關于抗血清的制備(實驗)第一頁，共三十三頁，2022年，8月28日選擇合適的抗原分離純化抗原選擇免疫動物確定免疫方案和程序免疫動物采血分離血清抗血清的純化與鑒定抗血清制備的基本流程第二頁，共三十三頁，2022年，8月28日設計實驗方案的設計1.設計本實驗的理由（實驗目的）。2.實驗方案設計。3.可行性（理論、人員、實驗條件等）。4.創(chuàng)新性。5.本實驗要解決的主要問題。6.預期目標。每個組交一份實驗方案（3-4個同學一組）第三頁，共三十三頁，2022年，8月28日論文式實驗報告一、題目的選擇1、準確、具體、簡潔、醒目，使人一目了然，引起重視2、作者與單位(班級)，并注明所在班級和指導教師姓名。3、摘要和關鍵詞摘要是對論文主要內容和觀點的概括第四頁，共三十三頁，2022年，8月28日論文式實驗報告二、關鍵詞又稱主題詞或索引詞，一篇論著(論文)一般選用2～5個關鍵詞第五頁，共三十三頁，2022年，8月28日論文式實驗報告三、引言(前言)引言是論文正文的開場白1、引起讀者對本論文的興趣。2、為讀者提供理解本論文所需的背景資料。第六頁，共三十三頁，2022年，8月28日論文式實驗報告四、材料與方法材料1、實驗對象2、實驗材料3、實驗分組4、實驗過程和方法6、數(shù)據(jù)處理等內容。第七頁，共三十三頁，2022年，8月28日論文式實驗報告五、結果：結果是實驗研究成果的結晶第八頁，共三十三頁，2022年，8月28日論文式實驗報告六、討論1.11.21.3對實驗結果解釋和評價第九頁，共三十三頁，2022年，8月28日論文式實驗報告七、參考文獻期刊：著者．文章名．刊物名稱，卷或年(期)：文章的起訖頁碼書籍：編著者．書名．版本．出版地：出版者，年份第十頁，共三十三頁，2022年，8月28日一、顆粒性抗原的制備（2%~5%RBC的制備）（1）靜脈采血2-3ml，注入抗凝管中，輕輕混勻。（2）洗滌RBC將上述抗凝血移至10ml試管中，加入NS6-7ml，混勻，2500r/min離心5min,去上清。重復上述操作三次，最后一次去上清后，將紅細胞配制成2%~5%的RBC懸液。第十一頁，共三十三頁，2022年，8月28日2、取上述RBC懸液1ml免疫家兔。免疫部位：靜脈、皮內、皮下等。每只兔子免疫8~10點，每點0.1ml左右。每隔2~4天免疫一次。第十二頁，共三十三頁，2022年，8月28日1班免疫時間表每隔2天免疫一次第十三頁，共三十三頁，2022年，8月28日2班免疫時間表每隔3天免疫一次第十四頁，共三十三頁，2022年，8月28日3班免疫時間表每隔4天免疫一次第十五頁，共三十三頁，2022年，8月28日3、心臟采血10ml，凝固后，分離血清（2000轉/min,5分鐘)。4、取兩支小試管并以A、B標記之，將上述血清一半加入A管，另一半加入B管。將A管置于56℃水浴箱30分鐘（滅活補體）。第十六頁，共三十三頁，2022年，8月28日5、抗血清效價的鑒定。凝集試驗和溶血反應第十七頁，共三十三頁，2022年，8月28日

凝集反應第十八頁，共三十三頁，2022年，8月28日實驗原理指顆粒性抗原(RBC)與相應抗體特異結合，在適當電解質存在下，形成肉眼可見的凝集現(xiàn)象。第十九頁，共三十三頁，2022年，8月28日試管凝集試驗過程1.取潔凈小試管8支，排列于試管架上，依次編號。2.向各管中加入生理鹽水200ul。第二十頁，共三十三頁，2022年，8月28日3.向第一支試管中加入A管血清200ul，充分混勻，吸出200ul放入第二管，混勻后取出200ul加入第三管中，如此類推直至第七管，混勻后取出200ul棄去。第八管不加血清，為生理鹽水對照管。至此，第1~7管的血清稀釋度分別為：1：2，1：4，1：8……1：128。這種稀釋方法稱為連續(xù)倍比稀釋法，為免疫試驗中常用的稀釋方法。第二十一頁，共三十三頁，2022年，8月28日4.向每管加入200ul2%RBC懸液，此時每管的液體總量為400ul，血清稀釋度又增加1倍。5.搖勻，置37℃30min。(取出試管1500r/s30秒)觀察結果。第二十二頁，共三十三頁，2022年，8月28日試管凝集操作程序(倍比稀釋法)管號12345678對照生理鹽水200200200200200200200200血清200200200200200200200RBC200200200200200200200200終稀釋度1/41/81/161/321/641/1281/256--棄去單位：uL第二十三頁，共三十三頁，2022年，8月28日[結果判斷]選擇適當?shù)墓獍祵Ρ缺尘?，先不要振搖，觀察管底凝集物的范圍和上清液的濁度。然后輕輕搖動試管，注意觀察凝集顆粒的大小、均勻度等。每一試管的觀察，都應與對照管進行比較。鹽水對照管誚無凝集現(xiàn)象，輕輕搖動試管則RBC分散成均勻混濁；而凝集塊則沉于管底，輕搖時不易散開，凝集程度通常以“+”表示：第二十四頁，共三十三頁，2022年，8月28日“4+”很強，全部RBC凝集，凝集塊全部沉于管底，液體澄清?！?+”強，RBC大部分凝集并沉于管底，液體稍混濁?！?+”中等強度，RBC大約一半凝集，液體較混濁?！?”弱，僅少量RBC凝集，液體明顯混濁?！?-”不凝集，液體混濁與對照管相同。只要待測血清管出現(xiàn)“2+”以上的凝集現(xiàn)象，即可判斷為反應陽性；以出現(xiàn)“2+”凝集的最大稀釋度為待測血清的抗體效價。第二十五頁，共三十三頁，2022年，8月28日

溶血試驗第二十六頁，共三十三頁，2022年，8月28日實驗原理

溶血反應是指補體參與的抗體致紅細胞的溶解反應.參與反應的成分有紅細胞、抗紅細胞抗體，也稱溶血素、補體。第二十七頁，共三十三頁，2022年，8月28日溶血反應實驗過程1.取潔凈小試管8支，排列于試管架上，依次編號。2.向各管中加入生理鹽水200ul。第二十八頁，共三十三頁，2022年，8月28日3.向第一支試管中加入血清200ul，充分混勻，吸出200ul放入第二管，混勻后取出200ul加入第三管中，如此類推直至第七管，混勻后取出200ul棄去。第八管不加血清，為生理鹽水對照管。至此，第1~7管的血清稀釋度分別為：1：2，1：4，1：8……1：128。這種稀釋方法稱為連續(xù)倍比稀釋法，為免疫試驗中常用的稀釋方法。第二十九頁，共三十三頁，2022年，8月28日4.向每管加入200ul2%RBC懸液，此時每管的液體總量為400ul，血清稀釋度又增加1倍。5.搖勻，置37℃30min。觀察結果。第三十頁，共三十三頁，2022年，8月28日溶血反應操作程序(倍比稀釋法)管號12345678對照生理鹽水200200200200200200200200血清200200200200200200200RBC200200200200200200200200終稀釋度1/41/81/161/321/64