精選優(yōu)質(zhì)文檔-----傾情為你奉上精選優(yōu)質(zhì)文檔-----傾情為你奉上專心---專注---專業(yè)專心---專注---專業(yè)精選優(yōu)質(zhì)文檔-----傾情為你奉上專心---專注---專業(yè)全國(guó)口岸及相鄰邊境線醫(yī)學(xué)媒介生物本底調(diào)查和監(jiān)測(cè)專項(xiàng)工作方案1目的通過在全國(guó)國(guó)家對(duì)外開放口岸（口岸核心能力達(dá)標(biāo)口岸）及其相鄰邊境線全面、規(guī)范地開展一輪醫(yī)學(xué)媒介生物本底調(diào)查和監(jiān)測(cè)專項(xiàng)工作，系統(tǒng)、完整、準(zhǔn)確地掌握全國(guó)口岸和邊境線具有重要傳病意義的醫(yī)學(xué)媒介生物的本底情況（包括種屬構(gòu)成、種群分布、季節(jié)消長(zhǎng)情況及其自然感染病原體情況），為識(shí)別輸入性醫(yī)學(xué)媒介生物、掌握口岸區(qū)域醫(yī)學(xué)媒介生物密度變化情況、防控蟲媒傳染病在口岸地區(qū)的暴發(fā)流行提供堅(jiān)實(shí)的科學(xué)依據(jù)；并為今后建立醫(yī)學(xué)媒介生物地理分布和信息預(yù)警系統(tǒng)奠定基礎(chǔ)。同時(shí)，通過對(duì)此輪本底調(diào)查數(shù)據(jù)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)研判，確定口岸醫(yī)學(xué)媒介生物監(jiān)測(cè)的重點(diǎn)區(qū)域和重點(diǎn)對(duì)象，提高口岸衛(wèi)生檢疫工作的針對(duì)性和有效性。2原則2.1監(jiān)測(cè)原則監(jiān)測(cè)是指應(yīng)用科學(xué)的方法，長(zhǎng)期、連續(xù)、系統(tǒng)地收集醫(yī)學(xué)媒介生物，從而獲取種類、數(shù)量、分布和季節(jié)變化等資料，監(jiān)測(cè)應(yīng)遵循“五定”原則，即“定人員、定時(shí)間、定地點(diǎn)（鼠類定生境）、定方法、定器械”。定人員：在監(jiān)測(cè)周期內(nèi)，監(jiān)測(cè)人員保持不變，沒有特殊情況，不得增減更換。定時(shí)間：包括周期、頻次和布放收集工具的時(shí)間三個(gè)方面，一旦確定不得更改。如遇特殊天氣可順延。定地點(diǎn)：根據(jù)口岸范圍大小和地貌特點(diǎn)，選擇具有代表性生態(tài)環(huán)境的三至五個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)。在一個(gè)監(jiān)測(cè)周期內(nèi)，鼠類不得隨意更改生境，其它醫(yī)學(xué)媒介生物不得隨意更改監(jiān)測(cè)地點(diǎn)。定方法：在監(jiān)測(cè)周期內(nèi)，統(tǒng)一采用本方案制定的方法。如果邊境地區(qū)因野外條件不適用制定方法的，可因地制宜選用敏感的方法，但應(yīng)在原始記錄中注明所用方法，方法一旦確定，不得隨意變更。定器械：在監(jiān)測(cè)周期內(nèi)，應(yīng)選用規(guī)范統(tǒng)一的監(jiān)測(cè)器械以保證數(shù)據(jù)的統(tǒng)一性和穩(wěn)定性。2.2本底調(diào)查原則本底調(diào)查應(yīng)采取多種監(jiān)測(cè)方法，調(diào)查范圍盡可能覆蓋整個(gè)口岸區(qū)域，力爭(zhēng)捕獲到口岸區(qū)域內(nèi)的所有醫(yī)學(xué)媒介生物種，以便完整的掌握本口岸的醫(yī)學(xué)媒介生物本底情況。2.3樣本鑒定、檢測(cè)和送樣原則2.3.1此次本底調(diào)查所獲醫(yī)學(xué)媒介生物樣品，捕獲的醫(yī)學(xué)媒介生物分類鑒定到種后，每個(gè)種保存2-10個(gè)標(biāo)本；其余樣品根據(jù)種類不同分類，并按規(guī)定方法保存以備病原體檢測(cè)。2.3.2本口岸有條件進(jìn)行分類鑒定和病原體檢測(cè)（單種蚊蟲30只以上開展病原體檢測(cè)）的，應(yīng)在本口岸及時(shí)完成；本口岸無法進(jìn)行分類鑒定和病原體檢測(cè)的，制作標(biāo)本留存后按規(guī)范保存并送樣至直屬局檢測(cè)。2.3.3新種和新記錄種等疑難標(biāo)本的鑒定、新發(fā)傳染病病原體的確證和陽性樣品的復(fù)核按就近原則送中國(guó)檢科院或廣東局P3實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行鑒定、檢測(cè)，需進(jìn)一步鑒定和復(fù)核檢測(cè)的標(biāo)本和樣品送軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所進(jìn)行鑒定、檢測(cè)。3任務(wù)3.1對(duì)象和內(nèi)容以鼠類及體表寄生蟲（蚤、蜱、螨等）、蚊類和游離蜱類（僅限黑龍江、吉林、內(nèi)蒙古、新疆、西藏、云南和廣西與周邊國(guó)家有邊境土地接壤的陸路口岸）為主，掌握它們?cè)诳诎秴^(qū)域的種屬構(gòu)成、種群分布、季節(jié)消長(zhǎng)情況及其攜帶病原體情況。3.2范圍全國(guó)正式對(duì)外開放口岸（包括口岸周邊400米環(huán)境）、陸路口岸周邊邊境線。3.3時(shí)間3.3.1監(jiān)測(cè)時(shí)間調(diào)查周期為1個(gè)監(jiān)測(cè)年度，鼠類及體表寄生蟲調(diào)查時(shí)間為2014年5月-2015年4月；蚊蟲調(diào)查時(shí)間為2014年5月-10月，蜱類調(diào)查時(shí)間為2014年5月-9月。監(jiān)測(cè)頻次：鼠類每月1次（中旬），蚊蟲和蜱類每月調(diào)查2次（分上、下旬進(jìn)行），每次的監(jiān)測(cè)時(shí)間為連續(xù)3天（誘卵器法除外）。本底調(diào)查頻次：鼠類、蚊蟲和蜱類每月至少開展1次。3.3.2病原體檢測(cè)時(shí)間病原體檢測(cè)每三個(gè)月為一個(gè)期限，即2014年7月、2014年10月、2015年1月和2015年4月底前應(yīng)分別完成此前三個(gè)月中捕獲的醫(yī)學(xué)媒介生物樣品的病原體檢測(cè)工作。3.4本底調(diào)查和監(jiān)測(cè)方法3.4.1鼠類：鼠類及體表寄生蟲采用夾夜法、籠捕法或粘鼠板法進(jìn)行本底調(diào)查和監(jiān)測(cè)。本底調(diào)查可更換誘餌，覆蓋口岸所有地區(qū)；監(jiān)測(cè)不得隨意更換誘餌。3.4.2蚊類：3.4.2.1各口岸成蚊監(jiān)測(cè)采用CO2誘蚊燈法（誘集時(shí)間為日落前后1小時(shí)）；云南、廣東、廣西、浙江、江蘇、深圳、珠海、廈門、福建和海南局所轄各口岸還應(yīng)采用誘卵器法監(jiān)測(cè)白紋伊蚊和埃及伊蚊。3.4.2.2蚊類本底調(diào)查除采用CO2誘蚊燈和誘卵器法外，還可選用帳誘法、幼蟲吸管法和幼蟲勺捕法等方法，調(diào)查時(shí)間盡可能覆蓋全天。3.4.3游離蜱監(jiān)測(cè)采用人工小時(shí)布旗法。如有條件游離蜱還可采用宿主動(dòng)物巢穴采集法和洞干蜱采集法開展本底調(diào)查。相關(guān)調(diào)查方法詳見《口岸醫(yī)學(xué)媒介生物監(jiān)測(cè)方法》（附件1），監(jiān)測(cè)記錄表格請(qǐng)參考《口岸醫(yī)學(xué)媒介生物調(diào)查記錄表》（附件2，記錄表填寫編號(hào)由直屬局統(tǒng)一編制）3.5醫(yī)學(xué)媒介生物樣品的處理捕獲的醫(yī)學(xué)媒介生物樣品的處理方法，詳見《口岸醫(yī)學(xué)媒介生物標(biāo)本前處理、保存和送樣規(guī)范》（附件3）3.6醫(yī)學(xué)媒介生物攜帶病原體檢測(cè)本次專項(xiàng)調(diào)查開展以下醫(yī)學(xué)媒介生物攜帶病原體檢測(cè)項(xiàng)目：1．鼠類：鼠疫菌、漢坦病毒、伯氏疏螺旋體。2．蚊類：甲病毒屬、黃病毒屬、瘧原蟲。3．蜱類：森林腦炎病毒、伯氏疏螺旋體。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法詳見《口岸醫(yī)學(xué)媒介生物攜帶病原檢測(cè)方法》（附件4）。為節(jié)約有限的檢測(cè)資源，病原體檢測(cè)項(xiàng)目應(yīng)因地制宜有所側(cè)重，具體選擇范圍請(qǐng)參考《全國(guó)口岸重要病媒生物攜帶病原體檢測(cè)范圍》（附件5）4報(bào)告4.1監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)上報(bào)。各口岸每次監(jiān)測(cè)后應(yīng)在72小時(shí)內(nèi)采用“醫(yī)學(xué)媒介生物信息報(bào)告系統(tǒng)”將監(jiān)測(cè)情況、監(jiān)測(cè)結(jié)果及照片（醫(yī)學(xué)媒介生物監(jiān)測(cè)現(xiàn)場(chǎng)照片、捕獲的醫(yī)學(xué)媒介生物照片和標(biāo)本照片各1張。）等數(shù)據(jù)上報(bào)總局衛(wèi)生司。4.2年度總結(jié)報(bào)告。各直屬局應(yīng)當(dāng)對(duì)所屬口岸2014年5月-10月的監(jiān)測(cè)資料進(jìn)行匯總、分析、評(píng)估，形成總結(jié)報(bào)告上報(bào)總局?？偨Y(jié)報(bào)告的內(nèi)容包括：口岸基本情況、口岸醫(yī)學(xué)媒介生物種屬情況、媒介攜帶病原體檢測(cè)情況以及對(duì)發(fā)現(xiàn)媒介新種、檢出攜帶病原體陽性、種屬構(gòu)成發(fā)生明顯改變等情況進(jìn)行傳染病傳播風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、應(yīng)對(duì)措施建議等。4.3信息專報(bào)。對(duì)于在監(jiān)測(cè)捕獲并經(jīng)鑒定為外來物種的，或者媒介攜帶病原體檢測(cè)發(fā)現(xiàn)當(dāng)?shù)匚匆妶?bào)道的病原微生物時(shí)，各直屬局應(yīng)當(dāng)按照《國(guó)境口岸傳染病疫情信息報(bào)告及發(fā)布管理規(guī)定》的要求，在24小時(shí)內(nèi)上報(bào)總局；檢測(cè)結(jié)果為特別關(guān)注傳染病病原體陽性的，應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)上報(bào)總局。5研判5.1風(fēng)險(xiǎn)研判根據(jù)醫(yī)學(xué)媒介生物的監(jiān)測(cè)結(jié)果，結(jié)合口岸所在地及接壤國(guó)家或地區(qū)的傳染病疫情，確定重點(diǎn)監(jiān)測(cè)的媒介種類、重點(diǎn)監(jiān)測(cè)口岸或區(qū)域，由總局組織全國(guó)口岸醫(yī)學(xué)媒介生物應(yīng)急監(jiān)控技術(shù)協(xié)作組專家論證。5.2研判結(jié)果的應(yīng)用5.2.1重點(diǎn)對(duì)象風(fēng)險(xiǎn)控制措施制定口岸重點(diǎn)監(jiān)測(cè)醫(yī)學(xué)媒介生物及其攜帶病原體的名錄，實(shí)施動(dòng)態(tài)管理，將重點(diǎn)對(duì)象的密度控制在不足為害的水平；遇有重點(diǎn)監(jiān)測(cè)醫(yī)學(xué)媒介生物密度異常增高，應(yīng)及時(shí)開展動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，通過擴(kuò)大監(jiān)測(cè)區(qū)域、增加監(jiān)測(cè)頻次等方式查找醫(yī)學(xué)媒介生物密度增高原因，并采取相應(yīng)的控制措施。周邊國(guó)家或地區(qū)有蟲媒傳染病疫情流行時(shí)，應(yīng)及時(shí)發(fā)布相關(guān)蟲媒傳染病疫情警示通告，立即開展與蟲媒傳染病相關(guān)的醫(yī)學(xué)媒介生物的監(jiān)測(cè)；并重點(diǎn)查驗(yàn)來自疫區(qū)出入境交通工具及其貨物攜帶的媒介生物。5.2.2重點(diǎn)口岸或區(qū)域風(fēng)險(xiǎn)控制措施重點(diǎn)口岸或區(qū)域結(jié)合醫(yī)學(xué)媒介生物生態(tài)習(xí)性及口岸地理、環(huán)境等特點(diǎn)，制定相關(guān)口岸或區(qū)域醫(yī)學(xué)媒介生物控制方案，采取控制措施，并根據(jù)實(shí)際需要開展雙（多）邊合作監(jiān)測(cè)重點(diǎn)項(xiàng)目。6保障6.1能力保障對(duì)口岸一線衛(wèi)生檢疫人員開展醫(yī)學(xué)媒介生物監(jiān)測(cè)（包括標(biāo)本制作與鑒定）及攜帶病原體檢測(cè)技術(shù)骨干培訓(xùn)，確保本次醫(yī)學(xué)媒介生物本底監(jiān)測(cè)工作隊(duì)伍能力、方法器具保障到位，監(jiān)測(cè)工作質(zhì)量和數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、有效。6.2質(zhì)量控制6.2.1口岸檢驗(yàn)檢疫機(jī)構(gòu)應(yīng)當(dāng)采用本方案規(guī)定的監(jiān)測(cè)方法，以確保全國(guó)口岸本底監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)的可比性。對(duì)各口岸在本底監(jiān)測(cè)中發(fā)現(xiàn)的新種、新記錄種、稀有種等醫(yī)學(xué)媒介生物，應(yīng)留存足夠數(shù)量的標(biāo)本，以備總局委派權(quán)威專家對(duì)留存標(biāo)本進(jìn)行復(fù)核。6.2.2各實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)論為陽性的樣本，送中國(guó)檢科院衛(wèi)檢所媒介實(shí)驗(yàn)室或廣東局P3實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行復(fù)檢；需進(jìn)一步復(fù)核的樣本送軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所進(jìn)行檢測(cè)。承擔(dān)媒介攜帶病原體復(fù)檢任務(wù)的實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)當(dāng)妥善保存病原體檢測(cè)陽性樣本。6.3核查措施6.3.1督導(dǎo)檢查。為確保質(zhì)量，提高醫(yī)學(xué)媒介生物監(jiān)測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和真實(shí)性，總局將隨機(jī)抽取一定比例的口岸，派檢查組對(duì)監(jiān)測(cè)、檢測(cè)質(zhì)量控制進(jìn)行檢查，檢查內(nèi)容包括監(jiān)測(cè)工具、采集記錄、醫(yī)學(xué)媒介生物標(biāo)本、鑒定記錄、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員能力等內(nèi)容，對(duì)于存在弄虛作假、謊報(bào)結(jié)果等惡性行為，將在全系統(tǒng)予以通報(bào)。6.3.2績(jī)效考核數(shù)據(jù)上報(bào)應(yīng)遵循真實(shí)、準(zhǔn)確、完整和及時(shí)原則，要建立嚴(yán)格的結(jié)果審核復(fù)核制度并認(rèn)真執(zhí)行，對(duì)出現(xiàn)弄虛作假、瞞報(bào)、漏報(bào)、遲報(bào)、誤報(bào)等行為，將扣除直屬局績(jī)效考核評(píng)分。7附件附件1口岸病媒生物監(jiān)測(cè)方法附件2口岸醫(yī)學(xué)媒介生物調(diào)查記錄表附件3口岸醫(yī)學(xué)媒介生物標(biāo)本前處理、保存和送樣規(guī)范附件4口岸醫(yī)學(xué)媒介生物攜帶病原檢測(cè)方法附件5全國(guó)口岸重要病媒生物攜帶病原體檢測(cè)范圍附件1口岸醫(yī)學(xué)媒介生物監(jiān)測(cè)方法1.鼠類及體表寄生蟲監(jiān)測(cè)方法1.1鼠類監(jiān)測(cè)方法1.1.1籠捕法參見《國(guó)境口岸鼠類監(jiān)測(cè)規(guī)程》（SN/T1240-2003）5.2（c）1.1.2鼠夾法和粘鼠板法參見《病媒生物監(jiān)測(cè)方法鼠類》（GB/T23798-2009）3.1和3.21.2鼠類體表寄生蟲監(jiān)測(cè)方法1.2.1蚤類監(jiān)測(cè)方法參見《國(guó)境口岸蚤類監(jiān)測(cè)規(guī)程》（SN/T1292-2003）附錄C1.2.2蜱類監(jiān)測(cè)方法參見《國(guó)境口岸蜱類監(jiān)測(cè)規(guī)程》（SN/T1293-2003）附錄A1.2.3螨類監(jiān)測(cè)方法參見《國(guó)境口岸螨類監(jiān)測(cè)規(guī)程》（SN/T1339-2003）附錄A2.蚊類監(jiān)測(cè)方法蚊類監(jiān)測(cè)方法參見《病媒生物監(jiān)測(cè)方法蚊類》（GB/T23797-2009）2.1、2.2、2.6、2.82.10、2.11和2.133..蜱類監(jiān)測(cè)方法此處指游離蜱，鼠帶蜱類調(diào)查與鼠調(diào)查一起進(jìn)行。調(diào)查時(shí)一般每月分上、下旬定期調(diào)查。3.1游離蜱布旗法和宿主動(dòng)物巢穴采集法參見《國(guó)境口岸蜱類監(jiān)測(cè)規(guī)程》（SN/T1293-2003）附錄A3.2洞干蜱采集法：在調(diào)查區(qū)內(nèi)找鼠洞洞口，用探蚤棒伸入洞內(nèi)，取出探蚤棒采集粘附的蜱類，帶回實(shí)驗(yàn)室檢查、鑒定、計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)。蜱密度=（捕獲蜱數(shù)/檢查洞穴數(shù)）單位：只/洞附件2口岸醫(yī)學(xué)媒介生物調(diào)查記錄表表1.口岸鼠類監(jiān)測(cè)現(xiàn)場(chǎng)記錄表（現(xiàn)場(chǎng)采樣人員填寫）表2.鼠類鑒定檢測(cè)記錄表（鑒定檢測(cè)人員填寫）表3.口岸成蚊監(jiān)測(cè)現(xiàn)場(chǎng)記錄表（現(xiàn)場(chǎng)采樣人員填寫）表4.口岸蚊蟲卵監(jiān)測(cè)記錄表（現(xiàn)場(chǎng)采樣人員填寫）表5.口岸蚊幼蟲監(jiān)測(cè)現(xiàn)場(chǎng)記錄表（現(xiàn)場(chǎng)采樣人員填寫）表6.口岸蜱類監(jiān)測(cè)現(xiàn)場(chǎng)記錄表（現(xiàn)場(chǎng)采樣人員填寫）表7.新記錄物種表（直屬局衛(wèi)生處填寫）表1口岸鼠類監(jiān)測(cè)現(xiàn)場(chǎng)記錄表監(jiān)測(cè)方法：監(jiān)測(cè)時(shí)間：年月日—年月日編號(hào)生境類型監(jiān)測(cè)用器械數(shù)有效器械數(shù)捕獲總數(shù)（只）鼠密度合計(jì)天氣：風(fēng)速：m/s溫度：℃濕度：％海拔高度米監(jiān)測(cè)單位：監(jiān)測(cè)人：填報(bào)日期：年月日表2.鼠類鑒定檢測(cè)記錄表采集時(shí)間：采集地點(diǎn)：編號(hào)生境種類性別年齡體重g體長(zhǎng)cm耳高cm右后足長(zhǎng)cm體表寄生蟲數(shù)量病原體檢測(cè)如檢測(cè)結(jié)果為陽性，應(yīng)注明檢測(cè)方法成幼蜱蚤螨鼠疫菌漢坦病毒伯氏疏螺旋體陰性陽性陰性陽性陰性陽性監(jiān)測(cè)單位：解剖制作者：表3口岸成蚊監(jiān)測(cè)現(xiàn)場(chǎng)記錄表監(jiān)測(cè)方法：監(jiān)測(cè)時(shí)間：年月日—年月日編號(hào)監(jiān)測(cè)地點(diǎn)生境類型采集開始時(shí)間采集結(jié)束時(shí)間監(jiān)測(cè)用器械數(shù)捕獲數(shù)量（只）密度計(jì)算單位蚊密度備注合計(jì)天氣：風(fēng)速：m/s溫度：℃濕度：％海拔高度米監(jiān)測(cè)單位：監(jiān)測(cè)人：填報(bào)日期：年月日表4口岸蚊蟲卵監(jiān)測(cè)記錄表監(jiān)測(cè)方法：監(jiān)測(cè)時(shí)間：年月日—年月日編號(hào)蚊蟲種類：誘卵環(huán)境備注誘卵器數(shù)卵陽性誘卵器數(shù)誘卵指數(shù)合計(jì)天氣：風(fēng)速：m/s溫度：℃濕度：％海拔高度米監(jiān)測(cè)單位：監(jiān)測(cè)人：填報(bào)日期：年月日表5口岸蚊幼蟲監(jiān)測(cè)現(xiàn)場(chǎng)記錄表監(jiān)測(cè)方法：監(jiān)測(cè)時(shí)間：年月日—年月日編號(hào)監(jiān)測(cè)地點(diǎn)水體類型采集時(shí)間（時(shí)、分）監(jiān)測(cè)用器械數(shù)捕獲數(shù)量（只）密度計(jì)算單位蚊幼蟲密度（單位）備注合計(jì)天氣：風(fēng)速：m/s溫度：℃濕度：％海拔高度米監(jiān)測(cè)單位：監(jiān)測(cè)人：填報(bào)日期：年月日表6口岸蜱類監(jiān)測(cè)現(xiàn)場(chǎng)記錄表監(jiān)測(cè)方法：監(jiān)測(cè)時(shí)間：年月日—年月日編號(hào)監(jiān)測(cè)地點(diǎn)生境類型監(jiān)測(cè)人員姓名采集開始時(shí)間采集結(jié)束時(shí)間捕獲數(shù)量（只）成蜱若蜱幼蜱合計(jì)天氣：風(fēng)速：m/s溫度：℃濕度：％海拔高度米監(jiān)測(cè)單位：填表人：填報(bào)日期：年月日表7新記錄種、新種登記表生境及地點(diǎn)日期種名采集方法數(shù)量采集人鑒定人、復(fù)核人科屬種拉丁文名稱天氣：風(fēng)速：m/s溫度：℃濕度：％海拔高度米監(jiān)測(cè)單位：填報(bào)人：填報(bào)日期：年月日附件3口岸醫(yī)學(xué)媒介生物樣品前處理、保存和送樣規(guī)范一、口岸醫(yī)學(xué)媒介生物鑒定檢測(cè)樣品前處理規(guī)范（一）鼠類及體表寄生蟲1準(zhǔn)備工作1.1穿戴防護(hù)用具：防蚤工作服、乳膠手套、防生口罩、帽子、防護(hù)鏡。1.2器械：白色方盤、固定板、鑷子、手術(shù)剪、紗布、消毒試管和廣口瓶、小塑料樣品袋、3%的來蘇爾、75%酒精、棉球、標(biāo)簽、標(biāo)本采集專用工具等。2鼠類樣品采集：2.1無菌及生物安全要求2.1.1無菌操作：采集血液和組織樣品過程要求鼠體表消毒并需使用已消毒或一次性無菌器材，血液和組織樣品需保存在無菌容器內(nèi)。2.1.2生物安全防護(hù)：鼠類解剖、采集血液和組織樣品時(shí)需作好個(gè)人生物安全防護(hù)，整個(gè)解剖過程應(yīng)在生物安全柜（II—2A及以上級(jí)別）中進(jìn)行（無生物安全柜的單位，應(yīng)在良好通風(fēng)的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，并保持實(shí)驗(yàn)操作人員處于上風(fēng)位置）做到防叮咬、防刺傷、防氣溶膠傳播等，如穿防蚤隔離衣、鞋、膠手套、防生口罩，實(shí)驗(yàn)室需配備硬質(zhì)防穿刺的廢物容器。2.2活鼠樣本處理2.2.1外觀檢測(cè)：將鼠標(biāo)本置方形手術(shù)盤的解剖板上，檢測(cè)鼠體體重（g）、體長(zhǎng)（mm）、尾長(zhǎng)(mm)、耳高(mm)、后足長(zhǎng)(mm)、性別(♀♂)、鑒定鼠種，填寫記錄表。2.2.2血樣采集：在密封塑料袋內(nèi)放置適量氯仿或乙醚棉球，將裝有活鼠的鼠袋放入，經(jīng)過一定蒸熏時(shí)間，使鼠類處于淺昏迷還有心跳的狀態(tài)后取出；采血方法參見《病媒生物感染病原體采樣規(guī)程鼠類》（GB/T28940-2012）2.2.3血清處理:采血后編號(hào)登記，先置放室溫1個(gè)小時(shí)，然后3000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，取上清液。2.2.4臟器采集：臟器采集：按皮下、腹腔、胸腔的順序解剖，采取膀胱、肝、脾、肺和心臟等，腹腔和胸腔臟器采集時(shí)應(yīng)更換無菌剪、鑷。2.3死亡的鼠類：2.3.1鼠體外觀檢測(cè)：同2.2.1；2.3.2血樣采集：將鼠類從鼠袋中取出，釘在解剖板上（解剖板放在手術(shù)盤內(nèi)，下墊紗布及3%的來蘇爾浸泡液），用75%酒精棉球?qū)⑹篌w消毒清洗一遍，然后沿著腹正中線剪開（皮下至肌肉組織），找到心臟后剪開，立即用消毒試驗(yàn)濾紙片沾心臟血，沾血面積應(yīng)不少于1cm×4cm，然后放入消毒試管，編號(hào)登記；2.3.3臟器采樣：同2.2.4；若動(dòng)物腐敗或鼠尸殘缺不全時(shí)，通常采取股骨髓檢查。先剝?nèi)ス峭饧∪?，消毒后剪斷股骨，用白金耳取骨髓。每個(gè)臟器存放一個(gè)小塑料袋內(nèi)，封口后編號(hào)和登記。3.鼠體表寄生蚤、螨、蜱類標(biāo)本采集：鼠類采血和解剖采樣前應(yīng)先撿蚤、螨、蜱類。打開經(jīng)過氯仿或乙謎蒸熏昏迷的鼠的鼠袋，將鼠倒進(jìn)白色的深搪瓷盆內(nèi)。先把鼠袋慢慢翻開，隨翻隨撿，將寄生蟲放進(jìn)指形管中；然后一只手用大鑷子夾持鼠體，另一手用梳子梳鼠體蚤、螨、蜱，由鼠頭部往后梳，再由尾部向前梳，特別要注意頸部、腋窩和股骨內(nèi)側(cè)。將刷出的鼠體外寄生蟲蚤、螨、蜱，用毛筆沾75%酒精或鑷子分類撿入指形管（內(nèi)裝75%酒精）；再將用鉛筆書寫的標(biāo)簽放至指形管中，用脫脂棉塞口。將其存放于內(nèi)裝75%酒精的大磨口瓶中。（二）蚊類和蜱類1.分類鑒定用蚊、蜱的標(biāo)本采集：采用氯仿、乙醚、冷凍滅活，按不同類別媒介分別置于干凈的白色方盤上分類。蜱類根據(jù)標(biāo)本完整性要求，挑選較理想的標(biāo)本分別按時(shí)間、地點(diǎn)分類撿入指形管內(nèi)（內(nèi)裝75%酒精），再將用鉛筆書寫的標(biāo)簽放至指形管中，用脫脂棉塞口。將其存放于內(nèi)裝75%酒精的大磨口瓶中。蚊類用雙針法插于標(biāo)本盒（或指形管）內(nèi)，加貼標(biāo)簽和登記，室溫干燥保存(盒內(nèi)放置樟腦丸)。2.病原檢測(cè)用蚊、蜱樣品采集：2.1蚊樣本采集：蚊樣本于-25℃冷凍30分鐘，取出后放于冰上分類鑒定，按采集批次、地點(diǎn)和蚊種分組，30只/組（不足30只也歸于一組），-70℃或液氮保存2.2蜱樣本采集：蜱樣本采集分類鑒定，立即密閉分裝冷凍處死，-70℃或液氮保存?zhèn)錂z。二、醫(yī)學(xué)媒介生物標(biāo)本制作規(guī)范參見《醫(yī)學(xué)媒介生物標(biāo)本采集、制作及保存規(guī)程》（SN/T1876-2007）三、口岸醫(yī)學(xué)媒介生物鑒定類樣品保存運(yùn)送規(guī)范參見《口岸醫(yī)學(xué)媒介生物鑒定檢測(cè)樣品保存運(yùn)送細(xì)則》四、口岸醫(yī)學(xué)媒介生物檢測(cè)類樣品保存運(yùn)送規(guī)范醫(yī)學(xué)媒介生物攜帶病原體的檢測(cè)樣本運(yùn)送必須遵守《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例（中華人民共和國(guó)國(guó)務(wù)院令第424號(hào)）》和《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定（中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部令第45號(hào)）》的要求。運(yùn)送樣本的容器或包裝材料應(yīng)當(dāng)達(dá)到國(guó)際民航組織《危險(xiǎn)物品航空安全運(yùn)輸技術(shù)細(xì)則》（Doc9284包裝說明PI602）規(guī)定的A類包裝標(biāo)準(zhǔn)（圖13-2），符合防水、防破損、防外泄、耐高溫、耐高壓的要求，在外包裝的外表面應(yīng)按《危險(xiǎn)貨物包裝標(biāo)志（GB190-2009）》的要求貼上統(tǒng)一的標(biāo)識(shí)，運(yùn)送疑似鼠疫等高致病性病原微生物樣本時(shí)應(yīng)按《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》加貼標(biāo)識(shí)。1.鼠樣本送檢1.1活鼠送檢：活鼠連同鼠籠置于捆扎袋口的鼠袋內(nèi)，由專人送檢。1.2鼠尸送檢：新鮮鼠尸如不能采集血液和組織樣品需立即送檢，用隔水防滲材料密封，置于生物安全運(yùn)輸箱中由專人送檢（不能與冰凍冷媒直接接觸，避免鼠尸冰凍）；如已無法采集血液或腐敗的鼠尸需立即低溫冰凍處理后，用隔水防滲材料密封，用浸有消毒液的棉花包裹，裝入特制的容器內(nèi)，置于生物安全運(yùn)輸箱中由專人低溫送檢。1.3鼠血清及組織樣本送檢：血清及組織樣本必須經(jīng)隔水防滲密封處理，用浸有消毒液的棉花包裹，裝入特制的容器內(nèi)，管口朝上，不可倒置，使用液氮罐或生物安全運(yùn)輸箱（較短時(shí)間）低溫送檢，跨省運(yùn)送時(shí)推薦使用干冰，并確保樣品送到實(shí)驗(yàn)室時(shí)干冰仍覆蓋樣品。2.蚊樣本送檢：置于液氮罐或生物安全運(yùn)輸箱（較短時(shí)間）低溫送檢，跨省運(yùn)送時(shí)推薦使用干冰，并確保樣品送到實(shí)驗(yàn)室時(shí)干冰仍覆蓋樣品。3.蜱樣本送檢：置于液氮罐或生物安全運(yùn)輸箱（較短時(shí)間）低溫送檢，跨省運(yùn)送時(shí)推薦使用干冰，并確保樣品送到實(shí)驗(yàn)室時(shí)干冰仍覆蓋樣品。詳見《醫(yī)學(xué)媒介生物（病原體檢測(cè)用）樣本保存及運(yùn)送細(xì)則》醫(yī)學(xué)媒介生物（病原體檢測(cè)用）樣本保存及運(yùn)送細(xì)則一、媒介生物樣本保存（一）蚊類采集到的蚊類標(biāo)本，直接放入—20℃或者—30℃冰箱中冷凍25-30分鐘（切勿使用乙醚、氯仿等麻醉劑，以保證樣本病原體檢測(cè)的準(zhǔn)確性），取出標(biāo)本放在冰塊（可用淺底白瓷盤預(yù)先冷凍冰塊）上（解剖鏡下）進(jìn)行分類鑒定。分裝原則為：中華按蚊等中大型蚊蟲每30只；淡色庫(kù)蚊、白蚊伊蚊等小型蚊蟲每30-100只裝入1.5mL或者2.0mL離心管中；放入液氮或—80℃低溫冰箱中保存。液氮中標(biāo)本的保存時(shí)間不超過6個(gè)月；—80℃（二）鼠類采集鼠類的標(biāo)本包括心臟、肝臟、脾臟、肺臟、膀胱、血液。每種臟器標(biāo)本（黃豆大小體積即可）應(yīng)分裝在不同的1.5mL離心管中或者0號(hào)封口袋中。血液標(biāo)本采集為血清或血紙條方式。鼠體寄生蟲的采集應(yīng)在活鼠經(jīng)過乙醚或者氯仿麻醉致死后采集。原則上單個(gè)鼠臟器標(biāo)本分裝單個(gè)試管，可以保存在液氮或者—80℃（三）蜱類可以采集鼠體及其他動(dòng)物體表寄生的蜱類（每只動(dòng)物采集蜱類樣本單獨(dú)保存），以及野外游離蜱類，分類鑒定并做好相應(yīng)記錄后將蜱類標(biāo)本放入液氮或—80℃二、標(biāo)本編號(hào)原則所有標(biāo)本的編號(hào)均可依照下列方式：地名拼音的縮寫加上采樣日期后加編四級(jí)號(hào)碼，比如在北京朝陽口岸采集的蚊類第一個(gè)標(biāo)本可以編號(hào)為（2014年4月23日三、樣本的運(yùn)送（一）針插標(biāo)本可以使用指管固定后直接發(fā)送快件，酒精浸泡后蜱類和其他標(biāo)本（低溫保存的）可以倒掉酒精后使用干冰快遞（條件不足時(shí)，也可以使用冰袋保存運(yùn)送，但應(yīng)在2天內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室）。（二）鼠類的形態(tài)標(biāo)本制作后，和頭骨（使用小的瓶子或者有機(jī)玻璃盒子單獨(dú)盛放）一起用報(bào)紙包裝后快遞即可。注意保存完成的采樣記錄和編號(hào)。（三）擬進(jìn)行醫(yī)學(xué)媒介生物攜帶病原體檢測(cè)的標(biāo)本，應(yīng)使用冷鏈運(yùn)送方式送達(dá)相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室。四、醫(yī)學(xué)媒介生物攜帶病原體核酸檢測(cè)樣本的保存和運(yùn)送方法所有媒介標(biāo)本病原體分子生物學(xué)的檢測(cè)主要包括2個(gè)方面。RNA為模板的檢測(cè)（包括大部分病毒的）和DNA為模板的檢測(cè)（包括細(xì)菌、立克次體等），主要是樣本的保存方式的不同，涉及到RNA模板的檢測(cè)，樣本一定要在4小時(shí)以內(nèi)保存到液氮或者—80℃低溫冰箱中保存，在6個(gè)月內(nèi)送檢；涉及DNA模板的檢測(cè)，樣本盡可能保存在液氮或者—80℃低溫冰箱中，也可以使用—需檢測(cè)病原體名稱樣本保存方式樣本運(yùn)送方式對(duì)應(yīng)的備檢樣本鼠疫菌、伯氏疏螺旋體、瘧原蟲—20℃冷鏈運(yùn)送（使用冰袋運(yùn)送應(yīng)該2天內(nèi)到達(dá)實(shí)驗(yàn)室）鼠疫菌鼠血清、肝、肺、脾、骨髓、寄生蚤。伯氏疏螺旋體鼠肝、蜱、膀胱；游離蜱、寄生蜱。瘧原蟲蚊蟲標(biāo)本（按蚊）。漢坦病毒、甲病毒屬、黃病毒屬、布尼亞病毒屬、森林腦炎病毒液氮或者—80℃盡量使用液氮或干冰運(yùn)送（干冰以完全覆蓋送檢樣本為準(zhǔn)，3天內(nèi)到達(dá)實(shí)驗(yàn)室）漢坦病毒鼠肺、肝、脾。甲病毒屬蚊蟲標(biāo)本黃病毒屬蚊蟲標(biāo)本森林腦炎病毒游離蜱。五、醫(yī)學(xué)媒介生物攜帶病原體的其他檢測(cè)方法的樣本的保存和運(yùn)送方法使用血清學(xué)或免疫學(xué)方法檢測(cè)醫(yī)學(xué)媒介生物攜帶病原體的標(biāo)本，根據(jù)其所使用的檢測(cè)方法，選擇相應(yīng)的標(biāo)本保存和運(yùn)送方法。檢測(cè)鼠疫抗體（含使用膠體金方法）：樣本為鼠血清，采集分離鼠血清后，應(yīng)將樣本保存在-20℃檢測(cè)鼠疫抗原：采集鼠類血清和臟器后，應(yīng)將樣本保存在在-20℃附件4口岸醫(yī)學(xué)媒介生物攜帶病原檢測(cè)方法1.鼠類攜帶病原體檢測(cè)1.1鼠疫菌1.1.1生物安全：鼠疫是一種自然疫源性疾病，是以發(fā)病急、傳播快、病死率高、傳染性強(qiáng)為特征的烈性傳染病，是《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》規(guī)定的甲類傳染病。開展鼠疫檢測(cè)工作應(yīng)按照《國(guó)境口岸鼠疫檢驗(yàn)規(guī)程》（SN/T1280-2003）附錄A要求，嚴(yán)格執(zhí)行生物安全操作。1.1.2血清學(xué)監(jiān)測(cè)：按照《國(guó)境口岸鼠疫疫情監(jiān)測(cè)規(guī)程》（SN/T1188-2003）6.2.5要求開展間接血凝試驗(yàn)檢驗(yàn)鼠疫F1抗體，不明原因死鼠和腐敗材料應(yīng)做反向血凝試驗(yàn)檢驗(yàn)鼠疫F1抗原。1.1.3核酸檢測(cè)：可按照《國(guó)境口岸鼠攜帶鼠疫菌和漢坦病毒快速檢測(cè)方法》（SN/T2616-2010）要求對(duì)捕獲鼠類進(jìn)行核酸檢測(cè)。1.2漢坦病毒1.2.1鼠肺抗原和血清抗體檢測(cè)：免疫熒光法檢測(cè)鼠肺漢坦病毒抗原，或可按照《》（SN/T2616-2010）用雙抗原夾心ELISA檢測(cè)鼠漢坦病毒抗體。1.2.2核酸檢測(cè)和序列測(cè)定：對(duì)免疫熒光陽性鼠肺標(biāo)本，可按照《》（SN/T2616-2010）進(jìn)行核酸檢測(cè)。1.2.3病毒分離：有條件的實(shí)驗(yàn)室可開展病毒分離，或送到中國(guó)檢科院、廣東局衛(wèi)檢實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病毒分離。1.3伯氏疏螺旋體1.3.1血清學(xué)檢測(cè)：鼠血清用間接免疫熒光抗體法（IFA）或酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)抗伯氏疏螺旋體抗體。1.3.2病原學(xué)檢測(cè)：鼠臟器（心、腎）用BSK培養(yǎng)基分離培養(yǎng)，單克隆抗體鑒定。1.3.3核酸檢測(cè)：可按照《蜱類攜帶森林腦炎病毒、伯氏疏螺旋體、貝氏柯克斯體PCR檢測(cè)方法》（SN/T3395-2012）檢測(cè)鼠臟器（膀胱、心、腎）中伯氏疏螺旋體核酸。2.蚊類攜帶病原體檢測(cè)先檢測(cè)蚊類攜帶黃病毒屬和甲病毒屬情況，檢測(cè)結(jié)果若為陽性再通過檢測(cè)確定具體攜帶病原體種類2.1黃病毒屬和甲病毒屬的檢測(cè)根據(jù)實(shí)驗(yàn)室儀器配置情況，使用RT-PCR方法檢測(cè)，陽性樣本送省局或廣東局P3實(shí)驗(yàn)室或中國(guó)檢科院進(jìn)行病毒分離。2.1.1引物黃病毒屬引物：上游引物FlaP1：TACAACATG