病理性瘢痕基因治療的研究現(xiàn)狀通【關(guān)鍵詞】增生性瘢痕;瘢痕疙瘩;基因治療;細(xì)胞因子病理性瘢痕主要包括增生性瘢痕和瘢痕疙瘩，目前國內(nèi)外的研究尚未能很好地提醒其發(fā)病機(jī)制，臨床防治也存在較大困難，成為了醫(yī)學(xué)研究的難點和重點問題之一。近年來，隨著基因工程技術(shù)的研究進(jìn)展，病理性瘢痕的基因治療成為研究的熱點，現(xiàn)就其研究現(xiàn)狀綜述如下。1細(xì)胞因子基因療法目前的研究說明，各種細(xì)胞因子對創(chuàng)面愈合和瘢痕防治的作用不同，通過基因轉(zhuǎn)染、基因敲除等手段，針對這些細(xì)胞因子的作用進(jìn)展干預(yù)，可以到達(dá)防治瘢痕的目的。1.1轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)TGF-β在瘢痕形成及開展中起著非常重要的作用[1]。hi等[2]以反義TGF-β1核酸轉(zhuǎn)染動物傷口，結(jié)果發(fā)如今給予反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染抑制TGF-β功能后，傷口瘢痕形成顯著減少。liu等[3]用含有截短型TGF-βⅡ型(tTGF-βRⅡ)受體的腺病毒轉(zhuǎn)染新生大鼠背部線性傷口，檢測結(jié)果說明腺病毒介導(dǎo)的tTGF-βRⅡ可促進(jìn)創(chuàng)傷愈合，減少瘢痕形成。Ashrft等[4]證實Sad3缺陷的小鼠上皮再生加快，瘢痕形成減少。Ga等[5]證實針對Sad2的小干擾RNA轉(zhuǎn)染能減少瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的I、Ⅲ型膠原分泌。提示通過對TGF-β下游分子Sad進(jìn)展干預(yù)，也能對抗TGF-β促瘢痕形成作用。1.2肝細(xì)胞生長因子(HGF)HGF可抑制肝纖維化組織中TGF-β1的產(chǎn)生，增強(qiáng)膠原酶的活性。Ha等[6]以腺病毒載體將人的HGF轉(zhuǎn)染兔耳增生性瘢痕，結(jié)果顯示實驗組瘢痕明顯縮小，膠原成分也較對照組減少，而且有更多的毛囊和汗腺構(gòu)造出現(xiàn)。1.3結(jié)締組織生長因子(TGF)TGF在肝、腎、等器官纖維化中具有重要作用，是TGF-β的下游分子，能促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖和Ⅰ型膠原的表達(dá)[7]。劉劍毅等[8]以脂質(zhì)體將TGF反義寡核苷酸導(dǎo)入瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞(KFs)，證實TGF反義寡核苷酸能抑制細(xì)胞增殖，減少其膠原合成。然而目前針對TGF進(jìn)展的瘢痕基因治療尚缺乏體內(nèi)實驗研究。1.4腫瘤壞死因子α(TNF-α)TNF-α來源極為廣泛，包括各種免疫細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等，TNF受體表達(dá)于除紅細(xì)胞外的所有體細(xì)胞和多種腫瘤細(xì)胞外表，TNF-α與其結(jié)合后參與炎性反響、免疫應(yīng)答和抗腫瘤作用等。何威等[9]研究說明TNF-α對瘢痕疙瘩治療有效。essadi等[10]通過實驗證明，瘢痕疙瘩使用TNF-α治療后，其成纖維細(xì)胞的NF-kappaB表達(dá)活性持續(xù)升高，誘導(dǎo)了成纖維細(xì)胞的凋亡。1.5致炎細(xì)胞因子Xue等[11]的研究證明，瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的成纖維細(xì)胞中白介素-6(interleukin6,IL-6)含量比正常皮膚高，Ghazizadeh等[12]發(fā)現(xiàn)KFs的IL-6及其受體IL-6Rα和IL-6Rβ表達(dá)比正常皮膚成纖維細(xì)胞平均高6倍以上，用IL-6刺激正常皮膚成纖維細(xì)胞后，其膠原分泌增加，而以IL-6或IL-6Rα中和抗體處理KFs后，細(xì)胞膠原分泌明顯減少。1.6γ-干擾素(IFN-γ)IFN-γ主要由活化的T細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生，能以與細(xì)胞外基質(zhì)相連的形式存在，通過旁鄰方式控制細(xì)胞生長[13]。近年來其被臨床用于病理性瘢痕的治療，能抑制病理性瘢痕中瘢痕成纖維細(xì)胞增殖，下調(diào)Ⅰ、Ⅲ型膠原基因的表達(dá)，并促進(jìn)膠原酶的產(chǎn)生，可拮抗TGF-β的作用，是創(chuàng)傷修復(fù)與瘢痕形成過程中的一種比擬明確的負(fù)性調(diào)節(jié)因子。Harrp等[14]等研究證實，IFN-γ可以誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞凋亡，使肉芽組織和其后的瘢痕組織中成纖維細(xì)胞數(shù)量減少而逐漸成熟。人們將IFN-γ直接注入到增生性瘢痕中，可以明顯減小瘢痕的體積。GranstEin等[15]對8例瘢痕疙瘩患者采用雙盲試驗，結(jié)果說明用IFN-γ治療的瘢痕疙瘩高度平均減少30.4%，病理示表皮及真皮明顯變薄;而撫慰劑組瘢痕高度幾乎未減少。Larrabee等[16]也用IFN-γ瘢痕內(nèi)注射治療瘢痕疙瘩和肥厚性瘢痕，結(jié)果發(fā)現(xiàn)10例中有5例瘢痕直徑減少了一半。2細(xì)胞凋亡基因調(diào)控病理性瘢痕的形成過程中,成纖維細(xì)胞增殖凋亡調(diào)控失常及基質(zhì)分泌增多是其產(chǎn)生的根本原因，在瘢痕成熟過程中成纖維細(xì)胞數(shù)量的減少主要是由細(xì)胞凋亡引起的，病理性瘢痕中存在著細(xì)胞增殖和凋亡的異常，因此有研究者通過對凋亡相關(guān)基因的干預(yù)進(jìn)展了瘢痕基因治療的研究。2.1p53p53基因編碼一核蛋白，是最著名的抑癌基因。它結(jié)合和調(diào)節(jié)DNA修復(fù)、細(xì)胞分裂和細(xì)胞凋亡的基因表達(dá)[17]。Ladin等[18]通過對瘢痕疙瘩組織標(biāo)本中的主要凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)進(jìn)展免疫過氧化酶分析，發(fā)現(xiàn)18/20例中有p53表達(dá),主要以核周方式分布于瘢痕疙瘩邊緣部的增生部位，認(rèn)為p53調(diào)節(jié)異?？梢瘃：鄹泶襁吘壊吭錾鷧^(qū)細(xì)胞增生和凋亡減少。王春梅等[19]對p53基因的外顯子4進(jìn)展限制片段長度多態(tài)分析發(fā)現(xiàn),瘢痕疙瘩和增生性瘢痕組織及體外培養(yǎng)KFs中均存在p53基因突變，p53基因突變可以使細(xì)胞處于一種增殖狀態(tài)，從而導(dǎo)致瘢痕疙瘩的形成。劉旺等[20]采用聚合酶鏈?zhǔn)椒错?單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析方法和基因測序法，檢測各種組織成纖維細(xì)胞中p53基因的突變情況，發(fā)現(xiàn)瘢痕疙瘩中有9/12例p53基因外顯子4、5、6、7出現(xiàn)點突變和移碼突變,認(rèn)為p53基因突變是瘢痕疙瘩形成和開展的重要因素之一。于冬梅等[21]在研究中發(fā)現(xiàn)，瘢痕疙瘩與增生性瘢痕中p53的RNA高表達(dá)。肖志波等[22]將攜帶野生型p53基因的腺病毒轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的KFs，發(fā)現(xiàn)瘢痕疙瘩的成纖維細(xì)胞的增殖被明顯抑制。2.2Fas(D95)和FasLFas(D95)和FasL是已認(rèn)識到的一對誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的重要膜蛋白因子，它們之間構(gòu)成一條獨(dú)特的細(xì)胞凋亡通路，參與了多種疾病的病理生理過程。陳偉等[23]通過實驗觀察到Fas和FasL在增生性瘢痕的表皮基底層細(xì)胞內(nèi)有少量分布，陽性細(xì)胞率顯著降低，提示增生性瘢痕的發(fā)生可能與Fas、FasL和aspase-3蛋白表達(dá)降低、由這三種蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡受阻相關(guān)。魯峰等[24]成功地構(gòu)建了攜帶Fas基因的重組腺病毒，感染后KFs能穩(wěn)定表達(dá)有功能的Fas蛋白，利用重組腺病毒轉(zhuǎn)染可以重建被阻斷的KFsFas死亡信號傳導(dǎo)通路。3自殺基因治療自殺基因又稱為前藥轉(zhuǎn)換酶基因,將一些病毒或細(xì)菌基因組中的前藥轉(zhuǎn)換酶基因?qū)肽[瘤細(xì)胞,這種基因可以編碼特殊的酶,將原先無毒性的前藥在腫瘤細(xì)胞中代謝為毒性產(chǎn)物,從而到達(dá)殺死腫瘤細(xì)胞的目的。自殺基因治療惡性腫瘤是利用轉(zhuǎn)基因方法將哺乳動物不含有的藥物酶基因轉(zhuǎn)入腫瘤細(xì)胞內(nèi)，其表達(dá)產(chǎn)物可將無毒性的藥物前體轉(zhuǎn)化為細(xì)胞毒藥物，影響細(xì)胞的DNA合成，從而引起細(xì)胞死亡[25]。由于多采用病毒作為載體，故稱為病毒介導(dǎo)的酶解藥物前體療法。自殺基因在腫瘤治療方面的研究已有多年的歷史，包括單純皰疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因、水痘帶狀皰疹病毒胸苷激酶(VZV-TK)基因、大腸桿菌胞嘧啶脫氨酶(E-D)基因、大腸桿菌脫氧胸苷激酶(DK)基因、大腸桿菌黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(GPT)基因及細(xì)胞色素p450基因。其中研究最深化、應(yīng)用最廣泛的自殺基因系統(tǒng)首推胸腺嘧啶核苷激酶(thyidinekinase，TK)基因/丙氧鳥苷(ganilvir，GV)胞嘧啶脫氨酶(ytsinedeainase,D)基因/5-氟胞嘧啶(5-flurytsine,5-F)。3.1TK基因TK基因編碼胸苷激酶，該酶可將核苷類似物(NA)代謝為二磷酸化物，后者在細(xì)胞內(nèi)酶的作用下成為有毒性的三磷酸化物，阻止DNA復(fù)制，導(dǎo)致細(xì)胞死亡，而發(fā)揮抗腫瘤作用。HSV-TK/GV系統(tǒng)不僅能殺滅表達(dá)TK陽性細(xì)胞，而且通過旁觀者效應(yīng)可以引起相鄰TK陰性細(xì)胞死亡，進(jìn)步了基因治療的效率。肖生祥等[26]將HSV-TK/GV系統(tǒng)應(yīng)用于體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞時，觀察到了其細(xì)胞毒性作用?？抡萚27]以攜帶胸苷激酶基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的KFs的同時應(yīng)用前體藥物無環(huán)鳥苷，顯示了自殺基因療法對KFs的殺傷作用。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.3.2D基因D基因存在于一些細(xì)菌和真菌基因組中，哺乳動物細(xì)胞無此基因。目前研究最多的是大腸桿菌D基因。D基因編碼胞嘧啶脫氨酶，編碼的胞嘧啶脫氨酶可將胞嘧啶代謝為尿嘧啶，抑制脫氧胸苷酸合成酶，阻止脫氧尿苷酸(dUP)甲基化為脫氧胸苷酸(dTP)，從而影響DNA的合成。另外，5-Fu在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為5-氟尿嘧啶核苷(5-FUR)后，也能摻入RNA中干擾蛋白質(zhì)合成，對其他各期細(xì)胞也有作用。5-Fu作為一線化療藥物，用于消化道腫瘤、乳腺癌及婦科腫瘤等的化療，效果良好，整形外科也將其用于瘢痕的非手術(shù)治療方法之一[28]。Knthristpuls等[29]對20例瘢痕疙瘩患者用5-Fu治療1周(部分注射，濃度50g/l)，隨訪12個月，超過85%的患者有明顯效果。D/5-F系統(tǒng)基因治療重要特點在于其旁觀者效應(yīng)，其作用特點和機(jī)制類似于TK基因。3.3D-TK雙自殺基因單自殺基因療法用于腫瘤治療有很多優(yōu)點，但它也存在許多缺乏之處,如各類自殺基因系統(tǒng)治療腫瘤都存在一定程度的局限性，自殺基因治療腫瘤可能存在對腫瘤細(xì)胞類型的依賴性，因此不少學(xué)者討論雙自殺基因的應(yīng)用研究。目前探究的雙自殺基因多為D-TK基因，其產(chǎn)物同時具有兩種酶的活性，即D和TK兩者的活性，可以產(chǎn)生互補(bǔ)的作用，大大進(jìn)步其應(yīng)用價值。研究說明，D-TK雙自殺基因不需考慮自殺基因的腫瘤細(xì)胞類型依賴性，可以最大限度地消除腫瘤細(xì)胞對治療藥物的耐藥性，和放療合用，可大大增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對放療的敏感性，比單自殺基因療法具有更大的優(yōu)越性。宋悅等[30]在體外實驗中發(fā)現(xiàn)D-TK交融基因?qū)β殉舶┘?xì)胞有良好殺傷作用。黃宗海等[31]亦通過實驗觀察到VEGF啟動子驅(qū)動的雙自殺基因治療系統(tǒng)對大腸癌LV細(xì)胞有確切的殺傷作用。蘇國強(qiáng)等[32]發(fā)現(xiàn)KDR基因啟動子調(diào)控的D-TK交融基因體系可選擇性殺傷乳腺癌F-7細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞。徐斌等[33-35]結(jié)合應(yīng)用胸苷激酶基因和大腸桿菌胞嘧啶脫氨酶基因轉(zhuǎn)染KFs，發(fā)如今應(yīng)用前體藥物后，KFs發(fā)生了明顯的凋亡，對瘢痕疙瘩具有強(qiáng)大的殺傷效應(yīng)和旁觀者效應(yīng)，顯示了良好的應(yīng)用前景。4展望病理性瘢痕的基因治療為攻克瘢痕難題展現(xiàn)了良好的前景，但目前多停留在實驗室研究階段，因其生物平安性問題，致使瘢痕基因治療至今未能進(jìn)入臨床治療實驗。如目前所應(yīng)用的載體特別是病毒類載體，尚存在導(dǎo)致機(jī)體免疫反響、基因突變以及野生病毒毒力恢復(fù)等問題。加上創(chuàng)傷愈合和瘢痕形成是多因素參與的過程，單一因子的導(dǎo)入很難實現(xiàn)理想的治療效果;在瘢痕形成過程中，某一因子可能在某一特定階段過表達(dá)或下調(diào)才能發(fā)揮其抑制瘢痕形成的作用，而時間錯位的過表達(dá)或下調(diào)反而可能產(chǎn)生不利影響，使病理性瘢痕的研究和治療具有很大的復(fù)雜性和挑戰(zhàn)性，因此值得人們做進(jìn)一步深化細(xì)致的研究，相信不久的將來人們會獲得病理性瘢痕研究的更大成就?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】[1]Liu,angDR,aYL.TGF-beta:afibrtifatrinundsarringandaptentialtargetfranti-sarringgenetherapy[J].urrGeneTher，2022，4(1):123-136.[2]hiB,KakHJ,JunD,etal.ntrlfsarringinadultundsusingantisensetransfringgrthfatr-beta1ligdexynuletides[J].IunlellBil，1996，74(2):144-150.[3]Liu,hua,uX,etal.Inhibitingsarfratininratundsbyadenvirus-ediatedverexpressinftrunatedTGF-betareeptrII[J].PlastRenstrSurg，2022，115(3):860-870.[4]AshrftGS,YangX,GlikAB,etal.ielakingSad3shaeleratedundhealingandanipairedlalinflaatryrespnse[J].NatellBil，1999，1(5):260-266.[5]GaZ,angZ,ShiY,etal.dulatinfllagensynthesisinkelidfibrblastsbysileningSad2ithsiRNA[J].PlastRenstrSurg，2022，118(6):1328-1337.[6]HaX,YuanB,LiY,etal.Genetherapyfrpathlgialsarithhepatytegrthfatrediatedbyrebinantadenvirusvetr[J].SihinaLifeSi，2022，46(3):320-327.[7]GressnerA,GressnerA.nnetivetissuegrthfatr:afibrgeniastersithinfibrtiliverdiseases[J].LiverInt，2022，28(8):1065-1079.[8]劉劍毅,李世榮,紀(jì)淑興.TGF反義寡核苷酸對人瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的作用[J].中華整形外科雜志,2022,20(6):455-457.[9]何威，劉榮卿，鐘白玉.瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞對腫瘤壞死因子α調(diào)節(jié)膠原合成作用的反響[J].中華整形外科雜志，2001，17(6)：332-334.[10]essadiDV,DungHS,ZhangQ,etal.AtivatinfNFkappaBsignalpathaysinkelidfibrblasts[J].ArhDeratlRes，2022，296(3):125-133.[11]XueH,auleyRL,Zhang,etal.Alteredinterleukin-6expressininfibrblastsfrhypertrphiburnsars[J].JBurnareRehabil，2000，21(2):142-146.[12]Ghazizadeh,Tsa,ShiizuH,etal.FuntinalipliatinsftheIL-6signalingpathayinkelidpathgenesis[J].JInvestDeratl，2022，127(1):98-105.[13]龔非力.醫(yī)學(xué)免疫學(xué)[].2版.北京：科學(xué)出版社，2022：77.[14]HarrpAR,GhaharyA,SttPG,etal.RegulatinfllagensynthesisandRNAexpressininnralandhypertrphisarfibrblastsinvitrbyinterfern-gaa[J].JSurgRes，1995，58(5):471-477.[15]GranstEinRD,RkA,FltteTJ,etal.Antrlledtrialfintralesinalrebinantinterfern-gaainthetreatentfkelidalsarring.linialandhistlgifindings[J].ArhDeratl，1990，126(10):1295-1302.[16]LarrabeeFJr.Kelidexisinandreurreneprphylaxisviainterderalinterfern-gaainjetins[J].Laryngspe，1997，107(9):1284.[17]ZarkaTA,HanA,EdelsnI,etal.Expressinfadherins,p53,andBL2insallellarinasftheervix:ptentialtursuppressrrlefrN-adherin[J].IntJGynelaner，2022，13(2):240-243.[18]LadinDA,HuZ,PatelD,etal.p53andapptsisalteratinsinkelidsandkelidfibrblasts[J].undRepairRegen，1998，6(1):28-37.[19]王春梅，百束比古，中澤南堂.增生性瘢痕和瘢痕疙瘩p53基因多態(tài)性的分析[J].中華整形外科雜志，2022，21(1):32-35.[20]劉旺，蔣游暉，李友良，等.瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞p53基因突變的研究[J].中華燒傷雜志，2022，20(2):85-87.[21]于冬梅，陳天新，呂松岑，等.病理性瘢痕中p53和ylinD1的RNA表達(dá)的實驗研究[J].中國實用美容整形外科雜志，2022，16(2):74-76.[22]肖志波,郝立君,任麗虹,等.腺病毒介導(dǎo)的t-p53基因?qū)θ笋：鄹泶癯衫w維細(xì)胞增殖的影響[J].中華醫(yī)學(xué)美學(xué)美容雜志，2022,12(4):233-235.[23]陳偉，付小兵，孫同柱，等.Fas，F(xiàn)asL和aspase-3在增生性瘢痕中表達(dá)特征及其對瘢痕形成的影響[J].解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2002，27(7):580-581.[24]魯峰，高建華.重組腺病毒介導(dǎo)Fas基因轉(zhuǎn)染瘢痕疙瘩細(xì)胞并誘導(dǎo)其凋亡的實驗研究[J].中華整形外科雜志，2022，20(4):268-270.[25]SandalnZ,FusenigNE,uthenJ,etal.Suiidegenetherapyfrprealignantdisease:anestrategyfrthetreatentfintraepithelialneplasia[J].GeneTher，2001，8(3):232-238.[26]肖生祥，潘敏,閆乎玲，等.HSV2tk/GV系統(tǒng)對NIH3T3細(xì)胞的體外殺傷作用研究[J].中國皮膚性病學(xué)雜志，2002，16(6):368-369，373.[27]柯正,武志堅,付小兵,等.逆轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)移HYTK基因結(jié)合應(yīng)用aniilvir對瘢痕成纖維細(xì)胞的體外殺傷作用[J].中華實驗和臨床病毒學(xué)雜志,1995,9(4):29.[28]henA,DavidsnT