ICS67.080CCSB31 43湖 南 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB43/T2324—2022桑黃多糖液體發(fā)酵生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程TechnicalregulationsforpolysaccharideofSanghuangporusproducedinliquidfermentation20222022050620220806湖南省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布目 次前言Ⅲ112規(guī)范性引用文件······131415·········3637多糖含量的測(cè)定······484附錄A（資料性）5附錄B（資料性）····6附錄C（資料性）·7前 言GB/T1.1—20201請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由湖南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出。本文件由湖南農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本文件起草單位：湖南省微生物研究院、湖南湘蕈生物科技有限公司。本文件主要起草人：唐少軍、喻桃生、許雋、雷平、邵晨霞、胡浩、賀月林、吳勝蓮、靳磊、楊祎。桑黃多糖液體發(fā)酵生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程本文件適用于桑黃多糖的液體發(fā)酵生產(chǎn)。（GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T12728食用菌術(shù)語(yǔ)NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T1731食用菌菌種良好作業(yè)規(guī)范DB37/T3995松花粉多糖實(shí)驗(yàn)室提取技術(shù)規(guī)程3術(shù)語(yǔ)和定義NY/T1731食用菌菌種良好作業(yè)規(guī)范DB37/T3995松花粉多糖實(shí)驗(yàn)室提取技術(shù)規(guī)程3術(shù)語(yǔ)和定義GB/T12728界定的以及下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1桑黃多糖sanghuangporuspolysaccharide4發(fā)酵工藝母種→搖瓶種→發(fā)酵罐檢查→清洗與空滅→投料與定容→滅菌→冷卻→接種→發(fā)酵培養(yǎng)→粗多糖的提取→多糖的純化→多糖含量的測(cè)定母種制備應(yīng)符合NY/T528的要求。原料應(yīng)符合NY/T1935的規(guī)定，參照附錄A配制。采用1000mL的常規(guī)三角瓶，每瓶裝液量為200mL～300mL，用八層紗布和牛皮紙封口。在121℃～126℃，0.14MPa～0.16MPa的壓力下，保持25min。30（10mm）100mL3接種后移至搖床，于26℃，130r/min條件下培養(yǎng)10天罐上全部閥門、安全閥、壓力表等要求完好，工作正常。流水清洗罐體內(nèi)外，達(dá)到無(wú)死角、內(nèi)壁無(wú)任何培養(yǎng)料殘余物的潔凈程度。流水清洗罐體內(nèi)外，達(dá)到無(wú)死角、內(nèi)壁無(wú)任何培養(yǎng)料殘余物的潔凈程度。空罐滅菌，應(yīng)在壓力0.14Mpa～0.16Mpa、溫度121℃～126℃下持續(xù)滅菌40min。材料應(yīng)符合NY/T1935的規(guī)定，參照附錄A規(guī)定配制。發(fā)酵罐總體積的60％～70％。滅菌用夾層預(yù)熱培養(yǎng)基至80℃后，蒸汽進(jìn)罐升溫至121℃～126℃，0.14MPa～0.16MPa保壓恒溫40min。冷卻培養(yǎng)基冷卻至26℃～28℃。接種1％（/罐溫為6～280.～.04Pa10.5/?in130r/mn～160r/min，培養(yǎng)時(shí)間為8～10d。發(fā)酵后的菌液在5000rpm、4℃條件下離心15min，棄去沉淀，收集上清。上清液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮10倍，用Sevag法除蛋白，操作過(guò)程應(yīng)符合DB37/T3995的規(guī)定。將除去蛋白后的多糖溶液緩慢加入到4倍量無(wú)水乙醇中，4℃條件下靜置8h～10h，然后在10000rpm、4℃條件下離心10min后收集底部沉淀。干燥收集到的沉淀經(jīng)過(guò)冷凍干燥后得到桑黃粗多糖。DEAE-SepharoseFastFlowColumnXK26/40（26mm400mm）150mLTris-HCl（55mM，pH7.8～8.0）1.5mL/minTris-HCl10mg/mL0.22μmTris-HCl(A1MNaClTris-HCl(B2.0mL/min，3min收集將SephadexLH-20裝填于ColumnXK16/100（內(nèi)徑：16mm，高度1000mm）層析柱中，體積為150mL，用Tris-HCl溶液（55mM，pH7.8～8.0）以0.5mL/min流速過(guò)夜平衡層析柱。6.2.2過(guò)柱分離Tris-HCl5mg/mL0.22μmTris-HCl0.5mL/min10min多糖含量的測(cè)定應(yīng)符合標(biāo)準(zhǔn)NY/T1676的規(guī)定。生產(chǎn)檔案應(yīng)有電子檔案和紙質(zhì)檔案保存，資料記錄完整準(zhǔn)確，檔案內(nèi)容見(jiàn)附錄C。檔案記錄一式2份保存于生產(chǎn)基地和技術(shù)指導(dǎo)單位，檔案保存3年以上。附錄A（資料性）常用搖瓶種培養(yǎng)基配方A.10.1％，0.06％，pH6.0。A.26.080附錄B（資料性）桑黃液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方B.13.510.150.01B10.01％。B.2120.0750.03％。附錄C（資料性）桑黃多糖液體發(fā)酵生產(chǎn)檔案表