關(guān)于流式細胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第一頁，共五十三頁，2022年，8月28日2世界衛(wèi)生組織血液腫瘤分類方案（1999年）“新分類方案的基本原則是：結(jié)合形態(tài)學(xué)、免疫表型、遺傳改變和臨床特征來鑒定疾病的‘真實’本質(zhì)”。“這為世界各國腫瘤學(xué)家和病理學(xué)家提供了一個全新的與令人興奮的合作交流新篇章，必將極大促進人們對血液腫瘤的治療與認(rèn)識?！保绹R床腫瘤協(xié)會，臨床腫瘤雜志17卷3835-3849頁，1999年）更重要的是提供了疾病分類與治療選擇和預(yù)后判斷的較明確關(guān)聯(lián)性，開啟了血液腫瘤靶向性治療和個性化方案的新時代。第二頁，共五十三頁，2022年，8月28日3白血病分子診斷的意義系統(tǒng)診斷白血病初發(fā)異常標(biāo)記精確診斷準(zhǔn)確預(yù)后指導(dǎo)治療科研資料殘留監(jiān)測靶向治療免疫/遺傳學(xué)靶標(biāo)MICM診斷第三頁，共五十三頁，2022年，8月28日4WHO血液腫瘤新分類實驗技術(shù)平臺實施WHO血液腫瘤新分類方案高度依賴流式細胞、細胞遺傳和分子生物學(xué)實驗技術(shù)平臺以及掌握這類實驗技能并具有專業(yè)知識的人員。第四頁，共五十三頁，2022年，8月28日5第五頁，共五十三頁，2022年，8月28日6InvestigativeToolsforMMdiagnosisandManagement(2008ASHEducationProgramBookp298)

PatientEvaluation

診斷

單克隆蛋白數(shù)量和特征

血清蛋白電泳和免疫球蛋白定量 24小時尿蛋白；總蛋白；本周蛋白

尿和血清免疫固定

血清自由輕鏈和比例

骨髓檢查和骨髓活檢Bonemarrowaspirationandbiopsy

組化

免疫分型-克隆檢定，及通過CD38/CD56/CD19/CD45抗體組合能從90余例患者正常漿細胞中找到檢測殘留MM細胞

終末器官損害評價

全血細胞計數(shù)；生化檢查:血清肌酐和骨鈣測定

預(yù)后評估

球蛋白，betta-2微球蛋白,LDH,CRP

骨髓細胞遺傳學(xué)和FISHt(4;14),t(14;16),del17p

針對某些特定患者的特殊研究

第六頁，共五十三頁，2022年，8月28日7傳統(tǒng)流式細胞術(shù)的臨床應(yīng)用細胞計數(shù)：CD4、CD34DNA含量：多倍數(shù)、S期結(jié)果是數(shù)據(jù)、準(zhǔn)確性依賴于良好的質(zhì)控傳統(tǒng)流式細胞術(shù)在白血病免疫表型中的應(yīng)用單參“白血病表型”，陽性比率大多數(shù)細胞為腫瘤細胞多為形態(tài)學(xué)/細胞化學(xué)后的確認(rèn)數(shù)據(jù)由臨床醫(yī)師判斷高分辨流式細胞的優(yōu)點以多參數(shù)正常抗原表達為基礎(chǔ)結(jié)果類似病理報告用于原發(fā)性診斷與鑒別診斷用于疾病分期，治療選擇療效監(jiān)測，預(yù)后判斷流式細胞術(shù)第七頁，共五十三頁，2022年，8月28日8骨髓-異質(zhì)性系統(tǒng)中的應(yīng)用多系列Lymphocyte(T,B,NK)MonocyteNeutrophilEosinophilBasophilErythrocyte骨髓中各系列細胞處于連續(xù)性成熟階段必須能涵蓋所有細胞第八頁，共五十三頁，2022年，8月28日9應(yīng)該使用何種抗體？所有抗體必須為標(biāo)準(zhǔn)的商業(yè)化試劑沒有什么“秘密武器”或者專門特異的抗體抗體的聯(lián)合應(yīng)用能使你從有限的標(biāo)本中得到最大化的信息量對正?？乖磉_的正確認(rèn)識能幫助你有效地鑒別疾病狀態(tài)相關(guān)的改變第九頁，共五十三頁，2022年，8月28日10高分辨流式細胞術(shù)能夠鑒別和分類所有骨髓細胞可以對每一個細胞進行多特征性的檢測并對其相應(yīng)的系列和成熟的階段進行分類至少檢測一萬個細胞，分辨率達到0.5%第十頁，共五十三頁，2022年，8月28日11第十一頁，共五十三頁，2022年，8月28日12CD45/SSWood(2004)MethodsCellBiology75:559-576第十二頁，共五十三頁，2022年，8月28日13正常粒系成熟模式第十三頁，共五十三頁，2022年，8月28日正常B系成熟Wood(2004)MethodsCellBiology75:559-576第十四頁，共五十三頁，2022年，8月28日15表達交叉系列的抗原非同步抗原共表達：CD34與CD15、CD11b、CD56、CD14抗原的過度表達：早前B-ALL中CD10抗原表達缺失：泛T抗原易位抗原表達：CSF中TdT+淋巴細胞，骨髓中胸腺發(fā)育階段的T淋巴細胞光散射異常：FSC和SSC白血病相關(guān)的免疫表型特點第十五頁，共五十三頁，2022年，8月28日16AML-M0第十六頁，共五十三頁，2022年，8月28日17AML-M2第十七頁，共五十三頁，2022年，8月28日18AML-M3第十八頁，共五十三頁，2022年，8月28日19AML-M4第十九頁，共五十三頁，2022年，8月28日20AML-M5第二十頁，共五十三頁，2022年，8月28日21B-ALL第二十一頁，共五十三頁，2022年，8月28日22Burkitt淋巴瘤/白血病

成熟B-ALL第二十二頁，共五十三頁，2022年，8月28日23MALT+GMALT+B第二十三頁，共五十三頁，2022年，8月28日24AUL第二十四頁，共五十三頁，2022年，8月28日25B-CLL/SLL第二十五頁，共五十三頁，2022年，8月28日26HCL第二十六頁，共五十三頁，2022年，8月28日27大B細胞淋巴瘤第二十七頁，共五十三頁，2022年，8月28日28MM第二十八頁，共五十三頁，2022年，8月28日29T-ALL第二十九頁，共五十三頁，2022年，8月28日30NK-LGL第三十頁，共五十三頁，2022年，8月28日31報告包括出現(xiàn)或缺乏的異常細胞群異常免疫表型相比正常細胞群的抗原強度增強，減弱，缺失定量層面的判斷相對于全部CD45陽性細胞(WBCs)出現(xiàn)的其它細胞群第三十一頁，共五十三頁，2022年，8月28日32第三十二頁，共五十三頁，2022年，8月28日33TCRVβ克隆第三十三頁，共五十三頁，2022年，8月28日34小結(jié)流式細胞術(shù)有助于血液系統(tǒng)異常疾病的診斷更加確定的診斷排除其他疾病有助于細分亞型更準(zhǔn)確的原始細胞辨別和定量有助于預(yù)后判斷治療后監(jiān)測快速第三十四頁，共五十三頁，2022年，8月28日35免疫表型分析與FAB分型基于不同的參數(shù)對白血病進行分型，兩者的結(jié)果可一致或不一致；對有些病例，尤其是髓系白血病亞型，免疫表型分析并非特異；對于復(fù)雜的病例，需結(jié)合多種檢查，如特異性染色體核型分析或融合基因綜合判斷。第三十五頁，共五十三頁，2022年，8月28日36MRD背景目前由于多種化療藥的聯(lián)合應(yīng)用，使多數(shù)白血病患者可以獲得形態(tài)學(xué)的完全緩解（CR）。但多數(shù)患者不能維持長期緩解，仍有相當(dāng)多的患者再次復(fù)發(fā)。復(fù)發(fā)的主要原因是患者體內(nèi)存在少量的形態(tài)學(xué)難以辨認(rèn)的殘存白血病細胞。如果能夠準(zhǔn)確檢測患者體內(nèi)殘存的白血病狀態(tài)，可以有的放矢地進行治療，使患者避免許多不必要的痛苦。第三十六頁，共五十三頁，2022年，8月28日37MRDOutlineofLeukemicDiagnosisMorphology:1-5%,Cytogenetics:1-5%,Flowcytometry:0.1-0.01%,RT-PCR:0.01-0.001%CRPrimaryleukemiaOSChemotherapiesAutoSCTAlloSCTInductionLeukemiccells1012 1010109108107≤106100% 1% 0.1%0.010.001 第三十七頁，共五十三頁，2022年，8月28日38第三十八頁，共五十三頁，2022年，8月28日39MolecularMeasurementsofTreatmentResponse—ClinicalApplication(2008ASHEducationProgramBookp367)

Application Action

檢測治療早期的反應(yīng)佳 加強治療檢測治療早期的反應(yīng)差

無需加強治療

檢測復(fù)發(fā) 加強治療，準(zhǔn)備HSCT

HSCT前MRD評估 優(yōu)化HSCT的時間HSCT后MRD評估 調(diào)整免疫抑制治療時間，等

臨床試驗結(jié)束時的MRD評估 評價新的抗ALL藥物或治療的結(jié)果

第三十九頁，共五十三頁，2022年，8月28日40MRD與預(yù)后當(dāng)殘存白血病細胞>10-2，3年復(fù)發(fā)率為76-94%10-3<殘存白血病細胞<10-2,3年復(fù)發(fā)率為37-53%殘存白血病細胞<10-3,3年復(fù)發(fā)率為8-20%殘存白血病細胞<10-4,3年無復(fù)發(fā)第四十頁，共五十三頁，2022年，8月28日41各種MRD檢測方法檢測殘存白血病細胞的主要依據(jù)是在患者發(fā)病時找到患者的特殊表現(xiàn)，包括遺傳學(xué)、分子生物學(xué)以及免疫學(xué)的特征。這些特征往往是正常血細胞所沒有的，因此可利用這些標(biāo)志鑒別正常細胞與異常細胞，特異地檢測殘存白血病細胞。評價這些方法的有效性及應(yīng)用性主要依據(jù)該方法的特異性、敏感性、簡單性、重復(fù)性和速度。FCM免疫表型、FCMDNA倍體、PCR、FISH是較好的方法。第四十一頁，共五十三頁，2022年，8月28日42MRD流式分析原則違背正常分化模式診斷時辨別出背離正常發(fā)育階段的免疫表型相對特異的抗原組合隨訪辨別出不同于正常免疫表型的不連續(xù)群體以診斷的免疫表型作為出發(fā)點第四十二頁，共五十三頁，2022年，8月28日43免疫表型異常適合MRD檢測ALL>95%兒童ALL>90-95%成人ALLAML85%兒童AML80-95%成人AML第四十三頁，共五十三頁，2022年，8月28日44報告模板第四十四頁，共五十三頁，2022年，8月28日45病例一AML病例資料：女，3歲，2009.6初發(fā)FCM印象：在CD45/SSC點圖上設(shè)門分析，原始細胞分布區(qū)域可見異常細胞群體，約占有核細胞的26%，主要表達HLA-DR、CD13、CD15、CD33、CD34、CD38、CD117，（CD19+2.27%）。淋巴細胞比例降低。提示：急性髓系細胞白血病（AML-M2可能）?；颍篈ML1/ETO陽性。第四十五頁，共五十三頁，2022年，8月28日46病例一（續(xù)1）2009.7化療D33：FCM：可見殘留，CD33+CD19+細胞約占0.04%?；颍篈ML1/ETO陽性。第四十六頁，共五十三頁，2022年，8月28日472009.9D70：FCM：未做?；颍篈ML1/ETO陰性。2010.3D245：FCM：未見免疫表型明顯異常的細胞。基因：AML1/ETO陰性。病例一（續(xù)2）第四十七頁，共五十三頁，2022年，8月28日48病例二B-ALL病例資料：男，3歲，2007.3初發(fā)FCM印象：在CD45/SSC點圖上設(shè)門分析，CD45弱表達分布區(qū)域可見異常細胞群體，約占有核細胞的45%，表達HLA-DR、CD10、CD19、CD22、CD34、CD38、Gly-A、cCD79a、TdT。提示：急性B淋巴細胞白血?。ㄆ胀ㄐ虰-ALL）?；颍築CR/ABL陰性。第四十八頁，共五十三頁，2022年，8月28日492008.11化療第20個月：FCM：未見明顯表型異常的殘留白血病細胞。（未附圖）基因：未做。2009.09化療第30個月：FCM：可見殘留，在CD45dim/-區(qū)域可見約1.87%的CD10+CD19+CD20-細胞和約1.55%的HLA-DR+CD19+CD34+細胞，考慮為殘留白血病細胞。（見右圖）基因：未做。病例二（續(xù)1）第四十九頁，共五十三頁，2022年，8月28日50病例二（續(xù)2）2010.03化療+DC-CIK第36個月：FCM印象：在CD45/SSC點圖上設(shè)門分析，CD45陰性略向原始延伸的分布區(qū)域可見異常細胞群體，與有核紅細