化學(xué)分析方法驗(yàn)證化學(xué)分析方法驗(yàn)證1化學(xué)分許方法驗(yàn)證成功的前提能夠研究建立一個(gè)有水準(zhǔn)的分析方法的能力有化學(xué)分析方法驗(yàn)證的知識(shí)和水平化學(xué)分許方法驗(yàn)證成功的前提2化學(xué)分許方法驗(yàn)證成功的前提有水平，經(jīng)過培訓(xùn)的實(shí)施人員儀器性能已經(jīng)得到確認(rèn)（校準(zhǔn)，驗(yàn)證，校準(zhǔn)在有效期內(nèi)）可靠的對(duì)照品（法定機(jī)構(gòu)提供的或有水平自己建立的）質(zhì)量可靠的實(shí)驗(yàn)試劑化學(xué)分許方法驗(yàn)證成功的前提有水平，經(jīng)過培訓(xùn)的實(shí)施人員3存在問題主要表現(xiàn)在：方法設(shè)計(jì)不科學(xué)方法沒有充分的研究，優(yōu)化驗(yàn)證的目的性不明確，驗(yàn)證不充分實(shí)驗(yàn)過程不規(guī)范，驗(yàn)證通不過的處理方法錯(cuò)誤驗(yàn)證數(shù)據(jù)不合理忽視方法在驗(yàn)證存在問題主要表現(xiàn)在：4什么時(shí)候分析方法需驗(yàn)證符合下列情形之一的，應(yīng)對(duì)檢驗(yàn)方法進(jìn)行驗(yàn)證：1.建立或采用新的檢驗(yàn)方法2.分析對(duì)象或檢驗(yàn)方法變更了3.采用中國藥典未收載的檢驗(yàn)方法4.法規(guī)規(guī)定的其他需要驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法什么時(shí)候分析方法需驗(yàn)證符合下列情形之一的，應(yīng)對(duì)檢驗(yàn)方法進(jìn)行驗(yàn)5什么時(shí)候分析方法需驗(yàn)證（續(xù)）對(duì)不需要進(jìn)行驗(yàn)證的的檢驗(yàn)方法，應(yīng)進(jìn)行方法確認(rèn)，以保證檢驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠。2005版藥典中分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則（附錄XIXA）只規(guī)定了項(xiàng)目和基本方法而沒有合格標(biāo)準(zhǔn)，ICH和USP類似。什么時(shí)候分析方法需驗(yàn)證（續(xù)）對(duì)不需要進(jìn)行驗(yàn)證的的檢驗(yàn)方法，應(yīng)6方法學(xué)驗(yàn)證對(duì)分析方法的科學(xué)性，準(zhǔn)確性和可行性進(jìn)行驗(yàn)證，充分表明分析方法符合測(cè)試項(xiàng)目的目的和求。方法學(xué)驗(yàn)證對(duì)分析方法的科學(xué)性，準(zhǔn)確性和可行性進(jìn)行驗(yàn)7方法驗(yàn)證的目的目的是判斷采用的分析方法是否科學(xué)，合理，是否有效控制產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量。方法驗(yàn)證的目的目的是判斷采用的分析方法是否科學(xué)，合8需要驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目1.鑒別目的在與判定被分析物是目標(biāo)化合物而非其他物質(zhì)。共存，相似的化合物要分開。要考察其他成分和輔料的干擾，空白試驗(yàn)一定要成陰性。需要驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目1.鑒別9需要驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目2.雜質(zhì)檢查主要用于控制住成分以外的雜質(zhì)，如有機(jī)雜質(zhì)，無機(jī)雜質(zhì)。限度檢查定量檢查需要驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目2.雜質(zhì)檢查10需要驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目限度檢查各種無機(jī)離子檢查等定量檢查定量測(cè)定：干燥失重，水分，有關(guān)物質(zhì)，殘留溶劑及其他特定檢測(cè)項(xiàng)目等。需要驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目限度檢查11需要驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目3.含量測(cè)定除主成分外，也包括檢查項(xiàng)下的防腐劑，溶出度等的含量測(cè)定等。

需要驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目3.含量測(cè)定12驗(yàn)證內(nèi)容準(zhǔn)確度精密度（重復(fù)性，中檢精密度和重現(xiàn)性）專屬性檢測(cè)線（LOD）定量限（LOQ）線性范圍耐用性驗(yàn)證內(nèi)容準(zhǔn)確度13準(zhǔn)確度定量方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，用回收率%表示。原料藥已知純度的對(duì)照品或供試品已知準(zhǔn)確度的另一種方法比較制劑配置回收試驗(yàn)法加樣回收試驗(yàn)法已知準(zhǔn)確度的另一方法比較雜質(zhì)準(zhǔn)確度定量方法14準(zhǔn)確度對(duì)于中藥a.以經(jīng)典方法的測(cè)定值作為真值，建立方法的測(cè)定數(shù)據(jù)與之比較（該法適用于化學(xué)單體藥物）b.以加入對(duì)照品測(cè)定的回收率表示，一般有空白回收（制劑空白）和加樣回收的測(cè)定方法（中藥材，復(fù)方制劑等）準(zhǔn)確度對(duì)于中藥15準(zhǔn)確度回收試驗(yàn)：測(cè)定值（M），空白，已知量A的對(duì)照品測(cè)定回收率：R=100%加樣回收試驗(yàn)：測(cè)定值（M），背景值（P），已知量的加入的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）的值（A）回收率：R=100%（M,P為均值）M-空白AM-PA準(zhǔn)確度回收試驗(yàn)：測(cè)定值（M），空白，已知量A的對(duì)照品測(cè)16準(zhǔn)確度試驗(yàn)方法：規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用九次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)，如制備高，中，低三個(gè)不同濃度樣品各測(cè)三次。準(zhǔn)確度試驗(yàn)方法：規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用九次17準(zhǔn)確度試驗(yàn)方法（中藥）同一樣品，制備相同濃度的6份供試品（樣品取樣量減半，以1：1比例加入對(duì)照品）同一樣品，制備三個(gè)濃度的供試品，每個(gè)濃度分別制備三份供試液，對(duì)照品的加入方式有三種方式。準(zhǔn)確度試驗(yàn)方法（中藥）18對(duì)照品的加入方式取相同量樣品9份（一般為樣品取樣量的一半），設(shè)計(jì)三個(gè)濃度，按不同比例加入對(duì)照品。中間濃度一般按1；1比例加入，低，高濃度可選0.5：1，1.5：1的比例，加入對(duì)照品的量要適當(dāng)，保證供試品溶液的濃度（或量）在考察的線性范圍內(nèi)。取3種不同量的樣品個(gè)三份，每個(gè)取樣量分別按1：1比例加入對(duì)照品，中間濃度已選定正常濃度，其他兩個(gè)濃度可以結(jié)合范圍測(cè)定項(xiàng)目選擇低，高濃度。按表示量計(jì)算得組分，可參訂化學(xué)藥品測(cè)定方法，取9份樣品，按0.8：1，1：1，1：1.2的比例加入對(duì)照品（樣品取樣量減半）對(duì)照品的加入方式取相同量樣品9份（一般為樣品取樣量的一半），19精密度精密度是指在規(guī)定條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。用偏差（d），標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD），相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）（變異系數(shù)CV）表示。偏差（d）d=xi-x測(cè)量值與平均值之差標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）SD相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）RSD=

精密度精密度是指在規(guī)定條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次取20精密度重復(fù)性：在相同條件下，有同一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度

在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)，如制備不同濃度樣品各測(cè)三次把被測(cè)濃度當(dāng)做100%，至少測(cè)6次進(jìn)行評(píng)價(jià)中間精密度：同一實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間有不同的分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度（三人三機(jī)）重現(xiàn)性：不同實(shí)驗(yàn)室，不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。以SD，RSD表示。

精密度重復(fù)性：在相同條件下，有同一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精21專屬性專屬性只有其他成分（雜質(zhì)，降解物，輔料等）可能存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性，能反映該方法在有共存物時(shí)對(duì)供試液準(zhǔn)確而專屬的測(cè)定能力，是指該法用于復(fù)雜樣品分析時(shí)是否受相互干擾程度的度量。專屬性專屬性只有其他成分（雜質(zhì)，降解物，輔22專屬性通常是通過分析含有加了雜質(zhì)，降解產(chǎn)物，有關(guān)化學(xué)物質(zhì)或安慰劑成分的樣品，將所獲的分析結(jié)果與未加前述成分之樣品的測(cè)試結(jié)果進(jìn)行比較，兩組測(cè)試結(jié)果只差即為專屬性。專屬性通常是通過分析含有加了雜質(zhì)，降解產(chǎn)物，有關(guān)化學(xué)物質(zhì)或安23專屬性鑒別反應(yīng)應(yīng)能與可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似化合物區(qū)別不含被分析的樣品，以及結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物均應(yīng)呈負(fù)反應(yīng)專屬性鑒別反應(yīng)24專屬性含量測(cè)定和雜志測(cè)定色譜法和其他方法：附帶表性圖譜說明專屬性表明各組分的位置，分離度是否符合要求雜質(zhì)或輔料可獲得的情況下，試樣中可加入雜志或輔料，考察測(cè)試結(jié)果是否受干擾對(duì)于雜質(zhì)測(cè)定也可相試樣中加入一定量的雜質(zhì)，考察雜質(zhì)間是否得到分離色譜峰純度試驗(yàn)（二極管陣列，其他檢測(cè)器，質(zhì)譜）專屬性含量測(cè)定和雜志測(cè)定25專屬性破壞性試驗(yàn)高溫，高濕，光照，酸破壞，堿破壞，氧化破壞注意觀察降解產(chǎn)物生成情況，分離度是否符合要求注意掌握破壞條件，應(yīng)使主成分峰保留大約90%專屬性破壞性試驗(yàn)26檢測(cè)限在確定的實(shí)驗(yàn)條件下，被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低濃度或含量目視法（直觀評(píng)價(jià)，非儀器分析）可用于非儀器分析方法，也可用于儀器分析方法，用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠的檢測(cè)出的最低濃度或量信噪比法用于能顯示基線噪音的分析方法（儀器分析方法），是把已知低濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與空白樣品的信號(hào)進(jìn)行比較，算出能被可靠的檢測(cè)出的最低濃度或量，一般以信噪比3：1或2：1時(shí)的相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)差法檢測(cè)限在確定的實(shí)驗(yàn)條件下，被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低濃度或27定量限被測(cè)定物質(zhì)能被定量測(cè)定的最低量，結(jié)果仍具有一定準(zhǔn)確度和精密度的要求。目測(cè)法（直觀評(píng)價(jià)，非儀器分析）用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠的檢測(cè)出符合準(zhǔn)確度和精密度要求的最低濃度或量信噪比法一般以信噪比（S/N）為10：1時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進(jìn)行確定。定量限被測(cè)定物質(zhì)能被定量測(cè)定的最低量，結(jié)果仍具有一定準(zhǔn)28檢測(cè)線和定量限試驗(yàn)時(shí)應(yīng)注意A：應(yīng)以實(shí)驗(yàn)中得到的濃度分析，而不能靠推算。B:應(yīng)以定量濃度限為依據(jù)確定對(duì)照溶液濃度（一般擴(kuò)大20—50倍）檢測(cè)線和定量限試驗(yàn)時(shí)應(yīng)注意A：應(yīng)以實(shí)驗(yàn)中得到的濃度29線性線性是指再設(shè)計(jì)范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正比例關(guān)系的程度。線性應(yīng)在分析需要的范圍內(nèi)進(jìn)行評(píng)價(jià)一般以最小二乘法處理數(shù)據(jù)求的回歸曲線的斜率來表示，必要時(shí)可對(duì)響應(yīng)信號(hào)進(jìn)行數(shù)字轉(zhuǎn)換。數(shù)據(jù)要求：至少需要五個(gè)濃度考察線性，需提供相關(guān)系數(shù)，Y截距，應(yīng)列出回歸方程數(shù)和線性圖。線性線性是指再設(shè)計(jì)范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正30范圍范圍是指達(dá)到一定精密度，準(zhǔn)確度和線性條件下，測(cè)試方法是用的高，低限量濃度或量的區(qū)間。范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性，準(zhǔn)確度，精密度結(jié)果和要求確定。原料藥和制劑含量測(cè)定范圍為80%-120%制劑含量均勻度范圍為70%-130%雜質(zhì)測(cè)定應(yīng)為被測(cè)雜質(zhì)限度的-20%到+20%溶出度應(yīng)為測(cè)定范圍的-20%到+20%，釋放度因規(guī)定了限度范圍，應(yīng)為下限的-20%到上線的+20%，例如緩釋片1h<20%，7h>70%，則驗(yàn)證范圍定為0-90%范圍范圍是指達(dá)到一定精密度，準(zhǔn)確度和線性條件下，測(cè)試方法是用31耐用性耐用性又稱粗放度，是指測(cè)試條件稍有變動(dòng)時(shí)，結(jié)果不受影響的承受程度。失衡連試驗(yàn)室和工作人員之間的正常情況下試驗(yàn)結(jié)果重現(xiàn)性的尺度，如方法易受分析條件的影響，或要求苛刻，應(yīng)注明典型的變動(dòng)包括：1.分析溶液的穩(wěn)定性用不同時(shí)間段的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品溶液與新制的標(biāo)準(zhǔn)品溶液的對(duì)比結(jié)果來分析溶液的穩(wěn)定性2.提取方法，溶劑，次數(shù)，時(shí)間等耐用性耐用性又稱粗放度，是指測(cè)試條件稍有變動(dòng)時(shí)，結(jié)果不受影響32耐用性3.液相色譜的典型變動(dòng)：流動(dòng)相PH（-0.5+0.5）流動(dòng)相組成（有機(jī)相-0.5至+0.5）色譜柱(同一廠家三個(gè)批號(hào)，或兩個(gè)不同廠家（同固定相和填充物，尺寸）)溫度（20-25攝氏度）和流速（-10%至+10%）檢測(cè)波長（-5nm至+5nm）4.氣象色譜的典型變動(dòng)：色譜住(同一廠家三個(gè)批號(hào)，或兩個(gè)不同廠家（同固定相和填充物，尺寸）)溫度流速

耐用性3.液相色譜的典型變動(dòng)：33耐用性如果測(cè)試條件要求苛刻，則建議在方法中予以寫明。耐用性如果測(cè)試條件要求苛刻，則建議在方法中予以寫明。34檢測(cè)項(xiàng)目和驗(yàn)證內(nèi)容總結(jié)

中國藥典鑒別雜質(zhì)測(cè)定雜志限度測(cè)定含量溶出度等準(zhǔn)確度-+-++精密度--重復(fù)性-+-++精密度—中間精密度-+-++專屬性+++++檢測(cè)限--+--定量限-+---線性-+-++范圍-+-++耐用性+++++檢測(cè)項(xiàng)目和驗(yàn)證內(nèi)容總結(jié) 中國藥典鑒別雜質(zhì)測(cè)定雜志限度測(cè)定含量35分析方法驗(yàn)證注意要點(diǎn)空白樣空白樣是指根據(jù)樣品的特性，配方和工藝過程，制備除了不含被測(cè)物外其他組成與樣品完全一致的模擬樣品預(yù)驗(yàn)證預(yù)驗(yàn)證是指在正式驗(yàn)證前進(jìn)行的試驗(yàn)，目的是收集證據(jù)，已初步證實(shí)該檢驗(yàn)方法可達(dá)到預(yù)期要求，同時(shí)確定各個(gè)項(xiàng)目單位可接受標(biāo)準(zhǔn)。分析方法驗(yàn)證注意要點(diǎn)空白樣36含量測(cè)定方法驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)確度各濃度下的平均回收率應(yīng)在98.0%-102.0%之間，9個(gè)回收率數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）應(yīng)不大于2.0%。中藥一般應(yīng)滿足以下規(guī)定：回收率計(jì)算值在95%-105%范圍，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）薄層掃描法<5%精密度1.重復(fù)性：6份供試液含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%2.中間精密度：相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%含量測(cè)定方法驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)確度37含量測(cè)定方法驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn)專屬性空白對(duì)照應(yīng)無干擾，主成分與各有關(guān)物質(zhì)應(yīng)能完全分離，分離度不得小于2.0檢測(cè)限

定量限含量測(cè)定方法驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn)專屬性38含量測(cè)定方法驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn)線性回歸線的相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.998，Y軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值的2%以內(nèi)，響應(yīng)因子的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。耐用性主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰的雜質(zhì)峰必須達(dá)到基線分離，各條件下的含量數(shù)據(jù)（n=6）的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%含量測(cè)定方法驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn)線性39分析方法的確認(rèn)方法確認(rèn)是一種簡化了的方法驗(yàn)證，目的是為了確認(rèn)藥典方法或其它已經(jīng)驗(yàn)證的方法是否適用于實(shí)際使用的環(huán)境。各國藥典和行業(yè)法規(guī)收載的檢驗(yàn)方法從外部引入的已經(jīng)檢驗(yàn)的檢驗(yàn)方法以往老產(chǎn)品的檢驗(yàn)方法，原廠無力或無法進(jìn)行方法傳遞。方法確認(rèn)一般應(yīng)進(jìn)行準(zhǔn)確度，重復(fù)性，專屬性測(cè)試。分析方法的確認(rèn)方法確認(rèn)是一種簡化了的方法40分析方法傳遞分析方法傳遞（轉(zhuǎn)移）是指一方將已經(jīng)驗(yàn)證的方法傳送（轉(zhuǎn)移）給另一方的過程。方法傳遞主要進(jìn)行在不同的實(shí)驗(yàn)室在一定時(shí)限內(nèi)對(duì)同一份樣品的重現(xiàn)性測(cè)試的結(jié)果比對(duì)。分析方法傳遞分析方法傳遞（轉(zhuǎn)移）是指一41系統(tǒng)適用性試驗(yàn)對(duì)一些儀器的測(cè)試方法，在進(jìn)行方法驗(yàn)證時(shí)，有必要將分析設(shè)備，電子儀器與實(shí)驗(yàn)操作，被測(cè)試樣品等一起當(dāng)做完整的系統(tǒng)進(jìn)行評(píng)估。系統(tǒng)適用性便是對(duì)整個(gè)系統(tǒng)進(jìn)行評(píng)估的指標(biāo)。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)參數(shù)的設(shè)置需根據(jù)被驗(yàn)證方法類型而定。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)對(duì)一些儀器的測(cè)試方法，在進(jìn)行42系統(tǒng)適用性試驗(yàn)含量測(cè)定方法可接受的標(biāo)準(zhǔn)主峰的峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%，主峰保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于1.0%。另外，主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰與雜質(zhì)峰必須達(dá)到基線分離，主峰的理論塔板數(shù)應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)含量測(cè)定方法可接受的標(biāo)準(zhǔn)43方法在驗(yàn)證在某些情況下，如原料藥合成工藝的改變，制劑處方改變，分析方法發(fā)生改變等，均有必要對(duì)分析方法再次進(jìn)行全面或部分指標(biāo)的驗(yàn)證，以保證分析方法可靠，這一過程稱為方法在驗(yàn)證。在驗(yàn)證原則：根據(jù)改變的程度進(jìn)行相應(yīng)的在驗(yàn)證。方法在驗(yàn)證在某些情況下，如原料藥合成工藝的改變，制劑處44方法在驗(yàn)證當(dāng)合成工藝發(fā)生改變時(shí)當(dāng)制劑的處方組成改變，輔料變更時(shí)當(dāng)原料產(chǎn)地來源發(fā)生變更時(shí)當(dāng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中某一項(xiàng)目分析方法發(fā)生改變時(shí)。方法在驗(yàn)證當(dāng)合成工藝發(fā)生改變時(shí)45化學(xué)分析方法驗(yàn)證化學(xué)分析方法驗(yàn)證46化學(xué)分許方法驗(yàn)證成功的前提能夠研究建立一個(gè)有水準(zhǔn)的分析方法的能力有化學(xué)分析方法驗(yàn)證的知識(shí)和水平化學(xué)分許方法驗(yàn)證成功的前提47化學(xué)分許方法驗(yàn)證成功的前提有水平，經(jīng)過培訓(xùn)的實(shí)施人員儀器性能已經(jīng)得到確認(rèn)（校準(zhǔn)，驗(yàn)證，校準(zhǔn)在有效期內(nèi)）可靠的對(duì)照品（法定機(jī)構(gòu)提供的或有水平自己建立的）質(zhì)量可靠的實(shí)驗(yàn)試劑化學(xué)分許方法驗(yàn)證成功的前提有水平，經(jīng)過培訓(xùn)的實(shí)施人員48存在問題主要表現(xiàn)在：方法設(shè)計(jì)不科學(xué)方法沒有充分的研究，優(yōu)化驗(yàn)證的目的性不明確，驗(yàn)證不充分實(shí)驗(yàn)過程不規(guī)范，驗(yàn)證通不過的處理方法錯(cuò)誤驗(yàn)證數(shù)據(jù)不合理忽視方法在驗(yàn)證存在問題主要表現(xiàn)在：49什么時(shí)候分析方法需驗(yàn)證符合下列情形之一的，應(yīng)對(duì)檢驗(yàn)方法進(jìn)行驗(yàn)證：1.建立或采用新的檢驗(yàn)方法2.分析對(duì)象或檢驗(yàn)方法變更了3.采用中國藥典未收載的檢驗(yàn)方法4.法規(guī)規(guī)定的其他需要驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法什么時(shí)候分析方法需驗(yàn)證符合下列情形之一的，應(yīng)對(duì)檢驗(yàn)方法進(jìn)行驗(yàn)50什么時(shí)候分析方法需驗(yàn)證（續(xù)）對(duì)不需要進(jìn)行驗(yàn)證的的檢驗(yàn)方法，應(yīng)進(jìn)行方法確認(rèn)，以保證檢驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠。2005版藥典中分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則（附錄XIXA）只規(guī)定了項(xiàng)目和基本方法而沒有合格標(biāo)準(zhǔn)，ICH和USP類似。什么時(shí)候分析方法需驗(yàn)證（續(xù)）對(duì)不需要進(jìn)行驗(yàn)證的的檢驗(yàn)方法，應(yīng)51方法學(xué)驗(yàn)證對(duì)分析方法的科學(xué)性，準(zhǔn)確性和可行性進(jìn)行驗(yàn)證，充分表明分析方法符合測(cè)試項(xiàng)目的目的和求。方法學(xué)驗(yàn)證對(duì)分析方法的科學(xué)性，準(zhǔn)確性和可行性進(jìn)行驗(yàn)52方法驗(yàn)證的目的目的是判斷采用的分析方法是否科學(xué)，合理，是否有效控制產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量。方法驗(yàn)證的目的目的是判斷采用的分析方法是否科學(xué)，合53需要驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目1.鑒別目的在與判定被分析物是目標(biāo)化合物而非其他物質(zhì)。共存，相似的化合物要分開。要考察其他成分和輔料的干擾，空白試驗(yàn)一定要成陰性。需要驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目1.鑒別54需要驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目2.雜質(zhì)檢查主要用于控制住成分以外的雜質(zhì)，如有機(jī)雜質(zhì)，無機(jī)雜質(zhì)。限度檢查定量檢查需要驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目2.雜質(zhì)檢查55需要驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目限度檢查各種無機(jī)離子檢查等定量檢查定量測(cè)定：干燥失重，水分，有關(guān)物質(zhì)，殘留溶劑及其他特定檢測(cè)項(xiàng)目等。需要驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目限度檢查56需要驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目3.含量測(cè)定除主成分外，也包括檢查項(xiàng)下的防腐劑，溶出度等的含量測(cè)定等。

需要驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目3.含量測(cè)定57驗(yàn)證內(nèi)容準(zhǔn)確度精密度（重復(fù)性，中檢精密度和重現(xiàn)性）專屬性檢測(cè)線（LOD）定量限（LOQ）線性范圍耐用性驗(yàn)證內(nèi)容準(zhǔn)確度58準(zhǔn)確度定量方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，用回收率%表示。原料藥已知純度的對(duì)照品或供試品已知準(zhǔn)確度的另一種方法比較制劑配置回收試驗(yàn)法加樣回收試驗(yàn)法已知準(zhǔn)確度的另一方法比較雜質(zhì)準(zhǔn)確度定量方法59準(zhǔn)確度對(duì)于中藥a.以經(jīng)典方法的測(cè)定值作為真值，建立方法的測(cè)定數(shù)據(jù)與之比較（該法適用于化學(xué)單體藥物）b.以加入對(duì)照品測(cè)定的回收率表示，一般有空白回收（制劑空白）和加樣回收的測(cè)定方法（中藥材，復(fù)方制劑等）準(zhǔn)確度對(duì)于中藥60準(zhǔn)確度回收試驗(yàn)：測(cè)定值（M），空白，已知量A的對(duì)照品測(cè)定回收率：R=100%加樣回收試驗(yàn)：測(cè)定值（M），背景值（P），已知量的加入的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）的值（A）回收率：R=100%（M,P為均值）M-空白AM-PA準(zhǔn)確度回收試驗(yàn)：測(cè)定值（M），空白，已知量A的對(duì)照品測(cè)61準(zhǔn)確度試驗(yàn)方法：規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用九次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)，如制備高，中，低三個(gè)不同濃度樣品各測(cè)三次。準(zhǔn)確度試驗(yàn)方法：規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用九次62準(zhǔn)確度試驗(yàn)方法（中藥）同一樣品，制備相同濃度的6份供試品（樣品取樣量減半，以1：1比例加入對(duì)照品）同一樣品，制備三個(gè)濃度的供試品，每個(gè)濃度分別制備三份供試液，對(duì)照品的加入方式有三種方式。準(zhǔn)確度試驗(yàn)方法（中藥）63對(duì)照品的加入方式取相同量樣品9份（一般為樣品取樣量的一半），設(shè)計(jì)三個(gè)濃度，按不同比例加入對(duì)照品。中間濃度一般按1；1比例加入，低，高濃度可選0.5：1，1.5：1的比例，加入對(duì)照品的量要適當(dāng)，保證供試品溶液的濃度（或量）在考察的線性范圍內(nèi)。取3種不同量的樣品個(gè)三份，每個(gè)取樣量分別按1：1比例加入對(duì)照品，中間濃度已選定正常濃度，其他兩個(gè)濃度可以結(jié)合范圍測(cè)定項(xiàng)目選擇低，高濃度。按表示量計(jì)算得組分，可參訂化學(xué)藥品測(cè)定方法，取9份樣品，按0.8：1，1：1，1：1.2的比例加入對(duì)照品（樣品取樣量減半）對(duì)照品的加入方式取相同量樣品9份（一般為樣品取樣量的一半），64精密度精密度是指在規(guī)定條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。用偏差（d），標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD），相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）（變異系數(shù)CV）表示。偏差（d）d=xi-x測(cè)量值與平均值之差標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）SD相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）RSD=

精密度精密度是指在規(guī)定條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次取65精密度重復(fù)性：在相同條件下，有同一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度

在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)，如制備不同濃度樣品各測(cè)三次把被測(cè)濃度當(dāng)做100%，至少測(cè)6次進(jìn)行評(píng)價(jià)中間精密度：同一實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間有不同的分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度（三人三機(jī)）重現(xiàn)性：不同實(shí)驗(yàn)室，不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。以SD，RSD表示。

精密度重復(fù)性：在相同條件下，有同一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精66專屬性專屬性只有其他成分（雜質(zhì)，降解物，輔料等）可能存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性，能反映該方法在有共存物時(shí)對(duì)供試液準(zhǔn)確而專屬的測(cè)定能力，是指該法用于復(fù)雜樣品分析時(shí)是否受相互干擾程度的度量。專屬性專屬性只有其他成分（雜質(zhì)，降解物，輔67專屬性通常是通過分析含有加了雜質(zhì)，降解產(chǎn)物，有關(guān)化學(xué)物質(zhì)或安慰劑成分的樣品，將所獲的分析結(jié)果與未加前述成分之樣品的測(cè)試結(jié)果進(jìn)行比較，兩組測(cè)試結(jié)果只差即為專屬性。專屬性通常是通過分析含有加了雜質(zhì)，降解產(chǎn)物，有關(guān)化學(xué)物質(zhì)或安68專屬性鑒別反應(yīng)應(yīng)能與可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似化合物區(qū)別不含被分析的樣品，以及結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物均應(yīng)呈負(fù)反應(yīng)專屬性鑒別反應(yīng)69專屬性含量測(cè)定和雜志測(cè)定色譜法和其他方法：附帶表性圖譜說明專屬性表明各組分的位置，分離度是否符合要求雜質(zhì)或輔料可獲得的情況下，試樣中可加入雜志或輔料，考察測(cè)試結(jié)果是否受干擾對(duì)于雜質(zhì)測(cè)定也可相試樣中加入一定量的雜質(zhì)，考察雜質(zhì)間是否得到分離色譜峰純度試驗(yàn)（二極管陣列，其他檢測(cè)器，質(zhì)譜）專屬性含量測(cè)定和雜志測(cè)定70專屬性破壞性試驗(yàn)高溫，高濕，光照，酸破壞，堿破壞，氧化破壞注意觀察降解產(chǎn)物生成情況，分離度是否符合要求注意掌握破壞條件，應(yīng)使主成分峰保留大約90%專屬性破壞性試驗(yàn)71檢測(cè)限在確定的實(shí)驗(yàn)條件下，被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低濃度或含量目視法（直觀評(píng)價(jià)，非儀器分析）可用于非儀器分析方法，也可用于儀器分析方法，用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠的檢測(cè)出的最低濃度或量信噪比法用于能顯示基線噪音的分析方法（儀器分析方法），是把已知低濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與空白樣品的信號(hào)進(jìn)行比較，算出能被可靠的檢測(cè)出的最低濃度或量，一般以信噪比3：1或2：1時(shí)的相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)差法檢測(cè)限在確定的實(shí)驗(yàn)條件下，被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低濃度或72定量限被測(cè)定物質(zhì)能被定量測(cè)定的最低量，結(jié)果仍具有一定準(zhǔn)確度和精密度的要求。目測(cè)法（直觀評(píng)價(jià)，非儀器分析）用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠的檢測(cè)出符合準(zhǔn)確度和精密度要求的最低濃度或量信噪比法一般以信噪比（S/N）為10：1時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進(jìn)行確定。定量限被測(cè)定物質(zhì)能被定量測(cè)定的最低量，結(jié)果仍具有一定準(zhǔn)73檢測(cè)線和定量限試驗(yàn)時(shí)應(yīng)注意A：應(yīng)以實(shí)驗(yàn)中得到的濃度分析，而不能靠推算。B:應(yīng)以定量濃度限為依據(jù)確定對(duì)照溶液濃度（一般擴(kuò)大20—50倍）檢測(cè)線和定量限試驗(yàn)時(shí)應(yīng)注意A：應(yīng)以實(shí)驗(yàn)中得到的濃度74線性線性是指再設(shè)計(jì)范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正比例關(guān)系的程度。線性應(yīng)在分析需要的范圍內(nèi)進(jìn)行評(píng)價(jià)一般以最小二乘法處理數(shù)據(jù)求的回歸曲線的斜率來表示，必要時(shí)可對(duì)響應(yīng)信號(hào)進(jìn)行數(shù)字轉(zhuǎn)換。數(shù)據(jù)要求：至少需要五個(gè)濃度考察線性，需提供相關(guān)系數(shù)，Y截距，應(yīng)列出回歸方程數(shù)和線性圖。線性線性是指再設(shè)計(jì)范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正75范圍范圍是指達(dá)到一定精密度，準(zhǔn)確度和線性條件下，測(cè)試方法是用的高，低限量濃度或量的區(qū)間。范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性，準(zhǔn)確度，精密度結(jié)果和要求確定。原料藥和制劑含量測(cè)定范圍為80%-120%制劑含量均勻度范圍為70%-130%雜質(zhì)測(cè)定應(yīng)為被測(cè)雜質(zhì)限度的-20%到+20%溶出度應(yīng)為測(cè)定范圍的-20%到+20%，釋放度因規(guī)定了限度范圍，應(yīng)為下限的-20%到上線的+20%，例如緩釋片1h<20%，7h>70%，則驗(yàn)證范圍定為0-90%范圍范圍是指達(dá)到一定精密度，準(zhǔn)確度和線性條件下，測(cè)試方法是用76耐用性耐用性又稱粗放度，是指測(cè)試條件稍有變動(dòng)時(shí)，結(jié)果不受影響的承受程度。失衡連試驗(yàn)室和工作人員之間的正常情況下試驗(yàn)結(jié)果重現(xiàn)性的尺度，如方法易受分析條件的影響，或要求苛刻，應(yīng)注明典型的變動(dòng)包括：1.分析溶液的穩(wěn)定性用不同時(shí)間段的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品溶液與新制的標(biāo)準(zhǔn)品溶液的對(duì)比結(jié)果來分析溶液的穩(wěn)定性2.提取方法，溶劑，次數(shù)，時(shí)間等耐用性耐用性又稱粗放度，是指測(cè)試條件稍有變動(dòng)時(shí)，結(jié)果不受影響77耐用性3.液相色譜的典型變動(dòng)：流動(dòng)相PH（-0.5+0.5）流動(dòng)相組成（有機(jī)相-0.5至+0.5）色譜柱(同一廠家三個(gè)批號(hào)，或兩個(gè)不同廠家（同固定相和填充物，尺寸）)溫度（20-25攝氏度）和流速（-10%至+10%）檢測(cè)波長（-5nm至+5nm）4.氣象色譜的典型變動(dòng)：色譜住(同一廠家三個(gè)批號(hào)，或兩個(gè)不同廠家（同固定相和填充物，尺寸）)溫度流速

耐用性3.液相色譜的典型變動(dòng)：78耐用性如果測(cè)試條件要求苛刻，則建議在方法中予以寫明。耐用性如果測(cè)試條件要求苛刻，則建議在方法中予以寫明。79檢測(cè)項(xiàng)目和驗(yàn)證內(nèi)容總結(jié)

中國藥典鑒別雜質(zhì)測(cè)定雜志限度測(cè)定含量溶出度等準(zhǔn)確度-+-++精密度--重復(fù)性-+-++精密度—中間精密度-+-++專屬性+++++檢測(cè)限--+--定量限-+---線性-+-++范圍-+-++耐用性+++++檢測(cè)項(xiàng)目和驗(yàn)證內(nèi)容總結(jié) 中國藥典鑒別雜質(zhì)測(cè)定雜志限度測(cè)定含量80分析方法驗(yàn)證注意要點(diǎn)空白樣空白樣是指根據(jù)樣品的特性，配方和工藝過程，制備除了不含被測(cè)物外其他組成與樣品完全一致的模擬樣品預(yù)驗(yàn)證預(yù)驗(yàn)證是指在正式驗(yàn)證前進(jìn)行的試驗(yàn)，目的是收集證據(jù)，已初步證實(shí)該檢驗(yàn)方法可達(dá)到預(yù)期要求，同時(shí)確定各個(gè)項(xiàng)目單位可接受標(biāo)準(zhǔn)。分析方法驗(yàn)證注意要點(diǎn)空白樣81含量測(cè)定方法驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)確度各濃度下的平均回收率應(yīng)在98.0%-102.0%之間，9個(gè)回收率數(shù)據(jù)的相