黑龍江生物科技職業(yè)學(xué)院

生物制藥技術(shù)生物分離技術(shù)主講人：張愛華再用CTAB溴化十六烷基三甲銨絡(luò)合法進(jìn)一步精制得銀耳多糖純品并共17頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁!

實訓(xùn)七、銀耳多糖的制備及鑒定

實驗原理

2材料用具

3操作方法

4目的要求

2155注意事項

再用CTAB溴化十六烷基三甲銨絡(luò)合法進(jìn)一步精制得銀耳多糖純品并共17頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁!目的要求了解銀耳多糖制備的基本原理

掌握糖類物質(zhì)提取純化的基本操作技術(shù)

再用CTAB溴化十六烷基三甲銨絡(luò)合法進(jìn)一步精制得銀耳多糖純品并共17頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁!原理

銀耳多糖主要成分為酸性雜多糖、中性雜多糖、胞壁多糖、胞外多糖及酸性低聚糖五類，不含核酸、蛋白質(zhì)類物質(zhì)。

可利用銀耳子實體經(jīng)水浸泡搗碎，酶浸提，乙醇沉析分離可制得銀耳多糖粗品，再用CTAB(溴化十六烷基三甲銨)絡(luò)合法進(jìn)一步精制得銀耳多糖純品并進(jìn)行多糖的鑒定。

再用CTAB溴化十六烷基三甲銨絡(luò)合法進(jìn)一步精制得銀耳多糖純品并共17頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁!試劑

（1）1％復(fù)合酶制劑(含果膠酶、纖維素酶和中性蛋白酶食品級復(fù)合酶)；（2）2％溴化十六烷基三甲銨（CTAB）配制：取2gCTAB溶于100mL蒸餾水中，搖勻備用；（3）α-萘酚配制：α-萘酚5g溶于95％乙（4）5%三氯乙酸-正丁醇溶液；（5）2mol／L的氫氧化鈉溶液；（6）0.5％甲苯胺乙醇溶液；（7）2mol／L氯化鈉溶液；（8）2mol／L鹽酸溶液；（9）活性炭；硅藻土。（10）1％融菌酶制劑；（11）無水乙醇；（12）濃硫酸；（13）乙醚。再用CTAB溴化十六烷基三甲銨絡(luò)合法進(jìn)一步精制得銀耳多糖純品并共17頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁!操作方法2mol／L鹽酸溶液調(diào)pH至6.3

加入1％復(fù)合酶制劑

50℃下酶促反應(yīng)40min

銀耳漿液

2.酶浸提

80℃滅酶，保溫浸提約1.5h

80℃水浴濃縮

再用CTAB溴化十六烷基三甲銨絡(luò)合法進(jìn)一步精制得銀耳多糖純品并共17頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁!操作方法2mol／L的氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7

搖勻

抽濾

3.多糖的沉淀（脫色、透析

）

下層清液備用

加1％活性炭80℃加熱15min脫色

濾液扎袋流水透析12h

80℃水浴濃縮抽濾

再用CTAB溴化十六烷基三甲銨絡(luò)合法進(jìn)一步精制得銀耳多糖純品并共17頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁!操作方法4.精制（一）

取粗品1g

溶于100mL水中

攪拌靜置2h2％CTAB

濾液

離心除不溶物60℃解離4h

離心3000r/min15min80℃熱水洗

氯化鈉2mol／L溶液100mL再用CTAB溴化十六烷基三甲銨絡(luò)合法進(jìn)一步精制得銀耳多糖純品并共17頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁!操作方法5.多糖的鑒定（一）

觀察硫酸層與糖溶液界面處顏色變化

透析液1mL

α-萘酚溶液2滴

顏色變化搖勻

沿管壁緩加入濃硫酸1.5mL(勿振動)再用CTAB溴化十六烷基三甲銨絡(luò)合法進(jìn)一步精制得銀耳多糖純品并共17頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁!注意事項1.酶促反應(yīng)的時間、溫度應(yīng)控制好。

2.在制備全流程中應(yīng)時刻注意溫度，不能超過80℃

再用CTAB溴化十六烷基三甲銨絡(luò)合法進(jìn)一步精制得銀耳多糖純品并共17頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁!材料用具

銀耳子實體干品（50g左右）

燒杯、布氏漏斗、抽濾瓶、分液漏斗、量筒、離心機(jī)、恒溫水浴鍋、透析袋、濾紙、組織搗碎機(jī)、不銹鋼鍋。再用CTAB溴化十六烷基三甲銨絡(luò)合法進(jìn)一步精制得銀耳多糖純品并共17頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁!操作方法1.銀耳預(yù)處理

20g銹鋼鍋中

加水1600mL

20℃～25℃浸泡30min

搗碎機(jī)中搗碎

銀耳漿液

再用CTAB溴化十六烷基三甲銨絡(luò)合法進(jìn)一步精制得銀耳多糖純品并共17頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁!操作方法等體積5％三氯乙酸-正丁醇溶液

搖勻

離心（3000r/min）15min

濃縮液

3.多糖的沉淀（有機(jī)酸除雜）

下層清液備用

吸去上層正丁醇中層變性蛋白

再用CTAB溴化十六烷基三甲銨絡(luò)合法進(jìn)一步精制得銀耳多糖純品并共17頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁!操作方法加3倍量95％乙醇

搖勻

3.多糖的沉淀（乙醇沉析

）

抽濾液離心（3000r/min）15min

沉淀用無水乙醇洗2次

乙醚洗滌1次

50℃以下真空干燥

再用CTAB溴化十六烷基三甲銨絡(luò)合法進(jìn)一步精制得銀耳多糖純品并共17頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁!操作方法4.精制（二）

解離液加三倍量95％乙醇

透析液80℃濃縮

離心3000r/min15min精品銀耳多糖

離心3000r/min15min沉淀用無水乙醇、乙醚洗滌

上清液流水透析10h

50℃真空干燥

再用CTAB溴化十六烷基三甲銨絡(luò)合法進(jìn)一步精制得銀耳多糖純品并共17頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁!操作方法5.多糖的鑒定（二）

透析濃縮透析濃縮2mL

點于濾紙

0.5％甲苯胺乙醇溶液染色

加入2％CTAB溶液2～4滴觀察現(xiàn)象

再用CTAB溴化十六烷基三甲銨絡(luò)合法進(jìn)一步精制得銀耳多糖純品并共17頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁!思考