微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課介紹與要求

及環(huán)境、人體表面微生物的檢測(cè)程立忠（）王紹輝（）張理珉（）余澤芬（）教材用書

1．沈萍，范秀容，李廣武主編．微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)（第三版）．北京：高等教育出版社，1999第四版已于2007年11月出版主要參考書1．杜連祥，路福平主編．微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)[M]．北京：中國(guó)輕工業(yè)出版社，2005．2．周德慶．微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程（第2版）[M]．北京：高等教育出版社，2006．3．楊文博主編．微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)[M]．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2004．4．趙斌，何紹江主編．微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)[M]．北京：科學(xué)出版社，2002．5．東秀珠，蔡妙英主編．常見細(xì)菌系統(tǒng)分類和鑒定方法[M]．北京：科學(xué)出版社，2001．

實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一

微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課介紹

與安全教育1、實(shí)驗(yàn)課的目的掌握微生物實(shí)驗(yàn)的最基本操作技術(shù)相關(guān)技術(shù)得到充分訓(xùn)練（熟練掌握最好）讀、想、學(xué)、會(huì)、用2、實(shí)驗(yàn)課的內(nèi)容介紹意義：微生物學(xué)是生命科學(xué)中最基礎(chǔ)的學(xué)科之一，實(shí)驗(yàn)技術(shù)的獨(dú)特性和重要性。促進(jìn)了多個(gè)學(xué)科的建立和發(fā)展——生物化學(xué)、分子生物學(xué)、生物工程學(xué)、免疫學(xué)、病毒學(xué)等等廣泛的應(yīng)用——基礎(chǔ)理論研究、工業(yè)、農(nóng)業(yè)、環(huán)境、醫(yī)學(xué)、食品等，實(shí)驗(yàn)內(nèi)容無菌操作技術(shù)；培養(yǎng)基的制備和消毒滅菌技術(shù)；微生物的分離培養(yǎng)純化技術(shù)；菌種的保藏技術(shù)微生物制片染色技術(shù)；微生物數(shù)量和大小測(cè)定技術(shù)；噬菌體的分離純化及效價(jià)的測(cè)定；微生物生理生化反應(yīng)；微生物DNA提取技術(shù)介紹；免疫學(xué)技術(shù)介紹；實(shí)驗(yàn)課學(xué)習(xí)要求認(rèn)真對(duì)待，做好預(yù)習(xí)，加強(qiáng)自主拋磚引玉，增強(qiáng)學(xué)科聯(lián)系多發(fā)現(xiàn)問題，多和教師交流注重原理，努力創(chuàng)新做到“讀、想、學(xué)、會(huì)、用”實(shí)驗(yàn)課安排根據(jù)教學(xué)計(jì)劃，本門實(shí)驗(yàn)課程2學(xué)分，4學(xué)時(shí)/周，14周共56學(xué)時(shí)，每學(xué)時(shí)45分鐘，每次課3小時(shí)；實(shí)驗(yàn)結(jié)果的觀察是實(shí)驗(yàn)過程的重要內(nèi)容。分組——兩人一組，登記聯(lián)系電話；穿白色實(shí)驗(yàn)服進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室；每組準(zhǔn)備記號(hào)筆和打火機(jī)各一個(gè)；值日生由班委每次實(shí)驗(yàn)前委派；下午實(shí)驗(yàn)課改在13：30上，上午的不變。實(shí)驗(yàn)報(bào)告的格式實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)材料和器材實(shí)驗(yàn)方法和步驟實(shí)驗(yàn)結(jié)果、數(shù)據(jù)分析討論及思考題實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求

1.每位學(xué)生準(zhǔn)備規(guī)定式樣的實(shí)驗(yàn)報(bào)告紙。2.上課時(shí)每給出一次作業(yè)，就在下一次上課前上交這一次的實(shí)驗(yàn)報(bào)告，不得拖延時(shí)間，否則后果自負(fù)。3.報(bào)告要求寫清楚實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、原理、步驟、結(jié)果及思考題。希望簡(jiǎn)潔、工整。4.本門課結(jié)束前，要求使用統(tǒng)一的封面，把自己的所有實(shí)驗(yàn)報(bào)告按實(shí)驗(yàn)先后順序裝訂成一冊(cè)，交給實(shí)驗(yàn)教師。實(shí)驗(yàn)成績(jī)平時(shí)成績(jī)（20%，安排于實(shí)驗(yàn)過程中或期末進(jìn)行操作考核）實(shí)驗(yàn)習(xí)慣（10%）期末考試（20%，筆試考試）實(shí)驗(yàn)報(bào)告（50%）可能組織就實(shí)驗(yàn)內(nèi)容進(jìn)行答辯，替代期末考試

實(shí)驗(yàn)用到儀器設(shè)備顯微鏡（光學(xué)——普通、相差、微分干涉差、暗視野；電子——掃描、透射）；高壓蒸汽滅菌鍋（立式和臥式）；超凈工作臺(tái)、隔水式恒溫培養(yǎng)箱；鼓風(fēng)恒溫干燥箱；恒溫振蕩培養(yǎng)箱（旋轉(zhuǎn)式和往復(fù)式）；旋渦振蕩器；恒溫水浴鍋；pH計(jì)；分光光度計(jì)（紫外、可見光、紅外、原子吸收等）；離心機(jī)；電泳儀、PCR儀、發(fā)酵罐、酶標(biāo)儀、冰箱；微波爐等。實(shí)驗(yàn)用到器械試管（testtube）德漢氏小管（Durhamtube）小塑料離心管，又稱Eppendorf管玻璃吸管（glasspipette）微量吸管（micropipette）[微量加樣槍]培養(yǎng)皿（petridish）三角燒瓶（erlenmeyerflask）常見的接種工具

（可根據(jù)要求自已定做）常用玻璃儀器實(shí)驗(yàn)室安全實(shí)驗(yàn)教學(xué)過程中出現(xiàn)的各類突發(fā)事故和事件主要有：1、火災(zāi)；2、觸電；3、跑（漏）水；4、化學(xué)品傷害及中毒；5、灼傷；6、割（劃）傷。實(shí)驗(yàn)室安全(一)化學(xué)藥品及溶劑的處理方法1.在使用強(qiáng)酸或強(qiáng)堿時(shí)必需戴上安全手套，并戴上安全眼鏡。2.有機(jī)溶劑，固體化學(xué)藥品，酸、堿化合物均需分類存放，揮發(fā)性之化學(xué)藥品更必需放置于具有抽氣裝置的藥品柜內(nèi)。3.高揮發(fā)性或易于氧化之化學(xué)藥品必需存放于冰箱或冰柜之中。4.強(qiáng)酸或強(qiáng)堿（包括廢酸堿）不得存放于金屬架之上。(二)安全用電，防止事故1.了解實(shí)驗(yàn)室總電源開關(guān)的安裝位置。2.不可用濕手操作電器，使用電工工具前確認(rèn)其完好無損。3.嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)私自接用電源。4.確保漏電保護(hù)器起作用，用電器外殼接好地線，實(shí)驗(yàn)室無人時(shí)要切斷電源。5.遇有電器失火，先要切斷電源，再行滅火。6.人身觸電，立即人工呼吸，再送醫(yī)院，切忌打強(qiáng)心針。

（三）節(jié)約用水，防止跑漏1.不用水時(shí)，隨手關(guān)閉閥門。2.廢物廢液不準(zhǔn)倒在水槽內(nèi)，實(shí)驗(yàn)完了放水沖洗水槽和下水管，勿使廢液殘留其中。實(shí)驗(yàn)時(shí)需特別注意：人身安全防止割傷、灼傷，如有發(fā)生，應(yīng)用急救藥品施治。意外對(duì)策學(xué)生衣服著火的對(duì)策以滅火「氈」包裹該同學(xué)，并使其在地上滾動(dòng)其他同學(xué)立刻通知老師。實(shí)驗(yàn)室的窗簾布著火的對(duì)策：取出滅火器，拔出安全針。把噴咀對(duì)準(zhǔn)火源。按掣使滅火器噴出二氧化碳。其他同學(xué)立刻通知老師。酒精濺在實(shí)驗(yàn)桌上并著火的對(duì)策：利用沙桶或濕抹布把燃燒的液體用沙蓋著。其他同學(xué)立刻通知老師。學(xué)生打破了燒杯，被碎片割傷流血的對(duì)策以清水沖洗傷口。貼上干凈的消毒膠布。其他同學(xué)立刻通知老師?；瘜W(xué)藥品濺進(jìn)學(xué)生的眼睛內(nèi)的對(duì)策用洗眼瓶以大量清水沖洗眼睛。其他同學(xué)立刻通知老師。一個(gè)學(xué)生在傾倒酸時(shí)意外地接觸到酸的對(duì)策立刻以大量清水沖洗患處最少五分鐘。立刻通知老師。實(shí)驗(yàn)物品常見警告標(biāo)識(shí)符號(hào)滅火器及其使用方法實(shí)驗(yàn)內(nèi)容二

實(shí)驗(yàn)室環(huán)境及人體表面微生物的檢測(cè)一、目的要求

檢查實(shí)驗(yàn)室空氣中及各人手上的微生物(細(xì)菌為主)，并加以統(tǒng)計(jì)、比較和描述（數(shù)量、菌落形態(tài)等）。使學(xué)生認(rèn)識(shí)到微生物無處不在，以便在以后的實(shí)驗(yàn)中重視無菌操作。二、實(shí)驗(yàn)原理微生物廣泛分布于室內(nèi)外、水、空氣和土壤中；通過對(duì)環(huán)境和人體表面微生物的檢測(cè)及觀察，建立起“微生物無處不在、無孔不入”的概念。形成自身良好的衛(wèi)生習(xí)慣，認(rèn)識(shí)到在微生物實(shí)驗(yàn)中無菌操作的重要性。平板培養(yǎng)基含有微生物生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)成分，當(dāng)不同來源的樣品接種于培養(yǎng)基上，在適宜溫度下培養(yǎng)，1~2天內(nèi)每一菌體細(xì)胞即能通過很多次細(xì)胞分裂而進(jìn)行繁殖，形成一個(gè)肉眼可見的細(xì)胞群體（菌落）；每種微生物都有其特有的菌落形態(tài)，一般情況下一個(gè)菌落對(duì)應(yīng)一個(gè)微生物活細(xì)胞，這樣就可以統(tǒng)計(jì)不同微生物在某樣品中的數(shù)量。三、實(shí)驗(yàn)材料及器材牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板3個(gè)/組；洗手液、酒精燈、記號(hào)筆、恒溫培養(yǎng)箱等。四、實(shí)驗(yàn)方法及步驟（一）實(shí)驗(yàn)室空氣中微生物檢查（二）手上微生物檢測(cè)

1、取一無菌牛肉膏蛋白胨瓊脂平板，打開上皿蓋（皿蓋扣放，開始計(jì)時(shí)），使培養(yǎng)基暴露于空氣中30分鐘，蓋上皿蓋。2、在37℃下倒置培養(yǎng)24~48小時(shí)，觀察結(jié)果，統(tǒng)計(jì)微生物數(shù)量。（一）實(shí)驗(yàn)室空氣中微生物檢查

（沉降法）3、利用沉降法測(cè)定計(jì)算空氣中微生物的數(shù)量，結(jié)果的表示的方法有兩種：①一種是每一平皿上菌落形成單位;②另一種是每一平皿實(shí)測(cè)得的菌落形成單位，再按奧梅梁斯基公式換算成為每立方米多少個(gè)細(xì)菌。

根據(jù)前蘇聯(lián)奧梅梁斯基提出的建議：面積為100cm2的平板培養(yǎng)基，暴露在空氣中5分鐘相當(dāng)于10升空氣中的菌落數(shù)。具體計(jì)算公式如下：除沉降法外，常用還有撞擊式（有專門儀器設(shè)備）。多級(jí)撞擊式空氣微生物采樣器1、取一個(gè)牛肉膏蛋白胨瓊脂平板，用記號(hào)筆在平板底部（外面）劃線等分成2半，用手指在其中一半上印（或摩擦）幾下（不能把培養(yǎng)基劃破）；然后用肥皀洗手，用同一手指在另一半上?。ɑ蚰Σ粒紫隆?、在37℃下倒置培養(yǎng)24~48小時(shí)，觀察結(jié)果，統(tǒng)計(jì)比較洗手前后的微生物數(shù)量及菌落種類。（二）手上微生物檢測(cè)

（三）菌落特征描寫方法①大小大、中、小、針尖狀?？上葘⒄麄€(gè)平板上的菌落粗略觀察一下，再?zèng)Q定大、中、小的標(biāo)準(zhǔn)，或由教師指出一個(gè)大小范圍。②顏色黃色、金黃色、灰色、乳白色、紅色、粉紅色等。③干濕情況干燥、濕潤(rùn)、粘稠④形態(tài)圓形、不規(guī)則等⑤高度扁平、隆起、凹下⑥透明程度透明、半透明、不透明⑦邊緣整齊、不整齊本次實(shí)驗(yàn)的思考題1、將你在平板上觀察到的結(jié)果填入下表樣品來源菌落數(shù)(近似值)菌落類型特征描寫大小形態(tài)干濕高度透明度顏色邊緣洗手前1234洗手后1234空氣中12342、計(jì)算出相應(yīng)的空氣中微生物