相應(yīng)胸膜轉(zhuǎn)移灶EGFR突變的比較

胸膜組織EGFR突變胸液沉淀EGFR突變+-合計(jì)+12416-2810合計(jì)141226符合率為73.1%胸液上清與相應(yīng)胸膜轉(zhuǎn)移灶EGFR突變的比較胸膜組織EGFR突變胸液上清EGFR突變+-合計(jì)+14216-31619合計(jì)171835符合率為85.7%胸液上清與相應(yīng)沉淀EGFR突變的比較胸液沉淀EGFR突變胸液上清EGFR突變+-合計(jì)+12113-4913合計(jì)161026符合率為80.8%胸液EGFR突變檢測(cè)率的比較敏感性特異性例數(shù)比百分?jǐn)?shù)例數(shù)比百分?jǐn)?shù)胸液沉淀12/1485.7%8/1266.7%胸液上清14/1782.4%16/1888.9%胸液沉淀+上清16/1794.1%14/1877.8%