南京圣和藥業(yè)試驗文件南京圣和藥業(yè)試驗文件編號：三種方法測定消癌平注射液中80起日期年月日審日期年月日批日期年月日圣和藥業(yè)SANHOM?三種方法測定消癌平注射液中80含量的試驗方案目 錄一、試驗背景 1二、試驗依據(jù) 1三、試驗設(shè)計及組織 1四、試驗參與人員及職責(zé) 1五、試驗?zāi)康?1六、試驗內(nèi)容 1試驗用材料 1試驗儀器及設(shè)備 1試驗過程 2七、試驗結(jié)果 2圣和藥業(yè)SANHOME? 第1頁共 頁三種方法測定消癌平注射液中80含量的試驗方案一、試驗背景：消癌平注射液是一種廣譜抗癌藥物不管是單獨用于抗癌治療還是聯(lián)合放化療都有較好的療效，其處方是通關(guān)藤浸膏和吐溫80，其中通關(guān)藤浸膏是主藥，吐溫80為藥用輔料，做增溶劑用，能夠改善注射劑的澄明度，有文獻(xiàn)記載中藥注射液中吐溫 80的用量一般為0.02%～2%，本品不能盲目使用，高純度的吐溫80近無色，但一般市售的多為淺黃色，其間含有較多雜質(zhì)，醫(yī)學(xué)界證明，含吐溫80的注射劑可能會引起過敏反響，有爭辯說明這些不良反響并非吐溫80造成而是吐溫80中的雜質(zhì)造成的所以其雜質(zhì)不徹底去除單靠增加用量難以到達(dá)藥用目的，不僅起不到很好的增溶效果，甚至?xí)绊懰幬锏奈?。其次?0因加熱及貯藏會造成PH值下降，可使溶液變濁，起不到很好的增溶效果，這就要求我們要對吐溫80的質(zhì)量探究，以明確其用量，本試驗首先建立消癌平注射液中吐80含量的測定方法。二、試驗依據(jù)：依據(jù)查閱有關(guān)文獻(xiàn)，目前有三種方法來測定消癌平注射液中吐溫80的含量，分別是用液相和比色法，其中液相測定方法包括兩種子方法。三、試驗設(shè)計及組織：1.〔參加量的吐溫80〕，利用三種方法測定注射液中吐溫80的含量，測出的含量與參加量做比照，篩選出專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高的試驗方案。2.180四、試驗參與人員及職責(zé)：消癌平攻關(guān)工程組分析人員負(fù)責(zé)試驗方案及報告的起草工作。消癌平攻關(guān)工程組分析負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)試驗方案及報告的審核、檢驗和監(jiān)視等工作。消癌平攻關(guān)工程組副組長負(fù)責(zé)試驗方案及報告的審核批準(zhǔn)。五、試驗?zāi)康模汉Y選出專屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確度高的試驗方案，建立消癌平注射液中吐溫80含量測定的標(biāo)準(zhǔn)方案。六、試驗內(nèi)容：方法一.HPLC-ELSD法測定消癌平注射液中吐溫80儀器設(shè)備高效液相色譜儀WatersHPLCsystem(e2695-Empower2)Alltech2023試劑藥品聚山梨酯80比照品(符合歐洲藥典標(biāo)準(zhǔn)，Sigma-AldrichChemieGmbH，批號01，純度：100%)；消癌平注射液樣品，乙酸銨，乙腈〔色圣和藥業(yè)SANHOME? 第2頁共 頁三種方法測定消癌平注射液中80含量的試驗方案譜純〔分析純〕，氮氣，蒸餾水色譜條件:TSK-GELG2023SWXL柱(7.8mm×300mm，5μm20mmol·L-1乙酸銨-乙腈(90∶10)，柱溫：30℃，流速：0.6mL·min-1；ELSD條件：漂移管溫度103℃，氮氣流速2.3L·min1；進(jìn)樣量：10μL。在此條件下樣品中的聚山梨酯80試驗過程比照品溶液的制備周密稱取聚山梨酯80300.0mg〔加無水乙醇制成3.0mg·mL-1的比照品溶液〕置100mL棕色量瓶中，參加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，即得。供試品溶液的制備周密量取消癌平注射液1.0mL100mL，加無水。方法學(xué)考察：線性關(guān)系考察：周密量取比照品溶液0、2、4、6、8、10、12ml25ml10μL80進(jìn)樣量的常用對數(shù)值(X，ngY)為縱坐標(biāo)進(jìn)展線性回歸，可得回歸方程，其結(jié)果說明其線性關(guān)系的好壞。周密度試驗：周密吸取聚山梨酯80比照品溶液5μL，按上述色譜條件，重復(fù)6次，測定峰面積，測定聚山梨酯80RSD，保存時間，推斷儀器周密度。中間周密度：周密吸取聚山梨酯80比照品溶液5μL，按上述色譜條件，重復(fù)6次，測定峰面積，測定聚山梨酯80RSD，保存時間，推斷儀器周密度。重復(fù)性試驗：周密量取消癌平注射液1mL6份，按上述供試品溶液制備RSD10μL，依上述色譜條件，于0、2、4、6、8、2、24h24hRSD。推斷供試品溶液在室溫下放24h加樣回收率試驗：周密量取未加吐溫801mL910ml瓶中，周密參加比照品溶液3、4、5ml，用無水乙醇定容至刻度，測定峰面積并計算回收率及RSD。圣和藥業(yè)SANHOME? 第3頁共 頁三種方法測定消癌平注射液中80含量的試驗方案1.5樣品測定 分別周密吸取比照品溶液10μL供試品溶液10μL注入液相色譜儀，測定，以外標(biāo)一點法對數(shù)方程計算樣品中聚山梨80的含量。方法二.分光光度法測定消癌平注射液中吐溫80儀器設(shè)備分液漏斗、旋蒸儀、試管、容量瓶、紫外分光光度器試劑藥品 乙酸乙酯、硫氰酸鈷銨試液、三氯甲烷、消癌平注射液，生理鹽水，不含吐溫80的消癌平注射液，吐溫80溶液3.00g/L,丙酮，蒸餾水。試驗過程3.00g/L,吐溫8020ml60ml10ml2再次收干。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:周密稱量比照品溶液吐溫80300.00mg用蒸餾水定容于100ml0,0.6,1.5,3.0,4.5,6ml6.0ml,9.0ml12.0ml,搖勻,放置7h,每隔30min0ml吐溫80620nm的波長AA80方法學(xué)考察線性關(guān)系考察：周密量取比照品溶液0、2、4、6、8、10、12ml25ml10μL80進(jìn)樣量的常用對數(shù)值(X，ngY)為縱坐標(biāo)進(jìn)展線性回歸，可得回歸方程，其結(jié)果說明其線性關(guān)系的好壞。806次,計算其RSD.806其RSD.穩(wěn)定性試驗:周密量取消癌平注射液1.2ml,置于試管中,加蒸餾水補(bǔ)足至6.0ml9.0ml12.0ml,搖勻,每隔15min1hA7h.重復(fù)性試驗:周密量取消癌平注射液1.2ml,置于試管中,加蒸餾水補(bǔ)足至6.0ml9.0ml12.0ml,搖勻,每隔30圣和藥業(yè)SANHOME? 第4頁共 頁三種方法測定消癌平注射液中80含量的試驗方案min7h,測定ARSD.806份,每份0.6ml,置于試管中,參加吐溫80(3.00g/L)5.4ml9.0ml,搖勻,周密參加三氯甲烷12.0ml30min17hA/參加比照品的量×100%3X±s方法三.HPLC-ELSD法測定消癌平注射液中吐溫80儀器設(shè)備高效液相色譜儀Agilent1200AlltechELSD2023注射器，棕色量瓶，移液管，膠頭滴管，電子天平試劑藥品聚山梨酯80比照品(符合歐洲藥典標(biāo)準(zhǔn)，Sigma-AldrichChemieGmb01100%)；消癌平注射液樣品，乙腈〔色譜純〕無水乙醇試劑〔分析純〕，氮氣，乙酸銨，蒸餾水色譜條件:TSK-GELG2023SWXL柱(7.8mm×300mm，5μm5mmol·L—1乙酸銨-乙腈(90∶10300.6mL·min?1；ELSD條件：漂移管溫度110℃，氮氣流速2.3L·min?1；進(jìn)樣量：10μL。在此條件下樣品中的聚山梨酯80試驗過程試驗工作曲線繪制和最低檢測限周密取吐溫80比照品0.5000g，置于50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，得10.000mg·mL-1的溶液，作為儲藏液。分別周密量取上述儲藏液1，2，3，4，5，6ml，置10ml量瓶中，分別加流淌相稀釋至刻度。取上述溶液10μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積。80XY將比照品逐級稀釋，以信噪比S/N=3，測定本品的最低檢測限。方法學(xué)考察線性關(guān)系考察：周密量取比照品溶液0、2、4、6、8、10、12ml25ml10μL80進(jìn)樣量的常用對數(shù)值(X，ngY)為縱坐標(biāo)進(jìn)展線性回歸，可得回歸方程，其結(jié)果說明其線性關(guān)系的好壞。周密度試驗取標(biāo)準(zhǔn)曲線項下3.0000mg/ml濃度樣品，連續(xù)進(jìn)樣6圣和藥業(yè)SANHOME? 第5頁共 頁三種方法測定消癌平注射液中80含量的試驗方案進(jìn)樣周密度。3.0000mg/ml6察進(jìn)樣周密度。重復(fù)性試驗取本品〔批號：202309181〕6取10μl注入液相色譜儀，照高效液相色譜法〔中國藥典2023版二部附錄VD〕測定峰面積。另取吐80溶液穩(wěn)定性試驗取本品〔20230918，分別于12小時RSD?；厥章试囼炛苊芊Q取吐溫8075.5mg25ml比照品溶液5ml〔批號：202309181〕三份，分別參加吐溫80〔3.0mg/mL〕4，5，6ml，依據(jù)含量測定項下的方法測定，計算平均加樣回收率。含量測定取供試品溶液10μl〔中國藥典2023VD〕測定；另取吐溫801