ICS65.020.20CCSICS65.020.20CCSB05山 東 省 地 方 標 準DB37/T3690.4—2020液體菌種制備技術規(guī)程第4部分：靈芝Technicalspecificationsforthepreparationofliquidspawn—Part4：Ganodermalingzhi2020-12-042020-12-042021-01-01山東省市場監(jiān)督管理局發(fā)布目 次前言 II112范引文件 13語定義 14本求 24.1工人衛(wèi)要求 24.2場要求 24.3生車要求 25施備 25.1基設施 25.2基設與具 26產術 36.1工流程 36.2培基 36.3母制作 3搖菌制作 3發(fā)罐體種作 4768產案 6附錄A（范）靈液體種產錄項 7前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件是DB37/T3690《液體菌種制備技術規(guī)程》的第4部分。DB37/T3690已經發(fā)布了以下部分：——第1部分：香菇；——第2部分：黑木耳；34本文件主要起草人：高霞、王慶武、趙淑芳、崔曉、高中強、高瑞杰、孫振福、叢倩倩、馬化彬、李秀梅、司元明、唐麗娜、張燕、蘭玉菲、安秀榮。液體菌種制備技術規(guī)程第4部分：靈芝范圍本文件適用于靈芝液體菌種的制備。（GB150.1壓力容器第1部分：通用要求GB4789.28食品微生物學檢驗培養(yǎng)基和試劑的質量要求GB5749生活飲用水衛(wèi)生標準GB50073潔凈廠房設計規(guī)范NY/T528食用菌菌種生產技術規(guī)程NY/T1742食用菌菌種通用技術要求3術語和定義GB50073潔凈廠房設計規(guī)范NY/T528食用菌菌種生產技術規(guī)程NY/T1742食用菌菌種通用技術要求3術語和定義GB/T12728界定的術語和定義適用于本文件。3.1食用菌液體菌種發(fā)酵罐ediblemushroomliquidspawnfermenter3.2罐壓jarpressure在液體菌種發(fā)酵制備過程中發(fā)酵罐內保持的空氣壓力（表壓）。注：單位為MPa。3.3通氣量ventilationvolume在液體菌種培養(yǎng)過程中發(fā)酵罐體積與每分鐘通入發(fā)酵罐中無菌空氣體積的比例。注：用V/V（發(fā)酵罐體積/通入空氣體積）表示。3.4接種量inoculationamount液體菌種體積與培養(yǎng)基體積的比例。注：用百分數表示。3.5液體菌種菌齡periodofliquidspawnrunning液體菌種接入培養(yǎng)基開始計算的液體菌種培養(yǎng)時間。3.6發(fā)酵罐空消emptyfermentersterilization對尚未加水投料的空發(fā)酵罐進行高壓滅菌。3.7發(fā)酵罐實消fermentersterilization對投料后的發(fā)酵罐進行高壓蒸汽滅菌。3.8空氣過濾器airfilter能對食用菌液體菌種發(fā)酵罐所用空氣進行濾除雜菌和其他雜質，達到無菌潔凈要求的設備。3.9搖瓶液體菌種liquidspawninshakeflask裝至玻璃菌種瓶內在磁力攪拌器或恒溫搖床上培養(yǎng)的液體菌種。3.10終止pHinitialpHvalueofmedium液體菌種達到放灌指標時的培養(yǎng)基pH。4基本要求工作人員應保持個人衛(wèi)生，進生產車間前須洗手、消毒，應穿戴經消毒處理的工作服、口罩、鞋、帽等。應符合NY/T528的環(huán)境衛(wèi)生要求，場地開闊、路面硬化。NY/T528GB500735設施設備（或GB150.1工藝流程見圖1。圖1靈芝液體菌種生產工藝流程培養(yǎng)基馬鈴薯20040煮汁20g/L3g/L1g/L、硫酸鎂0.5g/L、瓊脂20g/L，pH液體菌種培養(yǎng)基搖瓶菌種培養(yǎng)基葡萄糖20g/L、蛋白胨3g/L、牛肉膏3g/L1g/L0.5g/L、維生素B15mg/L，pH發(fā)酵菌種培養(yǎng)基宜選用以下配方，且生產用水應符合GB5749的要求：20g/L3g/L1g/L0.5g/LB15mg/L、0.3g/L，pH15g/L20g/L2g/L2g/L1g/L0.3g/L，pH10g/L10g/L3g/L3g/L2g/L、硫酸1g/L0.3g/L，pH6.3母種制作母種制作應符合NY/T528的要求，母種質量應符合NY/T1742的要求。6.4搖瓶菌種制作按液體培養(yǎng)基配方，稱取原料，加水攪拌至完全溶解，定容。50%～60MPa～0.13MPa20min～30min液體培養(yǎng)基冷卻至室溫，無菌條件下，挑取7～8塊（2～3）mm×（2～3）mm的母種菌塊接入搖瓶2425℃～840rmi～10r/mn4～650mg/mL發(fā)酵罐初次使用、出現(xiàn)雜菌、長期置放、更換品種等情況出現(xiàn)其一時，應進行空消。蒸汽壓力0.14MPa40min按液體培養(yǎng)基配方，稱取原料，加水攪拌至完全溶解，定容。上罐70～801min～2min，200.05MPa開排氣閥降壓至0MPa，關閉排氣閥繼續(xù)升壓至0.13MPa～0.14MPa；同時，待發(fā)酵罐罐內壓力達到0.05MPa0MPa0.11MPa～0.12MPa50min～60min冷卻滅菌結束，關閉加熱棒電源、空氣過濾器滅菌閥門，緩慢打開夾套排氣閥降壓至0MPa0.05MPa750.03MPa～0.0528接種6.5.8.2理化性狀理化指標應符合表2的規(guī)定。6.5.8.2理化性狀理化指標應符合表2的規(guī)定。表2發(fā)酵罐液體菌種理化指標通過肉眼及顯微鏡觀察菌絲體形態(tài)。GB4789.28PDA28℃～30hGB4789.2830～3724h～48h950.010.5～1.0750.02MPa～0.03MPa25℃～285d～7感官指標要求應符合表1的規(guī)定。表1發(fā)酵罐液體菌種感官要求項目要求菌液色澤菌絲體呈白色，濾液呈淡黃色菌液氣味有靈芝液體菌種培養(yǎng)時特有的氣味，無異味菌液形態(tài)菌液澄清透明不渾濁，稍粘稠；菌絲體密集、均勻懸浮于液體中不分層菌種微觀菌絲粗壯、分枝密度高、有隔膜，可見鎖狀聯(lián)合，無雜菌項目要求終止pH3.6～5.5（m/L≥50pH取樣用pH計或pH試紙測定菌液酸堿度。/